Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 2. Обзор литературы
ГЛАВА 3. Материалы и методы
3.1. Препаративная часть
3.1.1. Моделирование экспериментальной менопаузы
3.1.2. Моделирование экспериментального инфаркта миокарда
3.1.3. Приготовление гомогенатов сердца и мозга
3.1.4. Выделение мембранной фракции гомогенатов сердца и мозга
3.1.5. Реагенты, препараты, аппаратура
3.2. Методы исследования
3.2.1. Определение уровня связывания лиганда с дофаминовыми, рецепторами
3.2.2. Определение белка
3.2.3. Электронно-микроскопическое исследование
3.2.4. Статистические методы
3.3. Постановка экспериментов
3.3.1. Особенности определения уровня специфического связывания[ Н]-спиперона с МФГС и МФГМ крыс на фоне овариэктомии
3.3.2. Особенности определения уровня специфического связывания [ Н]спиперона с МФГС и МФГМ у овариэктомированных крыс на фоне введения препаратов женских половых гормонов
3.3.3. Особенности определения уровня специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГС и МФГМ у овариэктомированных крыс в разные сроки после инфаркта миокарда
3.3.4. Особенности определения уровня специфического связывания [3Н]-спиперона с дофаминовыми рецепторами у крыс, получавших препараты женских половых гормонов, в разные сроки после корона-роокклюзии
ГЛАВА 4. Результаты собственных исследовании 44
4.1. Действие препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы головного мозга самок крыс после хирургической овариэктомии
4.1.1. Влияние ложной овариэктомии на уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГМ
4.1.2. Действие хирургической овариэктмоии на количество сайтов специфического связывания [ Н]-спиперона с рецепторами дофамина в головном мозге 46
4.1.3. Уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФРМ овариэктомированных крыс после введения препаратов женских половых гормонов 51
4.1.4. Уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГМ в разные сроки инфаркта миокарда у ложноовариэктомированных животных 55
4.1.5. Дофаминергическая система головного мозга кастрированных самок в разные сроки инфаркта миокарда 59
4.1.6. Действие препаратов женских половых гормонов на уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГМ кастрированных самок в разные сроки после инфаркта миокарда 63
4.2. Влияние препаратов женских половых стероидов на дофаминовые рецепторы сердца в период менопаузы 74
4.2.1. Влияние ложной овариэктомии на уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГС -
4.2.2. Действие хирургической овариэктмоии на количество сайтов специфического связывания [3Н]-спиперона в сердце 77
4.2.3. Уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФРС овариэктомированных крыс после введения препаратов женских половых гормонов 81
4.2.4. Уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГС в разные сроки инфаркта миокарда у ложноовариэктомированных животных 85
4.2.5. Влияние коронароокклюзии на уровень специфического связы-вания [ Н]-спиперона с дофаминовыми рецепторами сердца овариэк-томированных крыс 89
4.2.6. Влияние препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы сердца кастрированных самок в разные сроки инфаркта миокарда 93
ГЛАВА 5. Обсуждение результатов 105
Выводы 117
Практические рекомендации 119
Список литературы 120
- Определение уровня связывания лиганда с дофаминовыми, рецепторами
- Особенности определения уровня специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГС и МФГМ у овариэктомированных крыс в разные сроки после инфаркта миокарда
- Действие препаратов женских половых гормонов на уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГМ кастрированных самок в разные сроки после инфаркта миокарда
- Уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФРС овариэктомированных крыс после введения препаратов женских половых гормонов
Введение к работе
Актуальность темы. В последние десятилетия внимание исследователей привлекают вопросы заместительной гормональной терапии у женщин в период менопаузы. Климактерический период не всегда протекает физиологично.
Дефицит женских половых гормонов вызывает расстройства, среди которых преобладают психоэмоциональные, нейровегетативные, сердечно-сосудистые, и двигательные нарушения, такие как раздражительность, агрессивность, импульсивность, приливы жара, потливость, сердцебиения, аритмии, повышение АД, дискинезии [2, 3, 4]. Американскими исследователями установлено, что уровень сердечно-сосудистой заболеваемости в течение последних 20 лет у мужчин снижается, а у женщин — устойчиво повышается [52]. У женщин острый инфаркт миокарда (ИМ) чаще возникает в более старшем возрасте (50 лет и старше), после наступления менопаузы [35].
При патологическом течение периода менопаузы, а также у женщин, перенесших хирургическую овариэктомию в молодом возрасте, возникает необходимость в назначении препаратов женских половых гормонов. В настоящее время имеется большой выбор препаратов женских половых стероидов. Одним из современных препаратов для проведения заместительной гормонотерапии является фемостон-10 («Solvay Phanna»), содержащий микронизированный 1713-эстрадиол (2 мг) в комбинации с дидрогестероном (10 мг). Микронизированный 1713-эстрадиол легко всасывается из желудочно-кишечного тракта, и после достижения равновесной концентрации его средний уровень при непрерывном приеме остается относительно постоянным. Дидрогестерон характеризуется метаболической стабильностью, избирательными прогестагенными свойствами и отсутствием эстрогенной, андрогенной и минералокортикоидной активности [14, 74].
На фоне терапии фемостоном наблюдается значительное снижение модифицированного менопаузального индекса. Нейровегетативные расстройства уменьшаются на 76%, обменно-эндокринные - на 62,5%, психоэмоциональные
• на 63,7% [16, 23]. Отмечается уменьшение количества триглицеридов в крови и индекса атерогенности, не возникает активации свертывающей системы крови, улучшается эндотелийзависимая вазодилатация [31]. Вместе с тем отмечены и отрицательные последствия гормонозаместительной терапии, такие как гиперплазия эндометрия, рак матки, мастопатии, гирсутизм, ожирение.
Молекулярные механизмы перечисленных эффектов препаратов женских половых гормонов недостаточно изучены. Установлено, что препараты женских половых стероидов через внутриклеточные рецепторы эстрогенов и гестагенов способны воздействовать на экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов [59].
В нейрорегуляции мозга и сердца важную роль играют дофаминовые рецепторы. Д2-рецепторы находятся в мозге, сердце, гладкой мускулатуре сосудов. Располагаясь в различных структурах головного мозга, они участвуют в регуляции психоэмоциональной сферы [29], краткосрочной и пространственной памяти, локомоторной активности, социальных взаимоотношений [30, 106, 229]. Их стимуляция вызывает сосудорасширяющий эффект, влияет на коронарный кровоток, число сердечных сокращений [52, 205].
По данным ряда авторов, менопауза приводит к уменьшению активности дофаминергической системы. Так Босс, и Де Пауло выявили уменьшение количества Дг и Д2-рецепторов в коре и стриатуме мозга крыс, подвергшихся овариэктомии, что по их мнению является фактором, предрасполагающим к возникновению шизофрении и дискинезии в период менопаузы [58, 59]. Косвенным доказательством причастности дофаминового дефицита к возникновению артериальной гипертензии у женщин в менопаузе является выявленное Ярником и соавторами антигипертензивное действие дофаминового агониста редергина [222].
По мнению авторов, эти изменения обусловлены дефицитом эстрогенов.
Действительно, в опытах Босс и Де Пауло введение эстрадиола овариэктомированным крысам восстанавливало плотность дофаминовых рецепторов [58, 59].
Между тем, по данным Хафнера и соавторов, эстрадиол, напротив, уменьшает количество дофаминовых рецепторов в мозге и таким образом ослабляет каталепсию, вызванную галоперидолом, и стереотипию, вызванную апоморфином (лигандами дофаминовых рецепторов) [93].
Роль дофаминовых рецепторов в патогенезе сердечно-сосудистых и психических заболеваний в период менопаузы исследована недостаточно. Изучение дофаминовых рецепторов сердца и мозга после хирургической овариэктомии и введения ЖПГ представляется важным для понимания молекулярных механизмов патогенеза овариэктомического синдрома и оптимизации заместительной гормональной терапии в период менопаузы в норме и при инфаркте миокарда.
Цель исследования. Определить характер действия препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы головного мозга и сердца крыс после хирургической овариэктомии и в динамике экспериментального инфаркта миокарда.
Задачи исследования:
1. Определить уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с мембранной фракцией гомогената головного мозга (МФГМ) при вытеснении блокатором дофаминовых рецепторов галоперидолом у крыс после ложной и истинной хирургической овариэктомии в сравнении.
2. Оценить влияние 17/?-эстрадиола, дидрогестерона и фемостона на уровень специфического связывания меченого лиганда с МФГМ овариэктомированных крыс.
3. Изучить динамику специфического связывания [3Н]-спиперона с дофаминовыми рецепторами головного мозга ложноовариэктомированных и овариэктомированных крыс в разные сроки после экспериментального инфаркта миокарда и после введения препаратов женских половых гормонов.
4. Определить динамику уровня специфического связывания [3Н]- спиперона с МФГС при вытеснении его галоперидолом у самок крыс после ложной овариэктомии и истинной хирургической овариэктомий.
5. Изучить уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГС у овариэктомированных крыс на фоне заместительной терапии препаратами женских половых стероидов.
6. Определить количество сайтов связывания [ Н]-спиперона в сердце ложноовариэктомированных и овариэктомированных крыс в разные сроки экспериментального инфаркта миокарда после введения 17р-эстрадиола, дидрогестерона и фемостона.
Научная новизна. Впервые изучено специфическое связывание [3Н]- спиперона с МФГС и МФГМ при вытеснении лигандом дофаминовых рецепторов галоперидолом у крыс после ложной и истинной овариэктомий. Установлено, что ложная операция понижает количество сайтов связывания [3Н]- спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ в сердце и мозге. Билатеральное хирургическое удаление яичников оказывает противоположное действие. Количество мест связывания [ Н]-спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ в мозге и сердце овариэктомированных крыс повышается. Выявлено модулирующее действие фемостона на дофаминовые рецепторы мозга и сердца у овариэктомированных самок. Исследовано состояние дофаминергической системы головного мозга и сердца у ложнооперированных и овариэктомированных крыс в разные сроки инфаркта миокарда. Установлено модулирующее действие
17(3-эстрадиола, дидрогестерона и фемостона на Д2-рецепторы сердца и мозга у кастрированных животных после инфаркта миокарда.
Научно-практическая значимость. Получены новые сведения о влиянии истинной и ложной овариэктомий, экспериментального инфаркта миокарда на дофаминовые рецепторы сердца и головного мозга. Полученные данные расширяют представление о роли дофаминовых рецепторов в регуляции деятельности сердца и головного мозга в норме и при патологии, обосновывают возможность применения средств, действующих на дофаминергические синапсы, для фармакологической регуляции деятельности сердца и мозга в период менопаузы.
Выявлено модулирующее действие препаратов женских половых гормонов на дофаминовые рецепторы сердца и головного мозга после хирургической овариэктомий и экспериментального инфаркта миокарда на фоне хирургической менопаузы, что вносит вклад в теоретическую фармакологию, раскрывая неизвестные аспекты механизма их действия.
Полученные данные могут быть использованы в преподавании фармакологии, кардиологии и гинекологии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. При ложной овариэктомий понижается специфическое связывание [3Н]-спиперона в концентрациях 0,5 и 2 нМ с МФГМ и с МФГС при вытеснении галоперидолом. Хирургическая овариэктомия, напротив, способствует увеличению количества мест связывания [3Н]-спиперона в мозге и сердце крыс в концентрациях 0,5 и 2 нМ.
2. Фемостон уменьшает количество дофаминовых рецепторов в головном мозге и сердце овариэктомированных крыс.
3. При экспериментальном инфаркте миокарда у самок крыс изменяется уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГС и МФГМ. Динамика уровня связывания [ Н]-спиперона отличается у ложнооперированных и овариэктомированных крыс.
4. Препараты женских половых гормонов модулируют динамику уровня связывания [ Н]-спиперона с Д2-рецепторами сердца и мозга овариэктомированных крыс в течение инфаркта миокарда.
Внедрение результатов работы в практику. Полученные данные используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии № 1 и № 2 Башкирского государственного медицинского университета. По результатам исследований получен патент РФ № 2326271 с приоритетом от 20.06.2008 г.
«Средство для модуляции плотности Д2-рецепторов мозга при менопаузе».
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 1 публикация в журнале, рекомендуемом ВАК. Апробация работы. Основные результаты работы доложены на: XII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии», Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 31 мая9 июня 2004 г., 69-й республиканской итоговой научно- практической конференции студентов и молодых ученых Республики Башкортостан с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины», Уфа, 2004; первой конференции Российиской ассоциации психонейроэндокринологов, Санкт-Петербург, 24-26 сентября 2008 г.
Апробация работы состоялась на межкафедральном заседании кафедр фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии, фармакологии № 2 и ЦНИЛ в декабре 2008 г.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 152 странице компьютерного набора текста, состоит из введения, обзора литературы, глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения, полученных результатов и выводов. Работа иллюстрирована 32 рисунками. Библиогафия представлена 42 отечественными и 187 иностранными источниками.
Определение уровня связывания лиганда с дофаминовыми, рецепторами
Для определения уровня общего связывания радиолиганда с тканями сердца и мозга аликвоты мембранных препаратов с конечным содержанием белка в инкубационной смеси 0,3-1,0 мг/мл инкубировали в триплете с [3Н]-спипероном в концентрациях 0,5 и 2 нМ. Объем инкубационной смеси состав-лял 1 мл. Связывание [ Н]-спиперона проводили 40 мин при 25С в 50 мМ трис-HCl буфере, содержащем 5 мМ ЭДТА [128]. Для определения уровня неспецифического связывания реакцию проводили точно так же, но в присутствии 1000-кратного избытка немеченого лиганда (антагониста - галоперидола). Реакция была остановлена путем фильтрации проб через фильтры GFC(Watman, Англия). Фильтры дважды промывались трис-HCl буфером, просушивались и помещались в сцинтилляционные флаконы с 5 мл сцинтилляци-онной жидкости на основе диоксана [37]. Содержание мест связывания выражали в фемтомолях (10"15 М) лиганда, специфически связанного с 1 мг белка. Эту величину рассчитывали по формуле: БРМобщ - средняя величина (в отсутствие конкурента) связывания меченого лиганда аликвотой мембранного препарата (распады/мин). DPM„ecn - средняя величина неспецифического связывания (в присутствии конкурента) меченого лиганда в распадах/мин. Разница между величинами DPMo6ui - DPM„ecn соответствует количеству специфически связанного лиганда. К - коэффициент пересчета количества связанного лиганда из распада/мин в фемтомоль (ф/ моль), зависящий от удельной радиоактивности лиганда. Сб - концентрация белка, мг/мл [1, 37]. Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с применением критерия Стьюдента с использованием программы Microsoft Excel 2000, достоверными считали различия при уровне значимости р 0,05 [5]. В эксперименте использованы белые беспородные самки крыс массой 140— 160 г, которые были распределены на 3 группы. Первую группу составляли крысы после овариэктомии (опытная группа), вторую - животные после ложной овариэктомии (контрольная группа) и третью - интактные животные.
Крысы после истинной и ложной кастрации в свою очередь подразделялись на 2 подгруппы по 10 крыс в каждой: первая подгруппа - животные с недельной овари-эктомией и вторая подгруппа - животные с двухнедельной овариэктомией. Под легким эфирным наркозом забивали по 10 крыс из опытной и контрольной групп с одинаковыми сроками наблюдения, и 10 интактных животных в качестве контроля для ложноовариэктомированных крыс путем декапитации. В эксперименте использованы овариэктомированные самки крыс массой 140-160 г, которые были разделены на 4 группы по 10 шт. в каждой: - первая группа - овариэктомированные животные, получавшие 170 эстрадиол; - вторая группа - овариэктомированные животные, получавшие дидроге-стерон; - третья группа - овариэктомированные животные, получавшие фемостон; - четвертая группа - овариэктомированные животные, получавшие плацебо. Эта группа служила контролем. Препараты вводились с первого дня овариэктомии ежедневно в течение 2-х недель — 17р-эстрадиол в дозе 20 мкг/сутки, дидрогестерон 100 мкг/сутки, фемостон в тех же дозах (Femoston, Dufaston, Solvay Farmaceuticals) [46, 61, 79, 85, 88, 123, 125, 157, 189, 212, 219, 224]. Препараты вводили per os, однократно в одно и то же время. Животные, использованные в качестве контроля, получали плацебо по той же схеме. Крыс забивали путем декапитации через 14 суток. В эксперименте использованы самки с двухнедельной ложной и истинной овариэктомией массой 140-160 г, которые были распределены на 2 группы. В первую группу были включены самки с двухнедельной овариэктомией, подвергшиеся экспериментальному инфаркту миокарда, во вторую - ложноовари-эктомированные животные, также подвергшиеся коронароокклюзии. Каждая группа подразделялась на 4 подгруппы по 10 животных в каждой: - первая подгруппа - с однодневным ИМ; - вторая подгруппа - с трехдневным ИМ; - третья подгруппа - с семидневным ИМ; - четвертая подгруппа - с двухнедельным ИМ. Перед забоем у всех животных регистрировали ЭКГ.
Забивали по 10 крыс из каждой группы с одинаковыми сроками наблюдения, т. е. через 1, 3, 7 и 14 суток, путем декапитации. Извлекали сердце и мозг. Контролем служили лшвотные без инфаркта миокарда. В эксперименте использованы кастрированные самки крыс массой 140— 160 г, которые с первого дня овариэктомии ел едневно, в течение двух недель получали препараты женских половых гормонов или плацебо. Животные были распределены на 4 группы: первая группа получала 17(3-эстрадиол, вторая - дид-рогестерон, третья группа - фемостон, четвертая группа - плацебо.
Особенности определения уровня специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГС и МФГМ у овариэктомированных крыс в разные сроки после инфаркта миокарда
Проведение ложной овариэктомии путем разреза кожных покровов и мышц в поясничном отделе туловища крыс и извлечения придатков матки с последующим их погружением в брюшную полость, наложение швов на мышцу и кожу оказало влияние на уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГМ, что свидетельствует о действии ложной овариэктомии на дофаминовые рецепторы мозга. Через неделю после ложной хирургической овариэктомии уровень специ-фического связывания [ Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ снижался в 4 раза по сравнению с интактными животными, что составило 24,9% от уровня контроля. Через две недели количество сайтов связывания меченого лиганда оставался на том же уровне (23,9%) (рис. 3.1). Таким образом, оперативное вмешательство приводит к стойкому уменьшению уровня специфического связывания радиолиганда с препаратами головного мозга. Так как концентроация 0,5 нМ близка к Kd спиперона, а величина Kd характеризует аффинность рецепторов, снижение уровня специфического связывания радиолиганда в данной концентрации может указывать на значительное снижение аффинности Д2-рецепторов головного мозга после ложной овариэктомии. Определение уровня специфического связывания [ Н]-спиперона в концентрации 2 нМ с МФГМ выявило следующие закономерности. Через неделю после ложной овариэктомии уровень связывания радиолиганда уменьшился в 3 раза по сравнению с интактными животными и составил 30,77% от уровня контроля (рис. 3.2). Но уже через две недели наблюдения уровень связывания радиолиганда повысился и составил 67,4% от уровня интактных крыс.
При этом не выявлено статистически достоверной разницы между интактными и ложнооперированными крысами. Следовательно, ложная овари-эктомия приводит к снижению уровня связывания [ Н]-спиперона через неделю после операции, но это снижение кратковременное, так как через две недели уровень связывания радиолиганда практически не отличается от уровня интактных крыс. Так как концентрация [ Н]-спиперона 2 нМ близка к концентрации, при которой происходит насыщение дофаминовых рецепторов, уровень связывания радиолиганда в данной концентрации может характеризовать плотность дофаминовых рецепторов мозга. Поэтому можно считать, что ложная овариэктомия приводит к кратковременному снижению плотности дофаминовых рецепторов мозга с последующим восстановлением ее через две недели наблюдения. Таким образом, ложная хирургическая овариэктомия влияет на аффинность и плотность дофаминовых рецепторов мозга. Хирургическое вмешательство вызывает стойкое и значительное снижение аффинности и кратковременное снижение плотности дофаминовых рецепторов мозга самок крыс. Билатеральное хирургическое удаление яичников у самок крыс привело к изменению уровня специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГМ по сравнению с ложноовариэктомированными животными. Через неделю после операции уровень специфического связывания [JH]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ повысился в 3 раза и составил 304,2% по сравнению с контрольной группой (рис. 3.3). Через две недели уровень связывания меченого лиганда увеличился в 4 раза относительно ложно-овариэктомированных животных и составил 405,6%. При этом уровень связывания радиолиганда с МФГМ животных с двухнедельной овариэктомией практически не отличался от уровня связывания интактных крыс.
Таким образом, удаление яичников предотвращает снижение аффинности дофаминовых рецепторов мозга, которое наблюдается при хирургическом вмешательстве у крыс-самок с сохраненными яичниками. Хирургическая овариэктомия оказала также значительное влияние на уровень связывания [3Н]-спиперона в концентрации 2 нМ с МФГМ. Через 7 дней после произведенной операции уровень специфического связывания радиолиганда увеличился в 24 раза по сравнению с контрольными животными, составив 2405,6% от контрольного значения (рис. 3.4). Через две недели наблюдения уровень специфического связывания меченого лиганда с дофаминовыми рецепторами еще более возрос, в 30 раз (2974,5%) превысив уровень у ложноовариэктомированных самок.
Таким образом, если ложная овариэктомия практически не влияла на плотность дофаминовых рецепторов мозга, то хирургическая овариэктомия резко увеличивает (в 30 раз по сравнению с ложноовариэктомированными крысами) количество дофаминовых рецепторов мозга. so Итак, у крыс-самок, подвергшихся двухстороннему удалению яичников, отмечается стойкое и резкое увеличение количества дофаминовых рецепторов мозга. При этом аффинность рецепторов у них повышается по сравнению с ложнооперированными крысами и не отличается от интактных крыс. Следовательно, отсутствие яичников предотвращает падение аффинности дофаминовых рецепторов мозга самок-крыс после оперативного вмешательства.
Действие препаратов женских половых гормонов на уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФГМ кастрированных самок в разные сроки после инфаркта миокарда
Ежедневное двухнедельное внутрибрюшинное введение препаратов женских половых гормонов с первого дня овариэктомии оказало существенное влияние на уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГМ. Все изученные препараты повысили уровень связывания радиолиганда в концентрации 0,5 нМ с тканями мозга. Так, 17р-эстрадиол в дозе 20 мкг/сут. повысил уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГМ в 2,5 раза относительно овариэктомированных крыс, получавших плацебо, что составило 257,1% от уровня контроля (рис. 3.5). При ежедневном введении дидрогестерона в дозе 100 мкг/сут. в течение двух недель уровень связывания [3Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ увеличился более чем в 2 раза и составил 256% по сравнению с овариэктомиро-ванными животными, не получавшими препарат. У овариэктомированных крыс, получавших фемостон, уровень связыва-ния [ Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ также повысился более чем в 2 раза (227%) по отношению к овариэктомированным крысам, получавшим плацебо. Таким образом, введение препаратов женских стероидных гормонов крысам, подвергшимся хирургической овариэктомии, приводит к более чем двукратному повышению аффинности дофаминовых рецепторов в головном мозге. При изучении влияния женских половых гормонов на количество дофаминовых рецепторов мозга были получены следующие данные (рис. 3.6). У животных, ежедневно получавших 173-эстрадиол, уровень специфического связывания [3Н]- спиперона в концентрации 2 нМ с МФГМ повышался в 1,8 раза (179%) по отношению к овариэктомированным крысам, не получавшим препарат. Дидрогестерон оказывал аналогичное действие, повышая количество мест связывания [3Н]- спиперона в концентрации 2 нМ в 2 раза, что составило 212%, относительно овариэктомированных животных, получавших плацебо. У овариэктомированных крыс, получавших фемостон, уровень специфического связывания меченого лиганда в концентрации 2 нМ с МФГМ снижался в 8 раз по сравнению с овариэктомированными животными, не получавшими гормон, и составил 13,3% от уровня контроля. Таким образом, исследованные препараты женских половых гормонов оказывают различное действие на плотность дофаминовых рецепторов головного мозга. 17-р-эстрадиол и дидрогестерон увеличивают количество мест связывания [3Н]-спиперона, а фемостон уменьшает до уровня интактных крыс.
Обобщая полученные данные, можно утверждать, что 17-(3-эстрадиол и дидрогестерон повышают функциональную активность дофаминовых рецепторов мозга, так как увеличивают аффинность и плотность Д2-рецепторов в головном мозге. Фемостон, напротив, понижает функциональную активность рецепторов, так как более чем в семь раз уменьшает плотность и лишь в 2 раза повышает аффинность дофаминовых рецепторов. Следовательно, комбинированный препарат фемостон оказывет модулирующее действие на рецепторы дофамина головного мозга. После перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии у крыс-самок, подвергшихся ложной овариэктомии, специфическое связывание [3Н]-спиперона с МФГМ значительно изменяется (рис. 3.7). Так, через сутки после экпериментального инфаркта миокарда уровень связывания радиолиганда в концентрации 0,5 нМ с МФГМ возрастал в 2 раза и составил 223% от уровня ложноовариэктомированных животных, не подвергшихся коронароокклюзии. Через 3 дня уровень связывания меченого ли-ганда повысился на 41%, по сравнению с контрольной группой, но эта разница была статистически недостоверна. Через 7 дней после коронароокклюзии уровень специфического связывания [3Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ снижался в 2 раза и составил 46% от уровня контроля, а через 14 дней резко возрастал (в 3,6 раза) и составил 356,9% по сравнению с группой контрольных животных. Таким образом, после экспериментального инфаркта миокарда уровень специфического связывания [ Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГМ изменяется неоднозначно. Характер изменений зависит от срока инфаркта миокарда. Повышение уровня связывания отмечается через 1 и 14 суток, а снижение — через 7 суток. Следовательно, у крыс с сохраненными яичниками после моделирования инфаркта миокарда изменяется сродство дофаминовых рецепторов мозга к спиперону, селективному блокатору Дг-рецепторов. Изменение аффинности зависит от стадии инфаркта миокарда. В острейшем периоде (1 сутки) аффинность дофаминовых рецепторов мозга повышается, в остром (3 суток) - не отличается от контроля, в подостром (7 суток) - снижается, а в период рубцевания (14 суток) - резко повышается по сравнению с ложно-оперированными крысами.
Уровень специфического связывания [3Н]-спиперона с МФРС овариэктомированных крыс после введения препаратов женских половых гормонов
Изучение влияния 17(3-эстрадиола, дидрогестерона и фемостона на дофаминовые рецепторы сердца у овариэктомированных самок показало следующее (рис. 3.21). У самок крыс, подвергшихся овариэктомии и получавших 17р-эстрадиол в течение 14 суток после операции, уровень специфического связывания [ Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГС резко снизился и составил 16,4% от контрольной группы. Под воздействием дидрогестерона снижение уровня связывания меченого лиганда с МФГС у кастрированных крыс произошло в 16 раз, что составило 6,35% от уровня овариэктомированных животных, получавших плацебо. Двухнедельное введение фемостона (комбинация 17(3-эстрадиола и дид-рогестерона) не изменило уровень специфического связывания [ Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГС относительно уровня специфического связывания у контрольных животных (99,2%). Таким образом, введение препаратов женских половых гормонов (17(3-эстрадиола и дидрогестерона) существенно влияет на аффинность дофаминовых рецепторов сердца самок, перенесших овариэктомию.
Под влиянием 17(3-эстрадиола и дидрогестерона количество мест связывания [" Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ в сердце уменьшается по сравнению с овариэктомиро-ванными животными, получавшими плацебо. Введение фемостона не изменяет уровень специфического связывания [ Н]-спиперона в низкой концентрации с тканями сердца. Следовательно, 17Р-эстрадиол и дидрогестерон оказывает модулирующе-ее действие понижая аффинность дофаминовых рецепторов сердца крыс, повышенную вследствие удаления яичников, а фемостон не оказывает влияния. Наиболее сильный эффект отмечается у дидрогестерона. Под влиянием препаратов женских половых гормонов также изменяется уровень специфического связывания [3Н]-спиперона в концентрации 2 нМ с МФГС у овариэктомированных самок (рис. 3.22). После двухнедельного введения 17р-эстрадиола уровень связывания меченого лиганда повысился в 4,6 раза, что составило 461,8% от уровня связывания у кастрированных животных, получавших плацебо. После введения дидрогестерона овариэктомированным крысам уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГС увеличился в 11 раз, составив 1100% по сравнению с контрольной группой. Введение фемостона животным после овариэктомии привело к резкому уменьшению количества мест связывания [ Н]-спиперона в концентрации 2 нМ в сердце, что составило 0,53% относительно числа мест связывания у животных, получавших плацебо. Таким образом, эстрадиол и дидрогестерон увеличивают плотность Д2-рецепторов сердца, а фемостон уменьшает. Итак, двухнедельное введение препаратов женских половых гормонов крысам после овариэктомии изменяет специфическое связывание [3Н]-спиперона с тканями сердца. 173-эстрадиол и дидрогестерон оказывают однонаправленное действие: в концентрации 0,5 нМ - уменьшают, а в концентрации 2 нМ - увеличивают уровень специфического связывания меченого лиганда с МФГС у крыс.
Следовательно, эстрадиол и дидрогестерон уменьшают аффинность, но повышают плотность дофаминовых рецепторов сердца. При этом дидрогестерон оказывает наиболее сильное действие, которое проявляется уменьшением уровня специфического связывания [ Н]-спиперона в низкой концентрации до уровня у ложнооперированных животных по сравнению с другими препаратами. Фемостон же не влияет на уровень специфического связывания лиганда в низкой концентрации, но уменьшает в высокой концентрации.. Из этого можно заключить, что фемостон снижает функциональную активность Д2-рецепторов сердца путем уменьшения их количества После овариэктомии у крыс функциональная активность дофаминовых рецепторов сердца повышается в основном за счет увеличения аффинности рецепторов в 24 раза по сравнению с ложноовариэктомированными крысами и в меньшей степени за счет увеличения плотности рецепторов (на 60%). Поэтому можно заключить, что ни один из исследованных препаратов не восстанавливает дофаминергическую систему сердца у кастрированных крыс до уровня ложноовариэктомированных животных. После перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии уровень специфического связывания [ Н]-спиперона с МФГС у крыс претерпевал изменения (рис. 3.23). Через сутки после коронароокклюзии уровень специфического связывания [3Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГС значительно снижался (в 2,3 раза) и составил 43% от уровня контрольной группы. Через три дня уровень специфического связывания меченого лиганда с МФГС повышался в 2,2 раза (225,5%) относительно уровня у ложноовариэктомированных животных, не подвергшихся ИМ. К 7 суткам после перевязки передней нисходящей ветви левой коронарной артерии количество сайтов связывания [3Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГС составляло 250,8%» от контрольных значений. К последнему сроку наблюдения (14 суток) после коронароокклю-зии уровень специфического связывания [ Н]-спиперона в концентрации 0,5 нМ с МФГС уменьшался на 17,2% от уровня специфического связывания в контрольной группе, что не было статистически достоверным. Итак, при экс-периментальном инфаркте миокарда уровень специфического связывания [HJ-спиперона в концентрации 0,5 нМ с Д2-рецепторами сердца животных с сохраненными гонадами значительно
