Введение к работе
Актуальность темы. На рубеже второго тысячелетия, в период сформированного "гемо фармакологпкус" одной из, важнейших проблем медицинской науки является поиск естественных, экологически чистых и эффективных путей оздоровления населення (Ф.З.Меерсон, 1,989). С данной точки зрения, экспериментальное подтверждение эффективности применения минимальных или "физиологических" доз фитопрепаратов в лечении различных патологических состояний может способствовать определению подходов к разрешению данного вопроса. Так как, с одной стороны, а лекарственных растениях оптимально сочетаются фармакологические эффекты биофлавопоидов, антпоксидаптов, витаминов, микроэлементов и других компонентов, а с другой - применение минимальных доз снижает фармакологическую нагрузку на организм (М.В.Блинков и соапт., 1990, Л.X.Гаркавії, 1991, Ф.П.Крендлль и соавт.,1993, И.Г.Сокольчик и соапт., 1992, Н.Ю.Фролова п соавт.,1991).
Между тем, разрозненные единичные данные, посвященные изучению минимальных доз на организм человека п животных не позволяют отнести эту область фармакологии к достаточно изученной. Все вышесказанное п определило направление наших исследований. На модели сулемового нефрозо-нефрита мы изучили влияние минимальных доз леспефлана на функциональную активность почек, морфологические структуры тканей и некоторые механизмы неспецнфической резистентности организма. Выбор препарата обусловлен тем, что согласно литературным данным, препараты из различных видов леспедез("Леспефлан" и "Леспенефрпл") обладают, наряду с выравженным гнпоазотемнчеекпм, диуретическим и противовоспалительным действием более широкой фармакологической активностью. В частности, выявлено гнпохолестерннемическое, гипотензивное, анаболическое действие леспедезы (В.Г.Гуляев, 1970-1989, В.Е.Соколоиа, 1979, Elbl J.et.al., 1992). Исследованиями Е.Н.Амосовой и соавт.(1991) выявлена способность леспедезы двуцветной сдерживать метастазнрование опухолей, а М.В.Блинковым (1990) леспедеза двуцветная отнесена к"неспецнфнческпм стимуляторам метаболических реакций".
Однако, несмотря на существующие подходы к
объяснению механизма действия леспедезы имеется ряд неразрешенных вопросов - не определена тканевая тропность, не раскрыт характер адаптогенного действия, не изучена фармакологическая активность препарата их леспедезы в более высоких разведениях.
Целью настоящего исследования явилось изучение фармаколгической активности минимальных доз леспефлана у животных с острой почечной недостаточностью (ОПН). Для разрешения поставленной цели нам предстояло решить следующие задачи:
- изучить влияние минимальных доз леспефлана на функциональную активность почек и морфологические изменения в тканях у животных с острой почечной недостаточностью;
-определить характер адаптогенной активности биофлавоноидов леспефлана у животных с острой почечной недостаточностью;
-выявить тропность биофлавоноидов леспефлана к различным ткашщ (почки, печень, миокард, эритроциты) и определить факторы, влияющие на устойчивость тнолдисульфндной системы к действию даухлорпстой ртути.
Научная новизна. В настоящем исследовании isnqiBbie была определена фармакологическая активность минимальных доз леспефлана у животных с острой почечной недостаточностью. Кроме того, нами получены новые данные о характере адаптогенного действия леспефлана, определена его тканевая тропность.
Практическая значимость работы. Полученные-нами данные о высокой гипоазотемпческой, диуретической и гнетопротективной активности минимальных доз леспефлана могут служить экспериментальным" обоснованием для возможности снижения средней терапевтической дозы и соответственно повышения доступности препарата для населения н снижения затрат на лечение больных с за&олевапнями почек. Выявленные нами динамические изменения функционального состояния гуморальной тполдпеульфидной системы и лейкоцитарной формулы периферической крови будут способствовать повышению адекватности оценки фармакологического действия леспефлана.Обнаруженное нами адаптогсниос действие препарата может бытьнспользовано для
коррекции стрессорных нарушений при различных патологических состояниях.
Внедрение результатов исследования. На основе полученных нами данных об эффективности минимальных доз леспефлана в лечении почечной недостаточности В.Г.Гуляевым и соавт.(1992) создан н запатентован безалкогольный лечебно-профилактический напиток "Леспп" (N930345.1),который рекомендован к широкому применению. Полученные результаты исследования могут быть использованы в процессе обучения студентов по курсу общей и клинической фармакологии.
Положения выносимые на защиту.
1. Лечебно-профилактическое применение минимальных доз
леспефлана оказало положительное влияние на течение острой
почечнойнедостаточности. Эта проявилось достоверным
снижением уровня мочевиньш плазме iq)OBii, стимуляцией диуреза
и клиренса мочевины, снижением количества ртути в почечной
ткани и ограничением морфологических нарушений в тканях,
вызванных действием двухлорпстой ртути.
2. Адаптогенная активность леспефлана проявилась в
восстановлении функционального состояния тканевой и
гуморальной тполднеульфнднон системы, стабилизации
процессов перекисного окисления липндов, нормализацией
лейкоцитарной формулы периферической крови и
иммуностимулирующей активностью. Обнаружено сдерживание
гипертрофии надпочечников и повышение уровня окнелителыю-
восстановнтельныхреакцин тноловых групп в них у животных с
ОПН, получивших леспефлан.
З.Биофлавоноиды леспефлана обладают наибольшим
сродством к почечной ткани, особенно к проксимальным
канальцам нефронов, наименьшим - к эритроцитам. На печень
и миокард препарат оказывает умеренное действпе.К факторам,
повышающим устойчивость тканей к действию
двухлористойртути можно отнести высокую буферную емкость
тнолдисульфндной системы (ТДС). 9
Апробация работы. По материалам диссертации сделаны доклады с публикацией тезисов на конференции молодых ученых
ЦГМИ и железной дорога (Uemmoq>afl, 1991 г.), 2-й всесоюзной
коиференціш"ф<армакологнческая коррекция гнпокснческіїх
состояний" (Гродно, 1991г.), международной конференции
"Нейрофармакология на рубеже двухтысячетелетнй" (Санкт-
Петербург, 1993 г.), республиканской-научной конференции
"Актуальные проблемы технологии производства, переработки
лекарственного , растительного сырья и получения
фптопрепаратов"(Карагапда,1993 г.), международной научной
конференции '"Ученпе.В. И. Вернадского и современная
экологическая снтуацпя"(Акмола-Боровое, 1993г.),
международной научно-практической конференции "Перспективы развития производства биопрепаратов для медицины п сельского хозяйства"(Степп.огорск, 1995г.). По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ и запатентовано I изобретение.
Объем н структура работы. Диссертация изложена на 146 листах машинописного текста п состоит из введения, обзора литературы,описания методов исследования, 2-х глав собственных исследований,заключения и выводов. Текст1 иллюстрирован 14 таблицами, 14 рисунками и9 микрофотографиями. Список литературы содержит 203 автора из них 151 отечественных и 52 зарубежных автора.
Материалы и методы исследования. В настоящей работе былнпепользованы 233 белых беспородных крысы, обоего пола, массой 160-200ГГ. Острую почечную недостаточность вызывали моделированием сулемового нефрозо-нефрпта по методу I.Bercsovskajet al. (1980). Внутрибрюшпнно вводили 0,1%раствор двухлористой ртути в дозе 2 мг/кг массы тела.Было применено однократное введение.
,Для лечения животных с ОПН был использован препарат "Леспефлан" в минимальных и средних терапевтических дозах.
Препарат "Леспефлан" представляет собой водно-спиртовой экстракт из леспедезы двуцветному из семейства бобовых. Активной частью леспефлана являются входящие в его состав биофлавононды: леспедцн, кемпефрол, кверцетин, робоннн, астрагалин, гиперзид и другие (Гуляев В.Г. 1989).
Режимы дозирования. 1.Ведение минимальных доз. Для скриннннг-исследования, животным с ОПН вводился'раствор
леспефлана в разведениях 1:10, 1:20, 1:50, 1:80, 1:100, 1:200 1 раз в сутки зондовым методом. Для дальнейшего исследования было применено разведение леспефлана 1: і 00 (суточная доза составила 0,02 мгясгмассы тела). Для превентивного введегаш использовали раствор леспефлана в количестве 0,5 мл/ЮОг массы тела.после затравки животных ртутью количество вводимого препарата было увеличено до Імл/ЮОг массы тела.
2.Применение средних терапевтических доз проводили согласно данным литературы (Гуляев В.Г,.,1989). Суточная доза составила 2 мг/кг массы тела.
Животным с ОПН, не получавшим лечения, в водил и дистиллированную воду в адекватном к применяемой схеме количестве.
Методы исследования.
Оценку влияния минимальных доз леспефлана на функциональную активность почек у животных с ОПН мы проводили с помощью определения уровня мочевины в плазме и моче, клиренса мочевины, диуреза и уровня общих сульфпгидрнльных и днеульфпдпых групп в моче. Кроме того, было определено содержание ртути в обеихпочках у животных с ОПН н в процессе лечения.
Для выявления антпетрессорной активности леспефлана мы изучили функциональное состояние тканевой п гуморальной тнолдпеульфидноп системы, динамические изменения .тейкоцетарпон формулы периферической крови, уровень малопового диальдегпда в плазме крови, массу надпочечников и уровень окислитель-восстановительных реакций тиоловых ірупп в них. Также было использовано определение уровня Т- и В-лимфоцнтов п содержания циркулирующих пммуных комплексов в периферической кропи.
Для выявления тканевой троппостп бпофлавопондов леспефлана мы провели сравнительную оценку изменении функционального состояния тнолдпеульфидноп системы, морфологических нарушений в тканях и некоторых физико-химических свойств эритроцитов.
Изучение диуретической способности животных при ОПН и в процессе лечения проводилось памп по методу Ю.И.Иванова (1988). Определение уровня мочевины в плазме и моче проводили стандартизированным методом с помощью наборов "Бпо-ла-гест" мочевина (производство ЧСФР) на фотоколориметре
OMKA IV-01. Исследуемые показатели изучались нами у ннтактпых животных, после превентивного введения раствора леспефлана здоровым животным и на 1-е, 3-е, 5-е, 7-е, 9-е и 11-е сутки течения ОПН.
Для морфологического изучения фармакологической активности минимальных доз леспефлана в отношении органной и тканевой структуры почек.печенн и миокарда животных па 14-е сутки течения ОПН выводили из эксперимента декапптациеп под легким эфирным наркозом. Кусочки тканей фиксировали в 12% нейтральном формалине, ^жидкостях Буэна и Карпуа. Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм. окрашивали гематокенлнн-эозином и исследовали с помощью светового микроскопа "Loboval - 4"(Андреев В.П.,1984, Шпманко И.И.,1977).
Определение ртути в тканях проводили на 14-е сутки течения ОПН по методу А.Н.Крыловой (1975). Метод основан на разрушении форменных элементов тканей - деструкцией и определения содержания ртути экстракцпопно-Колорнметрическнм методом по дитпзонату ртути. Исследование было проведено на фотоколориметре ФЭК-56МГ
Определение уровня сульфгпдрильных н дисулъфндных групп в белковых и небелковых фракциях биологических субстратов проводили непрямым амперометрическнм титрованием по методу В.В.Соколовского и соавт.(1977).'В нашей работе изучались паказателн ТДС тканей (почки,печень, миокард, надпочечники), крови ( гемолнзат крови и взвеси эритроцитов), мочи. Функциональное состояние ТДС крови и мочи изучали после превентивного введения препарата и на 1-е, 3-е, 5-е, 7-е, 9-е и 11-е сутки течения ОПН. Определение содержания тиолов и дисульфидов в тканях проводили в течении II суток ОПН, выводя животных из эксперимента путем декапитацип.
В качестве маркера интенсивности перекненого окисления липидов (ПОЛ), было использовано определение уровня малонового диальдегида (МДА) а плазме крови. Определение уровня МДА проводилось в модификации Л.И.Андреевоп и Л.Б.Кожемякина (1988) на спектрофотометре СФ-46.
Подсчет общего количества лейкоцитов проводили унифицированным способом по методу И.А.Грибовой (1979) с использованием микроскопа и камеры Горяева. Лейкоцетарную
формулу подсчитывали в окрашенных по Романовскому-Пшзе мазках крови по методу Р.П.Золотницкой (1983).Данные показатели были изучены на 3-й, 7-е и 14-е сутки течения ОПН.
Определение "содержания Т- и В- лимфоцитов в периферической крови проводили с помощью реакций Е-РОК и ЕАС-РОК по методу Eggers Y.,Kruse Н., 1979 et Friemel Н., 1987, Количество циркулирующих иммунных комплексов определяли п модификации Ю.А.Грниевнча и А.Н.Алдярова (1981).
Осмотическую резистентность эритроцитов определяли с
использованием модификации Л.И.Идельсона (1974). После
построения варицнонных кривых гемолиза эритроцитов,
определяли следующие показатели: среднюю клеточную
хрупкость, амплитуду резистентности и золу резистентности
эритроцитов. N
Определение типа адаптационных реакции по степени напряжения окислительно-восстановительных реакций тиоловых групп основано на концепции В.В.Соколовского (1988) о роли тиоловых групп в механизмах нгепецпфнческоп резистентности организма: и запантентован намп.Сущностьспособа: при значениях тнол-дисульфпдиого коэффициента ТДК меньше 2,4 реакция адаптации расценивается как стрессовая, при колебаниях ТДК в биологических жидкостях от 2,5 до 6,0 - нормальная реакция адаптации, при преобладании значении ТДК выше 6,1 отмечается реакция переактивацни, отражающая высокое напряжение окислитель-восстановительных процессов в организме.
Статистическая обработка данных проводилась по специальным программам на микрокалькуляторе "Электроника МК-56" (Иванов Ю.И.., Погорешок O.F., 1990) И на ЭВМ "Искра 1031". Изучались следующие показатели: средняя арифметическая величина и ее стандартная ошибка, оценивалась достоверность различий показателей с помощью коэффициента Стыодента.
![Клинико-фармакологическое исследование влияния триметазидина замедленного высвобождения (Предуктала МВ) на показатели выраженности хронической сердечной недостаточности у больных сахарным диабетом 2-го типа [Электронный ресурс]](/i/i/4401/198124.png "Клинико-фармакологическое исследование влияния триметазидина замедленного высвобождения (Предуктала МВ) на показатели выраженности хронической сердечной недостаточности у больных сахарным диабетом 2-го типа [Электронный ресурс] Смолина Елена Ростиславовна")
