Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Типы гиперчувствительности, псевдоаллергические реакции 12
1.2 Роль полиморфноядерных лейкоцитов в патогенезе воспалительных... реакций различной этиологии, фармакологическая регуляция воспаления 28
1.3 Медиаторы иммунитета в нейроиммунном взаимодействии, механизм действия цитокинов при регуляции гипоталамус-гипофиз-надпочеч-никовой системы 39
1.4 Медиаторы воспаления и свободнорадикальные процессы при ишемии
головного мозга и мозговой травме 49
1.5 Совершенствование программ исследований аллергизирующих и им мунотоксических свойств новых фармакологических веществ 61
Глава 2. Материалы и методы собственных исследований
2.1 Методы, используемые при изучении влияния высокомолекулярных примесей на аллергизирующие свойства беталактамных антибиоти ков 70
2.2 Оценка аллергизирующих свойств фармакологических веществ 74
2.3 Оценка иммунотоксических и некоторых иммунофармакологических свойств фармакологических веществ 80
2.4 Экспериментальное исследование иммунотропной и противоопухолевой активности препарата ОПМ-411 (под условным названием пента-ксидин) 94
2.5 Экспериментальное изучение хронической токсичности кардиотропно го препарата боннекор в опытах на собаках 95
Глава 3. Сравнительная оценка аллергизирующих свойств антибиотиков
3.1 Сравнительное изучение аллергизирующих свойств беталактамных антибиотиков (бензилпенициллина, карфециллина,карбенициллина, азлоцил-лина,цефалотина,ампициллина, суспензии ампициллина, цефалексина, суспензии цефалексина) 97
3.2 Характеристика аллергизирующих свойств рифампицина,сизомицина иамикацина 105
Глава 4. Псевдоаллергические реакции, анафилактический шок и противовоспалительная активность различных соединений
4.1 Псевдоаллергическая реакция на конканавалин А эстриглутона, аллер генные свойства препарата АВП, азакраунэфира С-3 и апилактозы 108
4.2 Сравнительная оценка противовоспалительной активности промышленных образцов пептидного препарата Рузам, противовоспалительная активность препарата "Кошачий коготь" 122
4.3 Изучение аллергизирующих свойств плазмозаменителей крови рондо феррина и рондекса-М 125
Глава 5. Характеристика аллергизирующих и иммунотокси-ческих свойств кардиотропных и психотропных средств
5.1 Характеристика аллергизирующих и иммунотоксических свойств мета-цизизина, кардиоциклида (для внутривенного и перорального применения) ибрадизола 131
5.2 Видовая специфичность токсического действия кардиотропного препарата боннекор 160
5.3 Изучение аллергизирующих и иммунотоксических свойств бефола, пептида дельта-сна, афобазола, тропоксина, ладастена 165
Глава 6. Иммунофармакологические свойства препарата НООПЕПТ
6.1 Изучение иммуномодулирующей активности препарата ноопепт 188
6.2 Оценка противовоспалительных свойств ноопепта 222
Глава 7. Изучение иммуномодулирующей активности среди 3-оксипиридинов и 5-оксипиримидинов
7.1 Скрининг иммуномодулирующей активности среди 3-оксипиридинов (СК-115, СК-116, СК-134, СК-117, СК-143 и СК-160) и 5-оксипиримиди-нов (ОПМ-411, ОПМ-31 -Н, ОПМ-41 -В, ОПМ-41 -Т, ОПМ-511, ОПМ-Б--71ІИОПМ-1111) 237
7.2 Изучение противоопухолевой активности пентаксидина 246
7.3 Изучение иммунотропных свойств препарата пентаксидин (ОПМ-411). 251
Заключение 259
Выводы 286
Список литературы
- Роль полиморфноядерных лейкоцитов в патогенезе воспалительных... реакций различной этиологии, фармакологическая регуляция воспаления
- Оценка иммунотоксических и некоторых иммунофармакологических свойств фармакологических веществ
- Характеристика аллергизирующих свойств рифампицина,сизомицина иамикацина
- Изучение аллергизирующих свойств плазмозаменителей крови рондо феррина и рондекса-М
Роль полиморфноядерных лейкоцитов в патогенезе воспалительных... реакций различной этиологии, фармакологическая регуляция воспаления
В экспериментальных исследованиях было показано, что белки с выраженными антигенными свойствами могут стимулировать синтез принципиально различных антител. Способность овальбумина к воспроизведению реакций анафилаксии разной степени тяжести (без определения механизма его действия) была нами также отмечена и использовалась при разработке различных экспериментальных моделей (123, 124).
У человека хелперные Т- клетки не могут быть подразделены на аналогичные два типа. Большинство клеток, продуцирующих IL-4, образуют одновременно либо IFN-y или IL-2, или оба этих медиатора . До сих пор не получено ответа на очень важный вопрос, почему под воздействием антигенов (лекарственных средств и других факторов) в одних случаях возникает преимущественно IgE-ответ (с преимущественным накоплением ТЬг- клеток), а в других - IgG -ответ (с включением в реакцию Th і-клеток). Избирательное возникновение Th2 ответа зависит от природы антигена, пути и режима его поступления в организм, а также от наследственных факторов у атопических больных (37 ).
Согласно современным представлениям (И.С. Гущин, 2000, K.S. Baby et al., 2002), биологическая активность IgE реализуется через высокоафинный (FCERI) и низкоафинный рецепторы IgE (Fcell или CD23). У пациентов с аллергическим ринитом тучные клетки экспрессируют повышенное количество рецепторов FcsRI, которые более активно связывают IgE, обеспечивая последующую дегрануляцию. Разработка моноклональных анти- Е-антител по дизайну человека (humanized antibodies) способствует дальнейшему прогрессу в изучении аллергических заболеваний и открывает новые возможности их лечения (168, 215, 261, 301). Первым таким препаратом явился омализумаб (omalizumab), прошедший клинические испытания у пациентов с аллергической астмой и сезонным аллергическим ринитом. Омализумаб - это IgG і антитела, разработанные по дизайну человека и способные связывать свободный IgE в области FceRI-сайта сЗ-домена молекулы IgE, предотвращая таким образом связывание с FcsRI-рецептором на эффекторных клетках. Так как сайт связывания с низкоафинным рецептором IgE находится вблизи от сайта связывания FceRI, препарат, возможно, предотвращает взаимодействие IgE с CD23, хотя неизвестно, вовлекаются ли в него все изоформы CD23 (137).
После применения талидомида беременными женщинами и появления фокомелии конечностей у родившихся детей, началось интенсивное изучение тератогенных и эмбриотоксических свойств лекарственных средств. Аллерги-зирующие свойства бензилпенициллина, вызывающего осложнения по всем 4 типам гиперчувствительности и приводящие в ряде случаев к смертельному исходу , также дали толчок для разработки методологии изучения аллергенности у новых фармакологических веществ.
Р-Лактамные антибиотики, к которым относятся производные 6-амино-пенициллановой кислоты (6-АПК) и 7-аминоцефалоспоранной кислоты, являются наиболее распространённой и высокоэффективной группой антибактериальных средств, причём их число непрерывно пополняется за счёт новых препаратов, преимущественно широкого спектра действия. Для химической структуры Р-лактамидов характерно характерно наличие Р-лактамного кольца, что обусловливает идентичность основного звена антимикробного эффекта и близость некоторых типов побочных реакций, р-лактамиды обычно оказывают сравнительно слабое органотропное действие, однако им присущи аллергизирующие свойства, которые и определяют основной вид осложнений при лечении этими препаратами. По данным ВОЗ до 1980 года частота аллергических реакций в ответ на приём или инъекцию бензилпенициллина колебалась в разных странах от 0,7 до 10%, причём частота анафилактических реакций - от 0,015 до 0,04%. Смертельный исход от анафилактического шока был отмечен в 0,0015 - 0,02% случаев инъекции пенициллина, аллергические осложнения на цефалоспорины - менее выражены. Частота распространения аллергии к пенициллинам у населения Западной Европы и Северной Америки колебалась от 1 до 10% (51, 338).
Вещества, обладающие антигенными свойствами и способные стимулировать в организме формирование специфических антител, имеют молекулярную массу выше 10000, молекулярная масса большинства лекарственных веществ значительно ниже этого. Согласно классической теории Landsteiner , химические соединения, которые образуют устойчивые ковалентные связи с белками, не являются полными антигенами и называются гаптенами. Бензилпенициллин и его полусинтетические производные не имеют свободных реактивных групп для образования устойчивых ковалентных связей с белками. Их аллергизующие свойства обусловлены различными продуктами деградации. Были установлены основные продукты деградации бензилпенициллина, обладающие антигенными свойствами: D-бензилпеницилленовая кислота, D-a- бензилпенициллоиновая кислота, D-бензилпенициламин. Бензилпеницилленовая кислота может реагировать с аминогруппой белка, образуя бензшшенициллоил-лизиновую группу, называемую обычно группой пенициллоила. При взаимодействии пеницилленовой кислоты с белком через дисульфидные связи образуется пеницилленат-протеиновый комплекс, также вызывающий образование специфических антител. Другие продукты деградации пенициллинов могут действовать как гаптены с различной частотой и специфичностью. По данным В.В Levine, которые были подтверждены A.L.de Week и G.T. Stewart (79, 338), группа пенциллоила в соединении с белком является «основной», наиболее часто образующейся антигенной детерминантой, ответственной за IgE -зависимую сенсибилизацию организма. Пеницилламин, пенициллоаты и другие продукты разложения пенициллина также могут вступать в соединение с белками, формируя «малые антигенные де-терминатны», которые образуются в незначительном количестве и ответственны за менее опасные осложнения. 6-АПК в соединении с циркулирующими или тканевыми белками, также обладает выраженными антигенными свойствами ( 338 ). Ядром пенициллинов является 6-АПК, а цефалоспоринов - 7-аминоце-фалоспорановая кислота. Обоим ядрам свойственно наличие Р-лактамного кольца. Очевидно, это кольцо не только обусловливает антибактериальную активность, но и играет основную роль в отношении антигенности (79). Как указывалось ранее, при раскрытии кольца гаптен может соединяться аминогруппой с белком носителем и действовать как полный антиген.
Оценка иммунотоксических и некоторых иммунофармакологических свойств фармакологических веществ
В связи с тем, что морские свинки при введении беталактамных антибиотиков погибали от дисбактериоза, в качестве основной модели при изучении аллерги-зирующих свойств антибиотиков использовали кроликов породы шиншилла массой 2-2,5 кг в модифицированной нами ранее модели А.А.Быковой (51). Бензил-пенициллин в смеси с адъювантом Фрейнда вводили по 100000 ЕД в 2 мл полного адъюванта Фрейнда на одну подкожную инъекцию. Другие беталактамные антибиотики вводили подкожно в дозе 50 мг/кг в смеси с 2 мл полного адъюванта Фрейнда. Животных иммунизировали в течение 2-х циклов иммунизации, каждый цикл составлял две инъекции с интервалом 2 дня, интервал между циклами -10 дней. Контрольных животных иммунизировали адъювантом Фрейнда. Для выявления антител к антибиотикам использовали реакцию гемагглютинации по методу Лея, и реакцию дегрануляции базофильных лейкоцитов (непрямой тест Shelley).
Реакция гемагглютинации по методу Лея Реакция основана на способности антител к бензилпенициллину, содержащихся в сыворотке крови иммунизированных антибиотиком в смеси с полным адъювантом Фрейнда кроликов, агглютинировать обработанные бензилпеницил-лином эритроциты кролика. К 4 мл стерильного раствора Альсевера добавляли 4 мл крови кролика-донора. Смесь вносили во флакон, содержащий 300000 ЕД натриевой соли бензилпенициллина, затем ее инкубирповали 1 час при t +37. нейшую инкубацию продолжали при 4С в течение 24 часов. В качестве контроля использовали эритроциты того же кролика-донора, но без добавления бензилпенициллина. Раствор Альсевера готовили в пропорции: 2,05 г глюкозы, 0,8 г цитрата натрия и 0,42 г NaCl растворяли в 100 мл дистиллированной воды, затем доводили рН до 6,8. Раствор стерилизовали в автоклаве под давлением 0,5 атм. в течение 5 минут. Полный адъювант Фрейнда готовили по следующей прописи: к 100 мг убитых микобактерий туберкулеза (БЦЖ) добавляли 30 мл вазелинового масла и 10 мл ланолина, который затем стерилизовали в водяной бане в течение 3-х часов. Перед постановкой реакции из флакона стерильной пипеткой брали 4 мл взвеси эритроцитов кролика, переносили их в пробирку с 6мл фосфатного буфера (рН=7,2) и центрифугировали 5 минут при 2000 об/мин. После взятия микропипеткой верхнего слоя жидкости, к частично отмытым эритроцитам добавляли 10 мл буфера и снова центрифугировали 10 минут при 2000 об/мин. После трехкратного отмывания эритроцитов из них готовили 2% суспензию в фосфатном буфере с рН=7,2. 2% суспензию необработанных бензилпенициллином эритроцитов кролика готовили таким же способом. Для определения титра антител испытуемую сыворотку крови предварительно инактивировали в течение 30 минут при 56С, затем готовили серии 2-х кратных разведений с фосфатным буфером (рН=7,2) от 1:2 до 1:1024. В каждой пробирке было по 0,25 мл разведенной сыворотки крови. В один ряд пробирок добавляли по О,05 мл 2% суспензии обработанных бензилпенициллином эритроцитов. В контрольный ряд пробирок добавляли суспензию эритроцитов, приготовленную без бензилпенициллина. Пробирки инкубировали в термостате при 37С в течение 3-х часов. Оценку реакции агглютинации проводили под малым увеличением микроскопа. Для выявления иммуноглобулинов IgG и IgM часть проб сыворотки крови обрабатывали 1М раствором 2-меркаптоэтанола (2-МЭ)по методу Heffiier и Shluederberg. Обработку производили через 30 минут после инактивации сыворотки крови при 56С, посредством добавления 1М раствора 2-меркаптоэтанола в объемной пропорции 1:10 , с последующей 30 минутной инкубацией при 37С. С обработанными 2-МЭ сыворотками крови также готовили двухкратные разведения в фосфатном буфере с рН=7,2 или стерильном физиологическом растворе и затем к ним добавляли суспензию эритроцитов. Титр антител (наибольшее разведение сыворотки, при котором наблюдается отчёт ливая агглютинация ЭБ) выражали величиной log2T, где Т - титр антител исследуемой сыворотки. Результаты выражали в виде средней арифметической и её средней ошибки, достоверность различий - по критерию Стьюдента. Реакция дегрануляции базофильных лейкоцитов (непрямой тест Schelley) В реакции дегрануляции базофильных лейкоцитов по методу Schelley использовали базофилы кроликов. У кролика-донора из ушной вены брали 1,5-2 мл крови в пробирку, обработанную гепарином. Затем пробирки центрифугировали в течение 3-х минут при 1500 об/мин. На границе плазмы и эритроцитарного сгустка был виден верхний лейкоцитарный слой. Лейкоцитарный слой осторожно отсасывали тонким капиллярным концом пипетки. Предметные стекла окрашивали 0,3% раствором нейтрального красного в абсолютном этиловом спирте и высушивали при комнатной температуре. В качестве антигена использовали раствор бензилпенициллина в концентрации 20000 ЕД/мл. При постановке реакции на предметных стеклах, окрашенных нейтральным красным, готовили 2 контрольных препарата и один - опытный. В первом контрольном препарате исследовали базофилы кролика-донора в присутствии исследуемой сыворотки крови (контроль на сыворотку), во второй — базофилы донора в присутствии раствора бензилпенициллина (контроль на антиген). На опытном стекле смешивали в равных количествах (0,005 мл) 3 капли, взятые пастеровскими пипетками: каплю лейкоцитарного слоя, каплю исследуемой сыворотки крови и каплю раствора бензилпенициллина. Препараты накрывали покровными стеклами, края которых смазывали вазелиновым маслом. После 10-минутной инкубации в термостате при 37С контрольные и опытные препараты исследовали под микроскопом с иммерсией. Подсчитывали и изучали не менее 20 базофилов, зернистость которых окрашена в оранжево-красный цвет. Степень реакции оценивали по количеству измененных базофилов. Реакцию считали положительной в том случае, когда в контрольных препаратах встречалось не более одного измененного базофила из 20, а в опытном не менее 5, что соответствует границе доверительной области для 5% уровня значимости критерия сумм биномиального распределения. Базофильные лейкоциты являются . клетками, у которых цитологическая картина отражает их функциональное состояние. При положительных реакциях изменения клеток могут быть следующими: отсутствие сферичности клеток, вакуолизация цитоплазмы, набухание и растворение гранул, уменьшение размера гранул и бледная их окраска, разрыв клеточных мембран, дегрануляция и выход гранул за пределы клеток.
Характеристика аллергизирующих свойств рифампицина,сизомицина иамикацина
При изучении аллергизирующих свойств рондоферрина в предварительных экспериментах на 32 морских свинках альбиносах (по 8 животных в каждой группе) было показано, что рондоферрин не вызывает кожнораздражающего действия в исходной 6% концентрации, поэтому эта концентрация была выявлена как разрешающая при внутрикожном введении. При внутривенном введении рондоферрина в дозах, эквивалентных терапевтическим (5,7 и 28,6 мл/кг) и избыточной дозе 50 мл/кг у интактных морских свинок не было выявлено каких-либо отклонений от нормы.
На 32 морских свинках было изучено кожнораздражающее действие от в/к введения 0,05 мл рондекса-М в различных концентрациях, а также определена разрешающая доза для в/к и в/в введения препарата. На выстриженных участках спины 8 животным вводили в/к рондекс-М в исходной концентрации (60 мг/мл), а также в концентрациях 100 мг/мл, 300 мг/мл и 600 мг/мл. Препарат в концентрации 600 мг/мл вызывал кожнораздражающее действие у 6 животных из 8, в концентрации 300 мг/мл - у 4 животных из 8, при в/к введении рондекса-М (шприцы SGE, производство Австралии) в концентрациях 100 и 60 мг/мл кожнораздражающего действия обнаружено не было. Таким образом, для в/к введения препарата были выбраны 6% и 10 % концентрации рондекса-М.
Поскольку разрешающая доза при в/в введении должна быть адекватна выбранным для иммунизации, 8 интактным животным вводили препарат в минимальной терапевтической дозе 5,7 мл/кг (0,34 г/кг), 8 морским свинкам - в максимальной терапевтической дозе 1,70 г/кг, 8 животным - в избыточной дозе 2,975 г/кг (в концентрации 300 мг/мл). У всех интактных морских свинок, которым в/в вводили препарат в различных дозах и концентрациях, отклонений от нормы обнаружено не было. Оценка анафилактогенной активности
Рондоферрин вводили 5 опытным группам (по 10 животных в каждой группе) морских свинок альбиносов по различным схемам. Препарат в дозах 5,7 мл/кг и 28,6 мл/кг вводили по следующей общепринятой схеме: первая инъекция подкожно, две последующие - внутримышечно в область бедра через день. Контрольным животным вводили соответствующий объем растворителя (стерильного физиологического раствора). В 3, 4 и 5 опытной группе рондоферрин вводили однократно, внутривенно в дозах 0,34 г/кг, 1,70 г/кг и 2,98 г/кг в 30% концентрации, что соответствует дозам 5,7 мл/кг, 28,6 мл/кг и 50 мл/кг.
Рондекс-М вводили 4 опытным группам (по 10 животных в каждой группе). Препарат в дозах 5,7 мл/кг и 28,6 мл/кг вводили по общепринятой схеме, в 3 и 4 группе рондекс-М вводили однократно, внутривенно в дозах 1,70 г/кг и 2,98 г/кг (в 30% концентрации). Контрольным животным вводили соответствующий объем растворителя. На 14 день после последней инъекции препаратов рондоферрина и рондекса-М животным внутривенно вводили разрешающие дозы препаратов. У всех 50 животных опытных групп, которым вводили рондоферрин и у всех 40 морских свинок, которым вводили рондекс-М аллергических реакций, оцениваемых по шкале Weigle, обнаружено не было. Реакция активной кожной анафилаксии 40 животных опытных групп ( по 10 свинок в каждой группе) иммунизировали рондоферрином и рондексом-М в дозах 5,7 мл/кг и 28,6 мл/кг по общепринятой схеме. 20 контрольным животным вводили соответствующий объем растворителя. На 14 день после последней инъекции препарата животным опытных и контрольных групп на выстриженных участках спины вводили по 0,05 мл рондоферрина в 6% концентрации или по 0,05 мл рондекса-М в 6% и 10% концентрации. На другом боку на выстриженном участке вводили 0,05 мл стерильного физиологического раствора. Через 30 минут морским свинкам в/в вводили 0,5 мл 1% раствора Синего Эванса. Через 30 минут после введения синего Эванса животных забивали эфиром и на внутренней стороне кожи измеряли диаметр синего пятна в месте внутрикожного введения препарата.
У 2-х животных из 10-ти, которых иммунизировали рондоферрином в дозе 5,7 мл/кг, и у 2-х свинок из 10-ти, иммунизированных препаратом в дозе 28,6 мл/кг, диаметр реакции в месте в/к введения рондоферрина был равен 7-8 мм. У остальных 26 животных опытных и контрольной группы реакция была отрицательной. У всех 20 морских свинок, иммунизированных рондексом-М в дозах 5,7 и 28,6 мл/кг (и у 10 животных контрольной группы) реакция на в/к введение 0,05 мл препарата в 6% и 10% концентрациях была отрицательной.
Таким образом, в результате изучения анафилактогенных свойств препарата рондекса-М данные по изучению общей и активной кожной анафилаксии указывают на отсутствие системных реакций анафилаксии и отсутствия кожносенсибилизирующих антител. Обнаруженные кожносенсибилизирующие антитела при иммунизации рондоферрином можно рассматривать как проявления индивидуальной чувствительности, поскольку число животных с положительной реакцией не превышало 50%.
Реакция гиперчувствительности замедленного типа 20 морских свинок опытных групп иммунизировали однократно, в подушечки задних лапок сухим рондоферрином в дозах 0,34 г/кг и 1,7 г/кг в смеси с полным адъювантом Фрейнда (ПАФ). 30 морских свинок иммунизировали однократно рондексом-М в смеси с ПАФ в дозах 0,34 г/кг, 1,70 г/кг и 2,98 г/кг. Контрольных животных иммунизировали ПАФ. На 21 день опыта на выстриженных участках спины животным вводили в/к разрешающие дозы препаратов и 0,05 мл стерильного физиологического раствора. Аллергических реакций через 30 минут, 1час, 24 и 48 часов обнаружено не было.
Влияние рондоферрина и Рондекса-М на реакцию воспаления на Кон А В опытах на 80 беспородных белых мышах самцах массой 18-20 г было изучено влияние рондоферрина и рондекса - М на реакцию воспаления на Кон А. Мышам 6-ти опытных групп вводили внутривенно 6% растворы рондоферрина или рондекса М в дозах 5,7 мл/кг, 28,6 мл/кг и 50 мл/кг, животным контрольных групп - физиологический раствор. Затем через 1 час в опытную лапу суб-плантарно вводили конканавалин А, в контрольную - физиологический раствор. Через 1 час мышей забивали декапитацией и определяли индекс реакции. Результаты опытов представлены в таблице № 15.
Изучение аллергизирующих свойств плазмозаменителей крови рондо феррина и рондекса-М
Изучение аллергизирующих свойств пептида дельта-сна проводили на 60 морских свинках альбиносах массой 200-250 г. При постановке реакции общей анафилаксии и активной кожной анафилаксии пептид дельта-сна вводили животным в двух дозах 0,1 мг/кг и 1 мг/кг по общепринятой схеме, разрешающие дозы вводили на 14 день. Реакций анафилаксии и положительных реакций в местах в/к введения препарата не выявили. При иммунизации морских свинок препаратом в смеси с ПАФ аллергических реакций немедленного или замедленного типа при в/к введении препарата в концентрации 1 мг/мл также обнаружено не было. Таким образом, в результате проведенных исследований ал-лергизирующ их свойств у препарата не обнаружили.
При изучении иммунотоксических свойств пептида дельта-сна влияние на гуморальное звено иммунитета изучали на двух линиях мышей СВА и С57В1/6, а на реакцию ГЗТ- на мышах СВА и (CBAxC57Bl/6)Fl . На 7 день после антигенной стимуляции 108ЭБ и в/в введения пептида дельта-сна ( в дозах 0,1 мг/кг и 1 мг/кг) у животных определяли титры антител в РПГА, при изучении влияния на ГЗТ мышей иммунизировали в/в ЭБ в дозе 2x105 ЭБ и на 5 сутки опре деляли индекс реакции. Результаты опытов представлены в таблицах №№ 35 и 36.
Пептид дельта-сна в терапевтически эффективной дозе оказывал незначительное стимулирующее действие на гуморальный иммунитет у мышей линии СВА (на 9,5%), достоверно увеличенное по сравнению с контролем у мышей линии С57В1/6 ( на 20,8%). Внутривенное введение препарата в дозе 0,1 мг/кг не вызывало достоверной стимуляции рекци ГЗТ. Изучение аллергизирующих и иммунотоксических свойств афобазола
Изучение аллергизирующих свойств оригинального, синтезированного и изученного в ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН ,селективного анксиолитика афобазола (СМ-346, 2-[2-(морфолино)этилтио]-5-этоксибенз-имидазола дигидрохлорида) проводили согласно методическим рекомендациям, утвержденным Фармакологическим комитетом в 1988 году "Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств". В предварительной серии экспериментов на 12 морских свинках альбиносах массой 250-300 г (по 6 животных в каждой группе) изучали кожнораздражающее действие от внутрикожного (в/к) введения 0,05 мл раствора препарата СМ-346 в концентрациях 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, а также определили разрешающую дозу для внутрисердечного введения препарата. На выстриженных участках спины 6 животным вводили в/к препарат и в качестве контроля - 0,05 мл стерильного физиологического раствора. У 2-х свинок из 6-ти обнаружили слабую реакцию на внутрикожное введение препарата в концентрации 10 мг/мл, поэтому в качестве разрешающей дозы для в/к введения выбрали введение препарата в концентрации 5 мг/мл. При внутрисердечном введении препарата морским свинкам в дозах 5 и 50 мг/кг токсических и анафилактоидных реакций не выявили, поэтому в качестве разрешающей дозы для внутрисердечного введения выбрали дозу 50 мг/кг.
В первой серии экспериментов афобазол вводили двум опытным группам животных (в дозах 5 и 50 мг/кг) по общепринятой схеме. Контрольным жи 169 вотным вводили соответствующий объем физиологического раствора. На 14 день после последней инъекции морским свинкам внутрисердечно вводили разрешающую дозу препарата. У всех животных опытных и контрольной групп реакций анафилаксии не выявили. Активная кожная анафилаксия
В следующей серии экспериментов изучали сенсибилизирующие свойства препарата афобазола по реакции активной кожной анафилаксии. Животных 3 и 4 опытных групп иммунизировали препаратом в дозах 5 мг/кг и 50 мг/кг (схема иммунизации та же, что и у животных 1 и 2 опытных групп). На выстриженных участках спины животным в/к вводили афобазол в концентрации 5 мг/мл, и в качестве контроля - 0,05 мл стерильного физиологического раствора. Через 30 минут морским свинкам опытных и контрольной групп внутрисердечно вводили по 0,5 мл 1 % раствора синего Эванса. Через 30 минут после введения синего Эванса животных забивали эфиром и на внутренней стороне кожи измеряли диаметр синего пятна в месте введения препарата. У животных опытных и контрольной групп положительных реакций не выявили (диаметр синего пятна в месте в/к введения препарата не превышал Змм). Таким образом, при иммунизации морских свинок афобазолом в дозах 5 и 50 мг/кг реакций анафилаксии и кожносенсибилизирующих антител не выявили.
Реакция гиперчувствительности замедленного типа ( ГЗТ) 20 морских свинок 5 и 6 опытных групп (по 10 морских свинок альбиносов в каждой группе) иммунизировали однократно в подушечки задних конечностей препаратом в дозах 5 и 50 мг/кг в смеси с полным адъювантом Фрейнда. На 21 день на выстриженных участках спины животным вводили в/к разрешающую дозу препарата (0,05 мл раствора афобазола в концентрации 5 мг/мл, в качестве контроля - 0,05 мл физиологического раствора). У всех морских свинок, которых иммунизировали препаратом в дозах 5 мг/кг и 50 мг/кг, положительных реакций в месте в/к введения афобазола через 1, 24 и 48 часов не выявили.
Опыты были проведены на беспородных мышах самцах массой 18-20 г. Афобазол вводили мышам 4-х опытных групп per os и внутривенно в дозах 5 и 50 мг/кг . Животным 2-х контрольных групп аналогичным способом вводили соответствующий объем растворителя. Через 1 час всем мышам подопытных и контрольных групп субплантарно (в подушечку задней стопы) вводили Кон А (20мкл раствора в концентрации 5 мг/мл), в контрлатеральную конечность -тот же объем физиологического раствора. Через 1 час мышей забивали, определяли массу лап и подсчитывали индекс реакции воспаления.
Результаты опыта представлены на рисунке 10. При пероральном введении афобазола статистически достоверного подавления реакции воспаления не обнаружили. При внутривенном введении препарата наблюдали выраженное достоверное подавление реакции воспаления на Кон А.
