Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 14
1.1. Современные представления об окислительном стрессе 14
1.1.1. Повреждающие эффекты АФК . 19
1.2. Динамика прооксидантно-антиоксидантного статуса при ишемии головного мозга . 22
1.3. Метод ТЭС-терапии . 34
1.3.1. Перспективы использования ТЭС-терапии в неврологической практике . 39
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования . 42
2.1. Характеристика групп животных 42
2.2. Методы исследования 43
2.2.1. Методика наркоза . 43
2.2.2. Метод моделирования ишемического инсульта у крыс 43
2.2.3. Методика проведения ТЭС-терапии у крыс 45
2.2.4. Методика проведения эвтаназии у крыс 47
2.2.5. Методика забора крови 47
2.2.6. Методика иммуноферментного анализа содержания -эндорфина в сыворотке крови крыс 47
2.2.7. Методы гистологических исследований 48
2.2.8. Методика определения размеров очага ишемии в головном мозге у крыс . 52
2.2.9. Методики оценки прооксидантно-антиоксидантного статуса биологического материала 54
2.2.10. Амперометрический анализ антиокислительной активности 55
2.2.11. Определение активности каталазы . 56
2.2.12. Определение активности супероксиддисмутазы 57
2.5. Методы статистической обработки полученных результатов . 58
ГЛАВА III. Динамика гистологической картины очага ишемии при моделировании ишемического инсульта без использования и с применением тэс-терапии 59
3.1. Динамика гистологической картины очага ишемии при моделировании ишемического инсульта 59
3.2. Динамика гистологической картины очага ишемии при моделировании ишемического инсульта при использовании ТЭС-терапии 73
3.3. Динамика объема очага инфаркта мозга при моделировании ишемического инсульта без использования и с применением ТЭС-терапии 82
ГЛАВА IV. Динамика показателей системы про-/антиоксиданты у крыс с моделированным ишемическим инсультом и при использовании тэс-терапии 85
4.1. Показатели системы про-/антиоксиданты у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом 85
4.2. Показатели системы про-/антиоксиданты у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом при проведении ТЭС-терапии 95
4.3. Активность эндорфинергической системы у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом 102
4.4. С Активность эндорфинергической системы у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом на фоне проведения ТЭС-терапии 104
ГЛАВА V. Обсуждение результатов 107
Выводы 122
Практические рекомендации
Список литературы
- Динамика прооксидантно-антиоксидантного статуса при ишемии головного мозга
- Метод моделирования ишемического инсульта у крыс
- Динамика гистологической картины очага ишемии при моделировании ишемического инсульта при использовании ТЭС-терапии
- Показатели системы про-/антиоксиданты у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом при проведении ТЭС-терапии
Динамика прооксидантно-антиоксидантного статуса при ишемии головного мозга
Установлено, что, не взирая на снижение парциального давления кислорода в условиях ишемии, в тканях происходит усиленное образование СР, в частности, супероксид-анион радикала, вследствие взаимодействия молекул кислорода с убихиноном. При ишемии, в результате снижения кислорода, происходит угнетение терминального компонента дыхательной цепи и восстановление НАД+ до НАДН+Н. Поэтому, создаются благоприятные условия для образования АФК. При реперфузии концентрация О2 резко повышается и растворенный в липидном матриксе кислорода немедленно восстанавливается переносчиками дыхательной цепи [В. П. Скулачев, 1999]. Образующиеся радикалы быстро реагируют с ненасыщенными жирными кислотами фосфолипидов и инициируется перекисное окисление липидов (ПОЛ). Таким образом, образуются новые СР, а, следовательно, происходит дальнейшее повреждение клеток [Ф. Х. Коган, А. Н. Кудрин, 1992], в случае не адекватной работы системы антиоксидантной защиты (АОЗ) [В. В. Ляхович, 2006.; Е. Б. Меньщикова, 2008].
Основным источником высокореакционного гидроксил-радикала в биологических средах является реакция Фентона и Габера — Вейсса [Н. К. Зенков и соавт., 1997; И. Ф. Беленичев и соавт., 2009]: Н2О2 + Fe2+ НО + ОН- + Fe3+(реакция Фентона); 2Н2О2 + О2 ОН– + О2 + ОН (реакция Габера — Вейсса), катализируемая металлами переменной валентности, доступность которых, особенно восстановленного железа, для Н2О2 значительно повышается при ишемии [C. W. Olanow, 1993; И. Ф. Беленичев и соавт., 2009]. Это происходит вследствие высвобождения ионов железа при ацидозе из ферритина, индуцированного супероксидом [C. E. Thomas et al.,1985], и трансферрина, а также из P-450, гемоглобина и миоглобина [P. Aisen et al., 1978]. Они в первые минуты реперфузии, пока их не вымыло потоком крови или не связал трансферрин, катализируют образование гидроксильного анион-радикала, обладающего наибольшим цитотоксическим потенциалом [B. Halliwell, 2000].
При взаимодействии супероксид-радикала и оксид азота образуется более агрессивная молекула — пероксинитрит (ONOO–), которая вызывает повреждение макромолекул. В последнее время появились работы, в которых убедительно доказывается роль оксида азота и пероксинитрита в патогенезе нейродеструктивных заболеваний. Более существенная роль в образовании оксида азота и пероксинитрита в условиях нейродеструкции принадлежит индуцибельной NO-синтазе, которая менее зависима от Ca++ и экспрессируется в глиальных клетках под действием различных цитокинов, в частности, интерлейкин-1бета (IL-1), фактор некроза опухоли альфа (ФНО-), индуцируемый при гипоксии фактор 1 и регулируется факторами транскрипции (NF-B) [И. Ф. Беленичев и соавт., 2009]. Такие данные получены при перевязке средней мозговой артерии, двусторонней перевязке общих сонных артерий, а также у больных с черепно-мозговой травмой (ЧМТ) и каротидным инсультом.
В липидсодержащих системах, таких как биологические мембраны и липопротеиды крови, ионы Fe2+ способствуют образованию радикалов при взаимодействии с гидроперекисями ненасыщенных жирных кислот. Эти радикалы дают начало новым цепям окисления, и, таким образом, в присутствии ионов Fe2+ реакции цепного окисления становятся разветвленными, а их активность многократно возрастает [Ю. А. Владимиров, 1998; И. Ф. Беленичев и соавт., 2009].
Наиболее вероятными источниками активных форм О2 при ишемии и реперфузии тканей и мозга, в том числе, являются: реакции, индуцированные металлами переменной валентности; протеолитическая конверсия ксантиндегидрогеназы в ксантиноксидазу - форму фермента, способную активно продуцировать АФК при окислении пуринов; изменение содержания серосодержащих и селенсодержащих соединений (эти соединения близки по своей функции в организме и играют важную роль в регуляции процессов ПОЛ в биологических системах, оказывая как прооксидантное, так и антиоксидантное действие); образование АФК в электротранспортных цепях митохондрий; образование АФК в реакции гипоксантин-ксантиноксидаза; образование АФК фагоцитирующими клетками крови; образование АФК при метаболизме арахидоновой кислоты, биосинтезе и окислении катехоламинов; ингибирование активности антиоксидантных ферментов, прежде всего супероксиддисмутазы (СОД), каталазы (КАТ), глутатионпероксидазы (ГПО) – предотвращающих избыточное образование АФК и перекисей липидов, участвующих в нерадикальном разложении [T. J. Colatsky, 1989]; супероксидный анион-радикал, взаимодействуя с оксидом азота, образует пероксинитрит (NOO), обладающий цитотоксическими свойствами и потенцирующий ОС. Однако и состояние, и активность самих ферментов АОС может стать причиной генерации дополнительных количеств СР и активных молекул кислорода, а сами АФК могут регулировать активность антиоксидантных ферментов. Приведенные в исследовании некоторых авторов результаты позволяют предположить, что активность Си, Zn-СОД может регулироваться уровнем супероксида в тканях. Чем меньше исходная удельная активность фермента, тем выше уровень активации. Тем не менее, реальная тканевая активность СОД in vivo, скорее всего, намного ниже, чем можно предположить, исходя из определения активности этого фермента общепринятым методом [М. Л. Милякова, В. В. Шабанов, 2006], что может в полной мере относится к тканям ГМ.
Метод моделирования ишемического инсульта у крыс
Было установлено, что ТЭС-терапия в режиме АЭ приводит к селективной активации структур, относящихся к антиноцицептивной системе (АНС) ствола мозга (дорзомедиальное ядро гипоталамуса, серое околоводопроводное вещество, ядра шва) [В. П. Лебедев и соавт., 1986], при этом происходит блокада проведения восходящих болевых импульсов и предупреждается их поступление в кору головного мозга.
В активации структур АНС и, следовательно, формировании АЭ при ТЭС-терапии ведущая роль принадлежит эндогенным опиатным механизмам [М. И. Кузин и соавт., 1984; А. Б. Савченко, 1994; Л. И. Айрапетов и соавт., 1985]. В более поздних публикациях описано участие серотонинергического, дофаминергического и холинергического механизмов в реализации стимуляционной анальгезии [В. П. Лебедев и соавт., 1988; В. П. Лебедев и соавт., 1991; А. Б. Савченко, 1994].
Опиоидная природа медиаторов, выделяемых при ТЭС-терапии, подтверждена многочисленными экспериментальными и клиническими наблюдениями [Р. В. Шапоренко, 2008; Е. А. Губарева, 2009; В. Г. Борисенко, 2009; В. С. Тиликин, 2012; С. О. Апсалямова, 2013].
Помимо увеличения концентрации ОП в указанных выше структурах мозга и ликворе животных, на фоне проводимой ТЭС-терапии в режиме анальгезии установлнено определяемое радиоиммунным методом значительное увеличение -эндорфина в плазме крови экспериментальных животных (кролики, мыши, крысы, кошки) и человека [А. Б. Савченко, 1994]. Центральные эффекты ТЭС-терапии. В настоящее время установлено, что опиоидные рецепторы (ОР), с которыми реагирует широкий набор эндогенных лигандов, представлены 5 типами: , , , , [А. А. Зозуля, С. Ф. Пшеничкин, 1990]. При этом индивидуальные лиганды по-разному взаимодействуют с различными типами рецепторов, создавая сложную и многообразную, разноплановую систему опиоидной регуляции, которая обеспечивает контроль над различными функциями организма от нервно-психической деятельности до работы висцеральных органов [N. E. Sibing, A. Goldstein, 1988; Е. О. Брагин, 1991].
К центральным эффектам ТЭС-терапии, проводимой по методу предложенному В. П. Лебедевым и соавт. (1983), кроме вышеописанного АЭ, относят центральный гемодинамический эффект. ТЭС-терапия, на основании проведенных исследований, может использоваться в качестве способа патогенетического лечения нейроциркуляторной дистонии и лабильной артериальной гипертензии [Г. А. Акимов и соавт., 1991; В. А. Заболотных и соавт., 1993; Н. А. Зюзина, 2006], ТЭС-терапия обладает антистрессорным эффектом у больных алкоголизмом и наркоманиями [V. P. Lebedev et al., 2001].
Периферические эффекты ТЭС-терапии. Возможная область использования ТЭС-терапии не ограничивается указанными выше направлениями, что связано со значительным разнообразием физиологических эффектов ОП, способных прямо или опосредованно влиять на функцию не только ЦНС, но и на функционирование других систем организма.
Связывание ОР на Т-лимфоцитах и натуральных киллерах с соответствующими лигандами стимулирует функциональную активность иммунокомпетентных клеток в виде увеличения продукции ИЛ-2, усиления ответа на митоген, повышение их активности [Д. Д. Харкевич, З. Г. Кадагадзе, 1989; C. J. Heijner et al., 1989].
Установлено, что ОП, взаимодействуя с соответствующими рецепторами нейтрофилов и моноцитов, активируют их хемотаксическую активность как in vitro, так и in vivo [J. N. Mehrichi, L. H. Mills,1983; E. W. Palmbland, 1985; Е. А. Корнева, Э. К. Шхинек, 1988]. Способность ТЭС-терапии в режиме анальгезии вызывать противовоспалительный эффект используется при применении ее в комплексной терапии воспалительных заболеваний различных систем организма [А. П. Голиков и соавт., 1989; В. А. Александрова, С. В. Рычкова, B. П. Лебедев, 1994; В. С. Тиликин, 2012; С. О. Апсалямова, 2013]. Показано, что ТЭС-терапия ускоряет процесс репарации тканевых дефектов в среднем на 17-20% [О. Б. Ильинский и соавт., 1998; Ю. В. Храмов, 2008; И. Ф.
Каллимулин, 2010], реиннервацию двигательных нервных волокон на 30%, чувствительных - на 20% [Г. Н. Акоев и соавт., 1990], благодаря чему ТЭС терапия используется в комплексной терапии язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки [Р. В. Шапоренко, 2008]; обширного инфаркта миокарда [Е. А. Губарева, 2009; В. Г. Борисенко, 2009; П. П. Оранский, 2009; C. О. Апсалямова, 2013], острого серозного пиелонефрита [В. С. Тиликин, 2012], гестоза [С. П. Вчерашнюк, 2011].
Метод ТЭС-терапии можно использовать в комплексном лечении ожогов и операционных травм [Ю. А. Богданова, 2003, И. Ф. Каллимулин, 2010]. При использовании этого метода у данной категории больных отмечается повышение продукции соматотропина, что важно для понимания механизмов репаративного действия и в отношении других тканей. Имеющиеся результаты применения ТЭС-терапии в полной мере демонстрируют комплексность действий ее лечебных факторов.
По данным исследования в ожоговой практике установлено, что благодаря использованию ТЭС-терапии на 30-35% сокращалось время заживления ожогов и операционной травмы и это позволяло сокращать сроки пребывания больных в стационаре [Ю. А. Богданова, 2003].
Установлено, что ТЭС-терапия оказывает нормализующее (гомеостатическое) действие на уровень артериального давления при его нарушении [Н. А. Зюзина, 2006; А. Н. Жидких, 2010, 2011].
На большом количестве наблюдений показано что, повышенное артериальное давление (гипертензия I-II степени) и гипотензия приходят к нормальным значениям [В. А. Заболотных, И. И. Заболотных, 1993; Н. А. Зюзина, 2006; А. Н. Жидких, 2010, 2011]. Приоритетность и новизна такого способа лечения подтверждена авторским свидетельством СССР [В. А. Заболотных и соавт., 1986].
Положительные клинические данные о иммуномодулирующих свойствах ТЭС-терапии были получены в ряде работ [А. В. Рубцовенко 1996], особенно заметных при наличии признаков вторичной иммунодепрессии, вызванной операционной [Т. Е. Довнар и соавт., 1998] или термической травмой [Ю. А. Богданова и соавт., 2003].
Также необходимо добавить наличие позитивных лечебных эффектов ТЭС-терапии при заболеваниях, в патогенезе которых ключевую роль имеют аллергические реакции [И. И. Заболотных, В. П. Лебедев, В. А. Заболотных, 1998]. Следует подчеркнуть, что эффекты ТЭС-терапии обладают следующими отличительными особенностями: 1. Проявляются комплексно и одновременно. 2. Имеют гомеостатическую направленность. 3. Носят многокомпонентный системный характер.
Динамика гистологической картины очага ишемии при моделировании ишемического инсульта при использовании ТЭС-терапии
Для определения размеров очага церебральной ишемии пользовали тетразолиевый метод [Y. Wang-Fischer, 2009; А. И. Трофименко и соавт., 2013], с применением 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (2,3,5-ТТХ) (Россия). Тетразолиевый метод использовали, поскольку он дает более точные данные объемов очага повреждения по сравнению с МРТ в режиме Т2-ВИ. Полученные данные коррелируют со степенью неврологического дефицита у животных с ишемией мозга в поведенческих тестах [Д. Н. Силачев и соавт., 2009]. 2,3,5-ТТХ является акцептором ионов водорода. Он присоединяет водород, который, проходя через всю систему переносчиков, соединяется с молекулярным кислородом. Ферментативное окисление субстрата приводит к образованию НАДН или НАДФН. На втором этапе реакции 2,3,5-ТТХ, в сопряженной «индикаторной реакции» восстанавливается, при участии НАДФН-дегидрогеназы, до водонерастворимого формазана красного цвета. При этом НАДН или НАДФН снова окисляются. Образование формазана происходит в месте локализации НАДФН-дегидрогеназы, и, как правило, в митохондриях. Интенсивность окраски окрашиваемой ткани определяется активностью фермента и зависит от количества образующегося формазана. Визуализацию и последующее определение размеров очага повреждения ГМ этим методом проводили у половины животных каждой группы [Y. Wang-Fischer, 2009; А. И. Трофименко и соавт., 2013].
Протокол визуализации очага ишемии ГМ тетразолиевым методом Сразу после выделения ГМ проводили быструю двукратную промывку его от крови в холодном 0,9% растворе хлорида натрия. Затем его замораживали и нарезали, во фронтальной плоскости, на срезы по 2 мм. Полученные срезы помещали в размеченную чашку Петри и добавляли к ним фосфатный буфер с pH 7,2 объемом 10 мл, затем 2 мл 2% раствора 2,3,5-ТТХ и 2 мл 2 % раствор сукцината натрия. После этого выдерживали срезы в указанной смеси в термостате при температуре 38 С в течение 1 часа.
В дальнейшем эти срезы в течение 1 часа находились в растворе 10% нейтрального формалина. Полученные срезы сканировали на фотосканере и сохраняли изображение в натуральном масштабе в формате PDF. Площадь очага церебральной ишемии в (мм2) определяли на полученных сканах срезов. Кроме того определяли площадь срезов ткани мозга (в мм2) с использованием программы AreaS. В ее основе лежит сравнение площадей двух фигур, площадь одной из которых известна [А. В. Пермяков, 2003]. На основе имеющихся данных (известная площадь срезов, известная площадь очага инфаркта мозга на срезе, толщина срезов) определяли объем очага инфаркта мозга (в мм3) и объем мозга (в мм3): [Г. Г. Автандилов, 1990; К. А. Дроздов и соавт., 2011].
Рассчитывали показатель: соотношения объема очага инфаркта мозга к объему всего мозга. Он позволял нивелировать разброс размеров мозга и соответственно очага инфаркта у крыс разной массы [Г. Г. Автандилов, 1990]. 2.2.9. Методики оценки прооксидантно-антиоксидантного статуса биологического материала
Все исследования проведены на базе лаборатории кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России. Метод индуцированной люминол-зависимой хемилюминесценция Измерение люминол-зависимой H2O2-индуцированной хемилюминесценция плазмы крови проводилось на хемилюминотестере ЛТ-1 производства СП «ХОРОС» (г. Ростов-на-Дону) по методике НИИБИ в модификации, в частности биологический субстрат предварительно осаждали 28% трихлоруксусной кислотой в соотношении 1:10 и центрифугированием на 3000 об/с в течение 10 минут, в реакционную смесь вносили 100 мкл супернатанта, полученного при осаждении, вместе с 50 мкл 3% раствора этилендиаминтетраацетата и инкубировали 20 минут в сухом термостате при температуре 37С перед инициацией хемилюминесценции. Оценку динамики процесса индуцированной хемилюминесцентной вспышки производилось с помощью аппаратно-программного комплекса с программным обеспечением [И. И. Павлюченко, С. Р. Федосов, А. А. Басов, 2006], позволяющего переводить в цифровое представление аналоговый сигнал с выхода хемилюминотестера.
Ход выполнения. В кювету вносили 2,9 мл 50 мкМ раствора люминола в 0,1 М трис-HCl буфере (рН = 6,8). Биологический субстрат (плазма крови) осаждали 28% трихлоруксусной кислотой в соотношении 1:10 и центрифугированием на 3000 об/с в течение 10 минут. Затем добавляли 100 мкл полученного супернатанта в кювету. Выдерживали кювету с реакционной системой 500 секунд в термостате (t = 37o C). После этого кювета помещалась в кюветодержатель люминотестера ЛТ-1 и реакция радикального окисления люминола запускалась впрыскиванием с помощью шприца-дозатора через инжектор 0,5 мл 3% перекиси. Интенсивность амплитуды вспышки хемилюминесценции (ВХЛ) регистрировалась в условных единицах (у.е.) хемилюминесценции в сравнении с эталоном (hхем, %). Чем выше амплитуда ВХЛ, тем больше уровень АФК в исследуемом образце и ниже его антиоксидантная активность. Эталоном служила реакционная смесь без биологического образца, но содержащая активатор СРО люминол. Интенсивность индуцированных реакций СРО, определяемая с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции по максимуму ВХЛ, указывает на наличие дисбаланса в системе про-/антиоксиданты и развитие ОС при ее высоких значениях, а также отражает его уровень.
Показатели системы про-/антиоксиданты у крыс с экспериментальным ишемическим инсультом при проведении ТЭС-терапии
Результаты, полученные в проведенных экспериментальных исследованиях, подтверждают литературные данные о механизмах активации ОС и его роли в повреждении ткани мозга. Наблюдаемое в 1 сутки после моделирования ИИ увеличение амплитуды МВХЛ (на 131,4% по сравнению с контрольной группой при p0,05) свидетельствует об активации процессов СРО. Рост амплитуды МВХЛ продолжался вплоть до 7 суток, достигая 395,6% при p0,05. К 14 суткам происходило некоторое снижение (до 255,5% по сравнению с контрольной группой при p0,05) амплитуды МВХЛ, однако она превышала уровень контрольной группы на 31,6% при p0,05. Это указывает на значительную активность оксидантной системы.
Одновременно с этим в ответ на возрастающую прооксидантную нагрузку повышалась активность СОД, которая к 7 суткам тоже достигала максимума (увеличение на 151,9% по сравнению с контрольной группой при p0,05). К 14 суткам повышенная ее активность резко падала, превышая показатель контрольной группы животных только на 22,1% при p0,05.
При этом отмечено падение активности второго фермента АОЗС - КАТ. Она даже к 14 суткам не достигала уровня контрольной группы (оставалась ниже на 34,5%при p0,05).
СОД всегда «работает» в паре с КАТ, которая быстро и эффективно расщепляет пероксид водорода на нейтральные соединения. В защите клеток от ОС, вызванного высокими концентрациями перекиси водорода, ключевая роль принадлежит КАТ.
К особенностям антиоксидантного ответа митохондрий клеток больших полушарий следует отнести синхронную активацию ферментативных компонентов АОС - увеличение активности СОД, КАТ [А. О. Даниленко, 2012]. Поэтому есть проблема избыточного образования активных метаболитов кислорода при участии компонентов АОС, в частности, пероксида водорода, который может синтезироваться в повышенных количествах на фоне высокой активности СОД и низкой 111 активности КАТ [M. L. Sentman, et al., 2006], что и наблюдалось у экспериментальных животных.
Приведенные в исследовании некоторых авторов результаты позволяют предположить, что активность Си, Zn-СОД может регулироваться уровнем супероксида в тканях. Чем меньше исходная удельная активность фермента, тем выше уровень активации. Тем не менее, реальная тканевая активность СОД in vivo, скорее всего, намного ниже, чем можно предположить, исходя из определения активности этого фермента общепринятым методом [М. Л. Милякова, В. В. Шабанов, 2006].
АОА отражает общую антиоксидантную активность плазмы крови или ее антиокислительный потенциал [Ю. О. Теселкин, 2003]. Проведенными исследованиями показано, что АОА плазмы крови уже на 1 сутки моделирования ИИ возрастала на 49,2% при p0,05, относительно показателя в группе интактных животных.
На 3 сутки рост этого показателя продолжался. Он превосходил нормальные показатели, характерные для группы интактных животных, на 103,3% при p0,05. На 7 сутки он оставался на том же уровне. К 14 суткам он падал даже ниже показателя группы контроля на 18,7% при p0,05, что вероятно связано с дезадаптацией системы АОЗ.
Резкое снижение общей АОА плазмы и стойкое повышение уровня продуктов СРО дает повод говорить о значительном дисбалансе в системе АОЗ крови и организма в целом, что является неблагоприятным фактором течения патологического процесса и требует эффективных мер коррекции.
Исследование плазмы крови у больных с инсультом выявило, что АОА плазмы ассоциируется с объемом ишемического инфаркта и последующей степенью неврологического дефицита. Пациенты с более низким интегральным показателем активности АОС имели больший объем инфаркта и худшие показатели по результатам неврологического тестирования [В. И. Шмырев, С. М. Крыжановский, 2010].
Морфологическая оценка состояния ткани мозга в очаге инфаркта в 1 сутки показала, что там появились клетки-тени. В нейронах выявлялся практически полный тигролиз. В очаге ишемии наблюдалась гипохромия ядер клеток, что отражало процессы деполимеризации ДНК в некротизированных клетках. Выявлены признаки перицеллюлярного отека ткани мозга, что подтверждалось значительной разреженностью нейропиля. В центре области ишемии капилляры запустевали и становились незаметными на общем фоне. Хотя по периферии очага ишемии они хорошо прокрашивались. В них были заметны признаки отека эндотелиоцитов и стаза крови. Отмечалась адгезия нейтрофилов к эндотелию капилляров. На периферии очага некроза мозговой ткани развивался клеточный ответ (появились единичные нейтрофилы). В некоторых капиллярах замечены признаки сдавления сосудов отечными ножками астроцитов.
Все это свидетельствовало о появлении некроза нейронов, нарушениях кровоснабжения в зоне образующегося инфаркта. Кроме того имелись признаки развития местной воспалительной реакции.
На фоне воспалительной и болевой реакции изменяется уровень эндогенных ОП. В 1 сутки исследования, на фоне моделирования острого ИИ, происходила активация СРО. При этом отмечено выраженное падение уровня -эндорфина в крови, которое имело место весь период наблюдения.
Интенсивность СРО на 3 сутки продолжала расти, одновременно отмечалось значительное увеличение активности СОД и резкое падение активности КАТ (это приводило к перепроизводству перекиси водорода, как источника СР).
