Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 15
1.1. Лекарственные растения, используемые для лечения злокачественных новообразований 15
1.2. Биологически активные вещества лекарственных растений и их фармакологическая активность 27
1.3. Фармакологические свойства, химический состав и ботаническое описание изучаемых растений 43
2. Материал и методы исследования 71
3. Результаты собственных исследований 93
3.1. Влияние препаратов из лекарственных растений и их биологически активных веществ на развитие перевиваемых опухолей и эффективность цитостатической терапии 93
3.1.1. Аир болотный (Acorus Calamus L.) 93
3.1.1.1. Жидкий экстракт корневищ 93
3.1.1.2. Полисахариды экстракта корневищ 95
3.1.1.3. Экстракт шрота корневищ 101
3.1.1.4. Полисахариды шрота корневищ 102
3.1.1.5. Гемицеллюлозы корневищ 104
3.1.1.6. Пектиновые вещества корневищ 105
3.1.1.7. Эфирное масло корневищ 107
3.1.2. Левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides W.) 109
3.1.2.1. Жидкий экстракт 109
3.1.2.2. Водорастворимые полисахариды 114
3.1.3. Одуванчик лекарственный (Taraxacum officinale W.) 116
3.1.3.1. Сухой экстракт 116
3.1.3.2. Водорастворимые полисахариды 121
3.1.4. Ольха клейкая (Alnus glutinosa L.) 123
3.1.4.1. Водные экстракты коры и листьев 123
3.1.4.2. Водорастворимые полисахариды из коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий 126
3.1.4.3. Пектиновые вещества из зеленых и зрелых соплодий 133
3.1.4.4. Гемицеллюлозы 135
3.1.5. Подорожник большой (Plantago major L.) 139
3.1.5.1. Сок подорожника 139
3.1.5.2. Водорастворимые полисахариды 144
3.1.6. Родиола розовая (Rhodiola rosea L.) 147
3.1.6.1. Жидкий экстракт 147
3.1.6.2. Водорастворимые полисахариды 153
3.1.6.3. Гликозид салидрозид и его агликон пара-тирозол 154
3.1.7. Солодка голая (Glycyrrhiza glabra L.) 160
3.1.7.1. Жидкий и сухой экстракт 160
3.1.7.2. Глицирам 162
3.1.7.3. Водорастворимые полисахариды 166
3.1.8. Шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis G.) 168
3.1.8.1. Жидкий экстракт 168
3.1.8.2. Сумма флавоноидов, флавоноиды байкалин и байкалеин 176
3.1.8.3. Полусинтетический флавоноид байкалинат-лизин 179
3.2. Некоторые механизмы действия изучаемых растений и их биологически активных веществ 183
3.2.1. Экстракт шлемника байкальского 183
3.2.1.1. Функциональная активность клеток лимфоузлов мышей линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис 183
3.2.1.2. Морфологический состав периферической крови мышей с аденокарциномой Эрлиха на фоне терапии 5-фторурацилом 184
3.2.1.3. Реакция маргинального пула нейтрофильных лейкоцитов мышей с аденокарциномой Эрлиха на введение адреналина 186
3.2.1.4. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови крыс с лимфосаркомой Плисса 187
3.2.1.5. Показатели агрегационной функции тромбоцитов у крыс с лимфосаркомой Плисса 188
3.2.1.6. Показатели степени стрессированности крыс с лимфосаркомой Плисса 190
3.2.2. Флавоноид байкалин 191
3.2.2.1. Функциональная активность гипоталамуса крыс (дексаметазоновая проба) 191
3.2.3. Экстракт родиолы розовой 192
3.2.3.1. Функциональная активность клеток лимфоузлов мышей линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис 192
3.2.3.2. Функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов у мышей с карциномой легких Льюис 193
3.2.3.3. Показатели метаболизма у мышей с аденокарциномой Эрлиха 195
3.2.3.4. Функциональная активность надпочечников у крыс линии Вистар с лимфосаркомой Плисса на фоне лечения циклофосфаном 196
3.2.4. Пара-тирозол 197
3.2.4.1. Показатели периферической крови, состояние костномозгового кроветворения крыс с лимфосаркомой Плисса на фоне терапии циклофосфаном 197
3.2.4.2. Функциональная активность нейтрофилов у крыс с лимфосаркомой Плисса на фоне терапии циклофосфаном 200
3.2.4.3. Функциональная активность надпочечников крыс с лимфосаркомой Плисса на фоне терапии 5-фторурацилом 201
3.2.4.4. Функциональная активность гипоталамуса крыс (дексаметазоновая проба) 203
3.2.5. Сок подорожника 204
3.2.5.1. Функциональная активность клеток лимфоузлов мышей с карциномой легких Льюис на фоне терапии циклофосфаном 204
3.2.5.2. Цитотоксичность естественных клеток-киллеров и макрофагов у мышей с карциномой легких Льюис на фоне терапии циклофосфаном 205
3.2.5.3. Фагоцитарная активность нейтрофилов крови у крыс с лимфосаркомой Плисса на фоне терапии фторафуром 207
3.2.5.4. Функциональная активность надпочечников у крыс с лимфосаркомой Плисса на фоне терапии фторафуром 208
3.2.6. Водный экстракт листьев и водорастворимые полисахариды ольхи клейкой 208
3.2.6.1. Функциональная активность клеток лимфоузлов мышей с карциномой легких Льюис на фоне терапии циклофосфаном 208
3.2.6.2. Количество клеток-киллеров (БГЛ) в периферической крови мышей с карциномой легких Льюис на фоне терапии циклофосфаном 211
3.2.6.3. Функциональная активность спленоцитов селезенки мышей с карциномой легких Льюис 213
3.2.6.4. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови мышей с карциномой легких Льюис в НСТ-тесте 217
3.2.7. Аир болотный 221
3.2.7.1. Функциональная активность клеток лимфоузлов мышей с карциномой легких Льюис на фоне терапии циклофосфаном 221
4. Обсуждение полученных результатов 224
Выводы 293
- Биологически активные вещества лекарственных растений и их фармакологическая активность
- Левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides W.)
- Родиола розовая (Rhodiola rosea L.)
- Некоторые механизмы действия изучаемых растений и их биологически активных веществ
Введение к работе
Актуальность проблемы. Злокачественные новообразования являются наиболее грозными среди существующих заболеваний, они занимают третье место в структуре общей смертности, показатели которой за последние годы меняются незначительно [Якубовская Р.И., 2000]. Даже в случае успешного избавления от основного опухолевого узла большинство больных погибает от метастазов и рецидивов [Балицкий К.П., 1991].
Цитостатическая терапия до настоящего времени остается одним из основных методов лечения злокачественных новообразований, особенно у больных с распространенной стадией заболевания [Переводчикова Н.И., 2001; Под-дубная И.В., 2003]. С целью наиболее полного уничтожения опухолевых клеток схемы лечения предполагают введение максимально переносимых доз противоопухолевых препаратов. Такая агрессивная противоопухолевая химиотерапия, как правило, приводит к развитию цитостатической болезни, повреждению быстро обновляющихся клеточных систем (эпителия полости рта и желудочно-кишечного тракта, волосяных фолликулов, репродуктивных органов, кроветворной ткани и т.д.) [Птушкин В.В., 2002]. Показано, что у онкологических больных страдают основные звенья гомеостаза, снижена сопротивляемость организма [Кадагидзе З.Г., 1999; Шабашова Н.В., 2000]. Специфическая же терапия усугубляет и без того нарушенный баланс иммунитета, приводя к развитию вторичного иммунодефицита [Гранов A.M., Винокуров В.Л., 2002], активирует перекисное окисление липидов [Пальмина Н.П., Бурлакова Е.Б., 1985; Nowak D., 2006], нарушает гемостаз [Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д. и др., 1980], обмен веществ, истощает стресс-лимитирующие системы. Гепатотоксич-ность цитостатиков, наиболее часто развивающаяся при длительном и интенсивном лечении, способствует усилению токсичности антибластомных препаратов [Муфазалова Н.А., 2002]. Кроме того, унифицированные схемы химиоте-рапевтического лечения не учитывают индивидуальные особенности характера и течения заболевания у различных больных, а также наличие сопутствующих
7 патологических процессов, что вызывает необходимость проведения дополнительных коррекционных мероприятий. Специфика лечения соматически истощенных онкологических больных в период цитостатической терапии требует минимальной нагрузки их лекарственными препаратами, особенно ксенобиотиками. Поэтому, с целью повышения эффективности цитостатического лечения целесообразным считается применение модификаторов биологического действия, в число которых входят средства природного происхождения, воздействующие как на опухолевые клетки, так и на регуляторные системы организма [Навашин СМ., Вядро М.М., 1989; Акимов М.А., Гершанович М.Л., 2002; Чер-дынцева Н.В. и др., 2002]. Препараты растительного происхождения, обладающие низкой токсичностью, высокой биодоступностью и широким спектром регулирующих эффектов, находят все большее применение в онкологической практике [Гольдберг Е.Д., Зуева Е.П., 2000; Яременко КБ., 2001]. Биологическая активность лекарственных растений определяется наличием в их составе веществ различных химических классов, подклассов и групп, которые обладают не одним, а несколькими видами действия. Их количественный и качественный состав определяет доминирование и степень выраженности того или иного фармакологического эффекта конкретного растения и его выбор при назначении с лечебными и профилактическими целями. Поливалентность лечебного действия лекарственных растений является их несомненным достоинством при комплексном лечении онкологических больных, включающем не только звено специфического воздействия, но и способность коррекции многочисленных нарушений гомеостаза, формирующихся как в результате развития опухоли, так и при проведении химиотерапии [Виноградова Т.А. и др., 2001]. В то же время, препаратам на основе биологически активных веществ растений может отдаваться предпочтение для использования в комплексной терапии с целью ослабления определенных сдвигов у больных со злокачественными новообразованиями в связи с направленностью их фармакологических эффектов на конкрет-
8 ные звенья патологического процесса или токсические проявления специфической терапии.
Применяемые в онкологической практике цитостатики растительного происхождения на основе алкалоидов, доказавшие свою эффективность в клинической практике, в то же время обладают побочными эффектами, свойственными всем антибластомным препаратам. Однако в качестве средств дополнительной терапии целесообразным может быть использование фитопрепаратов с широким спектром фармакологических эффектов и отсутствием токсичности. Влияние растительных препаратов и биологически активных веществ на развитие опухолевого процесса и эффективность химиотерапии, механизмы антибла-стомного влияния и повышения с их помощью избирательности действия цито-статических средств изучены недостаточно. В основном в экспериментальных исследованиях исследуется влияние фитопрепаратов на рост основного опухолевого узла, реже - метастазов, и почти не изучается возможность увеличения эффективности цитостатической терапии. В то же время, отсутствуют сведения о сравнительном анализе фармакологических эффектов комплексных растительных препаратов и отдельных биологически активных веществ. Практически не встречаются данные о роли действующих веществ лекарственных растений в механизме повышения избирательности действия цитостатиков.
Цель исследования. Изучить влияние фитопрепаратов и выделенных из них биологически активных веществ на развитие перевиваемых опухолей животных, исследовать их действие на эффективность цитостатической терапии.
Задачи исследования:
1. Изучить влияние препаратов растительного происхождения (аира болот
ного, левзей сафлоровидной, одуванчика лекарственного, ольхи клейкой,
подорожника большого, родиолы розовой, солодки голой, шлемника бай
кальского) на развитие перевиваемых опухолей животных.
2. Оценить влияние растительных препаратов на противоопухолевый и
противометастатический эффект цитостатиков.
3. Изучить действие выделенных из лекарственных растений биологически
активных веществ на рост и метастазирование экспериментальных опухолей.
Исследовать влияние выделенных из лекарственных растений биологически активных веществ на эффективность химиотерапевтического лечения животных с опухолями.
Вскрыть некоторые механизмы противоопухолевого и противометастати-ческого действия исследуемых средств растительного происхождения и их биологически активных веществ.
Изучить механизмы повышения эффективности цитостатической терапии фитопрепаратами и их биологически активными веществами.
Положения, выносимые на защиту
В опытах на животных с перевиваемыми опухолями сок подорожника, экстракты аира болотного, левзей сафлоровидной, солодки голой, одуванчика лекарственного, листьев и коры ольхи клейкой, родиолы розовой, шлемника байкальского, водорастворимые полисахариды из соплодий ольхи, флавоноид шлемника байкалин и его полусинтетический фла-воноид байкалинат-лизин, гликозид салидрозид и его агликон пара-тирозол родиолы розовой ингибируют рост первичной опухоли. Подавляют процесс диссеминации препарат подорожника, экстракты левзей, солодки, коры ольхи, родиолы, шлемника, водорастворимые полисахариды подорожника и солодки, пара-тирозол, байкалин, байкалинат-лизин.
Препарат подорожника, экстракты левзей сафлоровидной, одуванчика лекарственного, ольхи клейкой, родиолы розовой, солодки голой, шлемника байкальского, байкалин, байкалинат-лизин, пара-тирозол повышают эффективность цитостатической терапии животных с опухолями. Водорастворимые полисахариды аира, левзей, одуванчика, листьев ольхи усиливают ингибирующее влияние циклофосфана на первичную опухоль, а
10 водорастворимые полисахариды родиолы и глицирам - на развитие метастазов.
Водорастворимые полисахариды зеленых соплодий и гемицеллюлозы коры ольхи стимулируют рост первичной опухоли, а водорастворимые полисахариды шрота аира, соплодий ольхи, гемицеллюлозы соплодий и коры ольхи, пектиновые вещества корневищ аира - усиливают процесс дис-семинации.
Водорастворимые полисахариды зеленых и гемицеллюлозы зрелых соплодий ольхи на фоне лечения циклофосфаном стимулируют рост первичной опухоли, а пектиновые вещества листьев ольхи стимулируют процесс метастазирования.
Свойство уменьшать токсическое влияние цитостатиков на кроветворение проявили сок подорожника, экстракты шлемника байкальского, родиолы розовой, левзей сафлоровидной, одуванчика лекарственного, бай-калинат-лизин, глицирам, пара-тирозол. Препарат подорожника, экстракты шлемника, родиолы, левзей, байкалинат-лизин, глицирам и пара-тирозол ослабляют выраженность лейкопении. Депрессия красного ростка крови выражена в меньшей степени при введении на фоне химиотерапии пара-тирозола и экстракта одуванчика.
Усиление эффективности химиотерапевтического лечения фитопрепаратами и их биологически активными веществами реализуется посредством стимуляции естественной резистентности организма: под воздействием экстрактов шлемника байкальского, родиолы розовой, препарата подорожника, пара-тирозола повышается функциональная активность клеток лимфоузлов и нейтрофилов, соком подорожника, водорастворимыми полисахаридами и водным экстрактом листьев ольхи усиливается цитоток-сическая активность спленоцитов, а препаратом подорожника - макрофагов; под влиянием водорастворимых полисахаридов и водного экстракта
листьев ольхи повышается количество клеток-киллеров (БГЛ) в периферической крови животных с опухолями. 7. Повышение избирательности цитостатического лечения пара-тирозолом, препаратом подорожника, экстрактами родиолы и шлемника сопровождается ослаблением катаболического процесса, судя по нормализации уровня гормонов гипофизарно-адреналовой системы, а также регуляцией метаболических сдвигов в организме животных с опухолями, судя по нормализации содержания глюкозы, мочевины, общих липидов в плазме крови.
Научная новизна. Проведен сравнительный анализ влияния сока подорожника, экстрактов родиолы розовой, шлемника байкальского, солодки голой, левзей сафлоровидной, одуванчика лекарственного, аира болотного, ольхи клейкой и их биологически активных веществ (суммы флавоноидов, байкалеи-на, байкалина, байкалинат-лизина из шлемника байкальского, пара-тирозола, салидрозида из родиолы розовой, глицирама из солодки голой, гемицеллюлоз, пектиновых веществ ольхи клейкой и аира болотного, эфирного масла аира болотного, водорастворимых полисахаридов аира болотного, ольхи клейкой, солодки голой, родиолы розовой, подорожника большого, одуванчика лекарственного, левзей сафлоровидной) на развитие перевиваемых опухолей животных и эффективность цитостатического лечения.
Наиболее эффективно ингибируют рост первичной опухоли экстракты родиолы розовой, шлемника байкальского, левзей сафлоровидной, солодки голой, одуванчика лекарственного. Выраженное противометастатическое действие обнаружено у экстрактов родиолы розовой, шлемника байкальского, левзей сафлоровидной, солодки голой, препарата подорожника.
Показана принципиальная возможность повышения эффективности цито-статической терапии экстрактами родиолы розовой, шлемника байкальского, левзей сафлоровидной, солодки голой, ольхи клейкой, препаратом подорожника.
12 Выявлены отдельные биологически активные вещества, принимающие
участие в механизме реализации фармакологического действия комплексных растительных препаратов: байкалин и бакалинат-лизин из шлемника байкальского, пара-тирозол из родиолы розовой, глицирам из солодки голой, водорастворимые полисахаридные фракции указанных растений. Обнаружена способность комплексных фитопрепаратов (шлемник байкальский, родиола розовая, подорожник большой) и отдельных действующих веществ (байкалин, пара-тирозол) уменьшать выраженность катаболического синдрома, нормализовать некоторые показатели метаболизма у животных с опухолями (родиола розовая, шлемник байкальский, байкалин), снижать гематотоксичность (сок подорожника, экстракты шлемника байкальского, родиолы розовой, левзей сафлоровид-ной, одуванчика лекарственного, байкалинат-лизин, глицирам, пара-тирозол), иммунодепрессию (препарат подорожника, экстракты шлемника байкальского, родиолы розовой, водорастворимые полисахариды и водный экстракт листьев ольхи, пара-тирозол), вызванные введением цитостатиков. Выявлен эффект стимуляции роста первичной опухоли водорастворимыми полисахаридами зеленых соплодий и гемицеллюлозами коры ольхи, метастазов - водорастворимыми полисахаридами шрота аира, соплодий ольхи, гемицеллюлозами соплодий и коры ольхи, пектиновыми веществами корневищ аира. На фоне цитоста-тического лечения водорастворимые полисахариды зеленых и гемицеллюлозы зрелых соплодий ольхи стимулируют рост первичной опухоли, а пектиновые вещества листьев ольхи усиливают метастатический процесс.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований выявлены фитопрепараты и биологически активные вещества лекарственных растений, способные тормозить рост и метастазирование экспериментальных опухолей, повышать эффективность цитостатического лечения. Полученные сведения расширяют представления о механизме усиления противоопухолевого действия антибластомных препаратов с помощью средств растительного происхождения. Представленные данные могут быть использованы для разра-
13 ботки патогенетически обоснованных методов повышения эффективности химиотерапии опухолей и коррекции нарушений, возникающих в процессе цито-статического лечения, с помощью фитопрепаратов. Результаты работы по изучению возможности применения в комплексной терапии злокачественных новообразований биологически активных веществ лекарственных растений могут служить основой для разработки новых высокоэффективных препаратов-корректоров цитостатической химиотерапии.
Материалы по доклиническому исследованию экстрактов шлемника байкальского, родиолы розовой, сока подорожника представлены в Фармакологический Комитет, получены разрешения на их клиническое испытание. Указанные препараты используются в онкологических клиниках в качестве средств дополнительной терапии злокачественных новообразований.
Байкалинат-лизин и глицирам в 1997г. разрешены Фармакологическим Комитетом МЗ Украины к применению в онкологической практике.
Материалы по доклиническому исследованию пара-тирозола в качестве препарата-корректора цитостатической терапии опухолей вошли в отчет, представленный в Фармакологический Комитет.
По материалам работы получено 2 патента Российской Федерации по заявкам на изобретения:
№ 2052992 «Средство, стимулирующее гемопоэз при гипопластиче-ском состоянии кроветворения, вызванного цитостатиком» от 27.01.96 г. (соавт. Дыгай A.M., Гольдберг Е.Д., Михленко А.В. и др.).
№ 2012927 «Способ моделирования метастазов в печень» от 15.05.94 г. (соавт.Удинцев С.Н., Фомина Т.Н.);
издано 2 методических документа МЗ СССР: 1) Доклиническое изучение средств, обладающих способностью ингибировать процесс метастазирования и повышать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей.- М., 1992. - 13 с. (соавт. Козлов A.M., Герасимова Г.К., Зуева Е.П. и др.).
14 2) Применение экстракта шлемника байкальского в качестве гемостимулятора
при цитостатической болезни. - М., 1992 г. - 8 с. (соавт. Дыгай A.M., Агафонов
В.И., Зуева Е.П. и др.).
Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Всесоюзной конференции «Вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 1982), «Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов» (Томск, 1984, 1993,1995), «Актуальные проблемы химиотерапии опухолей» (Черноголовка, 1982), на III Всероссийском съезде онкологов (Ростов-на-Дону, 1986), Всесоюзном симпозиуме «Метаста-зирование злокачественных опухолей. Новые подходы» (Киев, 1987, 1991), IV Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент, 1988), Республиканской конференции по медицинской ботанике (Киев, 1988, 1994), Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1992, 1995, 1996, 1997, 1998, 2000, 2001), I съезде онкологов стран СНГ (Москва, 1996), 3 съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1997), на научно-практической конференции «Лекарства - человеку» (Харьков, 2001), на Всероссийской конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2001), «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2004), на международном симпозиуме «China - Russia International Conference on Pharmacology» (Harbin, China, 2005) и др.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 70 печатных работ, в том числе 24 - в центральных журналах, рекомендованных перечнем ВАК, 3 - в зарубежных (Китай).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 336 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 117 таблицами и 7 рисунками, библиографический указатель включает 423 источника, из них 268 отечественных и 155 иностранных.
Биологически активные вещества лекарственных растений и их фармакологическая активность
Целебные свойства лекарственных растений обусловлены наличием в их составе биологически активных веществ, которые в организме человека вызывают определенный терапевтический эффект, воздействуя на те или иные органы либо системы. Эти вещества обычно содержатся в растениях в небольшом количестве, но часто оказывают значительное влияние на клеточном и системном уровне. По химическому составу они весьма разнообразны. В химический состав растений кроме воды, которая составляет 70-90%, входят различные органические и минеральные вещества. Среди органических соединений различают вещества первичного синтеза - белки, углеводы, липиды (жиры), ферменты, витамины и вторичного синтеза - алкалоиды, гликозиды, фенольные соединения (фенолы, лигнины, кумарины, флавоноиды, дубильные вещества), эфирные масла, смолы, органические кислоты. Алкалоиды являются важнейшей и широко распространенной группой биологически активных веществ: алкалоидоносные растения составляют 10% мировой флоры, некоторые из них сильно ядовиты (например, алкалоиды кураре). Это сложные органические азотсодержащие соединения основного характера, отличающиеся исключительно разнообразным химическим составом и строением. Основные свойства, характерные для этих соединений, обусловили их название: алкалоидный - подобный щелочи. Чаще всего алкалоиды классифицируют на основе строения гетероциклов, либо в соответствии с их биогенетическими предшественниками - аминокислотами. Выделяют следующие ос- новные группы алкалоидов: пирролидиновые, пиридиновые, пиперидиновые, пирролизидиновые, хинолизидиновые, хиназолиновые, хинолиновые, изохино-линовые, индольные, дигидроиндольные (беталаины), имидазоловые, пурино-вые, дитерпеновые, стероидные (гликоалкалоиды) и алкалоиды без гетероцик-лов (протоалкалоиды). Многие из алкалоидов обладают специфическим, часто уникальным физиологическим действием и широко используются в медицине. В настоящее время выделено около 5000 различных алкалоидов. Многие из них представляют собой ценнейшие лекарственные средства или служат источником их синтеза. Выделенные из растений алкалоиды представляют собой, в большинстве случаев, кристаллические вещества без цвета и запаха, обычно горькие. Они содержатся, главным образом, в цветковых растениях, могут находиться во всех органах или избирательно накапливаться в некоторых (до 2-3% на сухой вес), достигая максимума в стадиях бутонизации и цветения.
Для большинства алкалоидов характерно избирательное действие по отношению к тем или иным органам человека, что и определяет их широкое использование в медицинской практике. Первый открытый в опийном маке алкалоид был назван морфием. Затем из различных растений были выделены стрихнин, бруцин, кофеин, никотин, хинин, атропин, являющиеся до настоящего времени фармацевтическими лечебными препаратами [Соколов С.Я., Замотаев И.П., 1988]. Фармакологические свойства алкалоидов представлены широким спектром действия: транквилизирующее и стимулирующее влияние на ЦНС, гипертензивное и гипотензивное действие, влияние на медиаторные системы, функциональную деятельность мышечной системы. Одним из первых введенных в онкологическую практику был алкалоид колхамин, выделенный из безвременника великолепного (Col-chium speciosum S.) и безвременника осеннего (Colchium autumnale L.). Колхамин применяют в виде 0,5% мази (омаиновая мазь) для лечения рака кожи и хронических лейкозов внутривенно или внутрижелудочно. Показано усиление антибластомного действия сарколизина при его совместном назначении с кол- хамином [Чернов В.А., 1982]. Второй алкалоид из безвременника осеннего и великолепного колхицин проявляет выраженное ингибирующее влияние на процесс метастазирования [Балицкий К.П., Воронцова А.Л., 1982] и применяется при лечении базально-клеточного рака, хронического миелолейкоза, в комплексной терапии фиброматозов. Положительный эффект выявлен при его совместном введении с сарколизином для лечения рака прямой кишки и пищевода. Димерные индольные алкалоиды барвинка розового (Vinca rosea L.) винб-ластин и винкристин [Чернов В.А., 1982], которые специфически действуют на клетки в фазе митоза, используются с целью синхронизации в комбинированной терапии злокачественных опухолей [Klein Н.О., 1972]. Винкристин (Vin-cristinum) применяют самостоятельно и в комбинации с другими препаратами для лечения лимфосарком, саркомы Юинга, нейробластомы, опухоли Вильмса, меланомы, рака молочной железы, лимфогранулематоза, острого лейкоза. Винбластин (Vinblastinum) эффективен преимущественно в комплексном лечении лимфогранулематоза, лимфо- и ретикулосаркомы, хорионэпителиомы матки, нейробластомы, гематосаркомы, миеломной болезни и некоторых солидных опухолей [Блохин Н.Н., Переводчикова Н.И., 1984]. Обнаружено противоопухолевое действие талибластина из корней василистника малого (Thalictrum minus L.) [Yanev S., Krusteva E., 1989]. Прошел вторую стадию клинических испытаний в качестве средства для терапии лейкозов гомогаррингтонин, выделенный из коры китайского вечнозеленого растения Cephalotaxus fortunei [War-rel R.P., Coonley C.J., Gee T.S., 1985]. Однако применение алкалоидов для лечения злокачественных опухолей лимитируется их токсичностью и наличием большого количества побочных эффектов.
Гликозиды - важная группа биологически активных веществ. Выделенные из растений в чистом виде, они представляют собой аморфные или кристаллические вещества, легко растворимые в воде, весьма неустойчивые и при хранении быстро разрушающиеся ферментами самих растений, а также под воздействием различных физических факторов. Молекула гликозида состоит из двух частей: агликона - основной несахаристой части и сахаристой части - гли-кона, которые связывают атомы серы, углерода, азота или кислорода. Именно агликон обладает фармакологической активностью. Сахаристые компоненты, входящие в состав гликозидов, обычно представляют собой моносахариды, хотя иногда могут быть ди-, трисахаридами и т.д. По связывающему атому гликозиды разделяются на группы: тиогликозиды (S), С-гликозиды, N-гликозиды, оксигликозиды. Тиогликозиды действуют раздражающе на слизистые оболочки и кожу. Содержащие их растения (горчица, хрен, редис, редька) находят применение для изготовления лекарств, оказывающих местное раздражающее действие. С-гликозиды представлены, в основном, флавоноидами. N-гликозиды имеют сложное строение, к ним относятся некоторые антибиотики (стрептомицин и др.). Оксигликозиды отличаются большим разнообразием, которое обусловлено характером сахара и агликона, что определяет их фармакологическое действие. По этим признакам они разделены на следующие группы: цианоген-ные, сердечные и флавоноидные гликозиды, сапонины, антрагликозиды, горечи. Ядовиты цианогенные гликозиды, содержащие в агликоне синильную кислоту (встречаются в семенах сливы, горького миндаля, черемухи). Они входят в состав капель и микстур в качестве успокоительных и обезболивающих средств. Сердечные гликозиды (карденолиды) оказывают действие на сердечную мышцу и имеют важное значение в лечении сердечно-сосудистых заболеваний. Растения, образующие в своих клетках сердечные гликозиды, довольно широко распространены в природе: это наперстянка, ландыш, олеандр, желтушник [Соколов С.Я., Замотаев И.П., 1988]. Лигнаны широко распространены в растениях и встречаются как в свободном состоянии, так и в форме гликозидов в семенах, корнях, древесине. Это природные фенольные вещества, производные димеров фенилпропановых единиц (С6-СЗ), соединенных между собой (3-углеродными атомами боковых цепей. Разнообразие лигнанов обусловлено наличием различных заместителей в бензольных кольцах и характером связи между ними, степенью насыщенности боковых цепей и др. По структуре делятся на несколько групп: диарилбутано- вый (гваяретовая кислота), 1-фенилтетрагидро-нафталиновый (подофиллоток- син, пельтатины), бензилфенилтетрагидрофурановый (ларицирезинол и его гликозид), дифенилфурофурановый (сезамин, сирингарезинол), дибензоцикло- октановый (схизандрин, схизандрол) и др. Они обладают стимулирующим и тонизирующим действием, применяются для лечения различных опухолей [Максютина Н.П. и др., 1985].
Левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides W.)
Изолированное использование экстракта левзей в дозе 5 мл/кг для лечения беспородных мышей-самцов с АКЭ привело к значительному торможению роста опухоли: её объем под влиянием препарата уменьшился в 2,5 раза (Р 0,01) по сравнению с контролем. При введении экстракта левзей в дозе 1 мл/кг наблюдалась тенденция к уменьшению объема опухолевых клеток, выражавшаяся в 20% торможения роста (табл.20). В то же время, добавление в схему лечения цитостатиком экстракта левзей в обеих изучаемых дозах привело к достоверному усилению противоопухолевого действия циклофосфана, причем в случае использования дозы 5 мл/кг эффект оказался с наивысшим уровнем значимости. Так, объем опухоли у мышей, получавших цитостатик совместно с растительным препаратом в дозе 1 мл/кг, уменьшился в 1,8 раза по сравнению с группой леченных только цик-лофосфаном животных (Р 0,05). Если же цитостатик комбинировали с экстрактом левзей в дозе 5 мл/кг, объем опухоли оказался в 5,2 раза меньше (Р 0,01) этого показателя в группе монохимиотерапии (табл.20). Карцинома легких Льюис Применение экстракта левзей в дозе 1 мл/кг для лечения мышей линии C57BL/6 с 3LL привело к достоверному уменьшению количества (в 2,8 раза) и площади метастазов (в 2,4 раза) по сравнению с контрольными значениями. Достоверно меньше (в 1,3 раза) оказалась масса основного опухолевого узла по сравнению с контролем после лечения животных экстрактом в дозе 2,5 мл/кг, при этом снижение количества метастатических узлов в легких (в 2,1 раза) и их площади (в 1,9 раза) имело характер тенденции (табл.21). Введение цитостатика животным привело к ингибиции роста основной опухоли и метастазов. Так, масса опухоли у мышей этой группы оказалась в 3,4 раза меньше контрольного уровня (Р 0,01). С высокой степенью достоверности отличались от контрольных значений все показатели процесса диссеминации . При включении в схему лечения цитостатиком экстракта левзей в дозе 1 мл/кг противоопухолевый эффект циклофосфана не изменялся. Все показатели развития процесса диссеминации у животных этой группы были ниже, чем у леченных одним циклофосфаном, но не имели статистически значимых различий с соответствующим контролем. Если же экстракт левзей использовался в дозе 2,5 мл/кг, достоверно повышалось противометастатическое действие цитостатика - видимых метастазов в легочной ткани мышей не обнаружено (табл.21).
Обращает на себя внимание тот факт, что на 3 сут после введения циклофосфана в периферической крови животных наблюдалась выраженная лейкопения: количество лейкоцитов уменьшилось в 4,5 раза (Р 0,01) по сравнению с этим показателем в контроле. В то же время, при добавлении в схему лечения цитостатиком экстракта левзей в дозе 1 мл/кг количество лейкоцитов в периферической крови мышей оказалось в 1,5 раза выше (Р 0,05) по сравнению с этими данными у животных, получавших монохимиотерапию (табл.22). Меланома В-16 Изолированное применение экстракта левзей в дозе 2,5 мл/кг для лечения мышей-самцов Fi (СВА х C57BL/6) с меланомой В-16 не повлияло на развитие опухолевого процесса. Введение цитостатика животным не повлияло на рост основного опухолевого узла, его масса осталась на уровне контроля. Более того, в используемом режиме применение циклофосфана привело к стимуляции процесса метастази-рования: в 1,5 раза больше (Р 0,05) оказалось количество и в 4,1 раза (Р 0,01) -площадь метастазов в легких (табл.23). В то же время, при совместном использовании цитостатика с экстрактом левзей масса опухоли у мышей уменьшилась в 1,5 раза (Р 0,05) по сравнению с этим значением в группе леченных циклофосфаном животных; достоверно меньше оказалось и количество мышей с метастатическим поражением легких - 70% против 100% (табл.23). Карциносаркома Уокер-256 У крыс-самок линии Вистар с карциносаркомой Уокер-256, получавших экстракт левзей в дозе 1 мл/кг, отмечено уменьшение массы подмышечных лимфоузлов (в 1,8 раза, Р 0,01) по сравнению с контрольными значениями (табл.24). Использование циклофосфана привело к торможению роста основной опухоли: ее масса уменьшилась в 3 раза (Р 0,01) по сравнению с контролем. Под влиянием цитостатика меньше контрольного уровня оказалась масса подмышечных (в 1,9 раза, Р 0,01) и парааортальных (в 1,4 раза, Р 0,05) лимфоузлов. Добавление в схему лечения цитостатиком экстракта левзей не изменило противоопухолевого и противометастатического действия антибластомного препарата (табл.24). 3.1.2.2. Водорастворимые полисахариды Карцинома легких Льюис Внутрибрюшинное назначение полисахаридов левзей сафлоровидной в дозе 10 мг/кг мышам-самкам линии C57BL/6 с 3LL не повлияло на развитие опухолевого процесса (табл.25). Введение животным циклофосфана не повлияло на рост основной опухоли, ее масса оказалась на уровне контроля. Однако под влиянием цитостатика значительно ингибировался процесс диссеминации опухоли: так, частота мета-стазирования составила 40% против 100% в контроле, количество метастазов в легких снизилось в 7,9 раза, а их площадь - многократно (Р 0,01), индекс инги- бирования метастазирования составил 95% (табл.25). Сочетанное лечение животных циклофосфаном с полисахаридами левзей привело к достоверному торможению роста опухоли: ее масса уменьшилась в 1,3 раза (Р 0,05) по сравнению с этим значением в группе получавших только цитостатик мышей. Действие антибластомного препарата на процесс метастазирования в данном эксперименте оказалось настолько велико, что добавление в схему лечения полисахаридов левзей не повысило эффективности лечения (табл.25).
В следующем эксперименте, проведенном в аналогичных условиях, водорастворимые полисахариды левзей вводили мышам в дозе 25 мг/кг. Обнаружено, что при их изолированном использовании для лечения мышей с карциномой легких Льюис в 1,2 раза уменьшилась масса основной опухоли (Р 0,05). В то же время, сочетанное применение полисахаридов в указанной дозе совместно с циклофосфаном достоверно не изменило эффективности лечения, однако час- тота метастазирования, количество и площадь метастатических узлов у животных данной группы имели наименьшие значения, а индекс ингибиции метастазирования - наибольшее, достигая 96% (табл.26). Заключение В эксперименте с перевиваемой карциномой легких Льюис экстракт левзей сафлоровидной, применяемый изолированно, в дозе 1 мл/кг проявил антиметастатическую активность (судя по количеству и площади метастазов), а в дозе 2,5 мл/кг - ингибирующее влияние на основную опухоль. Проведенные эксперименты выявили способность экстракта левзей повышать противоопухолевую (аденокарцинома Эрлиха, карцинома легких Льюис, меланома В-16) и противометастатическую (карцинома легких Льюис, меланома В-16) активность циклофосфана. В периферической крови животных, получавших комбинированную терапию, отмечено достоверно большее количество лейкоцитов, чем у получавших только цитостатик. Повышение противоопухолевой активности циклофосфана отмечено при включении в схему лечения водорастворимых полисахаридов левзей, вводимых внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг мышам с 3LL. Использование полисахаридов левзей в дозе 25 мг/кг при самостоятельном применении приводило к уменьшению массы первичной опухоли. 3.1.3. Одуванчик лекарственный (Taraxacum officinale W.) 3.1.3.1. Сухой экстракт Аденокарцинома Эрлиха При изолированном введении экстракта одуванчика лекарственного в дозе 100 мг/кг беспородным мышам-самкам с АКЭ наблюдалось значительное торможение роста опухоли: ее масса уменьшилась в 1,4 раза (Р 0,05) по сравнению с контролем (табл.27). Применение циклофосфана для лечения мышей с АКЭ привело к торможению роста опухоли: объем опухолевых клеток уменьшился в 2,1 раза по сравнению с контрольными значениями (Р 0,01).
Родиола розовая (Rhodiola rosea L.)
Жидкий экстракт Аденокарцинома Эрлиха Изолированное применение экстракта родиолы розовой в дозе 5 мл/кг для лечения беспородных мышей-самок с АКЭ привело к уменьшению объема опухолевых клеток в 4,6 раза (Р 0,01) по сравнению с этим показателем у нелеченых мышей, а при использовании в дозе 1 мл/кг обнаружена лишь тенденция к его уменьшению (табл.55). Введение циклофосфана в данном режиме не оказало влияния на рост опухоли, её объем оказался на уровне контрольных значений. Совместное использование цитостатика с экстрактом родиолы в обеих изучаемых дозах привело к достоверному торможению роста АКЭ. Так, в группе животных, получавших цитостатик с препаратом родиолы в дозе 1 мл/кг, объём опухолевых клеток в асците уменьшился в 2,2 раза по сравнению с этими данными у мышей, получавших только циклофосфан. Если же в схему лечения добавляли экстракт родиолы в дозе 5 мл/кг, эффективность лечения повысилась еще больше: объем опухолевых клеток в асците мышей этой группы снизился в 3,6 раза по сравнению с этим показателем у животных, получавших один цитостатик (табл.55). Обращает на себя внимание способность экстракта родиолы ослаблять лейкопенический эффект циклофосфана. Так, если в периферической крови мышей, леченных цитостатиком, количество клеток белой крови снизилось в 2,3 раза (Р 0,05) по сравнению с контролем, то при сочетанном использовании препаратов этот показатель оказался в 1,5-1,6 раза выше (Р 0,05). В аналогичном эксперименте при использовании экстракта родиолы в дозе 5 мл/кг в изолированном режиме для лечения беспородных мышей-самок с АКЭ обнаружилась тенденция к уменьшению объема опухоли (табл.56). Применение 5-фторурацила для лечения мышей с АКЭ также не оказало достоверного влияния на рост опухоли. В то же время, совместное использование цитостатика с экстрактом родиолы привело к появлению противоопухолевого эффекта: объем опухолевых клеток у мышей уменьшился в 1,8 раза (Р 0,05) по сравнению с этим показателем у леченных одним цитостатиком мышей (табл. 56). Выявлена способность экстракта родиолы уменьшать лейкопенический эффект 5-фторурацила: обнаружено увеличение количества клеток белой крови в 1,8 раза (Р 0,01) в периферической крови мышей, получавших комбиниро- ванную терапию по сравнению с этими данными у животных, леченных одним цитостатиком (табл.56). Карцинома легких Льюис При изолированном введении экстракта родиолы в дозе 5 мл/кг мышам-самцам линии C57BL/6 с 3LL отмечено уменьшение массы опухоли в 1,6 раза (Р 0,05), количества метастазов - в 6,8 раза (Р 0,01) по сравнению с контролем.
Существенное ингибирующее влияние оказал препарат родиолы и на процесс диссеминации опухоли, судя по таким показателям, как частота метастазирова-ния опухоли, которая у животных этой группы составила 25% против 88% в контроле и площади метастатического поражения, уменьшившейся в 6,8 раза (Р 0,01) по сравнению с таковой у нелеченых мышей (табл.57). Лечение цитостатиком привело к уменьшению массы первичной опухоли в 1,6 раза и в 2,4 раза - количества метастазов по сравнению с контролем (Р 0,01). Применение препарата родиолы в сочетании с циклофосфаном значительно повысило эффективность лечения. Так, масса опухоли у мышей с 3LL, получавших комбинированную терапию, уменьшилась в 6,8 раза (Р 0,01) по сравнению с этим показателем у леченных одним циклофосфаном животных. Еще более существенным оказалось влияние комбинированного лечения на процесс диссеминации: метастазы в легких мышей этой группы полностью отсутствовали (табл.57). Под влиянием цитостатика количество лейкоцитов в периферической крови животных уменьшилось в 6 раз по сравнению с контролем (Р 0,01). Совместное назначение экстракта родиолы и циклофосфана привело к уменьшению токсического влияния последнего на клетки белой крови - их количество оказалось в 2 раза (Р 0,01) выше этого показателя у животных, получавших один цитостатик (рис.3). Применение экстракта родиолы розовой в дозе 1 мл/кг в изолированном режиме для лечения крыс-самцов линии Вистар с лимфосаркомой Плисса привело к ингибиции процесса диссеминации опухоли: масса метастазов на одну крысу уменьшилась в 1,3 раза (Р 0,05), частота метастазирования составила 30%) против 60%) в контроле. Влияния препарата на основную опухоль не отмечено (табл.59). Введение циклофосфана привело в торможению роста первичной опухоли, ее масса уменьшилась в 1,5 раза (Р 0,05) по сравнению с этим показателем у нелеченых крыс, однако не повлияло на развитие метастазов.
При использовании цитостатика совместно с экстрактом родиолы инги-бирующее влияние на первичную опухоль усилилось, ее масса оказалась в 2,2 раза (Р 0,01) ниже этого показателя у крыс, получавших один циклофосфан. Особое внимание следует уделить факту полного отсутствия метастазов у крыс группы комбинированного лечения (табл.59). В следующем эксперименте препарат родиолы розовой, вводимый крысам-самцам линии Вистар с лимфосаркомой Плисса в дозе 1 мл/кг, самостоятельного противоопухолевого либо противометастатического действия не проявил (табл.60). Использование 5-фторурацила привело достоверному уменьшению массы основной опухоли в 1,3 раза, но не повлияло на процесс метастазирования. Совместное использование цитостатика с экстрактом родиолы, напротив, оказало ингибирующее влияние на процесс диссеминации опухоли: такой показатель, как частота метастазирования, в данной группе животных составил 25% против 75% в группе крыс, которым вводили только 5-фторурацил (Р 0,001). В то же время, включение в схему лечения цитостатиком препарата родиолы привело к отмене ингибирующего влияния на первичную опухоль (табл.60). Следует отметить уменьшение лейкопенического эффекта цитостатика под влиянием экстракта родиолы: так, количество лейкоцитов в перифериче- ской крови крыс данной группы оказалось в 1,4 раза (Р 0,01) больше этого показателя у животных, получавших монохимиотерапию (табл.61). Внутрибрюшинное применение водорастворимых полисахаридов родиолы розовой в дозе 10 мг/кг для лечения мышей-самок линии C57BL/6 с 3LL не повлияло на развитие опухолевого процесса. Введение циклофосфана мышам вызвало ингибицию развития карциномы легких Льюис: её масса снизилась значительно, уменьшились такие показатели процесса диссеминации, как количество метастазов (в 2,7 раза), их площадь (в 6,9 раза) и масса легких с метастазами (в 1,4 раза) по сравнению с контрольными значениями (табл.62). Добавление в схему лечения циклофосфаном полисахаридов родиолы привело к уменьшению частоты метастазирования, которая составила 80% против 100% (Р 0,001), при этом индекс ингибиции метастазирования увеличился до 79% против 63% в группе получавших один цитостатик мышей. Обнаружена также тенденция к уменьшению количества и площади метастазов у животных комбинированной группы по сравнению с этими показателями у мышей, леченных только циклофосфаном (табл.62). 3.1.6.3. Гликозид салидрозид и его агликон пара-тирозол Аденокарцинома Эрлиха Внутрижелудочное введение салидрозида родиолы розовой в дозе 50 мг/кг для лечения беспородных мышей-самцов с АКЭ привело к торможению роста опухоли: объем опухолевых клеток уменьшился в 1,6 раза (Р 0,01). Однако наиболее выраженным оказалось противоопухолевое действие салидрозида при его введении мышам внутримышечно в той же дозе: объем опухолевых клеток у животных этой группы уменьшился в 2,5 раза (Р 0,01) по сравнению с контролем (табл.63).
Некоторые механизмы действия изучаемых растений и их биологически активных веществ
Для определения функционального состояния клеток лимфоузлов выбран тест нейтрализации опухолевых клеток Винна, в котором их активность определялась по способности тормозить рост и метастазирование опухоли при перевивке животным смеси лимфоидных и опухолевых клеток. По окончании курса лечения мышей линии C57BL/6 с карциномой легких Льюис экстрактом шлемника в дозе 1 мл/кг, проявившего выраженные проти-вометастатические свойства (табл.76), у животных выделяли подмышечные и паховые лимфатические узлы, клетки которых смешивали в соотношении 10:1 (106) и вводили внутримышечно здоровым мышам той же линии. На 16 сут после трансплантации 3LL у всех животных контрольной группы были обнаружены метастазы в легких. У мышей, которым была перевита смесь опухолевых и лимфоидных клеток животных с карциномой легких Льюис, частота метаста-зирования значительно не изменялась, однако масса первичного опухолевого узла уменьшилась в 2,3 раза (Р 0,01). При добавлении в перевивочный материал клеток лимфоузлов животных, получавших экстракт шлемника, количество мышей с метастатическим поражением снизилось с 83% до 14%, а масса опухоли уменьшилась в 4 раза (Р 0,01) по сравнению с этими показателями у мышей, которым перевивали 3LL с лимфоидными клетками нелеченых животных (табл.89). Таким образом, показано, что лечение мышей C57BL/6 с карциномой легких Льюис экстрактом шлемника байкальского приводит к увеличению функциональной активности клеток лимфатических узлов. 3.2.1.2. Морфологический состав периферической крови мышей с аденокарциномой Эрлиха на фоне терапии 5-фторурацилом На мышах с аденокарциномой Эрлиха изучено содержание клеточных элементов периферической крови на фоне лечения 5-фторурацилом в сочетании с экстрактом шлемника. На 3 сут после введения цитостатика общее количество лейкоцитов в периферической крови мышей снизилось в 4,3 раза, содержание сегментоядерных нейтрофилов - в 5,3 раза, а число лимфоцитов - в 3,5 раза по сравнению с уровнем контроля (Р 0,01).
У животных, которым вводили 5-фторурацил совместно с экстрактом шлемника, количество лейкоцитов в периферической крови было в 1,9 раза выше, чем у получавших только цитостатик (Р 0,05), при этом в 5,5 раза повысился уровень палочкоядерных нейтрофилов, в 1,9 раза -количество сегментоядерных нейтрофилов, в 1,7 раза - число лимфоцитов, в 1,7 раза - содержание моноцитов (Р 0,05) (табл.90). К 7 сут после введения цитостатика общее количество лейкоцитов и содержание их отдельных форм (лимфоциты, моноциты, эозинофилы, сегментоя-дерные нейтрофилы) в периферической крови мышей повысилось, однако оставалось еще ниже нормы. В то же время, у животных, получавших комбинированное лечение, абсолютное содержание лейкоцитов в периферической крови оказалось в 1,4 раза выше (Р=0,05), чем у леченных одним цитостатиком. При этом существенно и достоверно возрастало число практически всех форменных элементов белой крови, за исключением юных и палочкоядерных нейтрофилов (табл.90). Таким образом, введение в схему лечения 5-фторурацилом экстракта шлемника байкальского для лечения мышей с аденокарциномой Эрлиха сопровождалось снижением токсичности в отношении клеток белой крови. Приведенные выше данные свидетельствуют о способности экстракта шлемника байкальского предотвращать развитие выраженной лейкопении, возникающей после воздействия цитостатика. В связи с этим проведено изучение компенсаторных возможностей гранулоцитарного ростка гемопоэза у беспородных мышей-самок с аденокарциномой Эрлиха, получавших лечение цикло-фосфаном в сочетании с экстрактом шлемника. Через 30 мин после подкожного введения адреналина гидрохлорида в до-зе 0,5 мл/м у мышей с опухолью Эрлиха, леченных циклофосфаном, выраженность нейтрофильной реакции оказалась значительно сниженной: количество лейкоцитов в периферической крови было в 4,8 раза меньше (Р 0,01), чем у контрольных животных. В то же время, у мышей, получавших цитостатик в сочетании с экстрактом шлемника, наблюдалось развитие острой лейкоцитарной реакции на введение адреналина, в 1,9 раза (Р 0,01) превышающей таковую у леченных одним циклофосфаном животных (табл. 91). Таким образом, экстракт шлемника байкальского препятствовал истощению маргинального пула нейтрофильных лейкоцитов в периферической крови мышей с АКЭ, наблюдаемого под влиянием циклофосфана. В эксперименте на беспородных крысах-самцах с лимфосаркомой Плисса (табл.75) изучено изменение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови с помощью кислородозависимой реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) под влиянием циклофосфана и препарата шлемника. Реакцию проводили в спонтанном и стимулированном вариантах, что позволяло судить о мобилизационной готовности нейтрофилов к завершенному фагоцитозу.
Воздействие циклофосфаном (в спонтанном варианте) приводило к снижению в 3,5 раза процента формазанположительных нейтрофилов (ФГШ) и в 5,4 раза - интенсивности реакции восстановления нитросинего тетразолия в формазан (табл.92). Сочетанное применение антибластомного препарата с экстрактом шлемника приводило к значительному увеличению процента ФПН (в 5,2 раза, Р 0,01) и интенсивности реакции (в 8,5 раза, Р 0,01) по сравнению с этими по- казателями у животных, леченных только циклофосфаном. Фагоцитарный резерв (ФР - разница между показателями в индуцированном и спонтанном тестах) у крыс, получавших комбинированную терапию, оказался в 4 раза ниже, чем у леченных только цитостатиком, что свидетельствует о максимально активированном состоянии нейтрофилов. Изолированное введение животным экстракта шлемника достоверно не влияло функциональную активность нейтрофилов периферической крови крыс с лимфосаркомой Плисса (табл.92). Таким образом, лечение крыс с лимфосаркомой Плисса циклофосфаном в сочетании с экстрактом шлемника байкальского приводит к существенному возрастанию функциональной активности нейтрофилов периферической крови. 3.2.1.5. Показатели агрегационной функции тромбоцитов у крыс с лимфосаркомой Плисса В эксперименте на крысах-самцах линии Вистар с лимфосаркомой Плисса изучены показатели агрегационной функции тромбоцитов под влиянием экстракта шлемника байкальского и циклофосфана. У всех животных контрольной группы отмечено метастатическое поражение лимфоидной ткани. Параллельно наблюдались выраженные изменения со стороны свертывающей системы крови: значительно возрастал индекс спонтанной агрегации тромбоцитов (в 3,1 раза, Р 0,05) и значение А2 (в 3,4 раза, Р 0,05), обнаружилась также тенденция к увеличению показателей Ан и МАА по сравнению с данными фона, свидетельствуя о повышенной агрегационной активности тромбоцитов. Отмечена высокая корреляционная зависимость между массой опухоли и таким показателем системы свертывания крови, как максимальная амплитуда агрегации тромбоцитов (табл.93). Применение экстракта шлемника байкальского для лечения крыс с лимфосаркомой Плисса привело к торможению роста опухоли и ослаблению процесса метастазирования: так, масса опухоли леченых крыс снизилась в 1,9 раза (Р 0,05), а частота метастазирования со 100% до 57% (Р 0,001). При этом достоверно меньше оказались такие величины показателей системы свертывания крови, как ИСА (в 3 раза) и значение Аг (в 2,2 раза) по сравнению с этими данными у мышей контроля и практически не отличались по своим значениям от соответствующих данных у здоровых крыс. Отмечена прямая корреляционная зависимость между максимальной амплитудой агрегации тромбоцитов и массой лимфоузлов, в которые метастазировала опухоль (табл.93).
