Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 19.
1.1. Основные положения этиологии и патогенеза язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки 19
1.2. Фитотерапия в лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта 47
1.3. Сведения о растениях и их составе как источников получения перспективных фитопрепаратов 76
1.3.1. Облепиха крушиновидная 76
1.3.2. Шлемник байкальский 84
1.3.3. Цикорий обыкновенный 90
1.3.4. Осина обыкновенная 92
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 96
2.1. Материал исследования 96
2.1.1. Характеристика средств растительного происхождения 98
2.1.1.1. Экстракты облепихи крушиновидной 98
2.1.1.2. Характеристика экстрактов шлемника байкальского 100
2.1.1.3. Сухой экстракт корня цикория 102
2Л.1.4. Сухой экстракт коры осины 103
2.1.2. Препараты сравнения 106
2.1.3. Введение препаратов и критерии противоязвенной эффективности .107
2.2. Методы исследования 108
2.2.1. Модели «острых» экспериментальных язв 108
2.2.2. Моделирование хронического язвенного процесса 111
2.2.3. Дополнительные методы исследования 112
2.3. Статистическая обработка результатов 117
ГЛАВА 3. Результаты собственных наблюдений 118
3.1. Скрининговая оценка противоязвенной активности экстрактов из растений Сибири и Дальнего Востока 118
3.2. Экспериментальное изучение противоязвенной активности перспективных фитопрепаратов 124
3.2.1 .Экстракты облепихи крушиновидной 124
3.2.1.1. Влияние экстрактов из облепихи крушиновидной на процесс нейрогенного язвообразования у мышей 124
3.2.1.2. Зависимость противоязвенных эффектов жидкого экстракта побегов и коры облепихи от степени его очистки от дубильных веществ 127
3.2.1.3. Влияние препаратов из облепихи крушиновидной на процесс язвообразования, вызванного введением ацетилсалициловой кислоты беспородным крысам 128
3.2.1.4.Влияние сухого экстракта коры облепихи крушиновидной на развитие резерпиновой язвы желудка у мышей 130
3.2.1.5. Исследование анальгезирующей активности экстрактов облепихи крушиновидной г 131
3.2.2. Экстракты шлемника байкальского 134
3.2.2.1. Влияние экстрактов шлемника байкальского на процесс нейрогенного язвообразования в желудке мышей 134
3.2.2.2. Влияние экстрактов шлемника байкальского на процесс язвообразования, вызванного введением крысам ацетилсалициловой кислоты 139
3.2.2.3. Действие экстракта травы шлемника байкальского на процесс язвообразования, вызванного введением мышам индометацина 142
3.2.2.4. Оценка влияния экстракта травы шлемника на моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта здоровых мышей 143
3.2.2.5. Влияние экстракта травы шлемника байкальского на болевую чувствительность у мышей 144
3.2.2.6. Исследование флоголитической активности экстракта шлемника байкальского 145
3.2.2.7. Изучение антипролиферативного действия экстракта травы шлемника байкальского на модели «ватной гранулемы» 146
3.2.2.8. Влияние экстракта травы шлемника байкальского на секреторную и экскреторную деятельность желудка собак с наложением фистулы по Басову 147
3.2.3. Экстракт корня цикория 154
3.2.3.1. Влияние экстракта корня цикория на процесс нейрогенного язвообразо-вания в желудке у мышей 154
3.2.3.2. Влияние экстракта корня цикория на процесс индометацинового язво-образования в желудке у мышей 156
3.2.3.3. Влияние экстракта корня цикория на процесс ацетилсалицилового язво-образования в желудке у мышей 158
3.2.3.4. Влияние экстракта корня цикория на атофановое повреждение слизистой оболочки желудка крыс 160
3.2.3.5. Влияние экстракта корня цикория на этаноловое повреждение слизистой оболочки желудка крыс 162
3.2.3.6. Влияние экстракта корня цикория на повреждение бутадионом слизистой оболочки желудка крыс 164
3.2.3.7. Влияние экстракта корня цикория на процесс индометацинового язво-образования в желудке у крыс 165
3.2.3.8. Влияние экстракта корня цикория на процесс язвообразования по методу H.Shay 167
3.2.3.9. Изучение флоголитической активности экстракта корня цикория 168
3.2.3.10. Изучение анальгезирующей активности экстракта корня цикория
3.2.3.11.Изучение влияния экстракта корня цикория на пролиферативную фазу воспаления 170
3.2.3.12. Влияние экстракта корня цикория на секреторную активность желудка собак: 171
3.2.3.13. Влияние экстракта корня цикория на секреторную активность желудка крыс на модели язвообразования по H.Shay 173
3.2.3.14. Влияния экстракта корня цикория на моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта здоровых мышей и с язвенной патологией 175
3.2.3.15. Изучение влияния экстракта корня цикория на моторную функцию желудка собак 177
3.2.4. Экстракт коры осины 182
3.2.4.1. Влияние экорсина на процесс нейрогенного язвообразования в желудке у мышей 182
3.2.4.2. Влияние экорсина на развитие язвенного поражения желудка мышей, вызванного введением резерпина .184
3.2.4.3. Влияние экорсина на процесс язвообразования, вызванного введением крысам ацетилсалициловой кислоты 186
3.2.4.4. Влияние экорсина на процесс язвообразования, вызванного введением гистамина 188
3.2.4.5. Влияние экорсина на развитие «острой» язвы желудка крыс по H.Shay 190
.2.4.6. Изучение влияния экорсина на развитие хронического язвенного процесса в желудке у крыс 191
3.2.4.7. Сравнительное изучение влияние фенологликозидов и экорсина на процесс язвообразования на модели нейрогенного повреждения слизистой желудка мышей 196
3.2.4.8. Изучение антиульцерогенного действия суммы фенологликозидов и флавоноидов в сравнении с комплексным экстрактом коры осины на модели альтерации слизистой оболочки желудка мышей резерпином 197
3.2.4.9. Исследование гастрозащитного действия экорсина в сравнении с сум марной фракцией фенологликозидов на модели атофановой язвы желудка 199
3.2.4.10. Изучение влияние экорсина на секреторную функцию желудка у крыс с «острой» язвой по H.Shay 201
3.2.4.11. Изучение влияния экорсина на секреторную функцию желудка у собак с фистулой по Басову 203
3.2.4.12. Влияние экорсина на моторную функцию тонкого кишечника здоровых мышей и с язвенной патологией 205
3.2.4.13. Изучение спазмолитического действия экорсина на здоровых и мышах с язвенной патологией 207
3.2.4.14. Влияние экорсина на выделительную функцию кишечника мы
шей 209
3.2.4.15. Изучение анальгезирующего действия экорсина на модели «уксусных»
корчей мышей 211
3.2А16.Изучение влияния экорсина на пролиферативнуго фазу воспаления на
модели «ватной гранулемы» 212
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 216
Выводы 306
Список литературы
- Фитотерапия в лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта
- Характеристика экстрактов шлемника байкальского
- Экспериментальное изучение противоязвенной активности перспективных фитопрепаратов
- Влияние экстракта травы шлемника байкальского на секреторную и экскреторную деятельность желудка собак с наложением фистулы по Басову
Введение к работе
Актуальность проблемы. Язвенная болезнь является хроническим, рецидивирующим заболеванием с образованием в период обострения язв в желудке и двенадцатиперстной кишке, которое по распространенности, тяжести течения, осложнениям и смертности занимает главное место среди заболеваний желудочно-кишечного тракта [Чернин В.В., 2000; Циммерман Я.С., 2000; Freston J.W., 2000; Ohmann С, 2000]. Проблема эффективной терапии данной нозологии обсуждается и решается в медицинских кругах более ста лет. Нельзя не признать, что за прошедшие два десятилетия достигнут большой прогресс в лечении язвенной болезни, а точнее, в лечении хронических гастродуоденальных язв, в основном, за счет целенаправленного подавления активности микробного фактора [Ивашкин В.Т., Шептулин А.А., 2001; Васильев Ю.В., 2002; Дубцова Е.А., 2002]. Однако в проблеме язвенной болезни и в настоящее время остается немало «белых пятен» - как в выявлении причин ее возникновения, так и в определении основных методов лечения, механизмов рецидивирования язв после успешно проведенного лечения. Более того, отмечается увеличение частоты осложненных форм на фоне общего роста заболеваемости, остаются неприемлемо высокими показатели летальности.
На сегодняшний день язвенная болезнь составляет порядка 36% среди патологий желудочно-кишечного тракта. Наибольшая частота ее встречаемости приходится на высокоразвитые страны. В России она регистрируется почти у 10% взрослого населения, а от последствий ее неадекватного лечения умирают около 6000 человек в год. В странах Западной Европы язвенной болезнью в течение жизни болеют 10-15% мужчин и 4-15% женщин. По данным Американской статистики, в этой стране каждый год регистрируется 350000 новых случаев заболевания, 100000 больных ежегодно подвергаются оперативному лечению, а 15000 человек умирают от гастродуоденальных язв и их осложнений [Kemppainen Н., 1998; Anand B.S., 1999; Яицкий Н.А. и др., 2002]. Чаще всего
9 эта патология встречается у лиц молодого, работоспособного возраста (от 20-40 лет). Язвенная болезнь в детском и подростковом возрасте перестала считаться редким заболеванием и сегодня представляет серьезную проблему в педиатрии [Козлова И.П. и др., 2001; Дубцова Е.А., 2002]. Перечисленные факты свидетельствуют о социально-экономической значимости решения данной медицинской проблемы.
Рынок лекарственных препаратов с доказанной противоязвенной активностью на сегодняшний день превышает 500 наименований, при этом проблема эффективной терапии далека от своего разрешения [Рысс Е.С., Звартау Э.Э., 1998; Яицкий Н.А. и др., 2002]. Несмотря на использование достаточно активных профилактических мер и постоянно совершенствующихся методов лечения (их насчитывают более 1000), даже при комплексном применении высокоэффективных противоязвенных средств возникновение рецидивов наблюдается в 30-82%, осложненные формы язвенной болезни встречаются в 26-42% случаев, а у 15-25% больных существует проблема резистентности гастродуоденальных язв к самому современному терапевтическому воздействию [Рутгайзер Я.М., Михайлов А.Г, 1999; Calvet X., 2001; Васильев Ю.В. и др., 2002; Ивашкин В.Т. Шептулин А.А., 2002]. Кроме того, следует подчеркнуть, что почти у трети больных прием препаратов сопровождается проявлением того или иного побочного действия, развитием псевдомембранозного колита, кишечного дисбак-териоза, у 5-10% населения имеется аллергия к антибиотикам. Прекращение приема селективных средств ведет к секреторной отдаче (синдром отмены, «рикошета»), что может спровоцировать рецидив заболевания. Существует риск образования антител к Н2-гистаминоблокаторам в результате их длительного приема. Фармакогенная анацидность способствует бактериальной пролиферации и увеличивает уровень нитрозаминов, что может провоцировать канцерогенез. Необходимо отметить, что определенная часть проблем с желудочно-кишечным трактом носит функциональный характер, и ксенобиотики в данном случае не обладают должным эффектом.
Мощный стимул в связи с открытием новых факторов патогенеза получила концепция неоднородности язвенной болезни, которая в настоящее время включает клинические, морфологические и эндокринные аспекты. Для практического здравоохранения все эти аспекты являются очень важными, так как более рационально позволяют подойти к вопросам лечения. Сообразно с этими знаниями постоянно идет поиск средств патогенетического воздействия. Конечно, терапия язвенной болезни не может ограничиваться только антихелико-бактерными схемами, какими бы совершенными они не были. Бесспорно, лечение должно быть многокомпонентным с включением активных препаратов, воздействующих на «фактор хозяина» и восстановление трофических процессов в слизистых оболочках желудка и двенадцатиперстной кишки, обусловливающих выздоровление [Циммерман Я.С., Зинатуллин М.Р., 1997, 1999; Шеп-тулин А.А., 1997; Скобелева Т.В. и др., 2002; Yoshida N. et al., 2000; Yamamoto S. etal.,2001].
В последние годы фармакологами предпринимаются определенные попытки в разработке комплексных лекарств с разноплановым действием для лечения хронических гастродуоденальных язв. Проблему системного воздействия на организм больного в виде монотерапии или как одного из составляющих комплекса лечебных мероприятий может решить фитотерапия [Соколов С.Я., 2000; Турищев С.Н., 2000, 2003; Белобородова Э.И. и др., 2001; Кошелев Ю.А., Агеева Л.Д., 2003; Вайс Р.Ф., Финтельманн Ф., 2004]. Клинические наблюдения за течением язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки при консервативном лечении, использующем разнообразные лекарственные растения в виде суммарных препаратов, отдельно действующих веществ или биологически активных групп, убедительно доказывают возможности фитотерапии [Радбиль О.С., 1991; Рысс Е.С., Звартау Э.Э., 1998; Виноградова Т.А. и др., 2001; Пашинский В.Г. и др., 2003]. Несомненным преимуществом фитопрепаратов является широкий спектр их биологических эффектов, низкая токсичность или отсутствие таковой, мягкость действия, взаимозаменяемость расте-
11 ний. Средства растительного происхождения могут найти применение на начальных стадиях язвенной болезни, в период обострения - в качестве средств дополнительного лечения в сочетании с сильнодействующими веществами, а на этапе противорецидивной терапии уход от ксеио биотической нагрузки вполне может быть оправдан. Трудно переоценить значимость препаратов из растений в периоды ремиссии или стабилизации патологического процесса, когда они выступают в качестве поддерживающих, осуществляя профилактику обострений. С учетом эффективности, переносимости и экономичности фитотерапев-тические препараты для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки являются не конкурирующими, а дополняющими современную фармакотерпию средствами.
В официнальной медицине реестр противоязвенных препаратов из растений, эффективность которых подтверждена экспериментальными и клиническими исследованиями, весьма ограничен [Машковский М.Д., 1986; Соколов С.Я., 2000; Вайс Р.Ф., Финтельманн Ф,, 2004]. Данные народной медицины о гастрозащитной активности растительных источников дает экспериментаторам широкие возможности для создания новых лекарственных средств, еще не нашедших применения в практике лечения больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. Исторически сложившиеся в народной и традиционной медицине подходы к лечению язвенной болезни желудка препаратами растительного происхождения для профилактики и увеличения межрецидивного периода нашли новый стимул за счет оригинальных технологий получения новых средств из растительного сырья.
В связи с вышесказанным, является актуальным поиск среди растений Сибири и Дальнего Востока и создание на их основе новых растительных препаратов для применения в терапии язвенной болезни, сочетающих противоязвенную активность с противовоспалительными, бактерицидными, обволакивающими, антацидиыми, прокинетическими и другими свойствами. Расширение спектра подобного рода средств вызвано и необходимостью индивидуали-
12 зации, адекватности лечения больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки с учетом полиэтиологичности основного заболевания и наличия сопутствующих патологий.
Цель исследования: поиск растений Сибири и Дальнего Востока, обладающих противоязвенным действием, изучение их специфических эффектов, вскрытие механизмов действия наиболее перспективных фитопрепаратов, обоснование возможности применения и определение точек терапевтического воздействия в лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.
Задачи исследования:
Провести скрининговые исследования растений Сибири и Дальнего Востока на модели нейрогенного повреждения слизистой желудка с целью определения среди них наиболее перспективных источников получения противоязвенных фитопрепаратов.
Изучить влияние профилактического введения наиболее активных фитопрепаратов на развитие «острого» язвенного дефекта слизистой оболочки желудка на модельных системах, отражающих основные этиопатогенетические факторы язвообразования: стресс (нейрогенная язва), поражение слизистой оболочки желудка в результате применения нестероидных противовоспалительных средств (ацетилсалициловое, индометациновое, бутадионовое повреждение), воздействие кислотно-пептического фактора (язва по Н. Shay, гистами-новое, резерпиновое, атофановое повреждение), прием алкоголя (этаноловое повреждение).
Оценить терапевтическую эффективность наиболее активных фитопрепаратов на модели хронического язвенного процесса (ацетатная язва) у крыс.
Выявить влияние наиболее перспективных фитопрепаратов из изученных растений на секреторную и экскреторную функции желудка животных при язвенной патологии и в норме.
5. Исследовать влияние фитопрепаратов на моторно-эвакуаторнуго функцию животных в норме и при язвенной патологии.
6. Изучить влияние фитопрепаратов на основные проявления язвенной болезни: воспаление и болевой синдром.
7, Разработать на основе выявленных фармакологических эффектов и механизмов действия новое лекарственное средство для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.
Положения, выносимые на защиту:
1. Изучение гастрозащитной активности 22 экстрактов растений Сибири и
Дальнего Востока на модели нейрогенного повреждения слизистой желудка
мышей позволило выделить две группы, отличающихся значимостью фармако
логического эффекта:
выраженная противоязвенная активность (от 2 до 20 единиц) показана у экстрактов бадана тихоокеанского (корни), левзей сафлоровидной (корневище с корнями), лихниса хальцедонского (трава, корни), облепихи крушиновидной (кора, побеги), подорожника большого и блошного (надземная часть), смолевки зеленоцветковой (трава, корни), цикория обыкновенного (корень), леспедеци двуцветной (надземная часть), осины обыкновенной (кора);
высокое антиульцерогенное действие (более 20 единиц) выявлено у экстрактов бархата амурского (листья), ореха маньчжурского (листья), серпухи венценосной (трава), шлемника байкальского (трава), элеутерококка колючего (корни).
2, Основанием для выбора экстрактов осины обыкновенной, облепихи
крушиновидной, шлемника байкальского и цикория обыкновенного для углуб
ленного исследования противоязвенной активности явились результаты скри-
нинговых исследований, возможности сырьевой базы и наличие разработанных
лекарственных форм.
Значительное гастрозащитное действие экстрактов облепихи крушино-видной (побегов и коры - жидкого и сухого, коры — масляного и спиртового) выявлено при их профилактическом курсовом введении мышам и крысам с моделируемым «острым» язвенным поражением слизистой оболочки желудка различного генеза (нейрогенная язва, ацетилсалициловое повреждение). Экстракты облепихи крушиновидной побегов и коры (жидкий) и коры сухой значительно уменьшают восприятие болевых раздражений, вызванных внутри-брюшинным введением уксусной кислоты. Выявлено определяющее значение дубильных веществ в реализации антиульцерогенного действия экстракта побегов и коры облепихи жидкого.
Профилактическое курсовое введение мышам и крысам оригинальных комплексных экстрактов корней и травы шлемника байкальского оказывает выраженное гастропротективное действие на скрининговых моделях «острого» язвообразования (нейрогенного, ацетилсалицилового и индометацинового повреждения). В экспериментах на собаках с наложением фистулы по Басову экстракт травы шлемника байкальского снижает кислотопродукцию желудочного секрета (протеолитическая активность, активность Н+) и повышает резистентность гастродуоденальной слизистой (концентрация эндогенного аммиака и уровень фукозы). Выявлено выраженное обезболивающее действие сухого экстракта травы шлемника.
Установлено, что экстракт корня цикория обладает выраженным противоязвенным действием на моделях нейрогенного, ацетилсалицилового, эта-нолового, индометацинового, атофанового, бутадионового, по H.Shay повреждениях слизистой оболочки ЖЕСТ мышей и крыс, сопоставимым с аналогичными эффектами фамотидина, гастросидина, ранитидина. Профилактическое курсовое введение экстракта корня цикория крысам с перевязанным привратником по H.Shay приводит к снижению «агрессивных» составляющих желудочного секрета, что выражается в достоверном повышение рН желудочного сока, снижении концентрации ионов водорода, уменьшении дебит/час ионов водорода. В
15 экспериментах на собаках с фистулой по Басову выявлена сезонная зависимость модулирующего влияния фитопрепарата на секреторную функцию желудка собак и выраженное протекторное действие (стимуляция слизеобразова-ния). Экстракт корня цикория значительно снижает восприятие болевых раздражений, индуцированных внутрибрюшинным введением уксусной кислоты. Фитопрепарат обладает выраженным противовоспалительным действием; угнетает развитие агарового отека, задерживает развитие грануляционно- фиброзной ткани. Экстракт корня цикория ускоряет эвакуацию гастродуоденального содержимого как у здоровых, так и у крыс с нейрогенными язвами. В экспериментах на собаках подтверждено стимулирующее влияние экстракта корня цикория на моторную функцию желудка собак.
6. Установлено, что сухой экстракт осины обладает выраженными гастро-защитными свойствами как при профилактическом введении животным с «острыми» язвенными деструкциями (стрессовая, резерпиновая, ацетилсалициловая, атофановая, гистаминовая, по H.Shay), так и в случае лечения им язвенной болезни хронического характера (ацетатная язва). Механизм антиульцероген-ного действия фитопрепарата обусловлен снижением кислотно-пептической «агрессии» (увеличение рН, уменьшение дебита соляной кислоты) и повышением защитных факторов (увеличение фукозы, эндогенного аммиака, стимуляция слизеобразования и сохранение морфоструктурной целостности желез и клеток, отвечающих за выработку бикарбонатов). Репаративные свойства экстракта коры осины проявляются в ускорении заживления хронического язвенного дефекта за счет усилении образования защитных компонентов (нейтральных и кислых ГАГ), более активного созревания грануляционной и формирования зрелой соединительной ткани. Экорсин проявляет выраженное анальгези-рующее и антипролиферативное действие. Умеренное послабляющее действие фитопрепарата обусловлено физиологически оптимальной стимуляцией гладкой мусхсулатуры желудка и кишечника, как у здоровых животных, так и с язвенной патологией. Экорсин проявляет выраженное анальгезирующее и анти-
пролиферативное действие. Сравнительная оценка фармакологического эффекта флавоноидов и фенологликозидов с комплексным экстрактом коры осины на моделях нейрогенного, резерпинового и атофанового повреждения слизистой оболочки желудка мышей и крыс показала, что данные биологически активные вещества.определяют его антиульцерогенную активность.
7. Оригинальные комплексные экстракты осины обыкновенной, облепихи крушиновидной, шлемника байкальского и цикория обыкновенного из частей растений, раньше не представлявших практическую ценность, являются перспективной базой для создания на их основе новых фитопрепаратов для использования в комплексной терапии язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.
Научная новизна:
Проведено скрининговое исследование экстрактов из растений Сибири и Дальнего Востока, в результате которого выделено две группы средств растительного происхождения, отличающихся выраженностью фармакологического эффекта, и проведен анализ их гастрозащитной активности в зависимости от химического состава. Впервые обнаружена противоязвенная активность у 15 из 22 изученных растений. Проведено комплексное исследование наиболее перспективных экстрактов из изученных растений на моделях экспериментального ульцерогенеза, отражающих основные этиопатогенетические факторы развития язвенной болезни. Показана принципиальная возможность воздействия фитопрепаратами на отдельные звенья патогенеза язвенной болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, что позволяет обосновать профилактическую, терапевтическую и противорецидивную эффективность растительных средств. Установлено, что фитопрепараты физиологически оптимально активизируют мо-торно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта, оказывают противовоспалительное и анальгезирующее действие. Проведены исследования, позволяющие связать выявленные эффекты с фармакологической активностью входящих в состав препаратов действующих веществ.
Практическая значимость работы:
Полученные данные позволили определить наиболее перспективные растения Сибири и Дальнего Востока для разработки на их основе новых эффективных противоязвенных препаратов. Проведенные исследования по изучению возможности применения различных частей растений Сибири и Дальнего Востока, ранее не представлявших практическую значимость в качестве источников получения фитопрепаратов для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, показали высокую эффективность на моделях экспериментального ульцерогенеза. Продемонстрированные возможности фармакологической коррекции средствами растительного происхождения как ацидо-пептического фактора желудочного секрета, так и резистентности гастродуоде-нальной слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки необходимо учитывать при их назначении для терапии и профилактики рецидивов данной патологии. Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать использование средств растительного происхождения для профилактики обострений и в качестве средств дополнительной терапии в комплексном лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, острых и симптоматических язв.
Полученные результаты послужили основанием для разработки нового противоязвенного препарата «Экорсин» в качестве средства дополнительной терапии в комплексном лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Приоритет полученных результатов, свидетельствующих о выраженных противоязвенных свойствах оригинального комплексного экстракта коры осины обыкновенной - экорсина, способы получения его лекарственной формы подтверждены 2 патентами РФ на изобретение («Способ получения средства, обладающего противоязвенным действием» № 2086251 от 10 августа 1997 г.; «Способ получения противоязвенного средства» № 2124899 от 20 января 1999 г.). На основании проведенных доклинических исследований оригинального препарата экорсина были представлены материалы в МЗ РФ, и полу-
18 чено разрешение на проведение клинических испытаний в качестве противоязвенного средства. Экорсин успешно прошел клинические испытания на базе клиник НИИ фармакологии и Алтайского государственного медицинского университета и в настоящее время находится на стадии регистрации в МЗ и СР РФ..
Апробация диссертации. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на научно-практической конференции «Актуальные вопросы гастроэнтерологии» (Томск, 1996, 1998, 1999); на I Всероссийской конференции по ботаническому ресурсоведению (Санкт-Петербург, 1996); на итоговых научных конференциях в НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН «Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов» (1992, 1994, 2002, 2004), «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (2001, 2002); на Y, YII и IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998, 2000, 2002); на конференции «Актуальные проблемы фармации» (Барнаул, 1995); на научной конференции «Актуальные проблемы фармакологии» (Барнаул, 2003).
Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 45 печатных работ, в том числе 19 - в центральных журналах, 1 монография, получено 2 патента Российской Федерации на изобретение.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 354 страницах машинописного текста, иллюстрированы 6 рисунками, 64 таблицами и состоит из введения, 4 глав, 7 выводов, списка цитируемой литературы, включающего 486 источников, из них 383 отечественных и 103 зарубежных.
Фитотерапия в лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта
Понятие «фитотерапия» введено в науку французским врачом Анри Лек-лерком (1870-1955), который жил и практиковал в Париже. Лечение же растительными средствами имеет, конечно, более давнее происхождение. Оно применялось в медицинских системах, зародившихся много тысячелетий назад: китайской, тибетской, индийской, аюрведической. По разным данным, не менее 10-12% от общего числа видов растений планеты (из 300 тыс. видов только высших растений) использовались в разных странах в качестве лекарственных и пищевых (также употреблявшихся в лечебных целях). Из них около 21 тыс. видов применяются и сейчас. В настоящее время фитотерапия считается лишь частью обширного учения о лекарственных растениях, включающего в себя также фитохимию, фйтофармацию, фитофармакологию. Только в последние десятилетия прошлого века фитотерапия преодолела барьер научных требований, предъявляемых к фитопрепаратам, и основывается на новых современных знаниях и представлениях. С этих позиций правильно и необходимо, чтобы имеющиеся древние традиции лечения растениями трансформировались в есте-ственно-начныЙ метод, эффективность и безопасность которого постоянно бы контролировалось. В наше время фитотерапия представляет собой интегральную составную часть современной фармакотерапии, однако не подлежит сомнению тот факт, что фитотерапия не имеет собственной теории и научного метода, и зачастую исследования замыкаются на феноменологическом уровне [Виноградова, 2001; Вайс Р.Ф., Финтельманн Ф.г 2004]. Лечебные свойства лекарственных растений обусловлены наличием в них разнообразных по составу и строению веществ, обладающих фармакологической активностью в зависимости от их относительного количества и сочетания [Завражнов В.И., Китаєва Р.И., Хмелев К.Ф., 1993]. Углубленному фитохимическому анализу с «привязкой» того или иного лечебного эффекта к определенным биологически активным веществам подвергнуто не более 500 лекарственных растений из примерно 2 тыс. видов. Для остальных растений установлена лишь групповая принадлежность содержавшихся в них действующих начал без выделения в чистом виде и расшифровки химической структуры, без определенной фармакологической оценки [Соколов С.Я., 2000; Турищев С.Н., 2000].
Из 20 тыс. видов высших растений, произрастающих на территории нашей страны, в народной медицине используют около 10%. [Завражнов В.И., Китаєва Р.И., Хмелев К.Ф., 1993]. В то лее время в Государственном реестре лекарственных средств присутствуют не более 300 видов и примерно 700 фармацевтических препаратов из растительного сырья. Следовательно, спектр лекарственных растений традиционной фитотерапии намного шире офининального. Возрождение интереса к традиционной медицине, охватывающей весь спектр растений, а не только внесенных в реестр, обусловлено несколькими причинами. Во-первых, это реальная эффективность и высокая степень безопасности фитотерапии при длительном лечении хронических болезней, особенно в детской практике и геронтологии. Хотя растительные лекарственные средства тоже несут определенный отрицательный потенциал (аллергические проявления, побочные эффекты), но предельно низкая токсичность подавляющего большинства растений позволяет назначать их длительными курсами в сложных или более простых комбинациях для противорецидивного или реабилитационного лечения. Немногие растения, содержащие сильнодействующие гликозиды или алкалоиды, в широкой терапевтической практике применяются в ограниченных до 49 зах и под строгим лечебным контролем. Во-вторых, богатый химический состав фитосборов определяет поливалентность фармакологических свойств, среди которых у каждого растения доминируют одно-два. Как правило, в фитотера-певтической практике используются именно сборы, а не отдельные растения, что позволяет достигнуть максимальной выраженности основных лечебных эффектов, то есть мягко и безопасно воздействовать одновременно на многие системы организма, так или иначе задействованные в патологическом процессе. В-третьих, немаловажной особенностью фитотерапии являются доступность и относительная дешевизна препаратов из лекарственных растений, особенно по сравнению с современными синтетическими средствами. Применение системной терапии на базе лекарственных растений и фитопрепаратов в профилактических целях и для лечения длительно текущих хронических рецидивирующих заболеваний, в том числе, при патологии желудочно-кишечного тракта, следует считать наиболее актуальным.
Лечение лекарственными растениями при заболеваниях желудочно-кишечного тракта имеет многовековую историю и широкое распространение. В значительной мере это объясняется простотой их использования и возможностью непосредственного воздействия на орган, пораженный болезнью (желудок, кишечник) [Белобородова Э И., 1992; Белобородова Э И. и др., 2001]. В лечебных травах есть практически все биологически активные компоненты, позволяющие им успешно конкурировать с синтетическими лекарственными препаратами, использовать их в течение длительного времени без угрозы привыкания больного. Вместе с тем нельзя переоценивать возможности фитотерапии и игнорировать синтетические лекарственные препараты, без которых не обойтись при острых формах болезней и обострения хронических процессов. В этих случаях официнальные препараты являются основными средствами лечения, а лекарственным растениям отводится хотя и важная, но вспомогательная роль.
Характеристика экстрактов шлемника байкальского
Экстракт шлемника байкальского жидкий представляет собой раствор экстрактивных веществ, извлекаемых 70 %-ным этиловым спиртом, содержание которых должно быть не менее 7 %, в том числе суммы флавоноидных соединений - не менее 2 %, флавоноидных гликозидов - не менее 1,5 %.
Экстракт шлемника байкальского сухой - аморфный гигроскопический порошок (от желтого до буровато-желтого цвета) со слабым специфическим запахом. Для получения препарата использован 70 %-ный этиловый спирт.
По данным фармакологических исследований, основная биологическая активность экстракта шлемника байкальского обусловлена наличием в нем суммы флавоноидов [Бухаров В.Г. и др., 1961]. Из корней шлемника выделены и идентифицированы 6 классов флавоноидов: флавоны, 2-оксифлаваноны, 3-оксифлаваноны, 2-3-диоксифлавоны, флаванолы и флаваноны. Основными компонентами экстракта являются флавоноиды байкалин, вогонозид, орокси-лозид, то есть 7-глюкорониды байкалеина, вогонина и ороксилина [Попова
Т.П., Литвиненко В.И., 1968; Попова Т.П., 1984]. Сумма флавоноидов в экстракте шлемника сухом достигает 58 %, кроме того, он содержит другие вещества флавоноидной природы, моносахариды, дисахариды, органические кислоты и их соли, в том числе аминокислоты до 10 %, незначительное количество стеринов [Shibata К., 1993]. Химический состав веществ экстрактов, получаемых из надземной части шлемника байкальского
Экстракт травы шлемника байкальского жидкий и экстракт шлемника байкальского сухой, приготовленные из надземной части, собранной в фазе цветения и начале плодоношения, содержит до 5 % веществ, извлекаемых этиловым спиртом. В спиртоводном извлечении найдены оксикоричные кислоты, флаво-ноиды, соли минеральных и органических кислот, аминокислоты, углеводы. Общее содержание флавоноидов в траве достигает 15-20 %, они представлены смесью более 20 веществ агликоновой и гликозидной природы. Из агликонов идентифицированы хризин, байкалеин, апигенин, лютеолин, скутеллареин, изо-скутеллареин, динатин, сальвигенин, картамидин (дигидроскутеллареин) и изо-картамидин (дигидроизоскутеллареин). Перечисленные агликоны представлены в основном 7-0-глюкоронидами [Попова Т.П., 1984]. В липофильной фракции обнаружены парафины, стерины, липиды, каротиноиды, дитерпены, фе-нольные соединения, хлорофилл.
В цветах растения, наряду с флаваноновыми и флавоновыми гликозидами и агликонами, обнаружены антоцианы производные дельфинидина. В листьях преобладают типичные В-замещенные флаванолы и флавоны, при этом количественно - флаваноновые глюкорониды (до 70 %). 2.1.1.3. Сухой экстракт корня цикория
Сухой экстракт корня цикория обыкновенного является комплексным препаратом, полученным по оригинальной технологии. Основными биологически активными веществами, определяющими его фармакологическую актив ность, является сумма фенольных соединений и фруктозанов [Трубников А.А.,
Фурса Н.С., Дыгай A.M., 1999; Фурса Н.С., Литвиненко В.И., Трубников А.А., 1999].Технология получения, основные параметры, регламентирующие качество препарата, методики анализа и нормативно-техническая документация на экстракт корня цикория разработаны в Ярославской государственной медицинской академии МЗ РФ совместно с Государственным научным центром лекарственных средств г. Харькова. Проведено изучение химического состава растительного сырья (подземной части корня цикория обыкновенного, культивируемого в Ярославской области и дикорастущего из различных мест обитания), используемого для приготовления экстракта (Литвиненко В.И. и др., 1977). Химический состав растительного сырья корня цикория
Аминокислоты. В корнях в свободном виде больше всего определено изолейцина, аланина, аргинина, тирозина, аспарагиновои кислоты, лейцина, гистидина, а в связанном — глутаминовои кислоты, аргинина, аспарагиновои кислоты, лизина, суммы изолейцина и лейцина, серина и треонина.
Моносахара, В свободном виде содержались арабиноза, глюкоза, фруктоза, галактоза, в связанном виде - арабиноза, галактоза, глюкоза. Фруктозаны. Показано, что фруктозаны составляют более 90 % углеводов цикория. Жирные кислоты. Выявлено преобладание пальмитиновой, олеиновой и линолевой кислот. Макро- и микроэлементы. Определено 5 макро-(К, Са, S, Р, О) и 25 микроэлементов (В, Вг, V, Fe, J, Cd, Со, La, Mn, Cu, Mo, As, Ne, Ni, Sn, Se, Pb, Fb, Sr, Ті, Cr, Ce, Zn, Zr, Sb)
Вещества вторичного обмена. Хроматографически выделено 9 фенольных соединений в индивидуальном состоянии, идентифицированных с 4 гид-роксикоричными кислотами (кофейной, феруловой, неохлорогеновой и преобладающей хлорогеновой), 3 кумаринами (умбеллифероном, скополетином, эс-кулетином), 2 флавоноидами (лютеолином и апегинином).
Экспериментальное изучение противоязвенной активности перспективных фитопрепаратов
Сравнительная оценка антиульцерогенного действия спиртовых и масляных экстрактов облепихи крушиновидной на модели нейрогенного язвообразования показала, что наиболее высокой активностью обладал жидкий экстракт побегов и коры (табл.3). Его однократное введение беспородным мышам-самцам перед подвешиванием за шейную складку приводило к уменьшению числа животных, имеющих изъязвления в желудке (со 100% в контроле до 43%), среднее количество язв снизилось в 6,8 раза по сравнению с контрольным уровнем, а противоязвенная активность оказалась максимальной и составила 15,9. Спиртовый экстракт коры облепихи оказал выраженное гастрозащитное действие: 56% мышей имели язвы в желудке, в 2,7 раза уменьшилось среднее число изъязвлений на одно животное, противоязвенная активность при этом составила 4,8 единицы.
Достоверно уменьшилось число мышей с язвами (29% против 100% в контроле) при использовании экстракта коры облепихи масляного, при этом количество изъязвлений на одно животное снизилось в 3 раза, противоязвенная активность равнялась 10,4 единицам. Официнальное средство «Масло плодов облепихи», которое использовали в качестве препарата сравнения, в выбранном режиме введения не влияло на развитие процесса язвообразования: показатели развития язвенного процесса в этой группе не отличались от таковых в контро-лях, получавших спиртовый раствор или масло растительное (табл.3).
Поскольку в предыдущем эксперименте комплексный препарат из побегов и коры облепихи оказался наиболее эффективным средством защиты слизистой оболочки желудка от повреждающего действия нейрогенного фактора, в следующей серии опытов изучено влияние его различных форм (сухого и жидкого экстрактов), а также масляного экстракта коры на процесс развития стрессовых язв у беспородных мышей-самок. Профилактическое введение препаратов проводилось в течение 3 сут, причем последнее осуществлялось за 1 час до подвешивания мышей. При использовании сухого экстракта в дозах 100 и 200 мг/кг достоверно уменьшилось число животных с язвами (с 80% в контроле до 30 и 40% в опытных группах соответственно), в 2Д и 2,6 раза снизилось среднее количество язвенных деструкции на одну мышь в группе. У животных, получавших жидкий экстракт коры и побегов облепихи в дозе 5 мл/кг, уровень противоязвенной активности оказался выше за счет значительного уменьшения количества изъязвлений в желудке (в 5,3 раза по сравнению с контролем). Сле дует отметить, что в данном эксперименте наиболее выраженным гастрозащит-ным действием обладал экстракт из коры облепихи масляного, причем более эффективным оказалось его использование в большей дозе (табл.4). Так, в группе мышей, которым вводили масляный экстракт в дозе 5 мл/кг, количество животных, имеющих изъязвления в желудке, составило 11% против 80% в контроле, а среднее число язв на одно животное было в 5,3 раза меньше контрольного уровня (табл.4). Зависимость противоязвенных эффектов жидкого экстракта побегов и коры облепихи от степени его очистки от дубильных веществ
Экстракт побегов и коры облепихи жидкий неочищенный, полностью либо на 50% очищенный от дубильных веществ, вводили в дозе 5 мл/кг внут-рижелудочно однократно за 1 час до подвешивания беспородных мышей-самцов за шейную складку. Препаратом сравнения служил известный адаптоген - официнальный экстракт элеутерококка, применяемый в аналогичном режиме.
Выявлено, что очищение препарата облепихи от дубильных веществ приводит к уменьшению его антиульцерогенного действия (табл 5.). Так, использование неочищенного экстракта побегов и коры облепихи привело к достоверному уменьшению как числа животных с язвами (с 90% в контроле до 13% в опытной группе), так и среднему количеству изъязвлений на одну мышь (в 17 раз по сравнению с контролем). Среди животных, получавших полностью либо на 50% очищенный от дубильных веществ экстракт, язвы в желудке имели 22% и 20% мышей соответственно. Таким образом, наибольшая противоязвенная активность (ПА=117,7 единицы) выявлена у неочищенного экстракта побегов и коры облепихи облепихи. Следует отметить, что гастрозащитная активность исследуемых препаратов облепихи значительно превосходила аналогичную эффективность экстракта элеутерококка, которая составила 6,4 единицы (табл.5).
Продолжением исследования антиульцерогенного действия экстрактов побегов и коры облепихи крушиновидной явилась серия экспериментов на беспородных крысах-самках, у которых повреждение слизистой желудка вызывали введением ацетилсалициловой кислоты. Выраженная противоязвенная активность была выявлена у масляного и сухого экстракта побегов и коры облепихи, которые применяли профилактическим 7-дневным курсом (табл.6). В группах крыс, получавших до введения ульцерогена масляный экстракт в дозах 0,5 и 2, 5 мл/кг, достоверно уменьшилось число животных с язвами (со 100% в контроле до 75% и 60% соответственно), число язвенных деструкции снизилось в 1,7 и 2,1 раза по сравнению с контрольными значениями. Противоязвенная активность оказалась наивысшей при использовании масляного экстракта в дозе 2,5 мл/кг и составила 3,5 единицы. Применение сухого экстршсга облепихи привело к уменьшению числа крыс с язвами (до 80% от 100% в контроле) и снижению среднего количества изъязвлений в слизистой оболочке желудка в 2,3 раза по сравнению с контрольным уровнем (табл.6).
Влияние экстракта травы шлемника байкальского на секреторную и экскреторную деятельность желудка собак с наложением фистулы по Басову
На первом этапе исследования гастрозащитного действия экстракта корня цикория на модели нейрогенного язвообразования у беспородных мышей-самок определяли диапазон эффективных доз. В 1-й серии экспериментов экстракт корня цикория вводили профилактическим курсом в дозах 10, 50, 200 мг/кг внутрь через зонд ежедневно в течение 4 сут. В качестве препарата сравнения применяли гастросидин (фамотидин) в дозе 8 мг/кг в аналогичном режиме. Во 2-й серии экспериментов изучаемый препарат использовали также превентивным курсом в дозах 50 и 100 мг/кг внутрижелудочно ежедневно в течение 4 сут. Животные контрольных групп получали растворитель в количестве 0,2 мл внутрь через зонд в аналогичном режиме.
Иммобилизация мышей за шейную складку на 22 ч вызывала появление язв на слизистой оболочке желудка у 90 % животных контрольной группы в 1-й серии экспериментов. При введении ЭКЦ в дозе 10 мг/кг этот показатель уменьшился на 20%, при этом отмечалась максимальная выраженность гастрозащитного эффекта препарата (ПА=2Д2), превышающая таковую у гастросиди-на. Противоязвенное действие ЭКЦ в эффективной дозе реализовалась в достоверном снижении количества точечных изъязвлений (в 1,8 раза), значительном уменьшении (в 1,6 раза) общего числа язв на одно животное (табл.22).
Во 2-й серии экспериментов выраженная противоязвенная активность показана при использовании препарата в дозе 100 мг/кг. Если снижение количества крупных язв в 2,5 раза, а числа полосовидных - в 2,6 раза по сравнению с контролем носило характер тенденции, то уменьшение количества точечных и среднего числа язв оказалось статистически достоверным, при этом противоязвенная активность экстракта составила 2 единицы (табл.23). Следует отметить, что при 100 % поражении язвенными дефектами всех экспериментальных групп, экстракт при использовании в дозе 100 мг/кг достоверно снижал количество животных с крупными язвами от 66,7% контроля до 30%, с полосовидны-ми язами - от 77,8% контроля до 50%, с точечными язвами - от 100% контроля до 80 % (табл.23).
Таким образом, результаты двух серий экспериментов на модели нейро-генного язвообразования выявили преимущество курсового профилактического применения экстракта корня цикория в дозах 10 и 100 мг/кг внутрижелудочно, обладающего наиболее выраженным гастрозащитным эффектом.
Экстракт корня цикория, вводимый профилактическим курсом в дозах 10, 50 и 100 мг/кг внутрижелудочно ежедневно в течение 9 сут, ограничивал образование всех видов язвенных деструкции, возникающих после воздействия ин-дометацина. Так, при использовании ЭКЦ в дозах 10 и 100 мг/кг у беспородных мышей-самок выявлено достоверное снижение как числа животных с крупными и полосовидными язвами, так и количества язв различного типа, при этом противоязвенная активность составила 1,6 и 1,9 единиц соответственно (табл.24, 25), Наиболее выраженным гастрозащитным эффектом обладал препарат при введении в дозе 50 мг/кг: отмечалось снижение количества крупных язв в 7 раз (р 0,01), точечных - в 2 раза (р 0,01), отсутствие полосовидных (табл,24). Противоязвенная активность в этой опытной группе составила 2,4 единицы и превышала таковую препарата сравнения - гастросидина (ПА=1,6), противоязвенное действие которого ограничивалось достоверным снижением количества точечных и общего числа изъязвлений.
Таким образом, на модели индометацинового повреждения слизистой оболочки желудка мышей установлено, что экстракт корня цикория обладает антиульцерогенным действием, наиболее выраженным в дозе 50 мг/кг.
На модели язвообразования, вызванного внутрижелудочным введением беспородным крысам-самкам кислоты ацетилсалициловой, экстракт корня цикория применяли профилактическим курсом в дозах 5, 25 и 50 мг/кг внутриже-лудочно ежедневно в течение 7 сут. В качестве препарата сравнения использовали гастросидин в терапевтической дозе 5 мг/кг в аналогичном режиме.
Введение ЭКЦ в дозах 25 и 50 мг/кг приводило к достоверному (р 0,01) уменьшению общего числа деструкции (в 3,3 и 4,9 раза соответственно). Обращает на себя внимание тот факт, что в группах крыс, получавших упомянутые дозы ЭКЦ, количество язв и процент животных с полосовидными и точечными язвами оказалось достоверно (р 0,01) меньше не только по отношению к кон трольному уровню, но и к этим значениям в группе крыс, получавших препарат сравнения (табл.26, 27). На слизистой желудка крыс, леченных ЭЬСЦ в максимальной дозе, полностью отсутствовали крупные язвы, что свидетельствовало о значительном уменьшении тяжести патологического процесса. Отмечался дозо-зависимый эффект растительного средства: с увеличением дозы ЭКЦ повышалась его противоязвенная активность, составляя в максимальной дозе 4,9 единиц (табл.26). Гастрозащитный эффект гастросидина (ПА=1,2) на модели ацетилсалицилового повреждения слизистой оболочки желудка крыс отсутствовал.
