Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Актуальность поиска новых фармакологических средств с психотропными эффектами среди производных гаммааминомасляной и глутаминовои кислот 12
1.1. Медико-социальная значимость и основные этапы поиска новых препаратов с психотропной активностью 12
1.2. Участие ГАМК и ПС в патогенезе расстройств основных психических функций (тревоги, депрессии, когнитивной и мнестической функции) 19
1.3. Заключение 27
ГЛАВА 2. Методы и материалы исследования 28
2.1 Экспериментальные методы, использованные для проведения скрининга нейропсихотропной активности соединений 31
2.1.1 Методы изучения влияния исследуемых соединений на психоэмоциональный статус животных (ОП, ПКЛ) 31
2.1.2 Методы изучения влияния исследуемых соединений на условно рефлекторную деятельность животных (УРПИ, ТЭИ) 33
2.1.3 Методы изучения анксиолитических свойств исследуемых соединений. 35
2.1.4. Методы изучения антидепрессантных эффектов исследуемых соединений 36
2.1.5. Методы изучения влияния исследуемых соединений на болевую чувствительность 38
2.1.6. Методы изучения влияния исследуемых соединений на физическую работоспособность 39
2.2. Методы изучения острой токсичности 40
2.3. Модели и методы изучения нейропротекторного действия исследуемых соединений 42
ГЛАВА 3. Скрининговое изучение возможной неиропсихотропнои активности новых производных гамкигк 49
3.1 Изучение влияния новых производных ГАМК и ГК на психоэмоциональный статус животных 49
3.2. Изучение влияния новых производных ГАМК и ГК на когнитивную и мнестическую функцию животных 52
3.3. Изучение анксиолитических свойств новых производных ГАМК и ГК .56
3.4. Изучение антидепрессантных эффектов новых производных ГАМК и ГК 58
3.5.Изучение влияния новых производных ГАМК и ГК на болевую чувствительность 61
З.б.Изучение влияния новых производных ГАМК и ГК на физическую работоспособность 64
3.7. Заключение 67
ГЛАВА 4. Изучение острой токсичности, дозозависимого спектра действия ргпу-135 и ргпу-202 и сравнение с препаратами позитивного контроля 75
4.1. Изучение острой токсичности 75
4.2. Изучение дозозависимого спектра действия РГПУ-135 78
4.3. Изучение дозозависимого спектра действия РГПУ-202 85
4.4. Изучение в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля 91
4.5. Заключение 98
ГЛАВА 5. Изучение нейропротекторных свойств новых производных глутаминовой кислоты 100
5.1. Изучение возможной противосудорожной активности соединений РГПУ- 135 и РГПУ-202 на модели хемоиндуцированного эпилептогенеза 100
5.2.Изучение влияния однократного профилактического введения новых производных глутаминовой кислоты на изменения психоневрологического статуса, морфосоматические нарушения и снижение устойчивости клеточных мембран, вызванные действием острого эмоционально-болевого стресса... 101
5.3. Изучение влияния курсового лечебно-профилактического введения новых производных глутаминовой кислоты на изменения психоневрологического статуса, морфосоматические нарушения и снижение устойчивости клеточных мембран у животных при хроническом стрессе.. 108
5.4. Изучение возможной противогипоксической активности новых производных глутаминовой кислоты 114
5.5. Заключение 115
ГЛАВА 6. Нейрофармакологический анализ взаимодействия соединения ргпу-135 с некоторыми медиаторными системами головного мозга и влияние его на обмен моноаминов 116
6.1. Изучение возможного взаимодействия РГПУ-135 с дофаминергической нейромедиаторной системой 116
6.2. Изучение возможного взаимодействия РГПУ-135 с адренергической системой, используя клофелин (агонист центральных пресинаптических сс-адренорецепторов) 119
6.3. Изучение влияния РГПУ-135 на центральную терморегуляцию у животных 120
6.4. Изучение возможного взаимодействия РГПУ-135 с холинергической нейромедиаторной системой 121
6.5. Изучение возможного взаимодействия РГПУ-135 с серотонинергической нейромедиаторной системой 122
6.6. Изучение возможного взаимодействия РГПУ-135 с ГАМК-ергической системой 123
6.7.Изучение возможного взаимодействия РГПУ-135 с глутаматергической системой 124
6.8. Влияние соединения РГПУ-135 на обмен моноаминов и нейроактивных кислот в структурах мозга 125
6.8. Заключение 132
Обсуждение результатов 133
Выводы 144
Научно-практические рекомендации 145
Список литературы 146
- Участие ГАМК и ПС в патогенезе расстройств основных психических функций (тревоги, депрессии, когнитивной и мнестической функции)
- Методы изучения влияния исследуемых соединений на физическую работоспособность
- Изучение влияния новых производных ГАМК и ГК на когнитивную и мнестическую функцию животных
- Изучение в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля
Введение к работе
Актуальность проблемы обусловлена тенденцией к нарастанию частоты разного рода психических нарушений в условиях современного общества с высоким темпом жизни и обилием стрессовых ситуаций, которые, как известно, могут провоцировать и усугублять течение психических расстройств. Область применения фармакологических средств для коррекции психических функций чрезвычайно широка: помимо собственно психиатрии препараты с психотропной активностью используются специалистами различных отраслей медицины, включены в стандарты терапии многих соматических заболеваний (Корр M.S. et al., 2007, Whooley M. A. et al., 2008, Pozuelo L. et al., 2009). На российском и зарубежном фармацевтических рынках данный класс лекарственных средств представлен огромным количеством препаратов различных производителей. Тем не менее, даже на современном уровне развития фармакологии и фармацевтической промышленности остается высокой потребность в разработке новых психотропных средств, поскольку многие из имеющихся препаратов обладают недостаточной эффективностью, низкой избирательностью действия и большим количеством побочных эффектов (Петров В.И. и др., 2004, Булдакова Н.Г., 2006, Михайлова Н.М. и др., 2006, Аведисова А.С. и др., 2007, Воронина Т.А. и др., 2007, Городничев А.В., 2007, Зборовский А.Б. и др., 2008, Табеева Г. Р., 2008, Roy-Byrne РР, 2005, Claire Allison, et al., 2006, Khawam EA, et al., 2006, McMahon L.R. et al., 2006, Palucha A, Pile A., 2007, Anderson I.M. et al, 2008, Mathew SJ et al., 2008, Sen S. et al., 2008). Поскольку главной научной основой для направленного поиска психотропных средств является представление о том, что эффекты всех препаратов данного класса реализуется за счет взаимодействия с нейромедиаторными системами головного мозга (Cai G. et al., 2005, De Gois S. et al., 2005, Ben-Ari Y. et al., 2007), поиск новых психотропных средств в ряду производных гамма-аминомасляной и глутаминовой кислот можно считать весьма
перспективным, что и послужило основанием к проведению данного исследования.
Цель исследования сравнительное изучение спектра психотропного действия новых производных гамма-аминомасляной (ГАМК), глутаминовой кислот (ГК), имеющих одинаковые заместители по углероду в бета положении и изучение возможных механизмов действия.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
Провести скрининг в ряду новых ароматических и гетероциклических производных ГАМК и глутаминовой кислоты соединений, обладающих психотропной активностью.
Определить острую токсичность наиболее активных веществ и провести изучение зависимости их психотропного действия от дозы.
Изучить нейропротекторное действие наиболее активных веществ на различных экспериментальных моделях судорог, острого и хронического стресса с использованием стандартных психофармакологических тестов, отражающих функциональное состояние ЦНС.
Изучить возможный нейрохимический механизм психотропного действия наиболее активных веществ с использованием агонистов и антагонистов основных медиаторных систем.
Изучить влияние наиболее активных веществ на обмен моноаминов и нейроактивных аминокислот в структурах мозга.
Научная новизна исследования:
Впервые проведено сравнительное исследование спектра психотропного действия новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты и выявлены вещества с высоким антидепрессивным, анксиолитическим, ноотропным эффектом, перспективные для дальнейшего доклинического изучения.
Впервые получены данные о церебропротекторном действии новых производных глутаминовой кислоты при экспериментальном судорожном и стрессорном воздействии.
Впервые определены возможные механизмы нейрохимического действия нового производного глутаминовои кислоты соединения РГПУ-135, оказывающего антидепрессивное, анксиолитическое, активирующее и неропротекторное действие. Изучено его влияние на обмен моноаминов и неироактивных кислот в структурах мозга.
Научно-практическая ценность работы и реализация результатов исследования.
Тема диссертации является составной частью плана научно-исследовательской работы кафедры фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей Волгоградского государственного медицинского университета и утверждена на заседании Ученого совета (Протокол №6 от 14 ноября 2007 года).
Полученные результаты исследования нейропсихотропной активности новых производных гамма-аминомасляной и глутаминовои кислот указывают на перспективность дальнейшего поиска веществ с психотропным действием в ряду структурных аналогов данных неироактивных аминокислот, имеющих ароматические и гетероциклические заместители.
Выделенное новое производное ГК соединение РГПУ-135 с выраженным антидепрессивным, анксиолитическим, нейропротекторным и активирующим действим является перспекивным для дальнейшего углубленного изучения.
Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе на кафедре фармакологии и биофармации ФУВ и на кафедре фармакологии ВолГМУ Полученные данные используются химиками-синтетиками Российского государственного педагогического университета им. A.M. Герцена для проведения дальнейшего целенаправленного поиска в ряду новых производных ГАМК и ГК новых веществ с психотропным действием, а также в научно-исследовательской работе кафедры фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ и лаборатории психофармакологии НИИ фармакологии ВолГМУ.
Положения, выносимые на защиту:
Новые структурные аналоги ГАМК и ГК, имеющие одинаковые заместители в бета-положении существенно отличаются по спектру психотропного действия.
Соединение РГПУ-135 обладает выраженной антидепрессантной активностью, не уступающей действию мелипрамина и значительно превосходящей эффекты коаксила и флуоксетина.
3. Соединения РГПУ-135, РГПУ-160 и РГПУ-202 обладают
анксиолитической активностью сопоставимой между собой. РГПУ-135 и
РГПУ-202 при сравнении с препаратами позитивного контроля не уступали
диазепаму и статистически значимо превосходили афобазол.
Соединение РГПУ-135 как при однократном, так и при курсовом лечебно-профилактическом энтеральном введении проявляет выраженную нейропротекторную активность в условиях действия различных экстремальных факторов: хемоиндуцированных генерализованных судорог, острого эмоционально-болевого стресса и хронического, вызванного путем депривации парадоксальной фазы сна.
Психотропная активность соединения РГПУ-135 вероятно связана со стимулирующим действием на дофаминергическую и серотонинергическую нейропередачу и, в меньшей мере, стимулирующим влиянием на центральную адренергическую нейропередачу.
Апробация работы
Материалы диссертации докладывались и обсуждались на следующих научно-практических конференциях: 62-ой, 65-ой юбилейной и 66-ой открытых итоговых конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ, 2004, 2007, 2008 гг.; XII, XIII Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, «Экспериментальные аспекты медицины», ноябрь 2007, ноябрь 2008 г, ; Симпозиуме: Результаты фундаментальных и прикладных исследований для создания новых лекарственных средств, Москва, 9-11 июня 2008 г.
Публикации: По материалам диссертации опубликовано 12 работ.
Структура и объем диссертации:
Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 4 главы собственных исследований, обсуждение результатов, научно-практические рекомендации, выводы, список литературы, содержащий 202 источника, из них 109 отечественных и 93 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 27 рисунками и содержит 22 таблицы.
Участие ГАМК и ПС в патогенезе расстройств основных психических функций (тревоги, депрессии, когнитивной и мнестической функции)
Согласно современным научным взглядам тревога и депрессия рассматриваются в контексте общих патогенетических механизмов, тесно связанных с эмоционально-стрессовыми расстройствами, число которых в наши дни неизменно растет (Калуев А.В., 2006, Нуца Н.А. и др., 2006, Арушанян Э.Б., 2007, Brady К.Т. et al., 2005). Стрессы различной этиологии индуцируют развитие депрессивных состояний и проявляют анксиогенное (протревожное) действие (Вознесенская Т.Г., 2006, Воробьева О.В., 2006, Anisman Н. at al.,2008, Jacobson-Pick S. et al., 2008). Несмотря на значительное число лекарственных препаратов, используемых для лечения психопатологии депрессии, сохраняется острая потребность в разработке новых селективных антидепрессантов с минимальным количеством побочных эффектов. В последние годы в литературе имеется много сообщений о роли ГАМК и глутаминовой кислоты в патогенезе тревоги и депрессии. (Петров В.И., 2003, Нуца Н.А. и др., 2006, Калуев А.В., 2006, Lydiard B.R., 2003, Nemeroff С.В.,2003, Sands S.A. at al., 2004, Cryan J.F. at al., 2005, McCarson K.E., at al., 2006, Hasler G. et ah, 2007, Leonard, B.E., 2007, Palucha A. et al., 2007, Sanacora G. et al., 2008). Установлено, что различные дисфункции ГАМК-ергической системы коррелируют с повышением тревоги и развитием депрессии у человека и животных. (Калуев А.В., и др., 2004 Sajdyk T.J. at al.,2008). Традиционно усиление центральной ГАМК-ергической передачи связывают с анксиолитическими механизмами, а угнетение данной системы — с усилением тревожности, т. е. анксиогенными механизмами. Показано, что позитивные модуляторы ГАМКл-рецепторов оказывают анксиолитическое и антидепресивное действие в клинике и на экспериментальных моделях, в то время как отрицательные модуляторы приводят к повышению уровня тревоги и депрессии. (Калуев А.В., 1997, Калуев А.В., и др., 2004, Калуев А.В., 2006, Молодавкин Г. М. и др., 2006, Lydiard B.R., 2003, Atack J.R. et al, 2005, Chiu Ch.-S. et al., 2005, Dias R. et al., 2005, Matsumoto K. et al., 2007) Классические анксиолитики бензодиазепины реализуют свое действие, повышая сродство ГАМК-рецепторов к эндогенной ГАМК (Gorman J.M., 2003), ноотроп с анксиолитической активностью фенибут способен прямо активировать ГАМКв-рецепторы (Хаунина Р.А. и др., 1976, Lapin LP., 2001). Конвульсанты - блокаторы хлорных ионофоров ГАМКА-рецепторов, -пикротоксин, бензилпенициллин при введении в высоких системных дозах действуют как индукторы тревоги. Иными словами одним из патогенетических факторов тревожно-депрессивных состояний является угнетение центральной ГАМК-ергической передачи, что подтверждается снижением уровня ГАМК в плазме, спинномомзговой жидкости и ткани мозга у больных депрессией (Sanacora G. et al., 2004, Sanacora G. et al., 2007)
Обширный материал, полученный в экспериментальных и клинических исследованиях доказывает наличие анксиолитических и антидепрессантных эффектов у ГАМК-позитивных препаратов (Sanacora G. et al. 2007), в частности пирацетама, фенибута и фенотропила (Ковалев Г.В., 1990, Захаров В.В., 2005, Lapin LP., 2001). Кроме того, накоплено достаточно большое количество научных данных, доказывающих наличие антидепрессантной активности у производных возбуждающих нейромедиаторов, в том числе глутаминовой кислоты (Palucha A, Pile А., 2005, Arnold P.D. et al, 2006). Противодепрессивное действие, а также анксиолитические свойства таких соединений связаны в первую очередь с антагонизмом или частичным агонизмом к ионотропным и метаботропным рецепторам возбуждающей нейроаминокислоты глутамата (Mathew S J. et al., 2005, Palucha A. et al., 2005, Pietraszek M. et al., 2005, Li X. et al., 2006, Belozertseva I.V. et al., 2007, Klak K. et al., 2007, Palucha A. et al., 2007, Mathew SJ et al., 2008). Другим направлением поиска новых эффективных средств для лечения расстройств настроения является «повышение нейрональной пластичности», которая (структурная пластичность и клеточная эластичность), как известно, повреждается при расстройствах настроения и неиродегенеративных нарушениях (Hayley S. et al., 2005, Carlson PJ et al., 2006, Einat H. et al., 2006). Таким действием обладают NMDA-антагонисты, АМРА-потенциаторы и сАМР фосфодиэстераза-ингибиторы fManji НК et al., 2003, Zarate СА Jr et al., 2006, Machado-Vieira R. et al., 2007, O Neill MJ et al., 2007 ). Противосудорожный препарат - ингибитор высвобождения глутамата — ламотриджин проявляет антидепрессивные свойства, в том числе, при депрессиях, резистентных к лечению классическими антидепрессантами. (Петров В.И. и др., 2002, Du J et al., 2007). В Волгоградском НИИ фармакологии интенсивно изучаются антидепрессивные свойства ВАК- { ергических соединений, действующих на системы возбуждающих аминокислот, получен ряд соединений, проявляющих высокую ,. антидепрессивную активность.
В обзоре Петрова В.И. (2003) приводятся данные о наличии антидепрессивной активности неконкурентных и конкурентных антагонистов NMDA-рецепторов, а также частичных агонистов глицинового сайта и высказывается предположение о том, что антидепрессивный эффект антагонистов данного типа рецепторов проявляется быстрее, чем эффект традиционных антидепрессантов. (Петров В.И., 2003). В многочисленных исследованиях последних лет говорится о целесообразности и перспективности поиска новых эффективных и безопасных лекарственных средств на основе модуляторов глутаматергической нейротрансмиссии (путем воздействия на метаботропные глутаматные рецепторы — mGlu-рецепторы) для лечения депрессивных и тревожных расстройств (Pietraszek М. et al. 2005, Marino MJ et al., 2006, Palucha A., 2006, Stachowicz K. et al. 2006, Belozertseva LV. et al. 2007). Эта гипотеза базируется на том, что функция метаботропных глутаматных рецепторов заключается в регуляции нейрональной трансмиссии глутамата (путем изменения освобождения нейротрансмиттера или модуляции постсинаптического ответа на глутамат), что в свою очередь отвечает за расстройства настроения и, таким образом, метаботропные рецепторы глутамата могут служить в качестве новой мишени для открытия молекулы
Методы изучения влияния исследуемых соединений на физическую работоспособность
Принцип данного теста основан на страхе животного перед падением с высоты, таким образом, при помещении животного на сетку, оно пытается удержаться, противодействуя силе тяжести. (Калуев А.В., 2006). Экран представляет собой металлическую сетку 50x50 см. Сетка устанавливается на высоте 100 см от уровня поверхности стола. Под сетку подкладывают ветошь для смягчения удара при падении животного. При проведении эксперимента животное (крысу) помещают на горизонтальную сетку и плавно отпускают, переворачивая ее на 180 градусов, оставляя висеть, уцепившись за сетку лапами. В данном тесте оценивалось влияние соединения на статическую физическую работоспособность, мышечный тонус и координацию движений у животных по изменению латентного периода первого падения животного с сетки и суммарного времени удержания на ней при 3-кратном подвешивании за период наблюдения, составлявший 3 мин Острая токсичность изучена в соответствии с общепринятыми рекомендациями (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ) Исследование проводилось на белых беспородных мышах самках массой 18-20 гр., содержавшихся в стандартных условиях вивария. Пол животных для первичного определения острой токсичности соединений был выбран с учетом того, что, как правило, по результатам токсикологических. исследований у самок отмечается большая чувствительность к действию токсикантов.
При проведении исследований использовали два пути введения: парентерально (внутрибрюшинно) и энтерально (внутрижелудочно). Животным вводились соединения однократно в возрастающих токсических дозах - внутрибрюшинно в дозах: 750; 1000 и 1500 мг/кг и внутрижелудочно в дозах: 1000; 2000 и 3000 мг/кг. В качестве растворителя для веществ использовалась стерильная вода для инъекций, растворы приготовлялись непосредственно перед введением. Непрерывное визуальное наблюдение за животными, получившими токсичную дозу веществ, велось в течение 5 часов от момента введения препарата, регистрация показателей проводилась с интервалом 10 мин. Оценивались следующие параметры визуальных наблюдений: 1. интегральные показатели - общее состояние, характер шерстного покрова (шерсть взъерошена или гладкая, блестящая или тусклая), состояние слизистых оболочек (окраска, отечность, наличие и характер выделений); 2. нервно-мышечная возбудимость: наличие судорог, парезов, тремора, подергиваний, реакции- на внешние раздражители - звуковые (постукивание по клетке), тактильные (прикосновения к коже), болевые (сдавление кончика хвоста), изменения положения тела, конечностей; 3. функциональное состояние вегетативной нервной системы: размер зрачка, уринация, дефекация, саливации, цвет кожи; 4. количество летальных исходов. Далее наблюдение проводились через каждые 24 часа в течение 7 суток после введения веществ в перечисленных дозах с регистрацией тех же показателей. После чего проводилось, вскрытие и макроскопическое Модели хемоиндуцированного эпилептогенеза (Воронина Т.А., и др. 2005), вызванного введением таких судорожных агентов как пикротоксин и коразол, используются для экспериментального доклинического изучения противосудорожной активности фармакологических веществ. Метод основан на регистрации возникновения судорог при введении проконвульсантов.
О наличии противосудорожной активности у изучаемых фармакологических веществ судят по способности подавлять развитие клонических и тонических судорог, увеличивать латентный период их наступления и снижать общую продолжительность. Тестируемые соединения вводятся до введения конвульсантов с учетом пика их активности. Таким образом, протоколируется латентный период судорог (интервал времени от момента введения проконвульсантов до возникновения судорог), общая продолжительность судорожных реакций, количество судорожных актов, продолжительность клонической и тонической фаз судорожной реакции, количество летальных исходов в группе. Тесты выполнялись на мышах. введении (Воронина Т.А. и др.,2005). Животным подкожно в область шейного отдела спины вводится пикротоксин в дозе, вызывающей судороги у 97% животных, составляющей 2,5 мг/кг. Далее животных помещают в прозрачные плексигласовые индивидуальные контейнеры (10x12x15 см), закрывающихся крышкой, с отверстиями в стенках при постоянной комнатной температуре и стандартном освещении.
Наблюдение проводилось одновременно за шестью животными в течение 60 минут после инъекции пикротоксина, фиксировался стандартный набор показателей. (Воронина Т.А., и др., 2005). Животным подкожно в область шейного отдела спины вводится коразол в дозе, вызывающей судороги у 97% животных, составляющей от 50 до 120 мг/кг. Так как дозы, рекомендуемые в литературе, вариабельны, что связано с высокой гигроскопичностью коразола, перед началом эксперимента было необходимо подобрать ее опытным путем. Доза, вызывающая судороги у 97% животных из группы, является искомой. На первом этапе исследования определяли кривую зависимости доза-эффект с использованием доз - 60, 90 и 120 мг/кг. Каждая доза исследовалась на 6-ти животных, наблюдение велось 60 минут после инъекции коразола, регистрировали время развития генерализованных клонических судорог с утратой рефлекса переворачивания, затем методом статистического анализа рассчитана доза, вызывающая судороги у 97 % животных (СД97) - 110 мг/кг, которая далее использовалась для проведения теста. На втором этапе животным вводили тестируемые соединения с учетом пика их действия,
Изучение влияния новых производных ГАМК и ГК на когнитивную и мнестическую функцию животных
Воспроизведение рефлекса пассивного избегания в тесте УРПИ выполнялось через 24 часа, 7 и 14 суток после обучения. В тесте ТЭИ проверка выработки рефлекса избегания аверсивной водной среды выполнялась однократно через 24 часа после обучения. При воспроизведении теста УРПИ через 24 часа после обучения ни одно из изучаемых в данной работе новых производных нейромедиаторных аминокислот не оказывало статистически значимого влияния на латентный период первого захода в темный отсек и количество животных в группе, посетивших его. При воспроизведении рефлекса пассивного избегания через 7 и 14 суток после обучения РГПУ-136 и РГПУ-202 статистически значимо повышали латентный период первого захода в темный отсек (рис.3) и уменьшали количество животных в группе, посетивших его т.е. улучшали сохранность памятного следа у животных, что говорит Остальные соединения, изучаемого ряда, не вызывали достоверных изменений показателей теста ни на одном из этапов воспроизведения и, следовательно, не влияли на мнестическую функцию у животных. Таким образом, в тесте УРПИ выявлено позитивное влияние РГПУ-136 и РГПУ-202 на такие когнитивные процессы у животных как обучаемость и память, что указывает на наличие у данных веществ ноотропных свойств. В тесте «экстраполяционного избавления» при воспроизведении через 24 часа у животных отмечалось снижение времени, затрачиваемого на решение задачи, как в опытных, так и в контрольной группах, что является критерием их обученности рефлексу избавления из аверсивной ситуации. При этом в группах животных, которым вводили исследуемые соединения статистически значимых изменений показателей, характеризующих когнитивную и мнестическую функции: латентный период подныривания (отражающий скорость решения экстраполяционной задачи) и изменение скорости избегания аверсивной ситуации при воспроизведении навыка по сравнению с периодом обучения в процентах (дельта %) выявлено не было (рис.4). Вместе с тем РГПУ-135 и РГПУ-202 достоверно снижали латентный период двигательной активности в период обучения навыку избавления, что может говорить об ускорении ориентировочных реакций под действием указанных соединений и возможном положительном влиянии на когнитивную функцию у животных.
Таким образом, в ТЭИ вещества, изучаемого ряда, явного влияния на мнестическую функцию не оказывали, однако результаты данного теста не исключают наличия ноотропных свойств у веществ РГПУ-136 и РГПУ-202, выявленных в тесте УРПИ. При оценке влияния веществ на выраженность поведенческой депрессии у животных в данном тесте было обнаружено, что соединения РГПУ-135, РГПУ-146 и РГПУ-202 статистически значимо уменьшали продолжительность иммобилизации (коррелят поведенческой депрессии), соединение РГПУ-135, помимо этого, достоверно повышало количество прыжков (попыток избежать аверсивного воздействия водной среды) (рис.5), что указывает на наличие у перечисленных соединений антидепрессивных свойств. Рисунок 4. Влияние однократного введения новых производных ГАМК и ГК на когнитивную и мнестическую функции у животных в тесте ТЭИ: а) - ЛП подныривания (латентный период подныривания) - время от момента помещения животного в воду под колпаком до подныривания из-под его краев (с); б) - дельта % процент снижения времени решения задачи при воспроизведении по сравнению с обучением. Обозначения: - р 0,05 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений). Таким образом, полученные в ТЭИ результаты говорят о возможной антидепрессивной активности соединений РГПУ-135, РГПУ-146 и РГПУ-202. Анализ результатов тестов, направленных на изучение влияния исследуемых соединений на когнитивную и мнестическую функции животных показал наличие умеренных ноотропных свойств у соединений РГПУ-136иРГПУ-202.
На первом этапе у некоторых изучаемых соединений были выявлены анксиолитические свойства, что проявлялось в статистически значимом увеличении количества выходов в центр в тесте ОП и продолжительности пребывания в открытых рукавах в тесте ПКЛ. На основании чего, для уточнения анксиолитической активности у исследуемых соединений, следующим этапом работы было ее изучение в более специфическом тесте «конфликтная ситуация в варианте Вогеля» (рис.6). В данном тесте изучаемые соединения РГПУ-135, РГПУ-136, РГПУ 160 и РГПУ-202 достоверно снижали латентный период первого наказуемого взятия воды из поилки (рис.6а), при этом РГПУ-135, РГПУ- 160 и РГПУ-202 статистически значимо увеличивали количество наказуемых попыток утолить жажду (рис.66), т.е. обладали выраженной анксиолитической активностью. Таким образом, сопоставление результатов скрининговых тестов ОП и ПКЛ и специфического теста по Вогелю указывает на наличие явной и
Изучение в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля
Для оценки эффективности новых веществ было проведено сравнительное изучение их активности с используемыми в клинической практике препаратами аналогичного действия. В качестве препаратов сравнения были выбраны наиболее эффективные по данным последних экспериментальных и клинических исследований лекарственные средства, имеющие близкий спектр психотропной активности к новым производным ГК: тианептин (коаксил) — антидепрессант, занимает промежуточное положение между седативными и стимулирующими антидепрессантами, не оказывает отрицательного влияния на память, сон и способность к концентрации внимания; флуокситин (прозак) - антидепрессант, способствует улучшению настроения, уменьшает чувство страха и напряжения, устраняет дисфорию, не вызывает седативного эффекта; мелипрамин - антидепрессант, обладает психостимулирующим действием, а также некоторым анальгезирующим (центрального генеза) эффектом; афобазол - анксиолитик с легким стимулирующим (активирующим) эффектом, у препарата отсутствуют миорелаксантные свойства, негативное влияние на память и внимание; диазепам - анксиолитик, обладает успокаивающим, снотворным, противосудорожным, миорелаксантным и амнестическим действием. Усиливает действие снотворных, наркотических, нейролептических, анальгетических препаратов. В данной серии экспериментов новые производные ПС использовались в максимально эффективных дозах, установленных по результатам описанного исследования: РГПУ-135-26мг/кг; РГПУ-202 - 27 мг/гг. Дозы препаратов сравнения выбирали, опираясь на литературные данные (Молодавкин Г.М. и др., 2007): Тианептин (коаксил) - 12,5 мг/кг; Флуоксетин - 20 мг/кг; Афобазол - 5 мг/кг; Мелипрамин - 2,5 мг/кг; Диазепам - 1 мг/кг. Поскольку изучаемые в настоящей работе новые производные ГК проявляют явные психотропные эффекты, уже при однократном введении животным, на предварительном этапе сравнительного анализа их активности с известными препаратами, вещества вводились животным 1 раз перед выполнением тестов с учетом пика их действия. Однако однократное введение животным флуоксетина, коаксила и афобазола не вызывало статистически значимых изменений поведения у животных по сравнению с контрольной группой. Из литературных данных известно, что большинство из выбранных препаратов сравнения развивает наибольший клинический эффект в среднем после 2-х недельного приема.
В связи с этим для данной серии экспериментов было выбрано курсовое введение исследуемых веществ и препаратов позитивного контроля продолжительностью 14 суток -ежедневно, однократно, перорально, с последним введением за 45 минут до выполнения тестов. Для проведения настоящей серии опытов были выбраны психофармакологические тесты, в которых по результатам ранее проведенного исследования новые производные ГК проявили наибольшую активность. В тесте ОП (рис.18) РГПУ-135, Флуоксетин, Мелипрамин и Афобазол проявили сопоставимое активирующее действие - достоверно увеличивали локомоторную активность животных. Соединения РГПУ-202 и диазепам, в большей степени, достоверно снижали двигательную активность у крыс, что указывает на наличие у них седативного действия. Ориентировочно-исследовательская активность (ОИА) статистически значимо изменялась под действием РГПУ-135, афобазола, мелипрамина, РГПУ-202 и диазепама: РГПУ-135, афобазол и мелипрамин сопоставимо - оказывали седативное действие. Количество выходов в центр открытого поля статистически достоверно увеличивалось под действием РГПУ-135 и афобазола, в равной степени, что указывает на наличие у них анксиолитических свойств. Количество актов кратковременного «тревожного» груминга (меньше 5 секунд) статистически значимо и сопоставимо уменьшалось под действием РГПУ-202, афобазола и, в большей степени, диазепама, что говорит об уменьшении состояния эмоционального дискомфорта под действием перечисленных соединений и косвенно свидетельствует о наличии у них анксиолитических свойств. Таким образом, по результатам теста «Открытое поле» можно сделать следующие выводы: - активирующее действие соединения РГПУ-135 сопоставимо по выраженности с действием препаратов сравнения - мелипрамина и афобазола и несколько превосходит действие флуоксетина. - седативное действие РГПУ-202 выражено в меньшей степени, чем у диазепама.
