Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Этиология и патогенез ишемической болезни сердца 11
1.2. Современные представления о холестероле 16
1.3. Метаболизм холестерола 19
1.4. Патогенетическая роль гиперхолестеролемии в развитии ишемической болезни сердца 20
1.5. Лечение гиперхолестеролемии 23
1.6. Метаболизм жирных кислот и их роль в патогенезе ишемической болезни сердца 35
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 47
2.1. Характеристика обследуемых групп 47
2.2. Общеклинические методы обследования 48
2.3. Этапы работы с обследуемыми лицами 52
2.4. Подготовка плазмы крови для определения спектра жирных кислот 54
2.5. Этерификация жирных кислот плазмы крови 55
2.6. Экстракция метиловых эфиров жирных кислот плазмы крови 56
2.7. Очистка эфиров жирных кислот тонкослойной хроматографией насиликагеле 56
2.8. Хромато-масс-спектрометрический анализ жирных кислот 58
2.9. Статистическая обработка данных 60
ГЛАВА 3. Результаты работы 62
3.1. Особенности спектра жирных кислот плазмы крови у относительно здоровых мужчин и женщин 62
3.2. Особенности спектра жирных кислот плазмы крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца, не получавших холестеролпонижаюшую терапию 66
3.3. Особенности липопротеинового спектра крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца до и после приема симвастатина 80
ЗАОсобенности спектра жирных кислот плазмы крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца, принимавших симвастатин 88
Глава 4. Обсуждение результатов работы 116
Выводы 124
Практические рекомендации 126
Список литературных источников 127
- Современные представления о холестероле
- Общеклинические методы обследования
- Хромато-масс-спектрометрический анализ жирных кислот
- Особенности липопротеинового спектра крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца до и после приема симвастатина
Введение к работе
Актуальность работы.
В настоящее время ишемическая болезнь сердца (ИБС) в развитых странах является наиболее частой причиной инвалидизации и смерти людей [10, 37, 47, 59, 86, 243]. Особенности возникновения и течения этого заболевания зависят от пола [155, 165, 176], при этом наиболее распространенной причиной развития ИБС у женщин и мужчин является атеросклеротическое поражение коронарных сосудов сердца, сопровождающееся нарушением перфузии миокарда [10]. Одним из факторов риска атеросклероза, коронарных артерий является гиперхолестеролемия — изменение спектра липопротеинов , плазмы крови с повышением содержания липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), содержащих большое количество' этерефицированного холестерола [7, 19, 32, 37, 86, 152]. Это приводит к отложению холестерола в интиме сосудов, и развитию асептического воспаления [21, 26, 38].
Известно, что в развитии воспаления важнейшую роль играют производные жирных кислот (ЖК). Входя в состав клеточных мембран, они являются предшественниками биологически активных веществ — эйкозаноидов, влияющих на интенсивность воспалительного процесса, агрегацию* форменных элементов крови и тонус сосудов. Содержание ЖК в плазме крови может свидетельствовать о содержании их в составе клеточных мембран [34, 67].
Для первичной и вторичной профилактики ИБС используются препараты, снижающие уровень холестерола — статины [104, 150, 160, 164, 177]. Блокируя образование эндогенного холестерола [53], препараты этой группы изменяют состав липопротеинов плазмы крови, снижая содержание атерогенных ЛПНП [167]. За счет этого проявляется основной эффект данных препаратов.
Известно, что образованный клетками печени эндогенный холестерол необходим для синтеза желчных кислот [57, 195], играющих важную роль во всасывании ЖК.
Исследования, посвященные изучению изменения процентного содержания ЖК у больных ИБС в зависимости от пола на фоне лечения соответствующими препаратами отсутствуют. В связи с этим, изучение изменения спектра ЖК плазмы крови при приеме статинов представляется интересным, поскольку позволит изучить воздействие препаратов данной группы на состав жирных кислот, играющих важную роль при развитии ИБС.
Цель исследования. Выявить особенности спектра жирных кислот плазмы крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца и динамику его изменений,при лечении симвастатином.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
Определить состав спектра жирных кислот плазмы крови у здоровых мужчин и.женщин.
Определить особенности изменения спектра жирных кислот плазмы крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца.
Выявить особенности липопротеинового спектра плазмы крови у здоровых лиц и больных хронической формой ишемической болезни сердца до и после приема симвастатина.
Определить особенности изменения спектра ЖК плазмы крови у мужчин и женщин, страдающих хронической формой ишемической болезни сердца, принимавших симвастатин.
Оценить вклад жирных кислот плазмы крови в терапевтический эффект симвастатина у больных хронической формой ишемической болезни сердца:
Научная новизна. Получены новые данные об особенностях спектра жирных кислот плазмы крови у здоровых людей, больных ИБС, не принимавших и принимавших симвастатин, в зависимости от пола обследованных лиц.
Установлено,; что у здоровых мужчин содержание отдельных. соЗ ненасыщенных жирных, кислот (НЖК) (С20:5, С22:6), сумма соЗ НЖК, отношение соЗ/соб НЖК выше, чем у женщин, а уровень отдельных НЖК семейства соб (G18:2, С20:2) и лигноцериновой (С24:0) насыщенной жирной кислоты (НасЖК) у женщин^ напротив, превышают соответствующие значения у мужчин.
Впервые установлено также, что^ у мужчин, страдающих\ ИБС, содержание НЖК семейства соб (С18:2,С20:2) выше; чем у больных женщин, у которых, в свою очередь, содержание НЖК семейства со7 (СГ6:1) и НасЖК (G14:0i С15:0) выше,.чем у больных мужчин-.
Впервые выявлено, что ИБС характеризуется более низким чемі в норме, процентным содержанием незаменимых соб НЖК (G18:2, суммарное содержание юб ЖК) у женщин и соЗ НЖК (С20:5, G22:6, суммарное содержание соЗ ЖК) у мужчин. На фоне этого у лиц обоего пола возрастает содержание отдельных незаменимых НЖК (у женщин — С18:3 соЗ НЖК, у мужчин - 20:2 соб НЖК). Снижение уровня незаменимых НЖК у больных женщин и мужчин компенсируется более высоким содержанием заменимых со? (у лиц обоего пола - С 18:1, суммарное содержание со7 НЖК; у женщин — С16:1), а у больных женщин, кроме того, еще и со9 НЖК (С18:1 и суммарное содержание со9 НЖК). Как следствие этого, у больных ИБС изменяется лишь процентное содержание отдельных насыщенных ЖК: уровень бегеновои (С22:0) и трикозановой (С23:0) НасЖК (у лиц обоего пола) становится ниже, а
содержание миристиновой (С14:0) и маргариновой (С17:0) НасЖК (у больных женщин), напротив, выше, чем в норме.
Установлено, что у больных ИБС женщин, принимавших симвастатин, более высокое, чем у мужчин аналогичной группы наблюдения, содержание пальмитиновой (С 16:0) НасЖК и суммарный уровень НасЖК, а у мужчин — более высокое содержание гондоиновой (С20:1) ш9 НЖК, лигноцериновой (С24:0)>НасЖК и значение индекса ненасыщенности ЖК.
Обоснованно, что прием симвастатина приводит у больных ИБС к еще более выраженному снижению содержания незаменимых НЖК (у пациентов обоего пола) за счет соб НЖК (С18:2, суммарное содержание шб НЖК) на фоне незначительного понижения содержания, отдельных ЖК семейства, соЗ (женщины - С18:3; мужчины — С20:5), не компенсируется более высоким, содержанием заменимых НЖК (у пациентов обоего пола — С 18:1 со7 НЖК, у женщин - суммарное содержание а>7 НЖК, у мужчин - С 18:1, C20:L ю9 НЖК, суммарное значение со9 НЖК) и сопровождается в конечном счете уменьшением суммарного содержания НЖК. В результате этого у больных ИБС обоего пола, принимавших препарат, увеличивается содержание как отдельных НасЖК (у лиц обоего пола С15:0; С17:0, О8:0, С20:0, С23:0, С24:0, у женщин - С 16:0, у мужчин - С22:0), так и их общий уровень при снижении индекса ненасыщенности ЖК.
Практическая ценность работы. Выявленные особенности изменения спектра ЖК плазмы крови у больных ИБС при лечении симвастатином могут быть использованы для обоснования новых, патогенетически оправданных подходов к коррекции содержания незаменимых ненасыщенных ЖК при лечении ИБС препаратами данной группы.
Положения, выносимые на защиту
Тендерные отличия спектра жирных кислот плазмы крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца, при лечении симвастатином становятся еще более выраженными.
Лечение симвастатином женщин и мужчин с хронической формой ишемической болезни сердца приводит к выраженному снижению содержания незаменимых ненасыщенных жирных кислот семейства юб, которое не компенсируется (как у нелеченных больных) увеличением содержания заменимых ненасыщенных жирных кислот и приводит к снижению общего содержания ненасыщенных жирных кислот, повышению уровня насыщенных жирных кислот и уменьшению индекса ненасыщенности.
Нормализуя спектр липопротеинов действие симвастатина у больных хронической^ формой ишемической- болезни сердца сопровождалось выраженным нарушением жирнокислотного состава плазмы крови (более сильным у женщин), что можно расценить как побочный-эффект этого препарата.
Внедрение результатов исследования. Разработаны новый способ определения и разделения жирных кислот (патент РФ на изобретение № 2298793) и новый способ оценки спектра жирных кислот (патент РФ на изобретение № 2237245). По полученным в результате работы данным оформлены рационализаторские предложения «Способ определения спектра свободных жирных кислот в плазме крови методом газожидкостной хроматографии» (№ 2098) и «Способ дифференциальной диагностики бронхиальной астмы среднетяжелого течения» (№ 2171). Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, внедрены в практику, кафедр ГОУ ВПО КрасГМУ имени проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого:
патологической физиологии; биологической химии с курсом медицинской, фармацевтической и токсикологической химии; внутренних болезней №1; восстановительной медицины и курортологии ИПО и используются при чтении лекций и проведении практических занятий и семинаров у студентов ГОУ ВПО КрасГМУ имени проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Росздрава и врачей-курсантов института последипломного образования.
Публикации. В результате проведенного исследования опубликовано 12 работ, из них в журналах, включенных в перечень изданий ВАК на соискание ученой степени кандидата медицинских наук - 5.
Современные представления о холестероле
Холестерол является цикличным одноатомным вторичным спиртом, характерным только для живых организмов [72]. Он имеет вытянутую форму, размер 0,7 на 0,8 и 0,2 на 4,7 мкМ. Критическая точка мицеллообразования — 28-40 нМ. Температура плавления - 148С. Входит в отдельный класс липидов-стероидов, именуемый стеринами. Гидроксильная группа в положении СЗ делает холестерол полярным. При высокой концентрации в водной среде он образует ассоциаты [3]. Холестерол синтезируется во многих тканях организма, но основным местом его синтеза считается печень. Ключевым ферментом синтеза является гидроксиметилглутарил-КоА-редуктаза [79]. В печени синтезируется более 80% холестерола, в тонком кишечнике — 10%, остальной холестерол синтезируется в коже, коре надпочечников, половых железах [213]. В теле взрослого человека в среднем содержится около 140 г холестерола, примерно 2 г на 1 кг массы тела. Условно в, организме человека можно выделить три пула холестерола: быстро обменивающийся, медленно обменивающийся, и очень медленно обменивающийся. К первому пулу следует отнести холестерол печени и других паренхиматозных органов; а также холестерол кишечной стенки и плазмы крови. Обновление этого пула происходит в среднем за 30 суток. К третьему пулу можно отнести холестерол головного и спинного, мозга, нервові и. соединительной ткани. Обновление этого пула может происходить годами. Холестерол остальных органов и тканей составляет промежуточный медленно обменивающийся пул холестерола [228] . За сутки в организме человека около 800- мг холестерола окисляется в желчные кислоты, примерно такое же количество экскретируется с фекалиями, около 100 мг удаляется со слущивающимся эпителием кожи и секретом сальных желез, на образование стероидных гормонов- используется менее 100 мг. Таким образом, ежесуточный расход холестерола составляет около 1,2 г и черпается, из быстрообменивающегося пула. Для того чтобы восполнить эту потерю; организм синтезирует в сутки около, 800 мг холестерола, и примерно 400 мг его поступает с пищей [141, 192]. Обращает на себя внимание резко различающееся содержание холестерола в отдельных органах и тканях в расчете на единицу массы. Содержание холестерола в ткани мозга на один порядок, а в надпочечниках на два порядка выше, чем. в мышце [141]. В жировой ткани содержание холестерола, относительно невысокое, но, учитывая, что количество жира у тучных людей достигает значительных размеров, жировая ткань может стать одним из главных мест хранения запасов холестерола.
Следует заметить, что в цельной крови содержится лишь около 8% холестерола от его, общего содержания в теле [29]. В организме холестерол присутствует в двух формах — полярной и неполярной: Полярной формой является свободный эфирно-несвязанный холестерол (НЭХС), неполярной — холестерол, этерифицированный жирной кислотой (ЭХС) [202]. Большая часть НЭХС находится в плазматических мембранах и в миелиновых оболочках. В клеточных и субклеточных мембранах холестерол распределен неравномерно. Наличие его характерно прежде всего для плазматической мембраны, где молярное отношение с фосфолипидами составляет 0,7-0,8 [18]. Меньше НЭХС в мембране микросом (0,4-0,8), эндоплазматического ретикулума (0,1-0,3) и митохондрий (0-0,1) [105]. Содержание холестерола в наружном монослое клеточной мембраны существенно выше, чем во внутреннем. Холестерол в мембране располагается рядом с фосфолипидами, при этом возрастает плотность упаковки фосфолипидов, и уменьшается площадь, занимаемая фосфолипидами на поверхности клетки. Ассоциированный холестерол вынуждает жирнокислотные остатки в фосфолипидах располагаться более тесно, уменьшает их подвижность и,пространство, занимаемое между ними водой, снижает жидкостность и повышает микровязкость мембраны [68]. В плазме крови четвертая часть всего холестерола приходится на НЭХС.
Хотя в целом в организме НЭХС преобладает над ЭХС, есть органы и ткани, в которых преимущественно содержится последний: надпочечники, кожа, плазма крови, соединительная ткань. Внутриклеточно данный холестерол находится, как правило, в эндоплазматическом ретикулуме и цитозоле в виде мелких жировых капель и рассматривается как запасная форма холестерола [185, 205]. Холестерол, как эндогенный, образованный в результате биосинтеза в печени, так и экзогенный, поступающий с пищей из тонкого кишечника, транспортируется в кровяное русло и ткани в виде хиломикронов и других липопротеинов. В клетки холестерол поступает при диффузии его через і водную среду путем встраивания в мембрану [77]. Исключение составляют гепатоциты и эпителиальные клетки эндокринных желез (надпочечники, яичники и семенники), которым холестерол необходим для синтеза желчных кислот и стероидных гормонов. Эти клетки активно поглощают холестерол, но не в виде полярного НЭХС, а в форме неполярного ЭХС [82]. Липопротеины низкой плотности (ЛПНП) транспортируют неполярный ЭХС к данным клеткам, где они захватываются рецепторами [163]. Влизосомах клеток, активно поглощающих ЛПНП, содержится» фермент — кислаяг гидролаза, осуществляющий в случае необходимости разделение молекулы холестерола и ЖК. В гепатоцитах гидролаза функционирует в щелочной среде [230]. Освобожденный холестерол участвует в построении мембран и метаболизме, являясь предшественником стероидных гормонов и желчных кислот [51]. Данный фермент отсутствует в лизосомах фагоцитов, чем
Общеклинические методы обследования
Отсутствие факторов; препятствующих включению обследованных лиц в настоящее исследование, подтверждали опросом, осмотром больного, проведением развернутого и биохимического анализа крови, тестом толерантности к углеводам, ЭКГ, ВЭМ и ЭхоКГ. Опрос лиц производили по анкете; составленной: на основании опросника Rose и методических рекомендаций ВОЗ по; многофакторной профилактике ИБЄ. Прш проведении опроса выявляли факторы риска развития ИБС: курение, злоупотребление алкоголем, малоподвижный образ жизни, нерациональное питание с повышенным содержанием углеводов? № холестерола; наличие сопутствующих заболеваний, отягощенная по развитию данного заболевания наследственность. Производили установление фактов; говорящих, о наличие иных заболеваний, не связанных с сердечно сосудистой системой; но делающих невозможным участие данного человека в исследовании. Осмотр» обследуемого включал: перкуссию, аускультацию, пальпацию, измерение АД, определение антропометрических данных (рост, масса тела, объем талии, объем бедер, наличие абдоминального ожирения — объем талии/объем бедер). Наличие избыточной массы тела определяли при помощи индекса Кетле (отношение массы тела в килограммах к квадрату роста в метрах). Проведение развернутого анализа крови было направленно на выявление острых воспалительных и иных процессов, изменяющих картину ЖК спектра плазмы и делающих невозможным участие данного человека в настоящем исследовании в данный момент времени.
Анализ производили на гематологическом, анализаторе «Medonic GA 620» (Швеция). Определялись следующие показатели: общее число эритроцитов, средний объем эритроцита, спектр распределения эритроцитов по объему, величина гематокрита, содержание гемоглобина, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, число ретикулоцитов, количество тромбоцитов, средний объем тромбоцита, количество лейкоцитов и их отдельных морфологических форм. Определение процентного содержания палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов и моноцитов проводили на мазок крови, окрашенный по Романовскому-Гимзе на микроскопе «Micros MG 400» (Австрия). Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) определяли с исследованием методов Панченко и Вестергрена. Для определения СОЭ по методу Панченко использовали многоразовые капилляры, при определении СОЭ по методу Вестергрена - одноразовые пробирки «Vacuette» (Австрия) -1,6 мл. Биохимический1 анализ крови производили на полуавтоматическом? биохимическом анализаторе «Star Fax 1904+» (США). При этом определяли содержание глюкозы, альбумина, общего белка, анализировали показатели, липиднопу спектра, активность креатинкиназы, АЛТ, ACT, а-амилазы, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы, уровень мочевой, кислоты, креатинина, мочевины, общего и прямого билирубина. Для проведения данных анализов использовались реактивы фирм: «Вектор-бест» (Россия) и «Оливекс диагностикум» (Россия). Содержание общего холестерола определяли по методу P. Trinder [229]. К небольшому объему (1000 мкл) рабочего реагента (включающего лиофилизат ферментов: холестеролэстеразы, холестеролоксидазы, пероксидазы и 4-аминоантипирин) «Вектор-бест» (Россия) добавляли 10 мкл сыворотки (стандарта) и после перемешивания пробу инкубирывали 10 мин при 37С. Затем проведя измерение (при длинне волны 500нм) абсорбции опытной и стандартной проб определяли содержание общего холестерола по формуле где оптическую плотность опытной пробы/оптическую плотность калибровочной пробы х 4,65.
Для определения концентрации триацилглицеролов к 1 мл реагента (включающего лиофилизат ферментов: липопротеиновой липазы, глицеролкиназы, глицеролфосфатоксидазы, пероксидазы и 4-аминоантипирин) «Вектор-бест» (Россия) добавляли 1мкл сыворотки крови (стандарта) и после перемешивания инкубировали 10 мин при 37С. После измерения абсорбции на спектрофотометре (длинна волны 500 нм) содержание триацилглицеролов устанавливали по формуле (оптическая плотность опытной пробы/оптическая плотность калибровочной пробы х 2,29) [212]. Для выделения ХС ЛПВП к 125 мкл реагента (содержащего фосфорновольфрамовую кислоту и ионы магния) «Вектор-бест» (Россия) добавляли 50 мкл сыворотки крови. Затем пробу хорошо перемешивали и-выдерживали в течении 10 минут при комнатной температуре. После центрифугирывания при 3000 оборотах/мин. (диаметр ротора 377мм) в течении 10 мин. отбирали супернатант содержащий ХС ЛПВП [93]. Дальнейшее определение концентрации ХС ЛПВП производили по вышеописанному методу для определения концентрации общего холестерола Такие показатели липопротеинового спектра как ХС ЛПОНП, ХС ЛПНП определяли по расчетной формуле W. Friedwald (ХС ЛПОНП=ТГ/2,2; ХС ЛПНП=общий холестерол - ХС ЛПВП - (ТГ/2,2) при условии что концентрация ТГ в крови не превышала 4,5 ммоль/л [132]. Для определения коэффициента атерогенности использовали формулу А.Н. Климова ((Общий холестерол - ХС ЛПВП)/ ХС ЛПВП) [28].
Тест толерантности к углеводам проводили для исключения наличия нарушения толерантности к углеводам, либо сахарного диабета при наличии повышенного содержания глюкозы, установленного биохимическим анализом крови. После взятия крови из локтевой вены, натощак обследуемому предлагали выпить стакан теплой воды с растворенными 75г глюкозы. Двукратно с интервалом в 1 час производили забор крови для определения уровня глюкозы. Электрокардиографическое исследование в настоящей работе использовали для диагностики нарушений ритма и проводимости сердца обследуемых, выявления гипертрофических изменений миокарда, наличия ишемии, и очагов рубцовых изменений. ЭКГ снимали в 12 отведениях при помощи системы «Валента». Велоэргометрическую пробу проводили с целью выявления СКрЬІТОЙі ишемии миокарда у лиц, предполагаемых для включения в группу контроля. Ступенеобразное повышение физической нагрузки моделировали при помоищ велоэргометра «Валента». Данную пробу проводили до, достижения субмаксимальной частоты сердечных сокращений, характерной для возраста обследуемого. Последняя рассматривалась как частота, составляющая 75-85% от максимальной для данного возраста (200 — возраст в годах). Показания1 к преждевременному прекращению физической нагрузки делились на клинические и электрокардиографические. К клиническим, показаниям относили: приступ стенокардии, снижение АД на 20-25% от исходного уровня или повышение АД до 230/130 мм рт. ст., приступ удушья, выраженную одышку, общую резкую слабость, головокружение, тошноту, сильную головную боль, отказ обследуемого от дальнейшего проведения1 пробы вследствие боязни, дискомфорта или болей в икроножных мышцах. К электрокардиографическим критериям прекращения проведения пробы относили: снижение или подъем сегмента «ST» на 1 мм и более, возникновение частых (1:10) желудочковых экстрасистол, пароксизмальной тахикардии, мерцательной аритмии, нарушение атриовентрикулярнои и внутрижелудочковой проводимости, изменение комплекса «QRS» в виде резкого снижения амплитуды зубца «R». О возникшей на фоне нарастающей физической нагрузки ишемии миокарда свидетельствовала депрессия
Хромато-масс-спектрометрический анализ жирных кислот
Пробу извлекали из низкотемпературного» холодильника, размораживали и досуха высушивали в токе азотам После: этого, по стенкам виалы по спирали собирая метиловые: эфиры ЖК, вводили 0;5 мл гексана.. Затем повторно высушивали пробу досуха в токе азота и таким: же образом -вводили еще 0,1мл гексана. Проделав это, гексан; содержащий растворенные эфиры; ЖК, переносили в автосамплеровскую виалу, которую устанавливали на автоматический самплер «Agilent technologies 7683В» (США), обеспечивающий введение 1 мкл пробы в газохроматографическую колонку. Для непосредственного определения метиловых эфиров ЖК использовали газожидкостный хроматограф «Agilent technologies 6890N» и масс-спектрометр «Agilent technologies 5975G VL MSD» (США). Хроматографическую разгонку производили на капиллярной колонке «0MEGOWAX ТМ» (США) с внешним диаметром - 0,25мм, внутренним -0 25 мкм,.длинной — 30-м. При: проведении анализа использовали следующие режимы, работы хроматографа и масс-спектрометра: времяі проведения анализа — 60 мин; начальная температура термостата — 140 С в течение 5 минут, после этого в течение 25 минут производили линейное повышение температуры на 4С в минуту до достижения 240С. При проведении анализа температура испарителя составляла 175 С. Образец вводили без деления потока. В качестве газа-носителя использовали гелий. Скорость продувочного потока равнялась 90 мл/мин, суммарная скорость потока составляла 93,7 мл/мин. Работала система экономии газа, включающаяся через 2 мин после начала хроматографической разгонки. Скорость отводимого потока газа составляла 15 мл/мин. Прием и обработку данных с хромато-масс-спектрометра проводили с применением компьютерной программы «MSD ChemStation D.02.00.275» (США).
Идентификацию метиловых эфиров ЖК проводили по сопоставлению времени выхода метилированных стандартов ЖК с пиками хроматограммы. Для этого использовались стандарты ЖК: додекановой (С12:0), миристиновой (С14:0), стеариновой (С18:0), олеиновой (С18:1), линолевой (С18:2), трикозановой (С23:0), лигноцериновой (С24:0) «Acros organics» (США), тридекановой (С13:0), 10-гептадеценовой (С17:1); арахиновой (С20:0), гондоиновой (С20:1), дигомо-у-линолевой (С20:2), 11,14,17-эйкозатриеновой (С20:3), пентакозановой (С25:0), гексакозановой (С26:0) «Sigma» (Германия), тридекановой (С 13:0), пентадекановой (С 15:0), пальмитоолеиновой (С16:1), маргариновой (С17:0), у-линоленовой (С18:3), нонадекановой (С19:0) «Fluka» (США), бегеновой (С22:0), эруковая (С22:1), 15-тетракозеновой (С24:1), гептакозановой (С27:0) «Fluka» (Германия), пальмитиновой (С16:0) «Aldrch» (США), транс-6-октадеценовой (С 18:1), 6-октадеценовой (С18:1), 7-октадеценовой (С18:1), олеиновой (С18:1), транс-И-октадеценовой (С18:1) «Supelko» (США), линолевой (С 18:2), транс-линолевой (С 18:2), а-линоленовая (С18:3), 5,8,11-эйкозатриеновой (С20:3), дигомо-у-линоленовой (С20:3), арахидоновой (C20:4), 5,11,14,17-эйкозатетраеновой (C20:4), тимнодовой (C20:5), цервоновой (C22:6) «Cayman chemical company»(CIIIA). В качестве дополнительных критериев идентификации использовали сопоставление масс-спектрометрических отпечатков анализируемой пробы с отпечатками, содержащимися в электронных библиотеках «NIST MS Search 2.0» и «AMDIS Analysis». Соотношение ЖК (рис.2) вычисляли с помощью компьютерной программы «MSD ChemStation D.02.00.275» по методу нормализации пиков. Единицы измерения ЖК выражались в процентах от общей суммы площадей пиков ЖК. Полученные данные подвергались статистической обработке на персональном компьютере «Intel Pentium IV» с применением прикладной программы « SPSS 11.5». Проверку нормальности распределения показателей осуществляли с использованием коэффициентов асимметрии и эксцесса по тестам Колмагорова-Смирнова и Шапиро-Уилкса. Для оценки достоверности различий нормализованных несвязанных выборок использовали t-критерий Стьюдента-Фишера. Различия сравниваемых величин считали достоверными при уровне значимости р 0,05.
Особенности липопротеинового спектра крови у больных хронической формой ишемической болезни сердца до и после приема симвастатина
У мужчин группы больных ИБС, не получавших холестеролпонижающую терапию, обнаруживались более высокие значения ХС ЛПНП, общего холестерола и коэффициента атерогенности, чем у здоровых лиц (табл. 19). Резюмируя результаты изучения липопротеинового спектра у больных ИБС, можно утверждать, что при возникновении заболевания у лиц обоего пола увеличивалось содержание ХС ЛПНП, общего холестерола и коэффициента атерогенности. Кроме того, у женщин отмечалось повышение содержания триацилглицеролов и снижение уровня ХС ЛПВП. Полученные нами данные соответствовали описанию изменений липопротеинового спектра крови при ИБС, приведенному в литературе [16, 19, 32, 36, 37, 47, 94, 103, 119, 162]. Как видно из табл. 17, у больных ИБС женщин, получавших симвастатин, показатели ТГ и ХС ЛПОНП превышали таковые у лиц сравниваемой группы наблюдения. По остальным показателям сколько-нибудь значимых (достоверных) различий в сравниваемых группах мужчин и женщин не обнаруживалось (табл. 20). У больных ИБС женщин, получавших симвастатин, так же как и у пациенток, не получавших холестеролпонижающую терапию, отмечался более высокий уровень ТГ при сравнении с таковым в норме. Остальные показатели липопротеинового спектра крови у женщин данной группы наблюдения соответствовали таковым у здоровых (табл.21). Таким образом, прием препарата-нормализовал значения ХС ЛПВП, ХС ЛПНП, общего холестерола и коэффициента атерогенности у больных женщин, в то время как уровень ТГ по-прежнему превышал таковой у здоровых лиц. У больных ИБС мужчин, получавших препарат, показатели липопротеинового спектра не отличались от таковых у здоровых лиц (табл. 22). Таким образом, как и у женщин данной группы, прием симвастатина у мужчин приводил к нормализации показателей, изменение которых было? связано с образованием эндогенного холестерола: ХС ЛПНП, общего холестерола, коэффициента атерогенности. У больных ИБС женщин после приема симвастатина отмечались более низкие значения ХС ЛПНП, холестерола, коэффициента атерогенности, чем. у пациенток, не получавших холестеролпонижающей терапии (табл. 23). f
Приведенные данные могут свидетельствовать о том, что действие препарата приводило к снижению содержания ХС ЛПНП, общего холестерола, коэффициента атерогенности у женщин, больных ИБС. У мужчин, больных ИБС, после приема симвастатина отмечались более низкие значения ТГ, ХС ЛПНП, общего холестерола и коэффициента атерогенности, чем у пациентов, не получавших холестеролпонижающей терапии (табл. 24). Таким образом, действие препарата приводило у больных ИБС к нормализации показателей липопротеинового спектра крови, зависимых от образования эндогенного холестерола (ХС ЛПНП, общий холестерол, коэффициент атерогенности) и не связанных напрямую с ним (ТГ). При этом симвастатин не оказывал влияния на содержание ТГ плазмы крови у больных женщин. Резюмируя проведенное исследование липопротеинового спектра плазмы крови, можно сказать, что у лиц обоего пола, больных ИБС, отмечались более высокие показатели ХС ЛПНП, общего холестерола, коэффициента атерогенности, чем у здоровых лиц. Кроме того, у больных женщин обнаруживался более высокий уровень ТГ и, напротив, более низкое содержание ХС ЛПВП. После приема симвастатина в течение двух месяцев у больных обоего пола отмечалось снижение содержания ХС ЛПНП, общего холестерола и коэффициента атерогенности до уровня в норме. У мужчин, помимо этого, было зарегистрировано снижение уровня ТГ. Прием препарата у женщин, страдающих ИБС, приводил к повышению уровня ХС ЛПВП, однако не влиял на содержание ТГ, уровень которых оставался выше, чем в норме (рис 10). Примечание. Здесь и далее: значимые отличия между группами больных одного пола обозначены: +-Р 0,05; ++-Р 0, 01 +++-Р 0,001. Таким образом, у больных ИБС, принимавших симвастатин, отмечались изменения показателей липопротеинового спектра крови, соответствовавшие данным литературы. [39, 70]. Спектр жирных кислот у больных ИБС мужчин и женщин, принимавших симвастатин, как и у нелеченых пациентов и здоровых лиц, состоял из насыщенных и ненасыщенных ЖК. При этом содержание ненасыщенных ЖК у лиц данной группы составляло около 68% всех ЖК плазмы крови; в том числе процентная доля НЖК семейства соЗ-3,1-3,9 % ЖК плазмы крови.
В число данных НЖК входили у-линоленовая (9Л %) тимнодовая (0,4-0,6 %) и цервоновая (2,2-2,6 %) НЖК. У отдельных лиц в следовых количествах определялась 8,11,14,17-эйкозатетраеновая НЖК. Общее содержание ЖК семейства юб составляло 41-42 % всех ЖК плазмы, при этом последние были представлены линолевой (31-32 %), дигомо-у-линолевой (0,3 %), дигомо-у-линоленовой (1,5 %), арахидоновой (7 %) НЖК. Отношение содержания соб НЖК к юЗ НЖК составляло 7-8 %. На семейство ю7 НЖК у лиц обоего пола приходилось около 3 %; последние были представлены пальмитоолеиновой (1%) и вакценовой (2 %) НЖК. Семейство со9 НЖК составляло около 19 % всех ЖК плазмы крови и было представлено олеиновой (19 %) и гондоиновой (у женщин - 0,14 %, у мужчин - 0,2 %) НЖК. У отдельных лиц в незначительных количествах определялась 5,8,11-эйкозатриеновая и эруковая НЖК. Насыщенные ЖК составляли у женщин 30,5 %, у мужчин — 28,6 % всех ЖК плазмы крови и включали в себя НасЖК с четным (миристиновая, пальмитиновая, стеариновая, арахиновая, бегеновая и лигноцериновая) и нечетным (пентадекановая, маргариновая и трикозановая) числом атомов углерода. Как и у здоровых людей большую часть НасЖК у больных этой группы составляли пальмитиновая (у женщин — 18,5 %, у мужчин — 16,5 %) и
