Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Химический состав и физиологические свойства гепарина 8
1.1. Химический состав гепарина 8
1.2.Физиологические свойства гепарина 14
1.3. Комплексообразующие свойства гепарина 27
Собственные исследования 35
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования результаты опытов 38
ГЛАВА 3. Модификация гепарином токсических свойств зоотоксинов 38
3.1. Пчелиный яд 38
3.2. Яд кобры ' 42
3.3. Яд гюрзы 44
3.4. Яд эфы 45
3.5. Яд щитомордника 46
3.6. Жабий яд 48
ГЛАВА 4. Модификация гепарином термопротекторных свойств зоотоксинов 50
4.1. Пчелиный яд 50
4.2. Яд скорпиона 52
4.3. Яд кобры 54
4.4. Яд гюрзы 57
4.5. Яд гадюки 59
4.6. Яд эфы 61
4.7. Яд щитомордника 64
4.8. Яд жабы 66
ГЛАВА 5. Влияние гипер- и гипогепаринемии на показатели сердечно-сосудистой системы в условиях введения зоотоксинов и гипертермии 68
5.1. Частота сердечных сокращений 68
5.1.1. Пчелиный яд 68
5.1.2. Яд кобры 70
5.1.3. Яд щитомордника 73
5.2. Систолическое артериальное давление 75
5.2.1. Пчелиный яд 75
5.2.2. Яд кобры 78
5.2.3. Яд щитомордника 80
5.3. Диастолическое артериальное давление 82
5.3.1. Пчелиный яд 82
5.3.2. Яд кобры 84
5.3.3. Яд щитомордника 86
ГЛАВА 6. Влияние гипер- и гипогепаринемии на показатели дыхательной системы в условиях введения зоотоксинов и гипертермии 90
6.1. Пчелиный яд 90
6.2. Яд кобры 92
6.3. Яд щитомордника 94
ГЛАВА 7. Морфологические изменения в паренхиматозных органах крыс при действии гепарина и зоотоксинов в условиях гипертермии 98
7.1. Морфологические изменения в почках 98
7.1.1. Интактная группа при нормо- и гипертермии 99
7.1.2. Пчелиный яд 100
7.1.3. Яд кобры 102
7.1.4. Яд щитомордника 104
7.2. Морфологические изменения в печени 105
7.2.1. Интактная группа при нормо- и гипертермии 105
7.2.2. Пчелиный яд 106
7.2.3. Яд кобры 108
7.2.4. Яд щитомрдника 109
7.3. Морфологические изменения в легких 111
7.3.1. Интактная группа при нормо- и гипертермии 111
7.3.2. Пчелиный яд 112
7.3.3. Яд кобры ' 114
7.3.4. Яд щитомордника 115
7.4. Морфологические изменения в селезенке 116
7.4.1. Интактная группа при нормо- и гипертермии 117
7.4.2. Пчелиный яд 117
7.4.3. Яд кобры "... 118
7.4.4. Яд щитомордника 120
ГЛАВА 8. Взаимодействие гепарина с зоотоксинами IN VITRO 123
8.1. Пчелиный яд 123
8.2. Мелиттин 126
8.3. Яд кобры 128
8.4. Яд щитомордника 130
8.5. Яд гюрзы 132
8.6. Яд эфы 134
8.7. Яд жабы 136
Обсуждение результатов 139
Выводы 147
Литература 149
Приложение 169
Введение к работе
Актуальность исследования. Актуальной задачей современной физиологии является выяснение роли эндогенных физиологически активных веществ в регуляции вегетативных функций организма. Одним из важных биорегуляторов является гепарин, синтезируемый тучными клетками печени, легких, соединительной ткани, играющий особую роль в поддержании го-меостаза. Хорошо установленным фактом является способность гепарина образовывать комплексы с широким спектром белков, пептидов, ферментов, катионных соединений, при этом могут меняться как его собственные свойства, так и свойства веществ, вступающих с ним во взаимодействие (Кудря-шов, 1975; Хомутов, 1987; Ляпина, 1987; Умароваи др., 1993; Кондашевская, Ляпина, 1998; Chen J. et al., 2006; Troy, 2006; Prakesh et al, 2007).
Влияние высокой температуры окружающей среды на организм человека и животных охватывает широкий круг вопросов физиологического характера. Одним из вопросов этого влияния является тот факт, что кратковременное действие тепла на организм или эпизодические случаи перегревания не являются типичными в условиях жизнеобитания. Чаще всего организм сталкивается с более или менее продолжительным влиянием высокой внешней температуры, которое связано с климатогеографическими условиями или со спецификой процессов (Султанов и др., 2001; Portner, 2001, 2002; Sharma, Hoopes, 2003).
На кафедре физиологии и биохимии человека и животных в течение последних 30 лет под руководством профессора А.Е. Хомутова ведутся активные исследования термопротекторных свойств зоотоксинов как на уровне целостного организма, так и отдельных функциональных систем. В экспериментах на лабораторных животных показано увеличение продолжительности жизни при предварительном введении зоотоксинов по сравнению с использованием только высокой внешней температуры. Установлен механизм защитно-компенсаторных реакций, связанных с острым перегреванием. Однако практическое использование зоотоксинов при высокой внешней температуре без учета эндогенных факторов, к которым относится гепарин, невозможно, так как гепарин, обладая полифункциональными свойствами, может изменить вектор действия зоотоксинов на диаметрально противоположный (Хомутов и др. 2005, 2006; Ягин, 2007).
Цель исследования: изучение токсических и термопротекторных свойств зоотоксинов в условиях вызванной гипер- и гипогепаринемии.
Задачи исследования:
1. провести сравнительный анализ токсических свойств ядов животных, относящихся к разным таксономическим группам при нормотермии (20°С) в условиях вызванной гипер- и гипогепаринемии;
2. изучить влияние экзогенного и эндогенного гепарина на термопротекторные свойства зоотоксинов на уровне целостного организма;
3. изучить состояние сердечно-сосудистой и дыхательной систем в условиях экспериментальной гипертермии на фоне введения зоотоксинов и предварительном введении гепарина;
5. оценить гистологические изменения в органах крыс при действии высокой температуры на фоне введения зоотоксинов и предварительного введения гепарина;
6. исследовать in vitro взаимодействие гепарина с зоотоксинами.
Научная новизна работы. Установлено, что как яды, относящиеся к нейротропным антикоагулянтам (пчелиный яд, яд скорпиона, яд кобры), так и яды, относящиеся к прокоагулянтам (яды эфы, гюрзы и гадюки) в присутствии гепарина теряют свои токсические свойства. Гепарин не действует на токсические свойства яда щитомордника и жабьего яда.
Показано, что пчелиный яд, яд скорпиона, яды кобры, щитомордника, эфы, гюрзы, гадюки и жабы в определенных дозах увеличивают продолжительность жизни в условиях высокой внешней температуры (50°С) в 1,5 - 5,0 раз. Впервые установлено, что совместное применение гепарина и зоотоксинов (кроме яда щитомордника и жабьего яда) блокирует проявление термо протекторных свойств. Гепарин не влияет на термопротекторные свойства яда щитомордника и жабьего яда.
Оптическая плотность растворов гепарина и пчелиного яда, мелиттина, яда кобры, гюрзы, эфы in vitro резко увеличивается. Яд щитомордника и жабий яд не взаимодействуют в растворе с гепарином, не изменяют оптической плотности и не изменяют спектров поглощения в УФ-области.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные о токсическом и термопротекторном действии зоотоксинов на фоне введения гепарина значительно расширяют современное представление о неспецифической регуляции гомеостаза. Фундаментальное значение для понимания процессов теплового стресса имеют исследования состояния сердечнососудистой и дыхательной систем, функционирующие в условиях высокой внешней температуры на фоне действия зоотоксинов и вызванной гипер- и гипогепаринемии.
Результаты работы внедрены в учебный процесс кафедры физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского.
Положения, выносимые на защиту:
1. Установлено, что токсичность пчелиного яда и ядов змей (кроме яда щитомордника) в условиях нормотермии (20°С) зависит от дозы предварительно введенного гепарин. Гипогепаринемия усиливает токсичность ядов животных. Эндогенный и экзогенный гепарин не оказывает влияния на токсические свойства яда щитомордника и жабьего яда.
2. Показано, что все исследованные зоотоксины (пчелиный яд, яд скорпиона, жабий яд, яд кобры, гюрзы, эфы, гадюки) обладают термопротекторным действием. Гепарин блокирует термопротекторное действие большинства исследованных зоотоксинов и не влияет на эти свойства яда щитомордника и жабьего яда. 3. Установлено, что экзогенный и эндогенный гепарин изменяют показатели сердечно-сосудистой системы, регистрируемые при введении пчелиного яда и яда кобры в условиях гипертермии, а щитомордника не изменяют.
4. Показано, что экзогенный и эндогенный гепарин изменяют показатели внешнего дыхания, регистрируемые при введении пчелиного яда и яда кобры в условиях гипертермии, а щитомордника не изменяют.
5. Выявлено взаимодействие гепарина с пчелиным ядом, мелиттином, ядом кобры, гюрзы и эфы in vitro. Яд щитомордника и жабий яд не взаимодействуют in vitro с гепарином.
Апробация работы. Основные положения работы были доложены и обсуждены: на Всероссийской конференции молодых исследователей «Физиология и медицина» (Санкт-Петербург, 2005), на 4-й Всероссийской конференция с международным участием «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005), на 6-й Международной выставке и конференции «Интермед - 2005» (Москва, 2005), на IV Всероссийской конференции, посвященной 80-летию Института физиологии им. И.П. Павлова «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2005), на научно-практической конференции «Инновационные технологии в пчеловодстве» (Рыбное, 2006), на научно-практической конференции «Современные технологии в пчеловодстве» (Рыбное, 2006).
По материалам диссертации опубликовано 18 работ, в числе которых 5 публикаций в изданиях, рекомендованных ВАК для публикации материалов кандидатских диссертаций.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 181 странице и состоит из введения, 1 главы обзора литературы, материалов и методов исследования, 6 глав собственных исследований, выводов, библиографического указателя, приложения. Список цитируемой литературы содержит 304 источника, из которых 163 на русском и 141 на иностранных языках. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами и 65 рисунками.
Химический состав гепарина
Согласно современной классификации, гепарин относится к группе линейных анионных мукополисахаридов - полимеров, называемых глюкоза-миногликанами. Наиболее общую структуру глюкозаминогликанов имеют хондроитин сульфат, дерматан сульфат, гепаран сульфат и кератан сульфат, гиалуроновая кислота и гепарин. Показано, что углеводный компонент гепарина - это сложная смесь сульфатированных и несульфатированных углеводов (Jaques, 1980).
Коммерческий препарат гепарина может включать до 120 разных (хотя и родственных) химических соединений, различающихся длиной цепи, долей сульфатных остатков, присутствием различных Сахаров, способностью образовывать специфические комплексы с определенными основаниями, белками, биологически активными веществами (Jaques, 1983). Главными сахарами, встречающимися в гепарине, являются: 2-деокси-2-сульфамино-альфа-Б-глюкоза (с 6 сульфатными группами максимально); альфа-Ь-идуроновая кислота (с 2 сульфатными группами максимально); 2-ацетамино-2-деокси-альфа-Б-глюкоза; бета-Б-глюкуроновая кислота; альфа-Ь-идуроновая кислота.
Уроновые кислоты могут быть О-сульфатированы в положении 2, а аль-фа-О-глюкозамин N-сульфатирован и также может быть О-сульфатирован (в положении 6). Доля той или иной уроновой кислоты, О- и N-сульфатированных моносахаридных остатков может значительно варьировать (Laurent, 1977; Simon, 1977; Prakesh S. Shah A. et al.).
В молекуле гепарина могут присутствовать и другие углеводы. Все мономеры соединены между собой гликозидными связями и формируют полимеры различных размеров. Гепарин имеет сильно отрицательный заряд из-за большого числа ковалентносвязанных сульфатных группировок и карбоксильных кислотных групп, которые делают гепарин очень сильной органической кислотой (Laurent, 1977; Simon, 1977; Prakesh S. Shah A. et al.).
Молекулу гепарина принято рассматривать как протяженную нераз-ветвленную линейную структуру. Электронно-микроскопические исследования показали, что длина молекулы гепарина равна 160±40А (Hirano, 1972). Наряду с этим некоторые авторы высказываются в пользу разветвленной структуры (Kennedi,1972; Labarre, Jozefowicz, 1977).
Высокий отрицательный заряд придает молекуле гепарина специфическую проводимость и высокую скорость электрофоретической подвижности. Введение гепарина сопровождается изменением физико-химических свойств крови, выражающемся в уменьшении электрического сопротивления и повышении ионной силы (Ермолаев, Маркосян, 1973).
Высокий отрицательный заряд гепарина обусловливает его полиэлектрическое поведение в водных растворах. По данным ряда авторов, электро-форетическая подвижность гепарина составляет 13,9-Ю"5 в фосфатном буфе-ре (рН-7,4) и 17,7-10" см вольт" см" в барбитуровом буфере (рН-7,58). Относительная подвижность гепарина, хондроитинсульфатов А или С и гиалуро-новой кислоты при электрофорезе в полиакриламидном геле составляет 1,11; 1,0 и 0,67 соответственно (Ehrlich, Stivala, 1973; Bleyl, Roka, 1980).
Сульфатированные глюкозаминогликаны чаще существуют в форме протеогликанов, это характерно и для гепарина (Бычков, 1981). Молекуляр ная масса фармакологических препаратов гепарина колеблется от 5000 до 30000 дальтон. Гепарин, выделенный из животной ткани и обработанный протеиназами и эндоглюкуронидазами, состоит на 90% из глюкозаминогли-кановой компоненты и на 10% из пептидогликана (Liu et al., 1995).
Протеогликан располагается на поверхности клеток и во внеклеточной матрице. Он играет важную роль в рецепции, биологическом узнавании, транспорте молекул, иммунологических реакциях и других процессах (Jackson et al.,1991). Продуктом биосинтеза пептидной части гепарина является стержень, построенный из чередующихся остатков глицина и серина. Приблизительно две трети сериновых остатков соединены с полисахаридными цепями (Марри и др., 1993). Связь осуществляется посредством трисахарида, состоящего из двух остатков галактозы и одного остатка ксилозы (Hricovini et al., 1999). Галактоза соединена р-связью с глюкуроновой кислотой молекулы гепарина, а ксилоза -с серином полипептида.
В таком виде гепарин массой 90000 выделен из кожи крыс (Rosenberg et al., 1997). Ввиду особенностей структуры такой белковый компонент недоступен для протеиназ. Появляющиеся в различных тканях менее крупные молекулы гепарина образуются в результате расщепления исходной макромолекулы под действием эндогликозидаз - так появляются физиологически активные фракции гепарина (Бычков, 1981).
Благодаря исключительно высокому отрицательному заряду глюкозами-ногликаны обладают высокой реакционной способностью и могут взаимодействовать со многими субстанциями, начиная от катионов и кончая слож-ноорганизованными белками, изменяя конформацию и биологическую активность последних (Ердикян и др., 1988). Наиболее высокой активностью обладают гепаран сульфат и гепарин, поскольку благодаря особенностям структуры они имеют высокую плотность отрицательного заряда и лабильность конфигурации, обеспечиваемую наличием остатков идуроновой кислоты (Харченко и др., 1996).
Пчелиный яд
Доза, вызывающая в эксперименте гибель всех крыс (2ДЛ5о), равнялась 13,0 мг/кг для чистого пчелиного яда. При добавлении к зоотоксину гепарина в соотношении яд-гепарин 1:0,5 2ДЛ5о возрастала до 25,0±3,4 мг/кг, а при соотношении компонентов смеси 1:5 была несколько ниже (19,0±2,1), но, тем не менее, значительно превышала контрольное значение (рис. 1). Блокирование эндогенного гепарина его антагонистом протамин сульфатом вызывало заметное увеличение токсичности пчелиного яда, ДЛ50 в этом случае составила 5,1±0,3 мг/кг (рис. 1).
Ввиду отсутствия усиления антидотного действия гепарина с увеличением его дозы была предпринята попытка выяснить оптимальные соотношения компонентов в смеси яд-гепарин. Действительно, при предварительной инкубации с пчелиным ядом гепарин в различных соотношениях вызывал заметное ослабление его токсичности. При введении животным летальной дозы (2ДЛ50) пчелиного яда в контроле все животные погибали. При инъекции животным смеси яд-гепарин в соотношениях 1:0,05; 1:0,5 и 1:5 выживаемость крыс была соответственно 33, 75 и 50% (рис. 2). Таким образом, максимальный защитный эффект гепарина проявлялся при определенном соотношении компонентов, тогда как при увеличении и уменьшении количества гепарина в смеси его антидотные свойства ослаблялись.
Антидотное действие гепарина проявлялось не только при взаимодействии с пчелиным ядом in vitro, но и при инъецировании его лабораторным животным. Введение 5, 50, 500 и 5000 МЕ/кг гепарина крысам за 10 минут до инъекции летальной дозы яда способствовало выживанию соответственно 18, 68, 35 и 26% экспериментальных животных (рис. 2).
Кроме того, гепарин оказывал не менее сильное защитное действие даже при его поступлении в организм на фоне действия яда. При инъекции тех же доз гепарина через 10 минут после введения зоотоксина в эксперименте выживало 15, 60, 50 и 40% крыс соответственно (рис. 2).
Как и в случае введения животным смеси яд-гепарин, максимальный протективный эффект наблюдался при определенной дозе гепарина. В наших экспериментах эта доза была 50 МЕ/кг, при десятикратном увеличении или уменьшении количества гепарина выживаемость животных заметно уменьшалась. . Яд кобры Яд кобры в наших экспериментах обладал наибольшей токсичностью. Доза, вызывающая гибель 50% крыс (ДЛ5о), равнялась 0,6±0,08 мг/кг. Тем не менее, предварительная инкубация зоотоксина с гепарином приводила к значительному ослаблению его токсических свойств. Так, ДЛ5о смеси яд-гепарин в соотношении 1:0,05 возрастала почти в 3 раза (до 1,7±0,1 мг/кг), а при десятикратном увеличении содержания гепарина в смеси была 0,9±0,07 мг/кг (рис. 3).
Доза, вызывающая гибель 100% экспериментальных животных (2ДЛ5о), для яда кобры была 1,5 мг/кг. При введении животным смеси яд-гепарин в соотношении 1:0,05 2ДЛ5о возрастала до 2,4±0,2 мг/кг, однако при увеличении количества гепарина в смеси до соотношения 1:0,5 была несколько меньше контрольного значения и составила 1,2±0,1 мг/кг (рис. 3).
Наибольший токсический эффект яда кобры проявлялся при его введении на фоне антагониста гепарина протамин сульфата. ДЛ5о токсина была в этом случае заметно ниже контроля - 0,45±0,01 мг/кг (рис. 3).
Введение крысам летальной дозы (2ДЛ5о) яда кобры вызывало гибель всех экспериментальных животных. Предварительная инкубация яда с гепарином способствовала выживанию животных. При инъекции животным смеси яд-гепарин в соотношении 1:0,05; 1:0,5 и 1:5 в эксперименте осталось в живых 66, 41 и 33% крыс соответственно (рис. 4).
Инъекция гепарина крысам в различных дозах также приводила к уменьшению токсичности яда кобры. Предварительное введение гепарина в дозах 5, 50, 500 и 5000 МЕ/кг способствовало выживаемости соответственно 55, 45, 40 и 25% животных, получивших инъекцию 2ДЛ50 яда (рис. 4).
Введение гепарина в дозах 5, 50, 500 и 5000 МЕ/кг на фоне яда кобры в дозе 2ДЛ5о сопровождалось увеличением выживаемости крыс до 20, 52, 40 и 33% соответственно (рис. 4).
Яд гюрзы вызывал гибель 50% лабораторных крыс в дозе 2,8±0,7 мг/кг. Предварительная инкубация яда гюрзы с гепарином приводила к заметному ослаблению его токсических свойств (рис. 5).
Частота сердечных сокращений
Внутримышечное введение 5 мг/кг пчелиного яда сопровождалось волнообразным изменением ЧСС во времени. Сразу после введения яда и до 40-ой минуты действия ЧСС снижалась (рис. 17), причем снижение имело плавный характер и к 40-ой минуте равнялось 216 уд/мин (контроль- 262 уд/мин), что в процентном отношении составило 17,6%. Затем ЧСС стало повышаться и к 70-80 минуте достигла контрольных величин. Далее было отмечено небольшое увеличение ЧСС, не достигшее достоверных различий (рис. 17). Животные, подвергавшиеся воздействию пчелиным ядом, оставались живы в течение суток.
Во второй группе животные подвергались острому перегреванию при температуре 50С. Отмечено недостоверное уменьшение ЧСС, причем на 50 минуте от момента воздействия начиналась фибрилляция сердца, которая заканчивалась гибелью животных (рис. 17).
Совместное действие пчелиного яда и высокой внешней температуры сопровождалось увеличением продолжительности жизни на 125%, т.е. более, чем в 2 раза. Частота сердечных сокращений увеличивалась по сравнению с контролем на 15 уд/мин и уменьшалась на 24 уд/мин, однако ни в одном из временных параметров различия не достигали достоверных величин (рис. 17).
При введении смеси яд-гепарин в соотношении 1:0,5, а также при предварительном введении гепарина в дозе 500 МЕ/кг, кривая изменений ЧСС (рис. 18) практически не отличается от таковой, характерной для тепловой экспозиции (рис. 17).
Совместное применение протамин сульфата пчелиного яда и высокой внешней температуры сопровождалось значительным снижением ЧСС с последующим возвращением к исходным величинам (рис. 18).
Таким образом, по данным электрокардиографии можно сказать, что гепарин блокирует термопротекторные свойства пчелиного яда, а нейтрализация эндогенного гепарина протамин сульфатом сопровождается изменениями, характерными для пчелиного яда при нормотермии.
-і 1 1 1 1—r 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Время экспозиции, мин Контроль 1— —I— —I 90 100 110 Рис. 18. Изменение ЧСС при действии пчелиного яда с гепарином и протамин сульфатом в условиях острого перегревания (50С) 1 - яд пчелы + гепарин (1:0,5); 2 - гепарин (500 МЕ/кг)-яд пчелы (5 мг/кг); 3 - протамин сульфат (1,0 мг/кг)-яд пчелы (5 мг/кг). 5.1.2. Яд кобры
При исследовании адаптогенных свойств яда кобры было показано, что при совместном воздействии двух экстремальных факторов, каковыми являются яд и высокая температура, продолжительность жизни экспериментальных животных увеличивалась почти в три раза, по сравнению с группой, в которой крысы подвергались только воздействию температуры (рис. 19).
При введении 1 мг/кг яда кобры, так же как и при инъекции пчелиного яда, картина ЧСС имела волнообразный характер. В течение первых 10 минут ЧСС достоверно снижалась с 256 до 234 уд/мин. Затем, следовало плав ное снижение ЧСС и к 50-ой минуте эта величина достигала минимального значения. Далее, с 60-ой до 90-ой минуты наблюдалось повышение ЧСС, которое превосходило контрольные величины. К 100-110 минуте вновь наблюдалось снижение, приближающееся к значениям контроля (рис. 19). О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 Контроль время экспозиции, мин Рис. 19. Изменение ЧСС при действии яда кобры в условиях острого перегревания (50С). 1 - температура 50С; 2 - яд кобры (1,0 мг/кг) + 20С; 3 - яд кобры (1,0 мг/кг) + 50С.
Совместное воздействие яда кобры и высокой температуры сопровождалось волнообразными изменениями ЧСС, причем величина снижения ЧСС была ниже, чем в случае с применением только яда. Сам характер волнообразного снижения и повышения ЧСС имел более линейный характер, чем в вышеописанной серии (рис. 19). Следует отметить, что после 110 минуты погибали не все животные, три из них (50%) доживали до 130 минут, но только в одном случае ЧСС перед летальным исходом резко снизилась.
При введении яда кобры в смеси с гепарином и при предварительном введении гепарина в дозе 500 МЕ/кг, так же как и в случае с пчелиным ядом, кривые ЧСС (рис. 20) не отличаются от результирующей кривой применения только температурной экспозиции (рис. 19).
Морфологические изменения в печени
Внутрибрюшинное введение 5 мг/кг пчелиного яда сопровождалось снижением систолического артериального давления в течение всего времени наблюдения (100 мин), причем в большинстве случаев различия с контрольными данными были достоверны (рис. 23).
Систолическое АД в серии экспериментов, в которых животные подвергались действию высокой температуры (Т=50С), в течение первых 10 минут температурной экспозиции, увеличивалось со 140±14,0 мм рт. ст. до 170±17,8 мм рт. ст., т.е. на 21,4%. Максимальное увеличение давления регистрировалось на 40-ой минуте острого перегревания и составляло 198±13,2 мм рт. ст., что на 47,4% превышало контрольные величины (рис. 23).
Совместное воздействие той же дозы пчелиного яда и высокой температуры сопровождалось снижением АД. Однако, систолическое АД при сочетанном воздействии двух экстремальных факторов снижалось значительно меньше, чем в серии опытов, в которых животные подвергались только воздействию яда (рис. 23). 1 - температура 50С; 2 - яд пчелы (5,0 мг/кг)+20С; 3 - яд пчелы (5,0 мг/кг) + 50С. На 90-ой минуте от начала тепловой экспозиции, примененной на фоне действия пчелиного яда, все животные оставались живы. На 100 и 110 минуте из группы в 6 крыс в живых оставались 5 особей, причем систолическое давление плавно шло вниз, на 120 минуте в живых оставался один кролик с высоким исходным давлением - 210 мм рт. ст.
Картина изменения систолического артериального давления при совместном применении пчелиного яда и гепарина в виде смеси, а также при пред варительном введении гепарина в дозе 500 МЕ/кг (рис. 24), полностью соответствовала изменениям, характерным для тепловой экспозиции (рис. 23,1). 1 - яд пчелы + гепарин (1:0,5); 2 - гепарин (500 МЕ/кг)-яд пчелы (5 мг/кг),; 3 - протамин сульфат (1,0 мг/кг)-яд пчелы (5 мг/кг).
При предварительном введении протамин сульфата, пчелиного яда с последующей тепловой экспозицией, наблюдалась картина изменений систолического АД (рис. 24), схожая с изменениями, наблюдаемыми при применении пчелиного яда и гипертермии (рис. 23,1). При введении яда кобры в дозе 1 мг/кг в условиях нормотермии систолическое АД достоверно снижалось в период с 20 до 70 минут от момента введения. Максимальное снижение давления отмечалось на 60-ой минуте от момента инъекции яда и равнялось 102 мм рт. ст., что на 31,1% меньше контрольных значений. В период с 90 по ПО минуту АД недостоверно увеличивалось и превышало контрольные величины на 10-14 мм рт. ст. (рис. 25).
Систолическое АД при введении яда щитомордника в дозе 4 мг/кг изменялось двухфазно. Начиная с 10-ой минуты от момента введения яда и по 50 минуту плавно снижалось, достигая максимума - 118±2,4 мм рт. ст., что на 17,1% ниже контрольных величин. Затем АД плавно повышалось и к 100 минуте наблюдения равнялось 178±6,4 мм рт. ст., что на 25,3% больше, чем в контроле (рис. 27).
Систолическое АД при введении яда щитомордника в дозе 4 мг/кг изменялось двухфазно. Начиная с 10-ой минуты от момента введения яда и по 50 минуту плавно снижалось, достигая максимума - 118±2,4 мм рт. ст., что на 17,1% ниже контрольных величин. Затем АД плавно повышалось и к 100 минуте наблюдения равнялось 178±6,4 мм рт. ст., что на 25,3% больше, чем в контроле (рис. 27).
Одновременное воздействие высокой температуры на фоне введения яда щитомордника в дозе 4 мг/кг оказывало гипотензивное действие. Однако снижение давления было недостоверным и только перед гибелью (120 мин) АД достоверно снизилось до 102 мм рт. ст. (рис. 27).
При предварительном введении гепарина, совместном введении в виде смеси, а также при предварительном введении протамин сульфата картина изменений систолического АД во всех трех случаях не имела достоверных различий (рис. 28), а сами кривые соответствовали кривой, характеризующей картину АД-систолического при сочетанном применении яда щитомордника и температурной экспозиции (рис. 27,3).
