Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Физиологическая роль свободнорадикальных процессов в организме 11
1.2. Значение свободнорадикального окисления в патогенезе сахарного диабета 15
1.3. Место антиоксидантних препаратов в патогенетической терапии метаболических нарушений на фоне сахарного диабета 2 типа 31
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Характеристика использованных препаратов 38
2.2. Характеристика экспериментальных методов исследования 39
2.3. Характеристика лабораторных методов исследования 42
2.4. Статистическая обработка результатов 45
Глава 3. Исследование некоторых показателей обмена веществ и структуры печени при нарушениях углеводного и липидного обмена в эксперименте
3.1. Изменение некоторых биохимических показателей крови, продуктов перекисного окисления липидов и структуры печени на фоне моделирования аллоксановой гипергликемии 46
3.2. Некоторые биохимические показатели плазмы крови и продуктов перекисного окисления липидов и структуры печени на фоне моделируемой холестериновой дислипидемии 54
3.3. Изменение некоторых биохимических показателей крови, продуктов перекисного окисления липидов и структуры печени на фоне моделирования аллоксан - холестериновой дислипидемии 60
Глава 4. Исследование влияния мексидола, актовегина инфезола и комбинации препаратов на некоторые биохимические показатели крови и структуру печени крыс при моделировании аллоксановой гипергликемии
4.1. Влияние актовегина, мексидола, инфезола и их комбинаций на показатели липидного обмена и эндотоксикоза при аллоксановой гипергликемии в эксперименте 67
4.2. Влияние исследуемых препаратов на некоторые показатели перекисного окисления липидов и структуру печени при моделировании аллокса новой гипергликемии 80
Глава 5. Исследование влияния мексидола, актовегина и комбинации препаратов на некоторые биохимические показатели крови и структуру печени крбіс при моделировании экспериментальной холестериновой дислипидемии
5.1. Влияние медикаментозной коррекции на некоторые показатели метаболических нарушений, возникших у экспериментальных животных с индуцированной холестериновой дислипидемией 85
5.2. Влияние исследуемых препаратов на показатели перекисного окисления липидов и морфологическую картину печени при моделировании холестериновой дислипидемии 94
Глава 6. Исследование влияния мексидола, актовегина, инфезола и комбинации препаратов на некоторые биохимические показатели крови и структуру печени крыс при моделировании аллоксан- холестериновой дислипидемии
6.1. Влияние медикаментозной коррекции на некоторые показатели метаболических нарушений возникших на фоне аллоксан - холестериновой дислипидемии в эксперименте 99
6.2. Влияние исследуемых препаратов на некоторые показатели перекисного окисления липидов и структуру печени на фоне экспериментальной аллоксан — холестериновой дислипидемии 111
Заключение. 118
Выводы 129
Практические рекомендации 130
Библиографический список 131
- Значение свободнорадикального окисления в патогенезе сахарного диабета
- Характеристика экспериментальных методов исследования
- Некоторые биохимические показатели плазмы крови и продуктов перекисного окисления липидов и структуры печени на фоне моделируемой холестериновой дислипидемии
- Влияние исследуемых препаратов на некоторые показатели перекисного окисления липидов и структуру печени при моделировании аллокса новой гипергликемии
Введение к работе
Несмотря на достигнутые успехи клинической медицины, метаболический синдром, включающий дислипидемию, сахарный диабет, ожирение и артериальную гипертонию, представляет собой одну из актуальнейших проблем общественного здравоохранения (Чазова И.Е., Мычка В.Б., 2004; Кобаллава Ж.Д., Толкачева В.В., 2005; Клебанова Е.М., Балаболкин М.И., 2006; Haffner S.M., 2000) и значительно повышает риск, развития фатальных сердечнососудистых осложнений (Смирнова Е.Н, 2000; Титов В.Н., 2001; Палферова Е.А., 2005; Laasko М., Lehto S., 1997).
Большой интерес клиницистов в последнее время привлекает проблема патогенеза и лечения неалкогольпого стеатогепатоза печени (Мансуров Х.Х. с соавт., 2005, Подымова С.Д., 2006; Буеверов А., 2006; Crespo J. et al., 2001; An-gulo P., 2002), который диагностируется при метаболическом синдроме (Кор-неева О.Н с соавт., 2005; Кобалова Ж.Д, Толкачева В.В., 2005; Буеверов А., 2006). При этом поражение печени является и следствием и одной из существенных причин дальнейшего усугубления нарушения обмена веществ (Подымова С.Д., 1993; Арутюнов А.Г. с соавт., 2005; Ройтберг Г.Е. с соавт., 2005).
Учитывая существенный вклад в патогенез метаболического синдрома оксидативного стресса (Балаболкин М.И. с соавт., 2004; Аметов А.С. с соавт., 2005; Суслова Т.Е. с соавт., 2005; Руяткина Л.А. с соавт., 2005; Memisogullari R. et al., 2003; Schrauwen P. et al., 2006), выступающего одним из наиболее значимых факторов поражения печени (Ройтберг Г.Е. с соавт., 2005; Poli G. 2000; G. Robertson et al., 2001), представляется целесообразным применение лекарственных препаратов антиоксидантного действия уже на ранних этапах формирования метаболического синдрома.
Одним из перспективных лекарственных средств является производное 3-гидроксипиридина сукцинат, проявляющий липидснижающее и антиокси-дантное действие при сахарным диабете (Клебанова Е.М. с соавт., 2006). В то
7 же время недостаточно изученным остается влияние на метаболические процессы в условиях их нарушения препаратов, действующих преимущественно на белковый обмен.
Работа является разделом комплексной программы исследований Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарёва «Фармакологическая коррекция повреждений, возникающих при гипоксических, токсических и радиационных воздействиях». Номер государственной регистрации темы 01200004103.
Целью работы явилось исследование влияния мексидола, актовеги-на, инфезола и их комбинированного применения на некоторые биохимические показатели и структуру печени при моделировании нарушений липидно-го и углеводного обмена в эксперименте.
В ходе исследования решались следующие задачи:
Изучить влияние актовегина, инфезола и мексидола на некоторые показатели обмена веществ и структуру печени при моделировании дислипидемии и гипергликемии в эксперименте.
Исследовать гепатопротекторное действие комбинированного применения мексидола и актовегина в условиях моделирования дислипидемии и гипергликемии.
2. Изучить влияние комбинированного применения мексидола и инфезола на некоторые биохимические показатели и структуру печени в условиях моделирования сочетанных метаболических нарушений.
Научная новизна:
Впервые показано, что в условиях моделирования нарушений углеводного и липидного обмена актовегин оказывает гиполипидемическое, дезинтокси-кационное, антиоксидантное и гепатопротекторное действие.
8 Отмечено, что комбинированное применение актовегина и мексидола повышает гепатопротекторныи эффект мексидола, потенцирует его липидкор-ригирующее и дезинтоксикационное действие в условиях моделирования нарушений липидного и углеводного обмена, а также потенцирует гипогликеми-ческий эффект мексидола при аллоксановом диабете.
Показано, что инфезол в условиях аллоксанового диабета и аллоксан-холестериновои дислипидемии оказывает гипогликемический, гиполипидеми-ческий, дезинтоксикационный эффект, снижает выраженность цитолитическо-го синдрома.
Впервые продемонстрировано, что комбинация инфезола и мексидола при аллоксановой гипергликемии уменьшает гепатопротекторное действие мексидола и в большей степени, чем монотерапия оксипиридина сукцинатом, угнетает холестеринсинтетическую функцию печени, снижает содержание триглицеридов и р-липопротеидов, ограничивает цитолитический синдром, но снижает антиоксидантный и дезинтоксикационный эффект мексидола.
Отмечено, что комбинированное применение мексидола и инфезола в условиях аллоксан-холестериновои дислипидемии снижает гепатопротекторныи и антиоксидантный эффект мексидола, моделирует его липидрегулирующее и повышает дезинтоксикационное действие, в отличие от монотерапии мексидо-лом стимулирует альбуминсннтетпческую функцию печени и предупреждает развитие гиперкалиемии.
Практическая ценность работы:
Полученные результаты открывают перспективу использования актовегина и инфезола в комплексной коррекции метаболического синдрома, обосновывают целесообразность комбинированного использования актовегина и мексидола при нарушениях липидного и углеводного обмена в клинике и являются экспериментальным обоснованием целесообразности дальнейшего
9 изучения эффектов инфезола при метаболических нарушениях в эксперименте.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Актовегин оказывает гиполипидемическое, цитопротекторное, дезин-
токсикационное, антиоксидантное и гепатопротекторное действие при модели
ровании нарушений липидного и углеводного обмена в эксперименте.
Инфезол оказывает пшогликемическое, гиполипидемическое, цито-проекторное,, дезинтоксикационное действие при моделировании метаболических нарушений в эксперименте.
Комбинированное применение актовегина и мексидола повышает гепатопротекторный и липидкорригируїощий эффект мексидола при моделировании нарушений липидного и углеводного обмена в эксперименте, а также потенцирует гипогликемический эффект мексидола при аллоксановом диабете и дезинтоксикационный при аллоксановой гипергилкемии и аллоксан-холестершювой гипергликемии.
Комбинированное применение инфезола и мексидола при моделировании нарушений углеводного обмена и сочетанных метаболических нарушений уменьшает гепатопротекторный эффект мексидола, угнетает холесте-ринсинтетическую функцию печени при аллоксановом диабете и повышает содержание холестерина липопротепдов высокой плотности при сочетанных метаболических нарушениях.
Апробация работы. Материалы работы были представлены на XII межрегиональной научно-практической конференции ГОУДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» - «Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных» (Пенза, 2006); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); XII научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов медицинского факультета ГО-УВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П.Огарева» -«Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и
10 эксперименте» (Саранск, 2007); научно-практической конференции Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им.И.И.Мечникова «Современная кардиология: наука и практика» (Санкт-Петербург, 2007).
Публикации. Основные положения диссертационного исследования представлены в 7 печатных работах, в том числе 1 в журнале, рекомендуемом ВАК.
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 159 страницах компьютерного набора, состоит из введения, главы материалы и методы, четырех глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 165 отечественных и 118 иностранйых источника, иллюстрирована 23 таблицами, 49 рисунками.
Значение свободнорадикального окисления в патогенезе сахарного диабета
Согласно современным представлениям неферментативному аутоокисли-телыюму гликозилированию и окислительному стрессу принадлежит основная роль в развитии сосудистых осложнений сахарного диабета.
Во многих экспериментальных и клинических работах показано, что развитие сахарного диабета сопровождается активацией процессов свободно-радикального окисления, на фоне истощения запасов эндогенных антиоксидан-тов, что приводит к выраженному оксидативному повреждению клеток (Новиков В.И., с соавт., 1999; Подопригова В.Г., 2001;Суслина З.А., с соавт, 2005; Vijayalingam S., 1996), а выраженность сосудистых повреждений и осложнений у больных напрямую коррелирет с увеличением продуктов аутоокисления (Никифоров О.Н., с соавт., 1997). М.И. Балаболкин, СВ. Моисеев и Е.М. Клебанова также подтверждают, что нарушение метаболизма глюкозы, гипергликемия, повышение аутоокисления глюкозы (неферментативное глики-рование) и ее участие в процессах гликирования белков сопровождается повышенным образованием свободных радикалов (Балаболкин М.И., Моисеев СВ., 2004; Балаболкин М.И., с соавт., 2000; 2005; Балаболкин М.И., 2005; Балаболкин М.И., Клебанова Е.М, 2006).
Окислительный стресс вызывает дисфункцию эндотелия, которая играет ключевую роль в развитии микро- и макроангиопатий (Занозина О.В., с соавт., 2006).
Кроме того, в условиях сахарного диабета недостаточность инсулина и гипергликемия повышают уровень окислительного стресса при относительном или абсолютном снижении активности антиоксидантной защиты (Ефимов А.С,1989; Фадеева Н. И., с соавт., 2001; Клебанова Е.М., с соавт., 2006; Wolff S.P., et al., 1991; Wolff S.P. 1993). При этом свободные радикалы могут способ ствовать, в свою очередь, дальнейшеему развитию гипергликемии за счет дисфункции митохондрий (Schrauwen P., Hesselin М., 2004), потому что усиление образования активных форм кислорода провоцирует усиление нарушений в структуре митохондриалыюго белка фратаксина в р-клетках поджелудочной железы, что приводит к разобщению окислительного фосфорилирования, ла-билизации лизосом, в результате чего нарушается синтез проинсулина, происходит гибель р — клеток и прогрессировать течения сахарного диабета (Сус-лина З.А., с соавт., 2005; Бондарь И.А., Климонтов В.В., 2001; Зилов А.В., 2006; Строков И.А., с соавт.,2000; Cameron N:E., 1997).
А также свободные радикалы увеличивают количество мутаций в мито-хондриалыюй ДНК, имеющей офаниченные возможности к репарации, что ведет к еще большему усилению их образования (Занозина О.В., с соавт., 2006).
Кроме того, важный вклад в развитие сосудистых расстройств и активацию свободно - радикального окисления липидов при сахарном диабете 2 типа вносят нарушения липидного спектра (Смирнова Е.Н., 2001; Ланкин В.З., с соавт, 2000; Балаболкин М.И., с соавт., 2004). Возникновение окислительного стресса (ОС)— важный фактор развития воспалительных процессов при сердечно - сосудистых заболеваниях (Киреев Р.А., с соавт., 2001). Ведущим компонентом ОС считают «респираторный взрыв» в полиморфно - ядерных лейкоцитах и перекисное окисление липипопротеинов (Руяткина Л.А., с соавт., 2004; Ланкин В.З., с соавт., 2000; Polidori М.С., et al., 2002). Они приводят к дисфункции эндотелия (Ланкин В.З., с соавт., 2000; 2004), которая запускает «каскад» реакций, участвующих в формировании атеросклеротической бляшки (Lee R.T., Libby P., 1998).
Патогенез сахарного диабета типа 2, по современным представлениям обусловлен двумя ключевыми нарушениями: "развитием инсулинорезистентно-сти периферических тканей и неадекватной секрецией инсулина, необходимой для преодоления барьера инсулинорезистентности (Недосугова Л.В., 2006; Бо 17 карев И.Н., с соавт., 2006). Оба эти дефекта взаимоусиливают друг друга: вследствие компенсаторной пшеринсулинемии усугубляется инсулинорези-стентность, а из-за снижения чувствительности к инсулину возрастает потребность в секреции инсулина (Недосугова Л.В., 2006; DcFronzo R.A., 1997).
Глюкоза - важный поставщик энергии, однако в больших концентрациях оказывает токсическое действие и в значительной степени причастна к возникновению поздних осложнений при диабете (токсичность глюкозы). При этом задействованы многие механизмы, в частности, вызванное глюкозой увеличение активности комплекса альдолазо-редуктазы и синтеза протеина, а также неферментативное аутоокислителыюе гликирование протеинов, липидов и ДНК. Это приводит к накоплению необратимых «конечных» продуктов глики-рования (БЕДИП, 2006). Токсическое действие может привести к уменьшению эндотелинзависимого расслабления сосудов, увеличению вазоконстрикции, стимуляции гиперплазии гладкомышечных клеток, ремодулированию сосудов и развитию атеросклероза (Мравян СР., Калинин А.П., 1999; Аметов А.С., с соавт., 2004; Кратнов А.Е., с соавт., 2005; Клебанова Е.М., с соавт., 2006; „ LorenziM., 1992).
Многочисленные исследования показали, что сосудистая патология при сахарном диабете напрямую коррелирует с уровнем гипергликемии и степенью компенсации углеводного обмена (Недосугова Л.В., с соавт., 2006; DCCT, 1996; Zeman R.J., et al., 1998; Campbell I.W., 2000).
Гипергликемия является одной из основной причины начала биохимических нарушений, лежащих в основе изменений сосудистой стенки (Чернов Ю.Н., с соавт., 1999; Балаболкин М.И., с соавт., 2004; Суслова Т.Е., с соавт., 2005; Балаболкин М,И., Клебанова Е.М., 2006; Epstein М., 1999). На фоне недостатка ферментов антиоксидантной защиты по современным представлениям гипергликемия приводит к увеличению в плазме, мембранах и клетках уровня свободных радикалов (Аметов А.С, с соавт., 2005; Sies II., 1997; Brownlee М., 2001; Baynes J.W., 2000). Слабость антиоксидантной системы, судя по исследо 18 ваншо полиморфизма генов антиоксидантных ферментов, имеет генетическую основу.
Гликозилирование - реакция между глюкозой и лизиновыми аминокислотными остатками циркулирующих или структурных белков, не требующая присутствия специфических ферментов - приводит к увеличению гликозили-рованных белков в организме (Аметов А.С., с соавт., 2004; Кратнов А.Е., с со-авт., 2005; Brownlee М., 1988).
Кроме того, увеличение количества конечных продуктов гликозилиро-вания, является следствием активирования полиолового и гексозаминового пути метаболизма глюкозы и повышения аутоокисления глюкозы, повышения уровня свободных радикалов с последующим повышением перекисного окисления липидов, при истощении или недостаточности системы антиоксидантной защиты (Креминская В.М., Гурьева И.В., 2004; Моргоева Ф.Э, с соавт., 2005). Исследования DCCT и UKPDS также подтвердили, что основными механизмами, лежащими в основе осложнений сахарного диабета, являются активация полиолового и гексозаминового путей метаболизма глюкозы, образование ко- . печных продуктов избыточного гликирования белков, повышенного содержания различных изоформ протеинкиназы С (Моргоева Ф.Э, с соавт., 2005), гиперпродукции супероксида в митохондриях (Lee Т., et al., 1989; Du X.L. et al., 2000).
Характеристика экспериментальных методов исследования
Животным опытных групп вводить препараты коррекции начинали с 11-х суток эксперимента на фоне развившихся нарушений углеводного и (или) липидного обмена. Животным, с 3-й по 7-ю серии, на фоне моделирования аллоксановой гипергликемии с 11-х по 20-е сутки эксперимента вводили препараты коррекции: в 3-й (п=13) опытной серии ежедневно 1 раз в сутки внутримышечно вводился раствор мексидола в дозе 25 мг/кг на одно животное; крысам 4-й (п=10) опытной серии ежедневно 1 раз в сутки внутримышечно вводился раствор актовегина в дозе 40 мг/кг; животным 5-ой (п=12) опытной серии ежедневно вводился мексидол в дозе 25 мг/кг и раствор актовегина в дозе 40 мг/кг на одно животное 1 раз в сутки внутримышечно; в 6-й (п=12) опытной серии ежедневно 1 раз в сутки внутрибрюшинно вводился инфезол в дозе 2 мл на одно животное; в 7-й (п=12) опытной серии крысам ежедневно 1 раз в сутки внутрибрюшинно вводился инфезол в дозе 2 мл и мексидол в дозе 25 мг/кг на одну особь (табл.1).
Вторая экспериментальная группа представлена холестериновой моделью. Контрольную группу составляли крысы опытной серии 8 (п=12), которые получали внутрижелудочно зондовым способом масляный раствор холестерина в дозе 40 мг/кг ежедневно в течение 20 суток без фармакологической коррекции. В опытных группах на фоне введения холестерина животные ежедневно получали препараты коррекции с 11-х по 20-е сутки эксперимента. В 9-й (п=12) опытной серии животным вводили мексидол в дозе 25 мг/кг внутримышечно 1 раз в сутки; в 10-ой (п=10) опытной серии вводили актовегин в дозе 40 мг/кг внутримышечно І раз в сутки; крысам экспериментальной опытной серии 11 (п=10) вводили комбинацию препаратов: мексидол в дозе 25 мг/кг и актовегин в дозе 40 мг/кг внутримышечно 1 раз в сутки (табл.1).
Экспериментальным животным, на которых моделировалась аллоксан-холестериновая дислипидемия, однократно вводили в брюшную полость раствор аллоксана в дозе 135 мг/кт и ежедневно с 1-х по 20-е сутки эксперимента внутрижелудочно зондовым способом масляный раствор холестерина в дозе 40 мг/кг/сут. В контрольной группе (№12) (п= 10) животные не получали какой-либо дополнительной фармакологической коррекции. Животным 13-ой опытной серии (п=10) ежедневно с 11 по 20-е сутки вводился мексидол в дозе 25 мг/кг внутримышечно 1 раз в сутки; в 14-й группе (п=8) с 11 по 20-е сутки эксперимента вводился актовегин в дозе 40 мг/кг ежедневно. Животным, составившим 15-ю опытную группу (п=8) ежедневно внутримышечно вводились мексидол (25 мг/кг) и актовегин (40 мг/кг). В опытной группе № 16 (п=8) ежедневно с 11 по 20-е сутки эксперимента вводили инфезол внутрибрюшинно в объеме 2 мл на 1 животное, а в 17-ой опытной серии (п=10) — ежедневно 1 раз в сутки вводили инфезол в объеме 2 мл в брюшную полость и раствор мексидола в дозе 25 мг/кг внутримышечно (табл. 1).
Забой животных осуществляли на 21 сутки путем декапитации после внутрибрюшинного введения тиопентала натрия в дозе 40 мг/кг. По окончании эксперимента на 21 сутки оценивали в плазме крови содержание глюкозы - глюкозооксидазным методом; уровень общего холестерина (ОХ) и триглицеридов (ТГ) - энзиматическим колориметрическим методом с использованием наборов CHOLESTEROL «E-D», TRIGLYCERIDES «E-D»; содержание холестерина лнпопротеидов высокой плотности (ХсЛПВП) - с использованием набора реагентов (осадитель фосфовольфрамат/Mg 2+ (HDL-CHOLESTEROL «FL-E»). Индекс атерогенности [ИА=(ОХС - ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП (усл. ед.)] рассчитывали по формуле А.Н. Климова (1977), рассчитывали содержание холестерина лнпопротеидов очень низкой плотности (ХсЛПОНП=ТГ/2,2), холестерина липопротеидов низкой плотности (ХсЛПНП=ОХ-ХсЛПВП-ХсЛПОНП). Активность аспарагиновой (ACT) и аланиновой (АЛТ) аминотрансфераз в плазме крови оценивали по методу Райтмана - Френкеля; содержание электролитов в сыворотке крови — калия (К) и натрия (Na) по стандартной методике, прилагаемой к наборам на автоматическом анализаторе K/Na «Ионометр ЭЦ-59»,
Для оценки альбуминсинтетической функции печени и степени эндотоксикоза определяли общую концентрацию альбуминов (ОКА), эффективную концентрацию альбуминов (ЭКА) с использованием набора реактивов «ЗОНД-Альбумин» на анализаторе АКЛ-01 «Зонд». Рассчитывали резерв связывания альбумина [РСА=ЭКА/ОКА)] и индекс токсичности плазмы [ИТ=ОКА/ЭКА - 1] (Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994). Кроме того, об уровне эндотоксикоза судили по концентрации мочевины в плазме крови, оценивая ее уреазным/фенол-гипохлоритным методом, и концентрации креатинина - методом, основанным на реакции Яффе с депротеинизацией.
В гомогенатах печени определяли активность каталазы (Королюк М.А., 1988), уровень малонового диальдегида при спонтанном (МДА) и железоиндуцированном окислении (їїеМДА) (Конюхова С.Г., 1989). Резерв липидов для перекисного окисления липидов рассчитывали по формуле [РЛПО=(РеМДА-МДА)/МДА] (Кузьменко Д.И., Лаптев Б.И., 1999). Методика определения активности каталазы в гомогенатах тканей (по Королюк М.А.; 1988 г.) Принцип метода основан на реакции перекиси водорода с молнбденовокислым аммонием в неокрашенных или слабоокрашенных растворах. К 0,1 мл гомогената тканей печени добавляют 2 мл 0,03 % раствора перекиси водорода и инкубируют 10 минут при комнатной температуре. Затем добавляют 1 мл 4 % молибдата аммония и встряхивают. Центрифугируют опытную пробу при ЮООобУмин. в течении 40 минут. Контроль содержит 0,1 мл дистилированшюй воды и 1 мл молибдата аммония. Измеряют опытные и контрольные пробы на фотоэлектрокалори-метре с толщиной слоя кюветы 0,5 см при длине волны 400 нм против дистиллированной воды. А = (Ест - Еоп) - 1,33 - 10 мкКат/с-л, где А - активность каталазы в микрокаталах на литр; Ест - экстинция стандарта; Еоп- экстинция опыта.
Методика определения МДА в гомогенатах тканей (по С.Г. Конюховой; 1989 г.). Метод определения малонового альдегида основан на его реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой в кислой среде. К 0,8 мл дистиллированной воды добавляют 0,2 мл гомогената тканей печени и 1 мл 6% тиобарбнтуровой кислоты (ТБК), и помещают на 30 минут на водяную баню при температуре 100С. Затем охлаждают и добавляют 1 мл 5Н NaOH и 2 мл изопропи-ловогоспирта, закрывают пробкой и встряхивают. Центрифугируют опытную пробу при 1000 об/мин 40 минут. Измеряют опытные и контрольные пробы на фотоэлектрокалориметре с толщиной слоя кюветы 1,0 см при длине волны 540 и 590 нм против дистиллированной воды.
Некоторые биохимические показатели плазмы крови и продуктов перекисного окисления липидов и структуры печени на фоне моделируемой холестериновой дислипидемии
Группе животных второй экспериментальной модели в течение 20 дней ежедневно однократно в сутки вводили внутрь перорально масляный раствор холестерина в суточной дозе 40 мг/кг. Холестериновая нагрузка приводила к негативным биохимическим изменениям в плазме крови у подопытных животных по сравнению с интактными животными: увеличилось содержание ОХС до 179% (р 0,001), уровня ТГ - до 139% (р 0,05), уровень ХсЛПОНП -до 141% (р 0,05), в 2 раза повышалось количество р-ЛП (р 0,001) и в 2,5 раза В контрольной группе менее выражено нарушалась альбуминсинтети-ческая функция печени, чем в условиях первых моделей: PC А снизился до 90%) (р 0,001), а индекс токсичности увеличился в 2 раза (р 0,001)(рис.9). Отмечался достоверный рост уровня креатинина на 39 % (р 0,005) и снижение натрия на 8% (р 0,05) относительно интактной группы, тогда как содержание калия и мочевины не изменялись .
В гомогенатах печени к концу эксперимента концентрация МДА возрастала на 261 %(р 0,001), Fe-МДА - на 48% (р 0,005), угнетались как АОА на 41% (р 0,005), так и РПОЛ на 81 % (р 0,001), с компенсаторным повышением активности каталазы относительно интактных значений на 114%, (р 0,005)(таб.5,рис.П.).
Примечание: рО - достоверность различия по сравнению с группой интактных крыс; pi- достоверность различия по сравнению с показателями при моделировании аллоксановой гипергликемии; рН — достоверность различия по сравнению с данными холестериновой днслипидемии.
Итак, 20-ти дневная холестериновая нагрузка у животных привела к изменениям углеводного и липидного обмена веществ, которые выражались в значительном повышении уровня Р-ЛП, ТГ и ИА, развитии гиперхолесте-ринемии с одновременным незначительным снижением содержания ХС ЛПВП, наблюдался синдром цитолиза гепатоцитов и умеренная гиперкалие-мия, повышалась концентрация креатинина, достоверно изменялись некоторые показатели эндотоксикоза, увеличивалась активность ПОЛ.
После 20-ти дневного прерорального введения холестерина у животных наблюдались выраженные дистрофические изменения в клетках печени. Дольковая структура печени была сохранена, балочное строение смазано. Центральные вены и синусоиды расширены, неравномерно полнокровны. Гепатоциты набухшие с нечеткими контурами. В центре отдельных долек встречались единичные очаги некроза печеночных клеток и мелкие очаги некротизированных гепатоцитов.
Цитоплазма клеток была грубозернистой, местами глыбчатая, в отдельных гепатоцитах вакуолизированная, оптически пустая. Ядра гепатоцитов в центре долек были бледными, отдельные с явлениями кариолизиса. В периферических отделах долек усиливался ядерный полиморфизм, выявлялись гиперхромные местами двуядерные гепатоциты. Отмечалась гиперплазия синусоидальных Купферовских клеток. Портальные тракты прослеживались четко с единичными лимфогистиоцитарными клетками. Проекция печеночных триад не была изменена .
Введение внутрибрюшинно раствора аллоксана однократно в дозе 135 мг/кг с последующей пероральной нагрузкой в течение 20 суток масляным раствором холестерина в суточной дозе 40 мг/кг приводило к изменению показателей липидного метаболизма сыворотки крови. Значительно возрос уровень ТГ с 0,49±0,06 до 1,15±0,12 (ммоль/л), составляя 235% (р 0,001). Более, чем в 2 раза, повысился уровень ХсЛПОНП (р 0,001) по отношению к показателям интактных крыс. Отмечалось достоверное увеличение содержания ОХС на 151% (р 0,001), Р-ЛП на 82% (р 0,005) и ХсЛПНП на 57% (р 0,05) по сравнению с показателями интактной группой животных. При сравнении с предыдущими моделями регистрировалось более низкое содержание ХС ЛПВП (на 26%) и достоверное повышение индекса атерогенности на 151% (р 0,001) относительно интактных значений (рис.13).
На фоне изменений некоторых показателей липидного спектра крови к концу 20-х суток наблюдалась более выраженная гипергликемия - уровень глюкозы крови повысился до 221% (р 0,001) относительно уровня интактных животных. Активность ферментов цитолитического синдрома достоверно возросла: АЛТ на 55% (р 0,001) и ACT на 37% (р=0,01) по сравнению с данными интактных крыс .
Влияние исследуемых препаратов на некоторые показатели перекисного окисления липидов и структуру печени при моделировании аллокса новой гипергликемии
Введение подопытным животным с аллоксановой гипергликемией мек-сидола (25 мг/кг) оказывало положительную динамику на процессы ПОЛ в клетках печени по сравнению с показателями контрольной группы: достоверно снижалось количество МДА (на 70%, р 0,001) и Fe -МДА (на 36% , р 0,001) с параллельным снижением активности каталазы на 48% (р 0,001) ниже контрольных значений, повышением АОА на 35% и РЛПО на 356%) (р 0,001) (таб. 13, рис. 23). При применении актовегина (40 мг/кг) на фоне аллоксанового диабета наблюдалось так же достоверное снижение вторичных продуктов перекисного окисления липидов МДА и Fe- МДА (с 13,91±0,88 до 4,66±0,34 ммоль/л, р 0,001 " и 20,78±1,36 до 15,64±0,93 ммоль/л, р 0,01, соответственно). Активность каталазы в гомогенатах печени снижалась на 54% (р 0,001). В сравнении со значениями контроля АОА достоверно возрастала до уровня показателей интактных крыс, а РЛПО повысился почти в 5 раз (р 0,005) от контрольных значений. Малоновый диальде-гид и железоиндуцированный малоновый диальдегид снижались на фоне комбинированного применения мексидола и актовегина: концентрация МДА в печени снижалась до 26% (р 0,001), a Fe -МДА до 56% (р 0,001) от уровня контрольной группы, в следствии чего возросли АОА и РЛПО на 21% и 362% (р 0,001)от группы животных не получающих фармакологической коррекции.
Коррекция инфезолом и его комбинацией с мексидолом положительно влияло на активность защитного фермента - каталазы, снижая его активность на 54% и 38 (р 0,001, р 0,01), соответственно от значений контроля и параллельно повышая АОА и РЛПО: АОА достоверно увеличилась в 2,8 и 1,9 раза(р 0,001), а РЛПО достоверно увеличился в 5,5 и 3,5 раза (р 0,05) соответственно.
Таким образом, все изучаемые препараты обладают в разной степени выраженности антиоксндантной активностью, о чем свидетельствует снижение концентрации МАД и компенсаторное снижение активности каталазы, рост АОА и РЛПО, по сравнению с данными контрольных животных.
Наиболее выраженное гепатопротекторное действие, в условиях грубых дистрофических изменений гепатоцитов аллоксановой модели оказала комбинация: мексидол и актовегин. После курсового введения препаратов морфологическая картина печени соответствовала состоянию интактных животных (рис. 24). На фоне введения мексидола дольковая и балочная структура печени полностью восстанавливалась. Плазматического пропитывания не отмечалось. Структура гепатоцитов приближалась к нормальной, лишь оставались единичные некротизированные гепатоциты. Наблюдалась пролиферация синусоидальных клеток. Применение актовегина и комбинации инфезол-мексидол (рис. 25) не позволило предотвратить грубых дистрофических изменений гепатоцитов, на фоне восстановления дольковой и балочной структуры печени. Гепатоциты оставались набухшими, с нечеткими границами, с зернистой цитоплазмой, и сохранялись некрозы единичных гепатоцитов. В группе комбинации мексидол- инфезол определялись единичные оптически пустые гепатоциты. Так же, как и в группе контроля наблюдался умеренный ядерный полиморфизм, с бледными увеличеными в размерах ядрами и зернистым хроматином. Выявлялась слабая пролиферация купферовских клеток. Однако наблюдалась выраженная лимфогистиоцитарная пролиферация в портальных трактах после курсового введения комбинации препаратов и единичные лимфогистиоцитарные элементы после коррекции актовегином. Печеночные триады не изменены. Курсовая коррекция инфезола не предотвратила повреждений печеночной ткани, при этом восстаноления дольковой и балочной структуры печени нами не получено.
Печень крысы. Аллоксановая гипергликемия. Комбинированное применение мексидола (25 мг/кг) и актовегина (40 мг/кг) с 11 по 20 сутки эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 150. Печень крысы. Аллоксановая гипергликемия. Комбинированное применение мексидола (25 мг/кг) и инфезола-40 (2 мл/сутки) с 11 по 20-е суй эксперимента. Сохранение балочной структуры печени. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 150.
При моделировании холестериновой дислипидемии у экспериментальных животных медикаментозную коррекцию царушения обмена веществ проводили препаратами метаболического типа действия: раствором мексидола, ак-товегина и их комбинацией.
В условиях холестериновой дислипидемии, вызванной холестериновой нагрузкой, применение мексидола оказало положительное влияние на некоторые показатели липидного профиля: отмечалось значительное снижение ХсЛПНП до 45% (pl 0,005) и р-ЛП до 48% (р 0,001), а так же ОХС - до 82% (р 0,01), ТГ - до 93%, ХсЛПОНП - до 90% в сравнении с животными не получающие коррекции. ХС ЛПВП в данной серии повышался почти в 2 раза составляя 187% (р 0,01) от контрольных и 183% от интактных значений, вследствие чего ИА снизился на 63% (р 0,005) относительно контроля, и даже ниже уровня интактных животных на 22% (р 0,001). Предотвращалась активность ферментов цитолиза по сравнению со значениями контрольной группы: уровень АЛТ снизилась в на 12%, а уровень ACT - на 1 %.
Похожие диссертации на Исследование раздельных и сочетанных эффектов актовегина, инфезола и мексидола при моделировании нарушений углеводного и липидного обмена в эксперименте
![Исследование антиульцерогенной эффективности комбинированного применения омеза и сайтотека с мексидолом в эксперименте [Электронный ресурс]](/i/i/4323/212524.png "Исследование антиульцерогенной эффективности комбинированного применения омеза и сайтотека с мексидолом в эксперименте [Электронный ресурс] Гришкина Ольга Петровна")
