Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Состояние и перспективы применения метода трансплантации эмбрионов 8
1.2. Отбор доноров и реципиентов Ю
1.3. Суперовуляция у доноров крупного рогатого 12 скота
1.4. Синхронизация охоты у донора и реципиента. 20
1.5. Извлечение эмбрионов у крупного рогатого 22 скота
1.6. Хранение зародышей крупного рогатого 26 скота
1.7. Культивирование эмбрионов 36
1.8. Оценка жизнеспособности эмбрионов 38
1.9. Пересадка эмбрионов крупного рогатого 40 скота
ГЛАВА II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Материалы и методы исследований 44
2. Результаты исследований 55
2.1. Сравнительная оценка применения гонадотропных препаратов различных серий ГСЖ и СЖК на коровах и телках разных пород, используемых в качестве доноров 55
2.1.1. Влияние разных серий ГСЖ и СЖ на индуцирование суцеровуляции
2.1.2. Реакция суперовуляцией яичников на обработку гонадотропином в зависимости от породы доноров
2.2. Сравнительная оценка известных систем для вымывания эмбрионов и совершенствование нехирургического способа извлечения эмбрионов крупного рогатого скота
2.3. Сравнительная оценка жизнеспособности эмбрио- 88 нов, полученных от доноров разных пород в зависимости от гонадотропного препарата .
2.4. Криоконсервация эмбрионов крупного рогатого 94 скота
2.5. Изучение эффективности применения морфологи- 101 ческого, флуоресцентного метода и метода культивирования для оценки жизнеспособности замороженных и оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота и их сравнительная оценка
2.6. Пересадка эмбрионов крупного рогатого скота 106 и результаты научно-производственного опыта.
ГЛАВА III. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 113
ПАВА ІУ. В Ы В О Д Ы. 127
ІЯАВА У. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 129
ЛИТЕРАТУРА 130
- Состояние и перспективы применения метода трансплантации эмбрионов
- Сравнительная оценка применения гонадотропных препаратов различных серий ГСЖ и СЖК на коровах и телках разных пород, используемых в качестве доноров
- ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Введение к работе
Коммунистическая партия Советского Союза последовательно осуществляет курс аграрной политики, выработанный на ХХУІ съезде КПСС и в Продовольственной программе до 1990 года, уделяет большое внимание вопросам обеспечения населения продуктами животноводства и других видов сельскохозяйственной продукции.
Решение этих вопросов возможно при хорошей организации вое- , производства стада, совершенствования качественного состава поголовья, улучшении племенной работы, разведении животных высокопродуктивных пород, рационального использования ресурсов племенных животных, поднятия уровня селекционно-племенной работы. В то же время важно получать за короткий срок хозяйственного использования и при сохранении оптимальной продуктивности наибольшее количество полноценного в племенном отношении приплода и сохранить (Высокий генетический потенциал животных.
Воспроизводительная способность коров может быть увеличена при помощи метода трансплантации эмбрионов. Трансплантация эмбрионов - это новый биотехнический метод, перспективный для получения многочисленного потомства от высокопродуктивных коров, ускорения проверки их по качеству потомства, создания новых пород молочного и мясного направления продуктивности в более короткие сроки, импорта и экспорта генетического материала.
В последнее десятилетие в Советском Союзе и за рубежом ведутся целенаправленные исследования по трансплантации зародышей. Однако реализация этого метода в молочном и мясном скотоводстве сдерживается недостаточной разработкой ряда теоретических, технологических и биологических проблем. К ним относятся вопросы суперовуляции у доноров, получения большего количества полноценных эмбрионов, хранения и пересадки эмбрионов животным-реципиентам. До - б - сих пор недостаточно разработаны методы криоконсервапии зигот и их прижизненной оценки жизнеспособности. Известные методы вызывания суперовуляции не позволяют постоянно получать больше 3-4 эмбрионов и яйцеклеток на донора (RoweA., eioL., I976;02.iLj;P.>ttaL, 1979), недостаточно выяснено влияние породы на реакцию суперовуля-ции (toatifttoJL J.» d ai. , I970;$uuvwanJe, J., & olL ., 1977).
Решению этих вопросов уделяется большое внимание многих ученых (Лопырин А.И. и др., 1950, 1951; Квасницкий А.В., 1951, 1953; Соколовская И.И., 1957; Заводовский М.М., 1963; Клинский Ю.Д., 1967; Мартыненко Н.А., I97I;Ro\J!>ovt V.., е+ aL, 1972; $tefi.v\aw J. , ЬеЛа*^., I974;SeAYilow V. , I975;VlKi"H-iwgW^., I975;WilkoLen Seeled., 1976;&e+feticl^ K_. , 1977; Прокофьев M.И. и др., 1977; Сергеев Н.И. и др., 1980; Эрнст Л.К. и др., I978;|//i[mu+T. , 1978; Бугров А.Д., 1982; Оеташко Ф.И. и др., 1982 и др.).
Анализ данных литературы показал целесообразность исследований по совершенствованию метода трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. Это диктуется непредсказуемостью реакции суперовуляции, которая является одной из основных помех в трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (SthzYihd. 1/., I968;(rotc/on J. , 1975), отсутствием стабильности результатов по получению эмбрионов нехирургическим методом от уперовулировавших доноров (Bala*. А., J/LLeilfc ^. , 1978) и другими сложностями - дороговизной хиругичес-кого метода (iUdth /I,, 1977; Sthelfob I. , 1979), разрозненностью результатов по низкотемпературному хранению эмбрионов (Wdynui ,., 1972; FoLitattTJ.fitaL.t 1977;lsc/en #., 1977), оценке жизнеспособности (Shin g. , e/ qL, , 1976; &efhtic/oe К.., 1977), нестабильностью приживляемости эмбрионов крупного рогатого скота от хирургической и нехирургической пересадки (в-очЛоп J, , 197'5;Stunati */. , 1975; 0>M>
Целью нашей работы являлось дальнейшее совершенствование ме- тода и техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в условиях промышленного молочного скотоводства.
Для достижения этой цели были поставлены на разрешение следующие задачи.
Произвести сравнительную оценку различных гонадотропних препаратов для вызывания суперовуляции у коров (телок) - доноров различных пород в местных условиях.
Усовершенствовать метод нехирургического получения зародышей у коров (телок) - доноров в условиях производства.
Исследовать и усовершенствовать метод и технику консервации и оценки жизнеспособности зародышей крупного рогатого скота.
Провести широкий научно-производственный опыт практического применения метода трансплантации в условиях крупной молочной фермы.
Состояние и перспективы применения метода 8 трансплантации эмбрионов
Проблема практического значения метода трансплантации многообразна, особенно у крупного рогатого скота, в последнее время привлекла большое внимание ученых и животноводов-практиков.
Интерес к ней обусловлен возможностью получать в более короткие сроки большое количество потомков от высокопродуктивных коров по сравнению с общеизвестными методами размножения животных, перспективой ускорения селекционного процесса, а также возможностью оценки высокопродуктивных коров по качеству их потомства.
Первое сообщение о трансплантации эмбрионов животных сделал английский ученый ХИЛ ((WeW. t 1891), получивший потомство от крольчихи после трансплантации оплодотворенных яйцеклеток. После временного перерыва исследования в этом направлении были возобновлены Piiieus (у-. (1936), показавшим возможность развития у реципиента до 80% эмбрионов кролика. В 1949г. появились сообщения о пересадке эмбрионов на овцах и козах (шшик &., Ьа1,чч R- ., 1949). В 50-тых годах группа отечественных ученых сообщила об успешных пересадках эмбрионов кролика и овцы (Лопырин А.И. и др., 1950, 1951; Сокловская И.И., 1957). А.В.Квасницкий (1951, 1953) разра-батал методику пересадки эмбрионов у свиней. В 1951г. WiLLef . ., t\ aU» (1951) получили потомство после успешной пересадки эмбрионов крупного рогатого скота.
Низкая приживляемость эмбрионов в экспериментах с овцами, козами, свиньями и крупным рогатым скотом по сравнению с кроликами послужила основанием для дальнейших исследований: разработки техники повышения результативности способов получения множественной овуляции, решения целого ряда вопросов физиологии размножения, оп ределения условий культивирования эмбрионов, возможности оплодотворения Ы /f+to яйцеклеток. Все эти исследования сыграли подготовительную роль в развитии техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота.
Экономические требования производства об эффективном использовании животных с высоким генетическим потенциалом и сообщение RovJson L., е+ al., (1969) о получении высокого процента (91$) при-живляемости эмбрионов крупного рогатого скота после хирургической пересадки - привлекло большое внимание не только ученых, но и практиков-животноводов.
В нашей стране разработки по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота начаты в 1975г. Первые телята получены были в начале 1977г. (Прокофьев М.И. и др., 1977) во Всесоюзном НИИ физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных (ВНИИФБ и П). В 1978г. этим методом получены были телята во Всесоюзном НИИ разведения и генетики животных (ШИИРГЖ) и Всесоюзном институте животноводства (ВЙЖ).
Сравнительная оценка применения гонадотропных препаратов различных серий ГСЖ и СЖК на коровах и телках разных пород, используемых в качестве доноров
В данных литературы нет точных сведений в отношении, какое число желтых тел необходимо принимать в счет для положительного ответа суперовуляцией. Нами условно животных-доноров с реакцией 4 и более желтых тел на голову считали за положительных по суперовуляции, а 3 и менее - за отрицательных.
Сергеев Н.И. (1981) указывает, что животных-доноров с реакцией 4 и более желтых тел следует считать положительными, а с 3 и менее желтых тел - отрицательными донорами. Отрицательных по суперовуляпии доноров не рекомендуется подвергать вымыванию для получения эмбрионов, так это экономически невыгодно.
Известно, что реакция суперовуляции зависит от дозы ГСЖ и СЖ (GWe, 7 ., d o-L ., 1977), а доза препарата для индуцирования суперовуляции может колебаться от 1500 до 3000 И.Е., в зависимости от схемы обработки (&етіел.іе(ае \С ., 1977; и J1 ел и і L скц BuUsovt Р .,1977). Средняя доза ГОЖ составляла 3200 И.Е., СЖ -3.500 Й.Е.
В связи с этим нами рассмотрено влияние различных доз ГСЖ на индуцирование суперовуляции по четырем сериям препаратов (табл.2).
В опыте было использовано 43 животных-донора.
Из данных табл.2 видно, что разные серии препарата дают неодинаковую реакцию суперовуляцией у животных-доноров.
Нами отмечено, что суперовуляционный ответ на введение ГСЖ серии № I у отрицательно реагировавших доноров с реакцией (3 и менее желтых тел) был достоверно выше, чем по сериям Ш 2 и № 67 (3,0 против 1,6 и 1,8, V 0,05).
ГСЖ серии З/б вызвал достоверно больше овуляций, чем серии Ж I, 2, 67 по выходу желтых тел на каждого обработанного донора и соответственно составил 9,5 против 4,54; 6,47; 4,89 (Р / 0,05).
В связи с тем, что были использованы разные дозы и серии ГСЖ и СЖ и суперовуляционный ответ соответственно колебался в широких пределах.
Анализ данных табл.2 показывает, что из выбранных четырех серий ГСЖ для индуцирования суперовуляции предпочтительнее использовать серию В З/б в средней дозе 4800 И.Е.
Обсуждение полученных результатов
Наши исследования были направлены на совершенствование технологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота.
В работе намечалось провести сравнительную оценку различных гонадотропних препаратов при вызывании суперовуляции у доноров разных пород, произвести сравнительное изучение и усовершенствовать метод и технику нехирургического извлечения эмбрионов в условиях производства, провести совершенствование метода и техники консервации, оценки жизнеспособности зародышей крупного рогатого скота, а также провести широкий научно-производственный опыт практического применения метода трансплантации в условиях крупной молочной фермы.
Все это в конечном итоге должно послужить совершенствованию методов трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота применительно к производственным условиям.
Одним из основных условий для получения ценного генетического материала, а именно эмбрионов, в достаточном количестве, необходимо обеспечить реакцию суперовуляцией животного-донора.
На реакцию суперовуляции влияют многие факторы, целый ряд из них не связан с индивидуальными особенностями донора. К ним относятся: доза гонадотропного препарата, серия его, возраст животных, порода, сезон года и ряд друтих.
Наши исследования по проверке гонадотропних препаратов разных серий ГСЖ и СЖК путем биологического теста на белых мышах показали, что в 92$ случаев активность препарата не соответствовала фактической на упаковке.
Так, ГСЖ серия Ш I Щелковской биофабрики (Москва) имела заводскую активность 2800 М.Е. (мышинных единиц), а фактически оказалась 1000 М.Е., серия ГСЖ № З-б с заводской активностью 1000 М.Е. фактически имела активность 1200 М.Е. Эти данные говорят о необходимости тестирования каждой серии гонадотропного препарата перед его использованием для целей трансплантации. Это подтверждается и данными других исследователей ((то&/вя J., 1975; Сергеева Н.й. и ji .t 1981).
Одним из условий положительной реакции суперовуляцией является выбор оптимальной дозы используемого гонадотропного препарата.
По данным о tee. па w J . (1975); (rteVeT ., ё &.L ., (1977) оптимальные дозы лежат в пределах 2000-2500 И.Е, на одну голову, .Ряд других исследователей считают, что они лежат в пределах 1500-3000 И.Е. и зависят от схемы обработки животного-донора (МтегіеІ . \L ., I977; J/e.shfLo/uBuision F., 1977),.
Похожие диссертации на Совершенствование методов и техники трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота
