Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Роль налтрексона в лечении героиновой наркомании 9.
1.2. Фармакокинетика налтрексона 23
1.3. Методы определения налтрексона в биологических жидкостях 28
Экспериментальная часть 32
Глава 2. Материалы и методы исследования 32
2.1. Реактивы, материалы и оборудование используемые в работе.. 32
2.2. Характеристика объектов и тактика фармакокинетического исследования 33
Глава 3. Результаты исследования 37
3.1. Разработка методики анализа налтрексона и его метаболита методом ВЭЖХ 37
3.1.1. Выбор условий хроматографирования 37
3.1.2. Количественное определение налтрексона и его метаболита в растворах 40
3.1.3. Изолирование из плазмы крови 40
3.1.4. Количественное определение налтрексона и его метаболита в плазме крови 41
3.2. Изучение высвобождения налтрексона из новой лекарственной формы в тесте in vitro 46
3.2.1. Подбор условий изучения высвобождение налтрексона в условиях in vitro 47
3.2.2. Результаты высвобождения налтрексона из новой пролонгированной формы в условиях in vitro 47
3.3. Доклиническое фармакокинетическое исследование новой пролонгированной формы налтрексона 49
3.3.1. Динамика концентрации налтрексона у собак после введения пролонгированной формы налтрексона 49
3.3.2. Динамика концентрации налтрексона у крыс после введения пролонгированной формы налтрексона 52
3.4. Изучение равновесной концентрации налтрексона и его метаболита у больных наркоманией 57
3.4.1. Динамика равновесной концентрации налтрексона после имплантации пролонгированной формы 57
3.4.2. Динамика равновесной концентрации метаболита налтрексона после имплантации пролонгированной формы 61
Глава 4. Обсуждение результатов 66
Общие выводы 80
Список литературы 81
Приложение 92
- Роль налтрексона в лечении героиновой наркомании
- Методы определения налтрексона в биологических жидкостях
- Динамика концентрации налтрексона у крыс после введения пролонгированной формы налтрексона
- Динамика равновесной концентрации метаболита налтрексона после имплантации пролонгированной формы
Введение к работе
Актуальность темы
Интенсивное изучение в последние годы антагонистов опиоидных рецепторов способствовало появлению новых подходов к лечению наркомании Одним из перспективных препаратов данной группы является налтрексон [Иванец НН, 2002, Marley RJ et al, 1995] Фармакодинамические и фарма-кокинетические свойства налтрексона характеризуют его как активного конкурентного антагониста опиатных рецепторов После приема внутрь налтрексон быстро всасывается из ЖКТ, у большинства пациентов пик концентрации отмечается через час после введения препарата В организме налтрексон быстро метаболизируется с образованием основного активного метаболита 6-(3-налтрексола Средняя концентрация налтрексона в плазме крови после перо-рального приема 100 мг составляет 18 нг/мл, а его метаболита 6-р1-налтрексола 160 нг/мл Выводится препарат и его метаболиты в основном с мочой Препарат и его метаболиты не куммулируют при курсовом приеме [Wall М Е , et al, 1981, Meyer М С , et al, 1984] Важной особенностью препарата является отсутствие привыкания к его антагонистическому действию в течение года и более его регулярного применения Зарубежный опыт использования налтрексона свидетельствует о его высокой эффективности и хорошей переносимости Накопленные сведения позволяют предполагать, что использование налтрексона может быть расширенно, в том числе для лечения героиновых наркоманий, осложненных алкоголизмом, для лечения полинар-команий [Miotto К, 1997, Volpicelli J R , 1995]
На АОЗТ "НПК ЭХО" совместно с ЗАО "Феделити Капитал" (Россия) был создан препарат Продетоксон, представляющий собой таблетки для имплантации, содержащие 1,0 г налтрексона
Исходя из вышесказанного для внедрения Продетокона в клиническую практику представляется актуальным изучение его фармакокинетических параметров, что определило цель и задачи исследования
Цель и задачи исследования Цель провести фармакокинетическое исследование нового отечественного пролонгированного лекарственного средства, содержащего налтрексон Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи
разработать методику ВЭЖХ-анализа налтрексона и его метаболита 6-Р-налтрексола в растворах и плазме крови,
подобрать условия и провести изучение высвобождения налтрексона из новой пролонгированной формы в условиях in vitro (по тесту кинетика растворения),
изучить динамику концентрации налтрексона в крови животных после имплантации препарата Продетоксон,
оценить равновесную концентрацию налтрексона и его метаболита в плазме крови больных наркоманией после имплантации препарата Продетоксон
Научная новизна
Проведено комплексное фармакокинетическое изучение высвобождения налтрексона из нового пролонгированного препарата Продетоксон в условиях in vitro и in vivo
Впервые изучена динамика концентрации налтрексона и его метаболита после подкожной имплантации нового отечественного препарата Продетоксон у двух видах животных, и больных наркоманией Доказано постепенное высвобождение налтрексона из новой лекарственной формы, обеспечивающее пролонгированный эффект
Практическая значимость
Разработаны методики совместного ВЭЖХ-анализа налтрексона и его метаболита 6-р-налтрексола в плазме крови
Определены уровни концентраций налтрексона и его активного метаболита в крови больных наркоманией после имплантации нового отечественного препарата Продетоксон
Внедрение в практику
Методики количественного определения налтрексона и его метаболита 6-р-налтрексола в плазме крови используются в фармакокинетических исследованиях в Филиале «Клиническая фармакология» Научного центра биомедицинских технологий РАМН, Институте Клинической фармакологии НЦ ЭСМП
Результаты исследований динамики концентрации налтрексона у животных и пациентов вошли в отчет по изучению нового отечественного препарата Продетоксон, на основании которого препарат был разрешен к медицинскому применению
Апробация работы
Основные результаты доложены и обсуждены на совместной научно-практической конференции Филиала «Клиническая фармакология» НЦ БМТ РАМН, кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних заболеваний ММА имени И М Сеченова, Института клинической фармакологии НЦ ЭСМП (Москва, 2008 г), на научно-практической конференции «Клиническая фармакология в России достижения и перспективы» (Москва,
г), на II Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи,
г)
Публикация результатов исследования
По результатам исследований опубликовано 5 печатных работ
Связь исследования с проблемным планом
Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным направлением «Оптимизация фармакотерапии заболеваний внутренних органов посредством разработки рациональных методов контроля клинически значимых параметров фармакокинетики лекарственных средств» (номер государственной регистрации - 01 206 110468)
Основные положения, выносимые на защиту
Разработанная методика определения налтрексона и его метаболита в плазме крови с помощью метода ВЭЖХ
Высвобождение налтрексона из препарата Продетоксон в условиях in vitro
Результаты фармакокинетического исследования нового препарата Продетоксон у животных
Уровни концентрации налтрексона у пациентов после введения препарата Продетоксон
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы из 108 названий и приложения Работа иллюстрирована 15 рисунками и 12 таблицами
Роль налтрексона в лечении героиновой наркомании
Опиоидная зависимость (опийная наркомания) представляет собой одну из наиболее распространенных и прогностически неблагоприятных форм аддитивных расстройств [6,7]. Стержневым психопатологическим проявлением наркотической зависимости является синдром патологического влечения к психоактивным веществам (ПАВ) [8].
В начале 70-х годов этого столетия в ЦНС животных были обнаружены рецепторы, связывающие морфин и другие опиоиды. Позднее из экстрактов мозга животных были выделены биологически активные вещества пептидной структуры (энкефалины, эндорфины), которые оказались эндогенными лигандами по отношению к опиатным рецепторам. Они получили название опиоидных пептидов. В настоящее время выделены новые группы опиоидных пептидов (динорфины, неоэндорфины и др.); синтезировано большое число их аналогов, которые применяются, главным образом, в экспериментальных исследованиях. Их изучение способствовало появлению новых направлений в исследовании функции мозга, а также определило новые подходы к лечению ряда нервных и психических заболеваний [1,3,5,41,84].
В настоящее время большинство исследователей выделяют три основные группы опиатных рецепторов:
- мю-рецепторы (эталонным лигандом является морфин);
- каппа-рецепторы (эталонный лиганд кетоциклазоцин);
- дельта-рецепторы, лигандами для которых являются эндогенные опиоидные пептиды.
В экспериментальной фармакологии в пределах вышеуказанных групп рецепторов выделяют подгруппу рецепторов (мюі, мю2, дельта!, дельта2, каппаї, каппа2, каппаЗ), которые специфически реагируют на экзогенные лиганды [84,102].
В исследованиях на здоровых испытуемых и больных установлено, что с мю-рецепторами связаны развитие анальгезии, седативного эффекта, угнетение дыхания, миоз, эйфория, выраженная способность вызывать зависимость, ухудшение процессов обучения и памяти, угнетение перистальтики кишечника [4,87].
С каппа-рецепторами связываются развитие седативного эффекта, анальгезии, минимальное угнетение дыхания, незначительная способность вызывать зависимость, дисфория, психотомиметический эффект, ухудшение процессов обучения и памяти [73,100].
Считается, что дельта-рецепторы принимают участие в анальгезии и регуляции некоторых видов поведения пищевого, полового и других [41,84].
В фармакологическом аспекте все многообразие лигандов опиатных рецепторов можно разделить на 3 группы:
- агонисты (морфин, метадон, героин, фентанил, промедол и др.);
- агонисты-антагонисты (бупренорфин, буторфанол, циклазоцин, на-лорфин, пентазоцин, трамал);
- антагонисты (налоксон, налтрексон, налмефен) [9,41,84].
Как известно, некоторые агонисты, особенно метадон, применяются в зарубежной наркологической практике в программах постепенного лишения наркотиков в процессе лечения больных с зависимостью к морфи-ноподобным анальгетикам, в нашей стране практика назначения наркоманам таких препаратов запрещена [2,66,89]. Применение агонистов-антагонистов, обладающих как анальгетическим, так и налоксоноподоб-ным действием, в качестве поддерживающей терапии, показано многочисленными исследованиями, что привыкание и зависимость к ним формируются гораздо медленнее, чем к агонистам [12,70,84]. Соотношение анальгетической и налоксоноподобной активности в группе агонистов-антагонистов варьирует в значительных пределах [94,101]. Так, бупренорфин (темгесик) превосходит по анальгетической активности морфин в 30 раз, циклазоцин в 15 раз, буторфанол (стадол) в 3,5 раза. Налоксоноподобная активность этих препаратов составляет соответственно 50%, 75%о и 10% от активности налоксона. Пентазоцин (фортрал, талвин) и трамадол (трамал) в этом плане примерно равны (около 20% от активности морфина и около 4-5% от активности налоксона) [4,41,84,106].
Наиболее выраженной налоксоноподобной активностью среди препаратов этой группы обладает налорфин (N-аллилнорморфин), который был синтезирован в 1942 г [80,95]. Налорфин явился первым препаратом, который блокирует почти все эффекты морфина, хотя и сам обладает значительной анальгетической активностью. По современным данным, такой эффект налорфина обусловлен тем, что он одновременно блокирует мю-рецепторы опиатов и стимулирует каппа-рецепторы [38,62,95].
В начале 60-х годов был синтезирован циклазоцин препарат, который примерно в 5 раз превосходит налорфин по антагонистической активности и обладает выраженной анальгетической активностью (примерно в 15-20 раз активнее морфина). Циклазоцин, так же, как и налорфин, блокирует мю-опиатные рецепторы и действует как агонист на каппа-рецепторы. Сходство в механизме действия налорфина и циклазоцина, очевидно, обусловило и сходство вызываемых ими побочных эффектов. Считается, что стимуляция каппа-рецепторов связана с развитием дисфории и психото-миметического эффекта. Именно эти побочные эффекты наиболее выражены у налорфина и циклазоцина, что существенно ограничивает их применение в клинике [68,88].
К началу 70-х годов в клинической практике использовались несколько препаратов, обладающих в той или иной степени свойствами антагонистов опиатов. Среди них наиболее чистым антагонистом оказался налоксон, который уже был разрешен FDA для применения в качестве антидота для лечения передозировки опиатов (в том числе для устранения угнетения дыхания, вызванного введением больших доз героина у наркоманов) [98]. Налоксон является высоко активным, но коротко действующим антагонистом (при внутривенном введении 0,4 мг эффект длится от 20 до 40 минут). Налоксон плохо всасывается в желудочно-кишечном тракте и быстро метаболизируется в организме [4,41,84,90].
Примерно в то же время фирмой Эндо было синтезировано очень близкое по строению к налоксону соединение (EN 1639А), которое обладало сильным и продолжительным антагонистическим действием, но было лишено недостатков налоксона и нежелательных эффектов циклазоцина [14,16,18].
Созданный на основе этого соединения препарат, который получил впоследствии название налтрексон, обладал длительной антагонистической активностью", более 24 часов после приема 50 мг препарата. В конце 1973 года, после проведения предварительных клинических испытаний, стало очевидно, что налтрексон в наибольшей степени соответствует требованиям, предъявляемым к оптимальному антагонисту опиатов (разными авторами перечисляется от 10 до 15 таких требований). Основные требования сводятся к наличию следующих свойств [17,19,49,60]:
1) способность устранять эйфорию и анальгезию, вызываемую опиатами;
2) отсутствие свойств агониста;
3) отсутствие привыкания к антагонистическому действию препарата;
4) отсутствие выраженных побочных эффектов и токсических проявлений при длительном применении;
5) легкий путь введения (без использования инвазивных методов);
6) значительная продолжительность антагонистического действия при однократном приеме (24 и более часов). Первые клинические испытания налтрексона, посвященные преимущественно изучению зависимости между дозировкой и активностью препарата (использовались дозы от 20 до 200 мг в сутки), позволили установить, что в дозах 30-50 мг в сутки он значительно ослабляет или блокирует эффект 25 мг героина при внутривенном введении [69,76]. Проведенные впоследствии расширенные клинические испытания налтрексона на сотнях больных, в том числе двойным слепым плацебо контролируемым методом, с продолжительностью применения препарата до 100 недель в дозах от 350 до 450 мг в неделю, позволили сделать заключение о его хорошей переносимости и высокой эффективности [18,50,85,97]. На основании анализа 1005 историй болезни специалисты NIDA установили, что 584 больных (58%) оставались на лечении налтрексона месяц и более; 118 (10%) больных 6 месяцев и более. Только у 53 больных (5,3%о) налтрексон был отменен, в основном вследствие побочных эффектов со стороны ЖКТ (тошнота, боли в эпигастральной области). Из других, достаточно редких побочных эффектов налтрексона следует отметить дисфорию, гиперальгезию, несущественные изменения секреции некоторых гормонов (например, тестостерона). В последние годы появились сообщения о том, что применение налтрексона в дозах 250-300 мг в сутки (превышающих средние терапевтические дозы в 4-5 раз) может вызвать токсическое поражение печени. Важно отметить, что указанный побочный эффект приема налтрексона. в этих дозах является обратимым [10,13,77,78].
Методы определения налтрексона в биологических жидкостях
Наибольшее распространение при изучении фармакокинетики препаратов, содержащих налтрексон получил метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим и масс-селективным типами детекторов [27,52,57,96]. Кроме того, для экстракции налтрексона из биологической жидкости используется метод твердо-фазной экстракции с последующей дериватизацией.
Так Davidson A.F. с соавт. для совместного определения налтрексона и его метаболита 6-р-налтрексола в плазме крови людей использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектором. Предварительно в образцы плазмы крови добавляли карбонатный буфер. Экстракцию определяемых соединений проводили дихлормета-ном с последующей реэкстракцией 0,017 М фосфорной кислотой. Хромато-графирование осуществляли на фенильной колонке подвижной фазой, содержащей метанол и фосфорную кислоту. Количественную идентификацию проводили с помощью колориметрического электрохимического детектора. Прецизионность методики составляла менее 10%, линейная зависимость наблюдалась в диапазоне концентраций 0,25-50,0 нг/мл для налтрексона и 0,5-100 нг/мл для 6-(3-налтрексола. Содержание налтрексона и его метаболита в плазме оставалось стабильным в течение 8 месяцев при хранении ее при -20С. Данная методика была использована для изучения концентрации налтрексона и его метаболита у здоровых лиц и пациентов с алкоголизмом после перорального применения 50 мг налтрексона [34].
Garrett E.R. с соавт. также использовали метод обращено-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектором. При этом проводили определение налтрексона и 6-(3-налтрексола и их конъюгатов в плазме, крови, моче и желчи собак после внутривенного введения. В исследовании была изучена фармакокинетика, а также доказана энтерогепатическая циркуляция конъюгатов налтрексона у собак. Предел определения составил 2 нг/мл.
Reuning R.H. с соавт. для определения налтрексона использовал метод газовой хроматографии с электронным захватом. Экстракцию проводили 0,25% бутанолом в циклогексане, что позволяло максимально экстрагировать налтрексон и минимально экстрагировать эго метаболит. Использование метиленхлорида позволило повысить эффективность экстракции как налтрексона так его метаболитов. В дальнейшем использовали дериватизацию с различными агентами. Хроматографирование осуществляли на колонке OV-17. В результате вместе с налтрексоном также хорошо определялся 6-р-налтрексол. Предел обнаружения составил 0,25 нг/мл.
В своей работе Li Н. с соавт. описали изучение фармакокинетики налтрексона и его глюкуронидов у собак с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектором и добавлением налоксона в качестве внутреннего стандарта. После внутривенного введения 5 мг или перорального 10 мг налтрексона концентрация налтрексона в плазме описывалась с применением двухкамерной модели для внутривенного введения и однокамерной модели для перрорального введения. Результаты показали, что у собак налтрексон подвергается эффекту первого прохождения через печень после перорального введения.
Monti К.М. с соавт. предложили для анализа налтрексона и 6-(3-налтрексола в плазме и моче использовать газовую хроматографию с масс-спектрометрией. Предел обнаружения составил 0,1 нг/мл. Первоначально к образцам добавляли гидрофосфатный буфер и затем экстрагировали двукратно в бутил-хлорид-ацетонитрил. Затем реэкстрагировали 0,2 N серной кислотой и снова экстрагировали в бутил-хлорид-ацетонитрил. Далее проводили дериватизацию смесью 2 % метоксиамина в пиридине и пентаф-луоропропионового ангидрида.
Peh К.К. с соавт. для детектирования налтрексона в плазме крови использовали жидкостную хроматографию с амперометрическим детектором. В качестве внутреннего стандарта использовали налоксон. Экстракцию проводили смесью хлороформа и изопропанола. Подвижная фаза состояла из 0,1 М гидрофосфата натрия и ацетонитрила. Детектирование проводили при потенциале +0,95 V. Предложенный метод обладает достаточной специфичностью и чувствительностью, а предел детектирования составил 1 нг/мл. Эффективность экстракции составляла около 93 %. Калибровочная зависимость носила линейный характер в диапазоне концентраций 1,5-100 нг/мл.
Huang W. с соавт. предложили для изолирования налтрексона и 6-р-налтрексола использовать твердофазную экстракцию. При этом использовался метод газовой хроматографией с масс-спектрометрией. В качестве внутренних стандартов использовали деитериевые изотопы налтрексона и 6-(3-налтрексола. После твердофазной экстракции образцы дериватизирова-ли пентафлюоропропионовым ангидридом при комнатной температуре. Предел определения составил 0,1 нг/мл. Эффективность экстракции составляла около 80%.
Указанные методы, обладая несомненными преимуществами, в тоже время имеют ряд существенных недостатков. Так применение LC/MS или GC/MC детекторов не всегда доступно в связи с их высокой стоимостью. Электрохимический детектор отличается «капризностью», поэтому снижается воспроизводимость, а ошибка данных методик, как правило, выше [75,99]. Это относится и к использованию дериватизации [36,37,55,64].
Динамика концентрации налтрексона у крыс после введения пролонгированной формы налтрексона
Динамика индивидуальных концентраций налтрексона в крови крыс после подкожной имплантации налтрексона в виде таблеток для имплантации Продетоксон представлена на рисунках 9-Ю, а усредненные значения на рисунках 11-12.
При анализе полученных усредненных значений концентраций налтрексона отмечено, что максимальное значение его концентрации определялось на 3 день после имплантации и составляло 89+3 нг/мл. Затем концентрация налтрексона снижалась и с 5 по 30 день колебалась в интервале значений 38-22 нг/мл, а затем к 60 дню снижалась до 11+2 нг/мл. Разброс индивидуальных значений был умеренный (CV до 31%).
Индивидуальные значения концентрации налтрексона в плазме крови испытуемых после подкожной имплантации налтрексона в дозе 1,0 г в виде таблеток для имплантации Продетоксон представлены на рисунке 13 и в таблице 6. Усредненные значения представлены на рисунке 15.
При анализе полученных значений концентраций налтрексона отмечен большой разброс индивидуальных значений (CV до 75 %).
В целом как видно из представленных данных 58 человек закончили исследование. У 53 человек налтрексон все еще определялся в крови через 2 месяца после имплантации, что подтверждалось и наличием терапевтического эффекта. У 4 человек через 2 недели после имплантации препарат еще не обнаруживался в крови в достаточном количестве, что может быть связано с индивидуальными особенностями организма в месте имплантации (толщина подкожного слоя, скорость кровотока и другие).
Все пациенты удовлетворительно перенесли исследование. Местных реакций на введение препарата обнаружено не было.
Динамика равновесной концентрации метаболита налтрексона после имплантации пролонгированной формы
Индивидуальные значения концентрации 6-(3-налтрексола в плазме крови испытуемых после подкожной имплантации налтрексона в дозе 1,0 г в виде таблеток для имплантации Продетоксон представлены на рисунке 14 и в таблице 7. Усредненные значения представлены на рисунке 15.
При анализе полученных значений концентраций метаболита налтрексона отмечен большой разброс индивидуальных значений (CV до 89 %).
В целом как видно из представленных данных 58 человек закончили исследование. У всех 58 человек метаболит налтрексона все еще определялся в крови через 2 месяца после имплантации, что подтверждалось и наличием терапевтического эффекта (метаболит обладает аналогичной активностью). У 8 человек через 2 недели после имплантации метаболит еще не обнаруживался в крови в достаточном количестве, что может быть связано с индивидуальными особенностями метаболизма (активностью ферментов и изоферментов, функциональным состоянием печени и другими).
В последние годы в России катастрофически быстро увеличивается количество больных опиатной наркоманией. Только по официальным данным в нашей стране сегодня около 2,5 млн потребителей наркотиков. В этой ситуации большое значение имеет разработка эффективных методов лечения наркоманий.
Более чем 25-летний зарубежный опыт применения налтрексона для профилактики рецидивов героиновых наркоманий, свидетельствуют об эффективности и хорошей его переносимости при длительном применении.
Являясь активным конкурентным антагонистом опиатных рецепторов, налтрексон оказывает антагонистический эффект в дозах 30-50 мг в сутки, с увеличением дозы продолжительность эффекта увеличивается. После приема внутрь, налтрексон быстро всасывается из ЖКТ, а пик концентрации его в крови отмечается через час после введения. В организме налтрексон быстро метаболизируется с образованием основного активного метаболита 6-Р-налтрексола. Важной особенностью препарата является отсутствие привыкания к его антагонистическому действию в течение года и более регулярного применения.
Положительный опыт применения налтрексона описан отечественными специалистами в области наркологии - Иванец Н.Н. с соавт., Дудко Т.Н. с соавт., Полятыкин С.А. с соавт., Макаров В.В. с соавт. и другие. Их исследования показали, что налтрексон в дозе 50 мг увеличивает у больных наркоманией эйфоризирующий эффект в течение суток, отсутствие психической и физической зависимости психотропного действия, кумулятивного эффекта.
ЗАО "Феделити Капитал" совместно с АОЗТ "НПК ЭХО" разработаны таблетки пролонгированного действия для имплантации - Продетоксон. В настоящее время официально зарегистрированных и разрешенных к применению аналогов Продетоксона ни в России, ни за рубежом нет (см. Приложение, таблица 10 - препараты, содержащие налтрексон, зарегистрированные в РФ). Препарат разработан на основе специфического блока-тора опиатных рецепторов - налтрексона, который находит широкое применение в лечении героиновой наркомании. Основное преимущество препарата его введение в организм 1 раз в несколько недель, что позволяет проводить терапию не зависимо от настроения пациента.
Основной задачей в связи с предполагаемой регистрацией данного препарата являлось доказательство пролонгированного эффекта и определение сроков имплантации, что связано, в первую очередь, с концентрацией активного вещества в крови в пределах терапевтического диапазона. Учитывая, что под влиянием изофермента цитохрома Р-450 ЗА4 налтрексон превращается в метаболит 6-(3-налтрексол, обладающий аналогичной активностью, что также продлевает эффект препарата, целесообразно было проводить изучение в крови как самого налтрексона так и его метаболита.
Для определения препаратов и их метаболитов в биологических жидкостях используются различные физико-химические методы анализа. Требования, предъявляемые к методам количественного определения препаратов в биологических жидкостях с учетом специфики анализа отличаются от требований при определении в субстанциях и лекарственных формах. Используемый метод должен иметь высокую чувствительность, возможность работы с малыми объемами проб, большую специфичность и избирательность, отличаться надежностью и воспроизводимостью, универсальностью (пригодностью для анализа различных ЛС), большой производительностью и возможностью автоматизации процесса анализа.
Основное требование - чувствительность, связанное с небольшими количествами определяемых ЛС в биологических жидкостях. Метод должен быть настолько чувствительным, чтобы он позволял достоверно и точно определять в 10 раз меньшее количество, чем среднее количество вещества, всасывающееся после приема однократной дозы. Вместе с тем, метод должен быть достаточно специфичным, чтобы определять неизменившуюся часть лекарственного вещества в присутствии его метаболитов и эндогенных соединений.
