Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Иммунная система женского организма и аллоиммунные противоэритроцитарные антитела во время беременности 9
1.2. Природа и физиология иммуноглобулинов человека 13
1.2.1. Иммуноглобулин G 15
1.2.2. Иммуноглобулин М 17
1.3. Физиология антител системы АВО 18
1.4.Методические проблемы в идентификации аллоиммунныхпротивоэритроцитарных антител системы АВО 25
2. Материалы и методы исследований 28
2.1. Материалы исследований 28
2.2. Реактивы и оборудование 29
2.3. Методы исследований 29
3 .Результаты исследования 34
3.1. Иммунный ответ против антигенов систем АВО и Rh во время беременности 34
3.2.Гипербилирубинемия новорожденных и материнские IgG антитела систем АВО и Rh 40
3.3. Феномен присутствия противоэритроцитарных антител класса IgG в молозиве 45
3.4. Модификация методов определения IgG антител систем АВО и Rh 47
3.4.1. Разработка ускоренного метода определения IgG антител систем ABO 47
3.4.2. Модификация методов определения антител и антигенов системы Rh 52
3.4.3. Быстрый антиглобулиновый вариант идентификации фенотипа Du. 55
4.Обсуждение результатов 58
4.1. Иммунный ответ против АВО и Rh антигенов во время беременности 58
4.2. Гипербилирубинемия новорожденных и материнские антитела IgG систем АВО и Rh 63
4.3. Феномен присутствия противоэритроцитарных антител класса IgG в молозиве 65
4.4. Модификация методов определения IgG антител систем АВО и Rh 67
4.4.1. Разработка ускоренного метода определения IgG антител системы АВО 67
4.4.2. Модификация методов определения антител и антигенов системы Rh 71
4.4.3. Быстрый антиглобулиновый вариант идентификации фенотипа Du 73
Выводы 77
Литература 79
- Иммунная система женского организма и аллоиммунные противоэритроцитарные антитела во время беременности
- Иммунный ответ против антигенов систем АВО и Rh во время беременности
- Модификация методов определения антител и антигенов системы Rh
- Иммунный ответ против АВО и Rh антигенов во время беременности
Введение к работе
Иммунологические взаимоотношения организмов матери и плода во время беременности по-прежнему являются предметом изучения физиологов и перинатологов. Одну из актуальных проблем в этом разделе представляет часто встречающаяся иммунизация матери к антигенам групповых систем АВО и Rh (Васильева, Шабалин, 1984; Шабалин, 1988, Issitt, 1985). Последняя может служить причиной развития гемолитического заболевания новорожденного, поскольку материнские аллоиммунные антитела класса IgG способны преодолевать плацентарный барьер (Васильева, Шабалин, 1984; Issitt, 1985). Данные аспекты относительно хорошо изучены в отношении антигенов системы Rh. В то же время в этом плане недостаточно ясна роль антител системы АВО анти-А и анти-В. Последние нередко образуются в отсутствие АВО-несовместимости организмов матери и плода (Минеева, 1986; Меркулова, 1999). Их появление может быть обусловлено другими причинами. Равным образом остаются неизвестными патогенные потенции этих антител в отношении организма плода (Меркулова, 1999). Помимо сыворотки крови, аллоиммунные антитела систем АВО и Rh выявляются также и в молозиве. Это обстоятельство служит для некоторых практических перинатологов причиной отказа от грудного вскармливания в первые дни после родов. Патологические эффекты анти-А и анти-В антител молозива матери на организм новорожденного нуждаются в дальнейшем изучении. Остается неясным физиологический смысл присутствия этих антител в молозиве. Кроме того, вместе с IgM антителами против групповых факторов А и В, в сыворотках крови взрослых нередко присутствуют и так называемые "иммунные" анти-А и/или анти-В, относящиеся к классу IgG. Они имеют первостепенное значение в практике клинической трансфузиологии, поскольку нередко выступают в качестве причины тяжелых гемотрансфузионных осложнений (Скачилова, Аграненко, 1986; Умнова, 1989, Issitt, 1985). В отличие от так называемых "естественных" антител класса IgM, иммунные анти-А,-В оптимально проявляют свое действие при
37С, активируют систему комплемента, способны преодолеть плацентарный барьер и вызвать гемолитическое заболевание у плода. Следовательно, они имеют клиническое значение. Однако выявление этих антител не позволяет прогнозировать развитие патологии у новорожденного и, тем более, предсказать степень ее тяжести. Определение IgG антител системы АВО у беременных, родильниц, доноров крови и плазмы может быть целесообразным, а в ряде случаев, например при несовместимости супругов по антигенам АВО, совершенно необходимым. По настоящее время продолжают существовать методические проблемы определения IgG антител системы АВО, которые ждут своего адекватного разрешения.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Целью настоящей работы является изучение особенностей аллоиммунного ответа женского организма против антигенов систем АВО и Rh во время беременности и в ранний послеродовой период.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
1 .Установить частоту встречаемости и активность IgG антител систем АВО и Rh среди беременных женщин.
2.Изучить распределение антигенов систем АВО и Rh среди беременных с наличием в сыворотке крови IgG антител системы АВО и сенсибилизированных к антигену D.
3.Установить распределение антигенов системы АВО у родильниц и новорожденных с проявлениями гемолитического заболевания (гипербилиру бинемией).
4.Выявить частоту встречаемости и активность IgG антител систем АВО и Rh в молозиве родильниц.
5.Теоретически обосновать и разработать ускоренные методы идентификации IgG антител и антигенов систем АВО и Rh, сравнить их чувствительность и специфичность с другими методиками, широко используемыми в нашей стране.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
Впервые показано, что образование IgG антител системы АВО во время беременности не связано с антигенными стимулами, исходящими от плода. Установлено, что АВО-несовместимость организмов матери и плода влияет только на активность антител. Полученные результаты свидетельствуют о том, что антитела анти-А и анти-В класса IgG наряду с сывороткой крови присутствуют в первой порции молозива практически всех родильниц в отличие от IgG антител системы Rh. Показано, что гипербилирубинемия достоверно чаще наблюдается у новорожденных с группами А(П) и В (III), родившихся от женщин группы 0(1) с наличием в их сыворотке крови антител анти-А и/или анти-В класса IgG. Установлено, что аллосенсибилизация женщин к антигену D системы Rh зависит от их фенотипов по системам АВО и Rh.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ
Впервые в отечественной практике разработан ускоренный метод идентификации IgG антител системы АВО. Предложена экспресс-модификация поликатионного теста для определения антигенов и антител системы Rh. Оба предложенных метода адаптированы для полистироловых микропланшет. Модифицирован непрямой антиглобулиновый тест, позволяющий быстро идентифицировать слабовыраженные варианты антигена D системы Rh. Разработанные методы используются в практике работы лаборатории иммуногематологии Коми республиканского кардиологического диспансера и других лечебно-профилактических учреждений Республики Коми и Российской Федерации для обследования больных, беременных, доноров.
ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1 .Присутствие анти-А и анти-В антител класса IgG в сыворотке крови беременных женщин и молозиве родильниц - явление физиологического порядка, не связанное с несовместимостью организмов матери и плода по антигенам системы АВО. Иммунные антитела анти-А и анти-В чаще
встречаются у женщин с группой крови 0(1) и реже среди имеющих фенотипы А(И) и В(Ш).
2.Теоретически обоснованы и разработаны ускоренные методы идентификации IgG антител систем АВО и Rh, а также слабовыраженных форм антигена Rh0(D).
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы работы доложены на научно-практических конференциях акушеров-гинекологов, педиатров и перинатологов (Сыктывкар, 2000, 2001 гг.), Коми республиканской молодежной научно-практической конференции (Сыктывкар, 2000), научно-практической конференции, посвященной 5-летию Коми республиканского кардиологического диспансера (Сыктывкар, 2002). По материалам работы опубликовано 13 работ, из них 11 статей.
Иммунная система женского организма и аллоиммунные противоэритроцитарные антитела во время беременности
Для объяснения феномена выживания и развития полуаллогенного плода в организме женщины в различные периоды развития репродуктивной иммунологии предлагались различные гипотезы. К настоящему времени наибольшее количество экспериментальных и клинических подтверждений нашла теория гестационной иммуносупрессии (Шмагель, Черешнев, 2002). Супрессия иммунных механизмов организма женщины во время беременности во многом обусловлена появлением гормонов и белков так называемой "зоны" беременности. Это уникальное физиологическое явление, связанное исключительно с состоянием женского организма во время беременности (Говалло, 1987; Шмагель, Черешнев, 2002). При физиологически протекающей беременности происходит выраженная перестройка иммунной системы женщины. Активность как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета снижена. Относительная и абсолютная численность В-лимфоцитов, а также способность Т-лимфоцитов к пролиферации уменьшаются. В то же время у беременных повышена активность так называемых факторов неспецифической резистентности, в частности фагоцитирующих клеток, системы комплемента. Нейтрофилы беременных обладают повышенной поглотительной и бактерицидной активностью, у лимфоцитов крови увеличен уровень спонтанной пролиферации. Отмечен рост цитолитической активности комплемента (Шмагель, 2002). Физиологический смысл таких уникальных перестроек функций иммунной системы заключается в эффективной защите от ксеногенных воздействий, прежде всего агентов бактериального и/или вирусного происхождения. В то же время организм беременной имеет пониженную чувствительность к аллоантигенным стимулам, исходящим от плода. Вторая составляющая является одним из важнейших условий успешного вынашивания беременности. С одной стороны, вариантом нормы во время беременности является состояние частичной иммунологической толерантности организма женщины по отношению к антигенам плода. С другой, имеет место особый тип реагирования, когда эффекторы, образуемые иммунной системой женщины во время беременности, стимулируют развитие беременности. Очевидно, что эти механизмы сложились в процессе эволюции. Однако, в ряде случаев эффекторы, образуемые иммунной системой организма беременной, оказывают повреждающее действие на плод. Таковыми, в частности, могут являться противоэритроцитарные антитела класса IgG. С одной стороны, трансплацентарный переход материнских IgG антител к плоду является физиологическим, поскольку плацентарный барьер преодолевают не только антитела к какому-либо из антигенов плода, но также многих других специфичностей. Организм новорожденного не способен к самостоятельному синтезу иммуноглобулинов, поэтому обретение их от матери является важным для защиты новорожденного от инфекционных агентов в первые недели жизни.
Из литературы известно, что в практике перинатологии клиническое значение имеют противоэритроцитарные антитела класса IgG, поскольку лишь они способны преодолеть плацентарный барьер, достичь соответствующих антигенов на эритроцитах плода и при определенных условиях вызывать их разрушение (гемолиз) (Иегер, 1990; Ройт, 1991). Данный феномен лежит в основе патологии, известной как фетальный эритробластоз или гемолитическое заболевание новорожденного (ГБН). В тяжелых случаях оно может завершиться внутриутробной гибелью плода. У таких плодов часто развиваются отеки, поэтому эту патологию называют еще и водянкой новорожденных.
До открытия антигенов системы Rh в 1940 году причины ГБН оставались неизвестны, тяжелые формы неизбежно заканчивались летальным исходом (Доссе, 1959; Косяков, 1974). Следует отметить, что многие эритроцитарные аллоантигены были открыты в результате обследования женщин, чьи новорожденные страдали ГБН (Доссе, 1959; Косяков, 1974; Issitt, 1985). Сыворотки их крови содержали иррегулярные противоэритроцитарные антитела неизвестной ранее специфичности. В этом отношении различные эритроцитарные групповые системы неравнозначны. Одним из условий является хорошая экспрессия соответствующего антигена на эритроцитах новорожденного, его раннее внутриутробное развитие. Во многих случаях аллоиммунизация с образованием антител не приводила к развитию ГБН. Одной из причин того, что антитела не вызвали патологии у плода, являлась их природа. Принадлежность антител не к IgG классу исключала их способность преодолеть плацентарный барьер. Некоторые антитела не обладали способностью связывать комплемент или активировать фагоциты, клетки - киллеры in vivo. Многие эритроцитарные аллоантигены слабо выражены на эритроцитах плода и не обладают способностью связать количество антител, достаточное для развития гемолиза эритроцитов плода in vivo.
Известны многие эритроцитарные антигены, которые явились причиной аллоиммунизации и развития ГБН (табл.1). Оценивая в этом отношении различные эритроцитарные групповые системы можно отметить, что практически все известные антитела системы Rh (за исключением анти-Rh39, являющихся аутоиммунными по своей природе) были причиной развития ГБН, хотя во многих случаях наблюдались легкие формы этой патологии (Issitt, 1985). Чаще всего (не менее чем в 95% случаев) тяжелые формы ГБН вызывают антитела анти-D системы Rh (Доссе, 1959; Косяков, 1974; Умнова, 1989; Прокоп, 1991; Issitt, 1985; Минеева и соавт., 2002). Случаи развития аллосенсибилизации к другим антигенам (С, с, Е, е, G и др.) этой системы наблюдаются существенно реже. В этих случаях, как правило, повторные беременности антиген-несовместимыми плодами сочетаются с гемотрансфузиями (Попова и соавт., 1986; Скудицкий, 1987; Мороков, 1990; 1992; 1993; Мороков и соавт., 1999, 2001, 2002).
Следует отметить, что антитела системы АВО занимают здесь особое положение. По данным зарубежных авторов (Issitt, 1985; Mollison et al., 1987; Wong et al.,1996), несмотря на высокую частоту выявляемости IgG антител этой системы, тяжелые формы ГБН, требующие интенсивного лечения, включающего обменное переливание крови, сравнительно редки. В то же время легкие формы этой патологии встречаются часто (Issitt, 1985).
Иммунный ответ против антигенов систем АВО и Rh во время беременности
.Раствор низкой ионной силы (РНИС) готовят путем растворения 0,2 г Ма2ЭДТА (трилон Б) в 100 мл 5% раствора глюкозы. Раствор стабилен в течение недели, хранится при 4С. Перед проведением исследований должен иметь температуру не ниже 18 - 22С, допустимо его подогревание на водяной бане или в термостате при 37С.
Рабочий раствор полибрена (гексадиметрина бромид) используется в концентрациях 0,025 - 0,05%. Сухой порошок полибрена производится фирмами "Aldrich", "Sigma", "Pierce" и другими. Мы использовали полибрен фирмы "Fluka", Швейцария. Для приготовления раствора поликатиона один г сухого порошка растворяли в 100 мл изотонического раствора натрия хлорида. Полученный 1%-ный базовый раствор хранили при 4С в полимерной таре, поскольку полибрен адсорбируется стеклом. Для получения рабочего раствора полибрена один объем базового раствора смешивали ex tempore с 19-39 объемами изотонического раствора NaCl. Поскольку аггрегационная активность полибрена различных лотов и производителей может варьировать, его оптимальную концентрацию находили опытным путем. З.Ресуспендирующий раствор готовится путем смешивания 60 мл 0,2 М (7,02%) натрия цитрата трехзамещенного 5-водного с 40 мл 5%-ного раствора глюкозы. Техника теста 1 .Стандартные эритроциты-"мишени" один раз отмывают изотоническим раствором (лучше подогретым до 37С) путем центрифугирования. З.В лунках полистироловых планшет для иммунологических реакций (с U-образными лунками) смешивают по 50 мкл приготовленной 1%-ной взвеси эритроцитов в растворе РНИС с равным объемом исследуемой сыворотки. 4.Планшеты инкубируют в течение 5 мин. при комнатной температуре, затем центрифугируют в течение одной мин при 180-250 g. Супернатант удаляют, оставляя на дне лунок только осадок эритроцитов. 5.Во все лунки вносят по 20 мкл рабочего (0,05%-ного) раствора полибрена, ресуспендируют в нем осадок эритроцитов путем встряхивания в течение 30 - 60 с. б.Планшеты повторно центрифугируют в режиме, указанном в п.4. 7.Во все лунки вносят по 20 мкл ресуспендирующего глюкозо-цитратного раствора, плату наклоняют под углом 45 и встряхивают в течение 10-15 с до тех пор, пока аггрегация, обусловленная полибреном, не исчезнет. Результаты оценивают по наличию или отсутствию агглютинации. Практические рекомендации І.При каждой серии тестов необходимо выполнять контрольные исследования с образцами сывороток, содержащих аллоиммунные антитела. Исследования проводятся как с антиген-позитивными, так и с антиген-негативными эритроцитами. Результаты контрольных тестов должны быть отчетливо интерпретируемы. С ними сопоставляют реакции, полученные в опытных пробах. 2.Время контакта сыворотки и эритроцитов, взвешенных в РНИС, не должно превышать 15 мин. Более длительная инкубация не повышает чувствительность теста, однако приводит к сенсибилизации эритроцитов комплементом или антителами с низким температурным оптимумом, не имеющими клинического значения. 3.Использование взвеси эритроцитов с концентрацией более 1% снижает чувствительность теста и может затруднить интерпретацию результатов. 4.После добавления ресуспендирующего раствора результат должен быть учтен в первые 1-2 минуты, поскольку возможна реверсия агглютинации с ее постоянным ослаблением вплоть до полного исчезновения, поскольку дезаггрегационное действие цитрата продолжается непрерывно. 5.Тест может быть конвертирован в непрямой антиглобулиновый. После учета результатов содержимое лунок отмывают один раз глюкозо-цитратным раствором, второй раз - изотоническим. При каждом отмывании в лунки к осадку эритроцитов добавляют по 100 мкл соответствующего раствора, планшеты центрифугируют при 180 g в течение одной минуты. После второго отмывания тщательно удаляют супернатант. К осадку эритроцитов добавляют 30 мкл антиглобулиновой сыворотки. Перемешивают встряхиванием и центрифугируют в течение 1 минуты. Результаты учитывают по наличию или отсутствию агглютинации, встряхивая планшету. Их считают истинными, если в контрольных пробах получены отчетливо интерпретируемые соответствующие результаты. Метод можно использовать и для фенотипирования эритроцитов. Начиная с марта 1999 года, этот вид исследований также проводится в микрометоде с использованием полистироловых планшет. В качестве тест-систем можно использовать как поликлональные антитела сывороток сенсибилизированных лиц, так и моноклональные реагенты. Высокоактивные тест-системы перед использованием можно предварительно развести. Тем самым достигается экономия (в 3-Ю раз) дефицитных и дорогостоящих противоэритроцитарных реагентов.
Модификация методов определения антител и антигенов системы Rh
Тест может быть конвертирован в непрямой антиглобулиновый. После учета результатов содержимое лунок отмывают один раз глюкозо-цитратным раствором, второй раз - изотоническим. При каждом отмывании в лунки к осадку эритроцитов добавляют по 100 мкл соответствующего раствора, планшеты центрифугируют при 180 g в течение одной минуты. После второго отмывания тщательно удаляют супернатант. К осадку эритроцитов добавляют 30 мкл антиглобулиновой сыворотки. Перемешивают встряхиванием и центрифугируют в течение 1 минуты. Результаты учитывают по наличию или отсутствию агглютинации, встряхивая планшету. Их считают истинными, если в контрольных пробах получены отчетливо интерпретируемые соответствующие результаты.
Метод можно использовать и для фенотипирования эритроцитов. Начиная с марта 1999 года, этот вид исследований также проводится в микрометоде с использованием полистироловых планшет. В качестве тест-систем можно использовать как поликлональные антитела сывороток сенсибилизированных лиц, так и моноклональные реагенты. Высокоактивные тест-системы перед использованием можно предварительно развести. Тем самым достигается экономия (в 3-Ю раз) дефицитных и дорогостоящих противоэритроцитарных реагентов.
Быстрый антиглобулиновый вариант идентификации фенотипа Du. 1.В сухой чистой пробирке смешивают 1 каплю (50 мкл) 3 - 5% взвеси эритроцитов, однократно отмытых изотоническим раствором натрия хлорида и 100 мкл тест-системы "Цоликлон анти-D" с IgG антителами. 2.В пробирку вносят 1 мл раствора РНИС указанной выше прописи. Последний должен иметь температуру не ниже комнатной, допустимо его подогревание до 37С. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием и оставляют на одну минуту при комнатной температуре. 3.Содержимое пробирки дважды отмывают изотоническим раствором путем центрифугирования при 1000 g в течение 30-45 с при каждом отмывании. После второго отмывания супернатант тщательно удаляют, оставляя на дне пробирки только сухой осадок эритроцитов. 4.К осадку эритроцитов добавляют 1-2 капли антиглобулиновой сыворотки, перемешивают и центрифугируют пробу в указанном выше режиме в течение 15 с. По окончании центрифугирования пробирку осторожно встряхивают, добиваясь отделения осадка эритроцитов от дна пробирки. Результаты учитывают по наличию или отсутствию агглютинации. При положительном результате осадок отделяется от дна в виде агглютинатов различной величины, при отрицательном отмечается равномерное окрашивание жидкости на дне пробирки в розовый цвет. Благодаря высокому качеству отечественной тест-системы на основе IgG МКА анти-D может быть существенно упрощена и укорочена по времени исполнения процедура идентификации слабо агглютинабельного варианта Rh0(D), известного как фенотип Du. Последняя может быть выполнена очень быстро. Нам удалось сократить время проведения исследования в 8,5 раз (рис.5). Практические рекомендации 1.Каждая серия тестов должна сопровождаться контрольными исследованиями с D-положительными и D-отрицательными эритроцитами, по возможности, желательны также контрольные тесты с эритроцитами фенотипа Du. Результаты могут быть интерпретированы как истинные только при получении соответствующих результатов в контрольных пробах. Эритроциты фенотипа Du дают отчетливо положительные реакции, хотя их интенсивность, как правило, существенно ниже в сравнении с обычными Rh+положительными клетками. При неясных результатах пробы оставляют на 5 мин при комнатной температуре, далее центрифугируют повторно и учитывают результаты. 2.Чувствительность теста снижается при использовании взвесей эритроцитов с концентрацией, превышающей 5%. 3.Удлинение времени инкубации свыше 5 мин может привести к гемолизу контрольных Rh+положительных эритроцитов, несущих высокоагглютинабельный антиген D на этапе отмывания, особенно, если для этих целей используется охлажденный изотонический раствор. Последний должен иметь комнатную температуру, однако его не следует также и подогревать во избежание элюции антител во время отмывания. 4.Тест непригоден для исследования эритроцитов, дающих положительную прямую реакцию Кумбса, иногда наблюдаемую с клетками больных различными аутоиммунными заболеваниями. Известно, что для фенотипирования таких эритроцитов вообще не могут быть использованы какие-либо тест-системы с антителами класса IgG. Мы тестировали на Du все образцы эритроцитов, которые при первичном определении Rh-фенотипа можно было квалифицировать как dCe и dcE. В период с марта 1998 по июнь 1999 г. при фенотипировании 5123 образцов крови таких проб было 126. Исследования с использованием ускоренной методики показало, что в действительности 59 (52% лиц с комбинацией dCe) из них имеют фенотип DuCcee, и 2 (17% квалифицированных первично как dcE) - DuccEe.
Иммунный ответ против АВО и Rh антигенов во время беременности
При обследовании 2508 беременных, рожениц и родильниц IgG антитела системы АВО выявлены в 1923 случаях (76,67%). При этом среди 1718 женщин с группой 0(1) в 1683 случаях (97,96%) они имели специфичность анти-А, в 1645 (95,75%) - анти-В. Частота выявления анти-А антител оказалась достоверно более высокой, нежели анти-В (р 0,001). Среди женщин с другими группами АВО антитела анти-А и анти-В класса IgG встречались реже. У 450 женщин с группой А(И) анти-В выявлены у 120 (26,66%). Анти-А среди женщин с группой В(Ш) встречались в 35,29% случаев (у 120 из 340). Активность антител определяли в ступенях разведения. Для анти-А антител ее среднее значение составило 3,04, для анти-В - 2,51. Таким образом, активность анти-А антител оказалась достоверно более высокой, нежели анти-В. Активные (титр выше 8, три ступени разведения) анти-А антитела встречались достоверно чаще (в 29,90% случаев), чем анти-В (12,61%), (р 0,001).
В литературе имеются данные о том, что иммунные ответы против некоторых антигенов существенно различаются среди лиц, имеющих неодинаковую Rh-принадлежность крови или определенные фенотипы этой системы (бактериальные антигены, анатоксины, антигены гистосовместимости). Венгерские исследователи (Таусик и соавт., 1985) отмечали корреляцию интенсивности иммунных ответов после введения столбнячного анатоксина с наличием у иммунизированных антигенов D и Е системы Rh. Другие исследователи (Донсков и соавт, 1987) установили, что аллоиммунные антитела к антигенам большого комплекса гистосовместимости класса I (HLA-A, В, С) в два раза чаще выявляются у женщин с Rh-отрицательной кровью, имевших повторные беременности. Отмечены также различия в иммунном ответе среди лиц различных Rh-фенотипов после введения им стафилококкового анатоксина. Установлено, что среди лиц, слабо реагирующих на его введение, достоверно реже встречаются гомозиготы по всем антигенам Rh за исключением СС. (Серова и соавт., 1982). В этой связи мы решили изучить распределение фенотипов, антигенов системы Rh отдельно для женщин с наличием IgG анти-А и анти-В антител, при этом учитывали также активность (титр) антител (табл.3 - 6). Существенных различий в распределении фенотипов Rh среди продуцентов анти-А антител не выявлено. Исключение составили лишь женщины с фенотипом DCcee, которые чаще вырабатывали анти-А антитела, причем высокоактивные (р 0,05, табл.3). Каких-либо значимых различий в распределении генов этой системы не выявлено (табл.4). В распределении Rh фенотипов и генов продуценты анти-В также не отличались от контрольной группы (табл.5 - 6). Исключение вновь составили женщины с фенотипом DCcee, однако, последние чаще продуцировали слабые анти-В антитела (р 0,05). Рядом исследователей выявлены коррелятивные связи интенсивности иммунного ответа на различные антигены с Rh-фенотипами. Наши исследования показали, что на иммунное реагирование против антигенов системы АВО в перинатальном периоде это положение вряд ли можно экстраполировать. Различия в реагировании, выявлены нами только среди женщин с фенотипом DCcee. У обследованных с другими сочетаниями антигенов Rh выявлена приблизительно одинаковая способность синтезировать IgG антитела системы АВО (помимо так называемых «естественных» IgM). Логично предположить, что несовместимость организмов матери и плода по антигенам А или В во время беременности может иметь решающее значение в инициировании синтеза антител анти-А или анти-В класса IgG. В этой связи мы решили выяснить, в какой мере АВО-несовместимость между организмами матери и плода влияет на частоту иммунизации и активность продуцируемых антител анти-А и анти-В класса IgG (табл.7). С этой целью проведен ретроспективный анализ иммуногематологического статуса 421 женщины с наличием антител анти-А и/или анти-В, родивших 421 детей с различными группами крови (как совместимыми, так и несовместимыми) по системе АВО. Активными считали антитела, имевшие титр выше трех ступеней разведения. Частота выявления антител анти-А и анти-В класса IgG среди родильниц с АВО-несовместимыми и АВО-совместимыми новорожденными достоверно не различается (р 0,05). Последняя практически одинакова как для анти-А, так и анти-В антител и не связана с группой АВО новорожденного. Выявленные особенности касались только выявляемое активных IgG антител системы АВО. Последние встречаются достоверно чаще в тех случаях, когда новорожденные имеют несовместимые с матерью группы АВО (табл.7). Таким образом, появление IgG антител системы АВО не связано с АВО-несовместимостью и, вероятно, даже беременностью. На наш взгляд, в данном случае более правомерно вести речь о переключении синтеза антител анти-А и анти-В с одного класса на другой (с IgM на IgG). Это может быть результатом антигенных стимуляций А- и В-подобными веществами, широко распространенными в окружающей среде (вещества животного или микробного происхождения).
В течение 1998 - 2002 гг. на наличие антител системы Rh нами обследовано 9589 беременных, родильниц и рожениц, наблюдавшихся в женской консультации и/или стационаре родильного дома Коми республиканского кардиологического диспансера. При этом антитела были выявлены в 105 случаях (1,09%). Во всех случаях последние выявлены у женщин с Rh-отрицательной кровью и направлены к антигену Rh0(D) этой системы. Все образцы антител демонстрировали активность в непрямом антиглобулиновом тесте, что позволяло отнести их к классу IgG. Средний титр антител составил 4,10 ступени разведения.
