Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Исследование генетических факторов в развитии психических расстройств и предрасположенности к употреблению наркотических веществ 13
1.1. Медико-генетические исследования при психической и наркологической патологии 13
1.1.1. Медико-генетические исследования улиц, употребляющих психоактивные вещества 18
1.1.2. Исследования генов дофаминергической медиации 21
1.1.3. Исследования генов серотонинергической нейромедиации 30
1.1.4. Изучение генов опиоидной рецепции 32
1.1.5. Взаимосвязь личностных расстройств и аддиктивных нарушений 33
1.1.5. Генетические исследования психических расстройств II оси DSM 47
Глава II Материалы и методы исследования 49
2.1. Характеристика материала исследования 49
2.2. Методы исследования 56
2.2.1. Методы исследования психических расстройств 57
2.2.2. Методы молекулярно-генетического анализа 56
2.2.3. Методы статистического анализа 61
Глава III Результаты молекулярно-генетического исследования у лиц, употребляющих психоактивные средства: полиморфизмы генов неиромедиаторнои системы drd4, dat, 5-нтт и опиоидной рецепции oprm1 63
3.1. Полиморфизм гена дофаминового рецептора D4 63
3.2. Полиморфизм гена дофаминового транспортера DAT 65
3.3. Полиморфизм гена серотонинового транспортера 5-НТТ 66
3.4. Полиморфизм гена опиоидного рецептора OPRM1 68
Глава IV Психические расстройства (личностные расстройства) у лиц, употребляющих психоактивные вещества 73
4.1. Структура и,динамика личностных расстройств у наркотизирующихся лиц 73
4.1.1. Личностные расстройства и частота их встречаемости у лиц, употребляющих наркотические средства 73
4.1.2. Клиническая характеристика личностных расстройств при наркотизации 79
4.2. Оценка частоты острых интоксикаций наркотическими средствами тяжелой степени (передозировок) при определенных личностных расстройствах 165
4.3. Связь криминального поведения с личностными расстройствами при употреблении психоактивных средств 173
4.4. Основные симптомокомплексы личностных расстройств у лиц, употребляющих наркотические вещества 181
4.5. Характеристика лиц с эпизодическим употреблением препаратов группы опиоидов и каннабиноидов в течение нескольких лет 199
Глава V Результаты изучения ассоциаций полиморфизма генов с личностными расстройствами и их критериями у лиц, употребляющих психоактивные вещества 201
5.1. Ассоциация полиморфизма генов с личностными расстройствами и их критериями у наркотизирующихся 201
5.2. Оценка вероятности развития личностных расстройств и их симптомов у носителей отдельных генотипов 211
5.3. Влияние комбинаций генотипов на вероятность развития личностных расстройств и их симптомов 218
Выводы 231
Практические рекомендации 234
Список использованных источников 236
- Генетические исследования психических расстройств II оси DSM
- Методы исследования психических расстройств
- Полиморфизм гена опиоидного рецептора OPRM1
- Оценка частоты острых интоксикаций наркотическими средствами тяжелой степени (передозировок) при определенных личностных расстройствах
Введение к работе
Актуальность. Несмотря на то, что, согласно официальным данным, потребление наркотиков в России является меньшим, чем в странах Запада, по сведениям Организации Объединенных Наций – население нашей страны лидирует в употреблении наиболее опасных инъекционных наркотических средств. По данным исследований Российской академии государственной службы при Президенте РФ, наркомания выделена как важнейший фактор повышения смертности среди молодежи (Халтурина Д.А., Коротаев А.В., 2006; United Nations. World Drugs Report 2004). Средняя продолжительность жизни человека с начала употребления героина не превышает 5-7 лет. Применение основных методов наркологического лечения позволяет добиться даже однолетней ремиссии только у меньшинства пациентов. Так, в настоящее время официально зарегистрировано около 550 тысяч потребителей наркотиков. По экспертным оценкам, эта цифра достигает примерно 2,5 миллиона или составляет почти два процента населения. Ежегодно почти 75 тысяч человек впервые пробуют наркотики, а 30 тысяч – погибают вследствие их потребления. Специализированными наркологическими учреждениями зарегистрировано почти 138 тысяч детей и подростков, страдающих наркологическими расстройствами (Федеральная служба Российской Федерации по контролю за оборотом наркотиков, 2010).
Не уменьшая значимости социальных факторов в возникновении эпидемии наркоманий, следует выделить, что развитие химической зависимости как специфического болезненного процесса реализуется через механизмы биологические, в том числе и психопатологические (Чирко В.В., Демина М.В., 2002). От преморбидных конституциональных особенностей характерологического склада зависят клиника и динамика наркологических заболеваний, сроки развития толерантности, наличие рецидивов и длительность ремиссий, скорость формирования и тяжесть дефицитарных расстройств в их исходах (Белокрылов И.В., 2004; Короленко Ц.П., 2005; Марилов В.В., Яшин Н.А., 2007). Использование современных систематик, в частности DSM-III-R и DSM-IV-TR определило новые перспективы в типологическом изучении личностной предиспозиции в наркологии (Иванец Н.Н., 2008). Личностные расстройства в настоящее время в России остаются малоизученными (Короленко Ц.П., Дмитриева Н.В. 2006).
Рассматривая детально биологические факторы, следует указать, что в определении зависимости от психоактивных веществ как заболевания мозга Институтом медицины Национальной академии наук США на международной конференции 1996 г. (Dispelling the myth…, 1997) генетическому компоненту отводится ведущее место (Gillespie N.A., 2006).
Изучение генетических маркеров предрасположенности к зависимости от психоактивных веществ позволит определять группу биологического риска и разрабатывать в ней специальные меры профилактики (Agatsuma S., Hiroi N., 2004; Hopfer C.J., 2006).
По современным представлениям в основе развития наркологического процесса находятся индивидуальные особенности функционирования нейромедиаторных систем и их компенсаторные возможности при длительном воздействии наркотических веществ (Фасхутдинова Г.Г., Гайсина Д.А., 2007; Oreskovich M.R., 2005). Данные различия в функционировании нейрональных систем и опиоидной рецепции обуславливают неодинаковую степень восприимчивости к определенным наркотическим веществам как отдельных лиц, так и этнических групп (Минко А.И., Линский И.В., 2004).
Изучается генетический вклад в развитие психических расстройств II оси DSM, в том числе и в предрасположенность к совершению антисоциальных действий (Reichborn-Kjennerud T., 2008; O'Sullivan S.S. et.al., 2009). В области молекулярно-генетических исследований в психиатрии перспективным считается выявление конкретных генов и их полиморфизма, ассоциированных с психическим фенотипом (Walitza А. et al., 2008). К сожалению, данные исследования до настоящего времени проводились только за рубежом.
В связи свыше изложенным, определили, что является необходимым комплексное исследование по изучению влияния генетических факторов в предрасположенность к развитию наркомании и психических расстройств. А также детальное изучение патогенеза психических (личностных) расстройств в процессе формирования наркоманического процесса. Подобных работ в западносибирской популяции (г. Новосибирск) не проводилось.
Цель работы. Определить вклад генетических факторов в механизмы формирования психических (личностных) расстройств и патогенез зависимости от психоактивных веществ у мужчин молодого возраста.
Задачи исследования:
-
Изучить частоту генотипов и аллелей генов нейромедиаторной системы и опиоидной рецепции у мужчин молодого возраста, употребляющих психоактивные вещества в популяции г. Новосибирска.
-
Изучить структуру и патогенез формирования психических (личностных) расстройств у мужчин молодого возраста, употребляющих психоактивные вещества на разных этапах наркотизации.
-
Выявить основные симптомокомплексы личностных расстройств у молодых мужчин с употреблением наркотических средств и оценить их патоморфоз в процессе наркотизации.
-
Исследовать связь личностных расстройств с передозировками наркотическими средствами и предрасположенностью к криминальному поведению с учетом наследственной отягощенности.
-
Оценить ассоциацию полиморфизма генов нейромедиаторной системы с формированием личностных расстройств и их отдельных симптомов у наркотизирующихся у мужчин молодого возраста.
-
Провести интегральную патогенетическую оценку связи полиморфизма генов-кандидатов, наркотизации и психических и поведенческих расстройств.
Научная новизна. Впервые у наркотизирующихся лиц мужского пола, русских, проживающих в западносибирском регионе, изучена ассоциация полиморфизмов генов нейромедиаторной нервной системы DRD4 (VNTR), DAT(VNTR), 5-HTT (VNTR- и ID) и опиоидной системы OPRM1 (118A/G) с употреблением психоактивных веществ.
Впервые представлена клиническая характеристика и возрастная динамика личностных расстройств, диагностированных по DSM-IV-TR и DSM-III-R, у мужчин молодого возраста, употребляющих психоактивные вещества.
Впервые представлены ассоциации исследуемых генотипов с определенными личностными расстройствами и их симптомами.
Установлено наличие определенных личностных расстройств и их симптомов у наркотизирующихся уже в преморбидном периоде до регулярного употребления наркотика. Описаны особенности их формирования, связанные как с наследственной предрасположенностью, так и с социокультуральной трансформацией личности, обусловленной необходимостью поддерживать наркотизацию; дана возрастная характеристика особенностей расстройств.
Выявлены ведущие симптомокомплексы и структурно-функциональные характеристики личностных расстройств. Показано, что определяющую роль в формировании наркотизации играют не социальные и медицинские показатели, а именно симптомокомплексы личностных расстройств.
Установлены данные о предрасположенности к криминальному поведению у наркотизирующихся подростков еще до развития синдрома зависимости и о связи криминогенности личности с наследственностью наркологическими заболеваниями. Прослежена взаимосвязь между фактами возникновения острой интоксикации наркотическими средствами тяжелой степени («передозировок») и личностными расстройствами.
Оценка связи полиморфизма генов-кандидатов с личностными расстройствами имеет теоретическое и фундаментальное значение. Полученные данные о частоте генотипов и аллелей генов-кандидатов позволяют сформировать представление о факторах риска наркотической патологии в изучаемом регионе.
Предлагается концепция, что изученные варианты генотипов определяют качественную и количественную характеристики нейрохимических процессов, которые и обусловливают появление и развитие психических расстройств, а также влечение к наркотическим веществам с формированием психической и физической зависимости. Триггерами употребления и развития процесса наркотизации могут выступать особенности функционирования нейромедиаторной системы ЦНС, а также психические расстройства, которые, провоцируя наркотизацию, в свою очередь также могут быть инициированы генетическими особенностями ЦНС. В свою очередь формирование наркотической зависимости оказывает патомодифицирующее влияние на клинику и течение психических нарушений, что создает «порочный круг».
Практическая значимость исследования.
-
Результаты проведенного комплексного наркологического, психиатрического и генетического исследования позволяют выявить конкретные закономерности в клинике наркологического процесса, которые могут быть использованы как в терапевтическом процессе, так и при планировании превентивных мероприятий.
-
Своевременная диагностика определенных личностных расстройств и их симптомов у наркотизирующихся в преморбидном периоде, т.е. еще до формирования регулярного употребления наркотика, позволяет применять соответствующее медикаментозное и психотерапевтическое лечение. Выявленная связь симптомокомплексов личностных расстройств и их возрастные особенности с наркотизацией позволят выделить сенситивные периоды, когда коррекция наиболее эффективна.
-
Данные исследования в перспективе можно использовать для определения степени риска и тяжести развития зависимости от психоактивных веществ. Практическое применение полученных результатов дает возможность научного обоснования и разработки адекватных методов профилактики и лечения наркотической зависимости.
-
Полученные данные о частоте генотипов и аллелей генов-кандидатов, дающие представление о факторах риска наркотической патологии в изучаемом регионе, могут явиться основой для определения масштабов необходимой профилактической работы и отнесения конкретных лиц к группам риска.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Полиморфизм генов дофаминового рецептора 4-типа, дофамин-транспортного белка, серотонинового транспортера ассоциирован с употреблением психоактивных веществ у русских молодых мужчин из западносибирского региона.
-
Полиморфизм генов нейромедиаторной системы ассоциирован с присутствием в психическом состоянии наркотизирующихся различных личностных расстройств и их отдельных критериев.
-
Имеется патогенетическая взаимосвязь молекулярно-генетических особенностей нейромедиаторной системы с употреблением психоактивных веществ и личностными расстройствами.
-
У лиц, употребляющих наркотические средства, диагностируется двойной диагноз, включающий употребление психоактивных веществ и личностные расстройства уже до становления системной наркотизации.
-
Мужчины молодого возраста уже на ранних этапах наркотизации характеризуются противоправным поведением. Наследственность, отягощенная наркологическими заболеваниями, усугубляет криминогенность поведения.
-
Острые интоксикации наркотическими средствами ассоциированы с личностными расстройствами.
Апробация результатов исследования. Основные положения диссертации были представлены и обсуждены на Международном междисциплинарном симпозиуме «От экспериментальной биологии к превентивной и интегральной медицине» (Судак, 2007); научно-практической конференции с международным участием «Психическое здоровье Дальнего Востока» (Владивосток, 2007); XIII научной отчетной сессии ГУ НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН «Актуальные вопросы психиатрии и наркологии» (Томск, 2007); Второй всероссийской конференции с международным участием «Современные проблемы биологической психиатрии и наркологии» (Томск, 2008); XIV отчетной научной сессии НИИ психического здоровья СО РАМН «Актуальные вопросы психиатрии и наркологии» (Томск, 2009); II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых процессов» (Новосибирск, 2010); межвузовской (с международным участием) научной конференции «Проблемы и перспективы общетеоретической, прикладной и специальной психологии» (Новосибирск, 2010); III международной научно-практической конференции «Социокультурные проблемы современного человека научно-практической конференции «Онтогенетические аспекты психического здоровья населения» (Омск, 2010); региональной научно-практической конференции «Социальные и психопатологические характеристики наркотизирующихся детей и подростков» (Томск, 2010); научно-практической конференции с международным участием «Психическое здоровье населения Сибири и Дальнего Востока» (Владивосток, 2010); межвузовской (с международным участием) научной конференции молодых ученых «Проблемы и перспективы общетеоретической, прикладной и специальной психологии» (Новосибирск, 2010); на общероссийской научной конференции «Фундаментальные прикладные исследования в медицине» (Сочи, 2010); межрегиональной научно-практической конференции «Резидуально-органическая патология головного мозга (онтогенетический аспект)» (Кемерово, 2011); V всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2011); III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых процессов» (Новосибирск, 2011).
Объем и структура диссертации. Работа изложена 265 страницах, иллюстрирована 28 таблицами и 2 рисунками. Диссертация состоит из введения, аналитического обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 158 отечественных и 103 зарубежных авторов, и приложения.
Генетические исследования психических расстройств II оси DSM
За рубежом стали активно проводить исследования, которые в данный-момент еще не многочисленны, посвященные генетическим механизмам в образовании; психических расстройств; II оси DSM;. в том- числе и в предрасположенность к совершению антисоциальных действий [212,249,253]. Существуют зарубежные публикации о связи личностных расстройств (ЛР) с полиморфизмами генов рецепторов дофамина 2-го, 3-го и 4-го типов (DRD2, DRD3, DRE 4) с обсессивно-компульсивным ЛР, с антисоциальным ЛР, ЛР избегания, а также с влечением к психоактивным веществ [194,224].
Предполагается связь, полиморфизма комбинации гена переносчика дофамина (DAT) и гена дофаминового рецептора 2-го типа. (DRD2) с агрессивным, преступным»поведением,[168,229].
Полиморфизмы гена переносчика серотонина (5-НТТ) ассоциируются с импульсивностью, агрессией, эмоциональными нарушениями, склонностью к суицидальности в структуре пограничного ЛР [199,254,236] и с обсессивно-компульсивным ЛР [225].
Существуют работы, в которых DRD3 и DRD4 ассоциированы с ЛР избегания и с симптомами обсессивно-компульсивного ЛР [194,253].
Рассматривая представленные данные, необходимо указать, что- в отечественной доступной литературе нет работ, посвященных генетическим исследованиям, личностных расстройств.
Анализируя отечественную и- зарубежную научную литературу, посвященную изучению взаимосвязи полиморфизма генов, с наличием у индивидуумов- с расстройствами наркологического и психиатрического спектра; можно сделать вывод, что более детально проблема изучается в последние десять лет. Немногочисленны исследования, в этой области российских ученых.
Таким образом, не вызывает сомнения, что определенные конституционально-личностные свойства являются факторами риска предрасположенности, к формированию зависимости от ПАВ. Эти свойства контролируются генетически, следовательно, могут быть учтены при молекулярно-генетическом анализе. Основываясь на материалах представленных научных исследований, мы считаем перспективными для дальнейшего изучения гены-кандидаты: ген тирозингидроксилазы (ТГ), ген дофамин-бета-гидроксилаза (ДБГ), ген дофаминового транспортера (DAT), ген дофаминового рецептора 2-го типа (DRD2), ген дофаминового рецептора 4-го типа (DRD4), ген катехол-О-метилтрансферазы (КОМТ), ген рецептора серотонина подкласса- 5НТ2А, гена рецептора серотонина подкласса 5HTR1B, ген транспортера серотонина 5-НТТ ген опиатного мю-рецептора (OPRM1), ген опиатного дельта-рецептора (OPRD1), ген опиатного каппа-рецептора (OPRK1) и каннабиноидного рецептора (CNR1). Системный анализ данных генов в сочетании» с детальным психиатрическим и комплексным анамнестическим исследованием наркозависимости с оценкой позволит в будущем выявить молекулярно-генетические факторы риска предрасположенности к зависимости от ПАВ.
В рамках настоящей работы было проведено обследование контингента, который» составляли лица мужского пола, русской национальности; в возрасте от 10 до 33 лет, в количестве 252 человек. Из них 240 человек были лица; обратившиеся за специализированной помощью В наркологические стационары г. Новосибирска в период 2004-2008 гг. в связи с употреблением психоактивных веществ. Средний, возраст пациентов был 19,5±0,8 года. В качестве группы сравнения были обследованы 12 мужчин с эпизодическим употреблением наркотических веществ группы опиоидов и каннабиноидов без развития зависимости к ним.
Наркологические диагнозы пациентам выставлялись в соответствии классификации МКБ-10 (2000). Все обследуемые имели верифицированный диагноз «Психические и поведенческие расстройства, связанные с употреблением психоактивных веществ» F1.
Наркотизирующиеся употребляли одно- илш несколько психоактивных веществ. Наиболее частыми.диагнозами.у пациентов, как следует из таблицы 1, были «Синдром активной зависимости от опиоидов Пет.» (F11.2) (63,8%) и «Синдром активной зависимости от каннабиноидов I ст.» (F12.2) (52,9%). В меньшем» числе случаев были представлены диагнозы «Употребление каннабиноидов с вредными последствиями» (F12.L) (24,2%) и «Синдром активной зависимости от каннабиноидов II ст.» (F12.2) (19,2%). Затем следовали остальные диагнозы «Употребление опиоидов с вредными последствиями» (F11.1) (7,1%), «Употребление летучих органических растворов с вредными последствиями» (F18.1) (11,3%), «Употребление алкоголя с вредными последствиями» (F10.1) (8,6%), «Синдром активной зависимости от кокаина I ст.» (F14.2) (8,6%), «Синдром активной зависимости от летучих органических растворов I ст.» (F18.2) (6,3%) (табл. 1). Критериями исключения из обследования было наличие у обследуемых признаков психического эндогенного заболевания, грубого органического поражения ЦНС, олигофрении, тяжелые соматические заболевания в преморбиде наркомании.
Все больные были обследованы лично клинико-психопатологически, клинико-катамнестическии статистически.
В связи с тем, что МКБ-10 предназначена в значительной степени для статистических целей, в основной группе проводилось клиническое психопатологическое обследование с использованием классификации психических расстройств Американской психиатрической классификации DSM-rVR(2000) и DSM-III-R (1987).
В основной группе пациентов было проведено клинико-психопатологическое, медико-генеалогическое и генетическое обследование.
В стандартной форме карты обследования содержались паспортный и информационный разделы. Паспортная часть состояла из фамилии, имени, отчества пациента, его возраста, сведений о текущем и предыдущих поступлениях в стационар, сроках пребывания в стационаре, службе в вооруженных силах (для лиц старше 18 лет), о фактах совершения общественно опасного деяния. Информационная часть включала полный анамнез (анамнез жизни, отягощенность наследственными, психическими и наркологическими заболеваниями, психиатрический анамнез, наркологический анамнез, описанные в хронологической последовательности), соматический статус, неврологический статус, психический статус, данные клинико-лабораторных исследований, методов функциональной диагностики, врачебно-клинического обследования, лечение.
В ходе исследования пациенты были разделены на две группы одинакового численного состава: младшую (дети и подростки в возрасте от 10 до 18 лет) и старшую (лица старше 18 лет) по 120 человек.
В зависимости от возраста пациентов было отслежено распределение наркологических диагнозов (табл. 2).
Методы исследования психических расстройств
Метод молекулярно-генетического анализа- включал подготовку препаратов ДНК. Экстракция ДНК из крови проводилась методом фенол-хлороформной экстракции. К образцу крови (—10 мл) добавляли 5-6 объемов буфера А (10 мМ трис-НС1, рН=7.5; 10 мМ NaGl; 3 мМ MgCl2) и проводили гемодиализ, растирая сгустки в гомогенизаторе Поттера. Осадки, полученные центрифугированием при- 2500 g, промывали дважды буфером. А и ресуспендировали в 0,5 мл буфера В . (10 мМ ЭДТА; 100 мМ NaCl; 50 мМ трис-HCl, рН=8.5). После добавления SDS до 0.5% и протеиназы К до 200 мкг/мл смесь инкубировали 2 часа при 65С, или в течение ночи при 37С. Депротеинизацию проводили последовательно водонасыщенным фенолом, смесью фенол-хлороформ (1:1) и хлороформом. ДНК осаждали добавлением раствора NH4Ac до 2.5 М и 2.5 V этанола. Осадок, полученный центрифугированием на микроцентрифуге «Eppendorf» в течение 10 минут, промывали 70% этанолом и растворяли в воде до концентрации ДНК 0,5мкг/мкл. Генотипирование VNTR полиморфизма гена DRD4
Генотипирование проводили по модифицированной методике Нанко с соавторами. Фрагмент ДНК гена DRD4 (идентификационный номер в GenBank L12398), содержащий участок ДНК с вариабельным размером 96-384 п.о., амплифицировали с использованием праймеров: 5 -AGGTG-GCACGCGCG-CCAAG-CTGCA-3 прямой, поз.668-692; 5 CTGC-GGTGG-AGTCT-GGGGT-GGGAG-3 обратный, поз. 1129-1105.
Реакционная смесь для амплификации содержала 0,5-1 мкг геномной ДНК, прямой и обратный праймеры в концентрации 0,4 мкМ каждый, dNTP в концентрации 0,1 мМ каждого, 1,5 мМ MgC12, 10% диметилсульфоксид (DMSO), 0,01% по объему Tween-20, 20 мМ (NH4)S04, 75 мМ ТрисНСІ (рН 9,0) и 1,25 ед. Taq полимеразы. Общий объем смеси составлял 25 мкл. ПЦР проводили на амплификаторе Eppendorf Mastercycler gradient (Eppendorf Scientific Inc., США). Условия амплификации были следующими: 4 мин при 95С, затем 35 циклов: 1 мин при 95С, 1 мин при 65С, 1 мин при 72С. Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле, в буфере, содержавшим 90 мМ Трис-борат (рН 8,0) и 2 мМ ЭДТА, с последующей окраской бромистым этидием. В качестве маркера молекулярного веса использовали ДНК маркеры 100 п.н. (Сибэнзим, Россия). Генотипироваине VNTR полиморфизма гена DAT
Для- генотипирования использовали модифицированную методику Митчела с соавторами. Фрагмент ДНК гена DAT (идентификационный номер В GenBank М95167), содержащий участок ДНК с вариабельным размером. 240-4801 п.о., амплифицировали с использованием праймеров: 5 GTGGGTAG-GGAAC-GGCCT-GAG-3 прямой, поз. 2718-2740; 5 -СТТССGGAG-GTGAC-GGGTC-AAGG-3 обратный, поз. 320 Г-31-78 . Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала 0,5-1 мкг геномной; ДНК, прямой и обратный праймеры в концентрации 0,4 мкМ каждый, dNTP в концентрации 0,4 мМ. каждого, 2 мМ MgC12 , 0,01% по объему Tween-20, 98 мМ бета-меркаптоэтанол, 67 мМ ТрисНСІ (рН 8.8) и 1,25 ед. Taq полимеразы. Каждый из 35 циклов амплификации состоял из денатурации (0,5 мин. при 95С), отжига (0,5 мин. при 66С) и синтеза (1,5 мин. при 72С). Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле, с последующей окраской бромистым этидием. В качестве маркера молекулярного веса использовали ДНК маркеры 100 п.н. (Сибэнзим, Россия).
Генотипирование два ОНИ -ID и VNTR полиморфизма гена 5НТТ ДНК. лейкоцита была изолирована путем высаливания насыщенным раствором NaCl. Праймеры-олигонуклеотиды были разработаны в человеческой, 5-НТТ регулирующей области, примыкающей к 5-НТТ связанной полиморфной (5-HTTLPR) области, т соответствовали положениям нуклеотида от 1416 до 1396 (5П GGCGTTGCCGCTCTGAATGCC) и от 1170 до 1149 (5П CAGGGGAGATCCTGGGAGAGGT) согласно опубликованной последовательности (Heils и др. 1996). С праймеров произвели 265 фрагментов п.н. (вариант инсерции - вставки) или 221 фрагмент п.н. (вариант делеции). VNTR в 2-ом интроне из гена серотонинового транспортера- был проанализирован с использованием1 интрон-2 последовательности праимера 5D-GTCAGTATCACAGGCTGCGAG (положение нуклеотидов от +1 до +21) и 5DGTTCCTAGTCTTACGCCAGTG (от +229 до +250) для амплификации» PCR как описано Ogilvie и др. (1996). Продукты амплификации состояли из трех аллелей 250 п.н. (9 повторов); 267 п.н. (10 повторов) и 300 п.н. (12 повторов). Стандартная PCR (полимеразная цепная,реакция) была выполнена в 25 мкл объема, содержащих 80 нг геномной ДНК, 20 пикомоль каждого» инициатора, 50 мМ KG1, 10 мМ Трис-HGl (рН 8.3), 1,5 мМ MgC12, 0.01% желатин, 5% диметилсульфоксид, 200 мкМ каждого dNTP и 0,5 U Taq полимеразы ДНК. Продукт HTTLPR был произведен с использование 3,0 мкМ дезоксирибонуклеотида (dGTP/7-deaza-2D-dGTP). Образцы были амплифицированы в UNO 2 Thermoblock. После первичной денатурации в течение 5 минут при температуре 95С были выполнены 35 температурных циклов, состоящих из 30 сек, при 95С, 45 сек - при 57 С и 60 сек - при 72 С, сопровождающиеся заключительным этапом продолжительностью 5 минут при 72С. Аллели были разделены путем электрофореза в агарозном геле при сравнении со стандартом размера ДНК.
Генотипирование 118A-G полиморфизма гена OPRM1 Для амплификации использовали праймеры: прямой 5-ggtca-acttgccca-cttag-atgtc-З и обратный, 5-gtaga-gggcc-atgat-cgtgag-3. Реакционная смесь объемом 25 мкл содержала 0 5-1 мкг геномной ДНК, прямой и обратный праймеры в концентрации 0,4 мкМ каждый, dNTP" в концентрации 0,4 мМ каждого, 2 мМ MgC12, 0,01% по объему Tween-20, 98 мМ бета-меркаптоэтанол, 67 мМ ТрисНСІ (рН 8.8) и 1,25 ед. Taq полимеразы. Каждый из 33 циклов амплификации состоял из денатурации (0,5 мин. при 95С), отжига (0,5 мин. при 66С) и синтеза (0,5 мин. при 72С). Рестрикцию осуществляли с 7,5 ед. рестриктазы TagI с последующей инкубацией при 37С в течение 16 часов. Размер продукта амплификации составлял 139 п.н. При наличии сайта рестрикции от продукта амплификации отрезается 20 п.н.
Полиморфизм гена опиоидного рецептора OPRM1
Носителей генотипа А/А гена опиатного мю-рецептора (OPRM1) среди наркотизирующихся встречается в 67,7±4,8% случаев, меньшую долю составляют носители генотипа A/G (29%) и генотипа G/G (3,2%). В контрольной группе носителей генотипа А/А было в 73,7±7% случаев, A/G в 23,7±6,8%, G/G в 2,6±2,5%. Соответственно (табл. 12), в обеих группах высока доля аллеля А.
По данным литературы, посвященной генетическим исследованиям, установлено, что некоторые психические и эмоциональные характеристики человека связаны с полиморфизмом 3-го экзона гена нейромедиаторной системы дофаминового рецептора 4-типа DRD4. При обследовании лиц, страдающих наркотической зависимостью, была обнаружена повышенная частота встречаемости «длинных» аллелей VNTR полиморфизма гена DRD4. Таким образом, выявление носительства семи тандемных поворотов в 3-ем экзоне гена DRD4 дает основание отнести обследуемого субъекта к группе высокого биологического риска в отношении наркотической зависимости (Анохина И.П. и др., 2004; Бочков Н.П. и др., 2003; Галеева А.Р. и др. 2002).
В обследуемой группе молодых людей мужского пола, этнически русских, по сравнению с контрольной и популяционной группой мужчин, следует отметить тенденцию к накоплению носителей гомозиготного генотипа 4/4 гена дофаминового рецептора 4-типа DRD4. Генотип 4/2 гена DRD4 у пациентов представлен намного реже, чем у мужчин контрольной группы, генотип 4/5 чаще, чем в популяционной. Только среди-наркотизирующихся отмечено присутствие носителей генотипа 4/3. В отличие от данных по наркозависимым европейских и русских популяций других регионов. России о преобладании, среди наркоманов носителей длинных аллелей, в сибирской популяции встречаются короткие аллели. Хотя нельзя исключить, что недостаточное разнообразие аллелей представленных в группе больных, обусловлено отчасти её небольшим размером. Длинные аллели представлены в общей популяции.
Одним из важнейших функциональных белков нейромедиаторной дофаминовой системы является дофамин-транспортный белок, с помощью которого осуществляется обратный захват медиатора пресинаптической мембраной (Анохина И.П. и др., 2004). Поглощение дофамина осуществляется через активный чрезмембранный перенос с помощью белкового транспортера дофамина. В этой связи ген дофаминового транспортера (DAT), картированный- на коротком плече хромосомы 5 (5р15.3), может рассматриваться как один из генов предрасположенности к развитию наркоманий и психических заболеваний. Особое внимание исследователей привлек 40-нуклеотидный тандемный повтор (VNTR) в 3 -нетранслируемой области гена. Среди больных опийной наркоманией наблюдалось преобладание гомозигот 10/10, а также гетерозигот 9/10. Аллель 9 предложено рассматривать в качестве аллеля - риска алкоголизма и наркомании (Agatsuma S., Hiroi N., 2004; Glatt S.J.. et al., 2007; Heils A., et al., 1996; Janicki P. K. et al., 2006).
В группе пациентов, употребляющих наркотические средства, прослеживается отчетливая тенденция к увеличению встречаемости генотипов 9/10 и 10/10 гена дофамин-транспортного белка (DAT), что соответствует литературным данным. Но в контрольной- и популяционной группах мужчин распределение исследуемых генотипов- гена DAT было аналогичным. Имеется тенденция к увеличению частоты генотипа 9/9 гена DAT у лиц с употреблением наркотических средств и, аналогично, в-контрольной группе мужчин, по сравнению с частотой генотипа- 9/9 в І популяционнойгруппе мужчин.
Как известно, серотонин участвует в, регуляции сложных поведенческих реакций. Имеются, доказательства участия серотонина мозгав регуляции потребления наркотиков (Agatsuma S., Hiroi N., 2000). При изучении предрасположенности к нервно-психическим заболеваниям, в том числе к наркомании, особое внимание уделяется изучению генетического полиморфизма переносчика серотонина (ген 5-HTTLPR), выполняющего функцию обратного транспорта серотонина в пресинаптическое пространство. При изучении VNTR-полиморфизма во 2 интроне гена переносчика серотонина обнаружена ассоциация гомозиготных генотипов, в» частности 10/10 с наркотизацией у мужчин (Бочков Н.П., 2003; Agatsuma S., Hiroi N., 2006). В ряде публикаций обнаружена и подтверждена, ассоциация полиморфных маркеров»гена 5-НТТ (в основном маркера, локализованного в области промотера 5-HTTLPR) как с алкоголизмом, так и с наркоманией (Lee N.M., Smith А.Р., 2002).
У наркотизирующихся западносибирской популяции несколько чаще представлены носители генотипа 10/12 гена 5-НТТ, чем у мужчин контрольной группы. Генотип 10/10 встречается у лиц с употреблением ПАВ чаще; чем в контрольной группе. Среди наркотизирующихся больше носителей аллеля 10. Различия не достигают уровня статистической достоверности, возможно, из-за небольшого размера групп, т.к. для анализа отбирались лица только русской национальности, с учетом критериев исключения.
Оценка частоты острых интоксикаций наркотическими средствами тяжелой степени (передозировок) при определенных личностных расстройствах
При: употреблении наркотических средств могут возникать состояния острых интоксикаций тяжелой степени (передозировки): Данные состояния могут быть следствием утраты контроля дозы, наркотического вещества в/ состоянии опьянения, при; снижении толерантности к ним; например; после курса специфического лечения , при сочетанном употреблении; психоактивных веществ, чаще всего с алкоголем, при высоком или, наоборот, низком качестве наркотического вещества ит.д. Однако, при равном стаже и; дозировках ПАВ, острые интоксикации наркотическими1 средствами в-анамнезе встречаются- не у всех наркотизирующихся. Также отмечена тенденциячк тому, что у лиц, перенесших передозировку ПАВ, часто имеются ее повторные случаи.
Было» отмечено, что есть различия в степени сопряженности острой интоксикации наркотическими средствами с определенными, клиническими синдромами и симптомами личностных расстройств, что и явилось целью нашего исследования.
У пациентов с диагнозом «Синдром активной зависимости от опиоидов II ст.» факт передозировки наркотиками присутствовал в половине наблюдений, что составило 29,2% от общего числа пациентов, в 12,5% из которых передозировок было несколько. Имеется статистическая значимость (С=0,477; df=2; р 0,001, OR- oo). Из значения коэффициента OR, следует, что наличие данного синдрома обуславливает максимальное повышение риска возникновения острой интоксикащш наркотическими веществами тяжелой, степени. Есть тенденция к сопряженности «Синдрома активной зависимости от каннабиноидов I ст.» и наличием в анамнезе больных острых интоксикаций наркотическими веществами. Данный синдром был сопряжен в 41,7% с передозировками наркотических средств (что составило 20,8% от общего числа), из них 25% были повторными, (С=0,358; df=2; р 0,001, OR=3,41). Значение OR свидетельствует, что наличие зависимости от каннабиноидов также повышает вероятность у пациента случая острой интоксикации тяжелой степени наркотическими средствами. Естественно, логичным является то, что непосредственно активная зависимость от наркотических средств обуславливает увеличение риска передозировок ими.
Существование связи между перенесенными острыми» интоксикациями тяжелой степени наркотическими средствами и диагнозом наличия личностного расстройства у пациента подтверждается тем, что у больных с антисоциальным личностным расстройством в 40% случаев (25% от общего числа), из них в 13,3%. неоднократно, была определена острая отравление наркотическими средствами, (С=0,337; df=2; р 0;0005, OR=3,67). Наличие передозировок наркотиков у обследуемых было статистически, достоверно сопряжение критерием «Неспособность находиться в!состоянии длительного "рабочего поведения" в производственной деятельности, обучении И Т. Д., Bi результате снижения мотивационной заинтересованности» в«28,6% всего ив 7,1% наблюдений неоднократно, (С=0,371; df=2; р 0,0005; OR=5). Критерий «Отсутствие конформности к социальным нормам и законам, выражающееся в, антисоциальных действиях» достоверно связан с фактом острой интоксикации ПАВ в 21,1% и в 10,5% повторно, (С=0,236; df=2; р 0,001; OR=l,8). Пациенты с симптомом «Отсутствие планирования своей жизни, действия совершаются импульсивно, спонтанно, реализуются даже неадекватные желания» имели связь с острыми интоксикациями также в равной степени однократные, так и многократные в 21,4%, (С=0;356; df=2; р 0;0005; OR=4,29). Симптом «Пренебрежительное отношение к безопасности других людей, включая близких» был в половине случаев сопряжен с передозировками наркотических средств, (С=0,47Г; df=2; р 0,0005; OR=2,72). Наличие передозировок наркотиками с критерием «Проблемы в семейной жизни, неустроенная личная жизнь» в трети наблюдений сопряжено с однократными передозировками, а также в трети случаев неоднократными, (С=0,438; df=2; р 0,0005; OR=3,94). Значения коэффициента OR указывают на то, что присутствие АЛР и его симптомов в психическом состоянии обследуемых увеличивает вероятность возникновения передозировок наркотическими средствами.
Пограничное ЛР характеризовалось однократными острыми интоксикациями тяжелой степени в 21,8% и в трети случаев повторными, (С=0,467; df=2; р 0,0005; OR=l,87). Симптом «Неистовые попытки избежать реального или воображаемого одиночества» сопряжен в»37,5% однократно и в четверти наблюдений неоднократно с острыми1 интоксикациями наркотиков, (С=0,462; df==2; р 0,007; OR=4,85): Критерий «Нарушение идентичности, проявляющееся, неуверенностью минимум в двух областях:;. самооценке или образе, самого себя, сексуальной; ориентации и т.д.» m передозировки наркотиками; взаимосвязаны как однократно; так иг многократно по 18,2%,(СЮ; 167; dfH2; р 0;03; GR=1,17): Симптом «Хроническое чувство пустоты» характеризовался связью с разовыми: острыми интоксикациями в 37,5% наблюдений и повторными в четверти случаев, (C=0i,462; df=2; р 0,0005; OR=4,85). Т.о., с данным симптомом сопряженность была весьма высокой; Лица с критерием «Неадекватная, интенсивная злость» имели передозировку в 39,5% случаев, причем во всех наблюдениях - неоднократную, (С=0,414; df=2; р 0,0005; OR=l,54). Острое отравление наркотическими средствами и симптом «Транзиторная, связанная со стрессом паранойя или: тяжелые диссоциативные симптомы (чувство нереальности)» были сопряжены в четверти случаев однократно и в 8,3% неоднократно, (С=0-234; df=2; р 0,001; OR=l,32). Т.о., как следует из положительного значения коэффициента: OR, эти критерии повышают склонность к наркотизации с передозированием наркотическими веществами.
Гистрионическое ЛР сопряжено с однократными передозировками наркотиков в 18,2% и в 27,3% - с неоднократными, (С=0,39г; df=2; р 0,001; OR=3). Критерий «Неадекватная сексуальная соблазнительность» имел сопряженность с острыми интоксикациями наркотических средств в половине наблюдений, (С=0,558; df=2; р 0,0005; OR=2,38). Критерий «Неадекватное, преувеличенное выражение эмоций» сопряжен с острыми интоксикациями в 15,4% и в 23,1% неоднократными (С=0,329; df=2; р 0,0005; OR=2,71):
