Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Растительные фенольные соединения и их источники (Обзор литературы) 10
1.1. Фармакологическая характеристика растительных фенольных соединений 10
1.2. Характеристика лекарственных растений, вошедших в состав сбора «Нефролен» 27
Глава II. Материалы и методы исследования 41
2.1. Фитохимический анализ сборов из лекарственных растений Алтая. Создание и фармакогностическое изучение сбора «Нефролен» 44
2.2. Изучение фармакологических свойств сбора «Нефролен» в экспериментах на животных 50
2.2.1. Противовоспалительное действие 50
2.2.2. Антиоксидантная активность 54
2.2.3. Влияние на функцию почек 60
2.3. Микробиологические исследования 62
Глава III. Химико-фармакологический анализ сборов из лекарственных растений Алтая 64
3.1. Содержание фенольных соединений в извлечениях из сборов... 64
3.2. Предполагаемая зависимость фармакологических свойств извлечений из сборов от содержания в них фенольных соединений 76
3.2.1. Противовоспалительное действие 76
3.2.2. Антиоксидантная активность 77
3.2.3. Противомикробные свойства 82
3.2.4. Влияние на функцию почек 83
3.3. Выводы 83
Глава IV. Разработка состава и стандартизация фитосбора «Нефролен» 85
Глава V. Фармакологические свойства сбора «Нефролен» 123
5.1. Противовоспалительное действие 123
5.2. Антиоксидантная активность 126
5.3. Влияние на функцию почек 129
5.4. Противомикробные свойства 133
5.5. Выводы 135
Глава VI. Обсуждение результатов 136
Общие выводы 145
Практические рекомендации 147
Список литературы
- Характеристика лекарственных растений, вошедших в состав сбора «Нефролен»
- Изучение фармакологических свойств сбора «Нефролен» в экспериментах на животных
- Влияние на функцию почек
- Антиоксидантная активность
Введение к работе
Актуальность темы: Лечение воспалительных заболеваний почек является актуальной проблемой современной терапии и требует поиска новых эффективных и безопасных лекарственных средств. Хорошо известно, что растительные средства, как правило, менее токсичны синтетических противовоспалительных препаратов и могут длительно применяться без каких-либо существенных побочных воздействий на организм [103]. В этом контексте перспективными для изучения и дальнейшего применения являются сборы, составленные из лекарственных растений, произрастающих на Алтае. Ранее было установлено, что водные извлечения из некоторых композиций лекарственных растений Алтая обладают противовоспалительным и противомикробньтм действием, а также влияют на процессы свободнорадикального окисления и функцию почек [41, 56, 76, 94].
Изученные сборы были созданы путем сочетания лекарственного растительного сырья с учетом его фармакологических свойств [56]. Однако такой подход далеко не всегда позволяет получить фитосборы с желаемым фармакотерапевтическим эффектом. Так, скрининговые фармакологические исследования шести сборов показали, что только один из них может быть рекомендован для углубленного изучения в качестве возможного фитосредства терапии почечной патологии [56, 93]. В связи с этим актуальной задачей является установление зависимости фармакологического действия извлечений из сборов от их химического состава, что помогло бы в дальнейшем создавать новые эффективные растительные препараты, сочетающие в себе противовоспалительные, антиоксидантные, противомикробные и диуретические свойства, на основе рационального целенаправленного подхода. Предлагаемый подход к созданию комплексных фитопрепаратов, возможно, позволит избегать скрининговых фармакологических исследований, требующих больших затрат труда и времени. Поэтому было решено исследовать химический состав изученных
5 ранее в нашей лаборатории сборов, проявивших фармакологическую активность, и, исходя из полученных результатов и химико-фармакологического анализа, составить новую активную фитокомпозицию, предназначенную для применения в комплексной терапии воспалительных заболеваний почек.
Важнейшее значение в химико-фармакологическом анализе извлечений из сборов отводилось биологически активным фенольным соединениям. Это связано с ведущей ролью фенольных соединений в противовоспалительном, антиоксид антном, противомикробном и диуретическом эффектах растений [11, 72, 193].
Цель работы: Выявить закономерности между фармакологической активностью сборов и их химическим составом и на этой основе предложить сбор, обладающий терапевтической эффективностью при воспалительных заболеваниях почек.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
Определить количественное содержание биологически активных соединений фенольной структуры в водных извлечениях из сборов лекарственных растений Алтайского края;
Выявить химико-фармакологические закономерности изученных сборов;
Разработать состав сбора из лекарственных растений Алтайского края, используя выявленные химико-фармакологические закономерности;
Определить количественное содержание фенольных соединений в водном извлечении из полученного сбора;
Провести стандартизацию предложенного сбора;
Изучить фармакологическую активность сбора и его влияние на функцию почек.
Научная новизна исследования: Впервые изучено количественное содержание фенольных соединений в водных извлечениях из сборов лекарственных растений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). При этом установлено содержание простых фенолов (арбутина, гидрохинона), фенолкарбоновых кислот (салициловой и бензойной кислот), суммы оксикоричних кислот и их отдельных представителей (кофейной и феруловой кислот), суммы флавоноидов и их представителей (рутина, кверцетина), а также суммы всех фенольных соединений в пересчете на арбутин.
Выявлена зависимость фармакологического действия извлечений из сборов от содержания в них биологически активных соединений фенольной структуры. Установлено, что фармакологическое действие извлечений из сборов зависит от содержания в них арбутина, салициловой кислоты, суммы флавоноидов, оксикоричных кислот и всех фенольных соединений.
В работе предлагается принципиально новый методологический подход к созданию комплексных фитопрепаратов для терапии почечной патологии, основанный на сочетании лекарственного растительного сырья с учетом содержания в нем арбутина, салициловой кислоты, суммы флавоноидов и оксикоричных кислот.
На основе предлагаемого подхода создан фитосбор, сочетающий в себе противовоспалительные, антиоксидантные, противомикробные и диуретические свойства; оформлена заявка на изобретение «Сбор лекарственных растений для профилактики и лечения воспалительных заболеваний мочевых путей» № 2006117461 (019008) от 22.05.2006 г. Сбору дано условное наименование «Нефролен».
Научно-практическая значимость: Получены новые сведения относительно химического состава некоторых сборов из лекарственных растений Алтая, позволяющие существенно расширить их фармакогностиче-скую характеристику.
Разработан состав фитосбора «Нефролен», обладающего противовоспалительными, антиоксидантными, противомикробными и диуретическими свойствами. Сочетание перечисленных фармакологических свойств позволяет рекомендовать данный сбор в качестве перспективного лекарственного средства для дальнейших клинических фармакологических испытаний. По результатам исследования подготовлен к рассмотрению проект фармакопейной статьи на сбор «Нефролен».
Предлагается использование установленных химико-
фармакологических закономерностей для целенаправленного создания новых сборов и фитопрепаратов, обладающих терапевтической активностью при воспалительных заболеваниях почек.
Основные положения, выносимые на защиту:
Водные извлечения из сборов лекарственных растений Алтая содержат арбутин, гидрохинон, салициловую и бензойную кислоты, флавоноиды и производные оксикоричной кислоты. Количественное содержание перечисленных фенольных соединений колеблется в широких пределах;
Фармакологическая активность извлечений из сборов зависит от количественного содержания в них арбутина, салициловой кислоты, флавоноидов и оксикоричных кислот;
Разработан состав растительного сбора «Нефролен» с учетом содержания в его компонентах арбутина, салициловой кислоты, флавоноидов и оксикоричных кислот;
Водное извлечение из полученного сбора обладает сравнительно высоким содержанием арбутина, салициловой кислоты, флавоноидов, оксикоричных кислот и суммы фенольных соединений;
Установлены морфолого-анатомические признаки и показатели доброкачественности сбора «Нефролен», которые включены в проект фармакопейной статьи;
8 6. Водное извлечение из сбора «Нефролен» обладает выраженными противовоспалительными, антиоксидантными, противомикробными и диуретическими свойствами.
Апробация материалов диссертации: Материалы диссертации
докладывались и обсуждались на научной конференции, посвященной 30-
летию фармацевтического факультета АГМУ (г. Барнаул, 2005 г), на научно-
практической конференции «Современные проблемы фармакологии и
фармации», посвященной 70-летию Новосибирской государственной
медицинской академии (г. Новосибирск, 2005 г), на международной научно-
практической конференции «Фармакология и фармакотерапия: достижения и
перспективы», посвященной 70-летию кафедры фармакологии ДГМА и 70-
летию профессора Ш. М. Омарова (г. Махачкала, 2006 г), на второй
российско-китайской международной научной конференции
«Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике» (г.
Пермь, 2006 г), на конференции «Актуальные вопросы современной
фармации и фармацевтического образования», посвященной 25-летию
фармацевтического факультета Башкирского государственного
медицинского университета (г. Уфа, 2006 г), на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (г. Барнаул, 2007 г).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе одна - в журнале, рекомендованном ВАК; оформлена заявка на изобретение № 2006117461 (019008) от 22.05.2006 г.
Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 рисунками, 16 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов,
выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы, включающего 202 источника, из них 78 иностранных авторов, и приложения.
Характеристика лекарственных растений, вошедших в состав сбора «Нефролен»
Фенольные соединения содержатся практически во всех лекарственных растениях. В данном разделе рассматриваются лекарственные растения, вошедшие в состав сбора «Нефролен». Володушка многожильчатая (Bupleurum multinerve DC.) многолетнее травянистое растение семейства зонтичных (Apiaceae) с 2-3 прямостоячими стеблями, высотой до 100 см. Прикорневые и нижние стеблевые листья с 5-7 жилками, ланцетовидные или линейно ланцетовидные, суженные к основанию в более или менее длинный черешок.
Средние и верхние стеблевые листья в 2-4 раза короче нижних, сидячие, ланцетовидные, длиннозаостренные, в нижней части яйцевиднорасширен ные, со стеблеобъемлющим основанием. Зонтики с 5-15 почти равными, дуговидно-изогнутыми лучами. Общие обертки из 2-4 неравных, продолговато-яйцевидных, заостренных листочков. Зонтички многоцветковые, с оберточками из 5-6 обратнояйцевидных желтоватых листочков. Цветки собраны по 20-30 в зонтички с пятью желтыми, загнутыми внутрь лепестками. Плоды темно-коричневые, состоящие из двух полуплодиков, с острыми, крылатыми ребрами. В ложбинках плода по одному крупному, в поперечном сечении продолговатому канальцу. Цветет володушка в июне - июле, плодоносит в августе [8, 55].
Растет володушка многожильчатая на степных лугах, открытых, нередко каменистых склонах, по опушкам и рединам лиственных и сосновых лесов, в разнотравных и высокогорных степях, на степных и альпийских лугах, а также в остепненных горных тундрах [95]. Наибольшего обилия достигает на разнотравно-злаковых степных участках с маломощными щебнистыми почвами по окраинам лиственничных и сосновых лесов [8].
Ареал володушки многожильчатой дизъюнктивный. В основном это монголо-сибирсткий вид, встречающийся за пределами Сибири лишь на Среднем и Южном Урале, а также на Среднерусской возвышенности. В Сибири володушка многожильчатая имеет разорванный ареал, состоящий из ряда участков. Распространена на Алтае (верховье рек Ак-Кем, Джело, Яссатра, Сема, Черга, Урсула, Коксы, Ануя, Песчаная, Чарыш; Абайская степь), в Саянах, Красноярском крае, Хакасии, Туве и Забайкалье [8, 47, 95]. В медицине используется надземная часть (трава) володушки многожильчатой, которую собирают во время цветения. В ней содержится до 8% флавоноидов: кверцетин, кемпферол, изорамнетин, изокверцетрин, рутин, изорамнетин-3-рутинозид и др. Кроме этого, присутствуют сапонины, алкалоиды, дубильные вещества, эфирные масла, каротин, аскорбиновая кислота [13, 66, 67, 98].
Из травы володушки многожильчатой получают препарат «Буплерин», который более чем на 90% состоит из суммы флавоноидов и обладает Р-витаминной активностью (нормализует проницаемость и прочность капилляров). Препарат рекомендован как профилактическое и лечебное средство при капилляротоксикозах, геморрагических диатезах, глазных кровоизлияниях, кровоточивости носа, десен и других органов, отеках сосудистого происхождения, нефритах [12, 67, 95]. В эксперименте на животных установлено также противовоспалительное и анальгезирующее действие Буплерина [67].
В народной медицине трава володушки многожильчатой применяется в виде настоя и отвара как слабительное и желчегонное средство [109].
В ряде районов Сибири вместе с воло душкой многожильчатой встречаются близкие ей виды володушка золотистая и володушка козелецелистная [8].
Володушка золотистая (Bupleurum aureum Hoffm.) - лесное растение с продолговатыми обратнояйцевидными прикорневыми листьями, суженными в довольно длинный черешок; стеблевые листья сидячие, туповато-заостренные, в основании с крупными ушками. Обертка состоит из крупных широкояйцевидных, неравных желтых листочков. По химическому составу отличается от володушки многожильчатой меньшим содержанием флавонов и более высоким содержанием аскорбиновой кислоты [47, 95]. Трава володушки золотистой применяется в народной медицине Сибири в виде настоя и отвара при заболеваниях печени и желчного пузыря, малярии, головных болях, а также как стимулирующее и слабительное средство [57].
Исследования сотрудников Томского медицинского института показали способность травы володушки золотистой оказывать желчегонное действие, усиливать выработку и кислотность желудочного сока. Установлена также противоопухолевая активность володушки золотистой [67, 109].
Изучение фармакологических свойств сбора «Нефролен» в экспериментах на животных
Исследование фармакологической активности сбора «Нефролен» проводили на 86 белых беспородных крысах обоего пола, массой 150 - 250 г. Животные содержались в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе и свободном доступе к воде и пище. Контрольные и подопытные животные находились в аналогичных условиях и имели примерно одинаковую исходную среднюю массу. Эвтаназию производили согласно правилам, принятым Европейской Конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986), путем дислокации шейного отдела позвонка под эфирным наркозом с одновременным забором крови. При исследовании влияния сбора на функцию почек, крысы содержались в индивидуальных клетках для сбора суточного диуреза.
Из сбора готовили отвар в соотношении 1:10 согласно методике ГФ XI издания. Отвар использовали из расчета 500 мг/кг массы тела животного в сутки. Оценку качества отвара проводили по содержанию суммы фенольных соединений в пересчете на арбутин методом ВЭЖХ по разработанной нами методике (Глава III).
Противовоспалительную активность определяли на моделях острого и хронического воспаления. В качестве модели острого экссудативного воспаления была использована методика образования воспалительного отека лапы крыс, вызванного субплантарным введением флогогенного агента каррагенина. В основе его действия лежит повреждение клеток с выделением биологически активных веществ (гистамина, серотонина, брадикинина), обусловливающих повышение капиллярной проницаемости и формирование воспалительного отека [65, 112]. В результате увеличивается объем конечности, что и является объектом наблюдения.
В течение 14 дней крысам подопытной группы с помощью зонда внутрижелудочно вводили отвар исследуемого сбора, контрольной группе -равнообъемное количество воды. После окончания длительного введения крысам, находящимся под легким эфирным наркозом, тонкой иглой под плантарный апоневроз задних конечностей вводили 0,1 мл 1% раствора каррагенина. Объем лапы определяли онкометрически с помощью плетизмометра до- и через 60, 120, 240 минут после введения флогистика. Онкометрический метод основан на измерении объема жидкости, вытесненной при погружении в нее конечности. В данном случае используются принципы волюметрии и сообщающихся сосудов [70, 184]. На рисунке 1 изображен плетизмометр, изготовленный по аналогии с описанным ранее [184].
Сосуд (1) диаметром 15 мл, в который погружалась лапа, заполняли двумя жидкостями так, чтобы ниже метки (2) на градуированной трубке, соединенной с сосудом, находился раствор хлороформа, подкрашенный Суданом III (3). Выше этой метки и до риски на сосуде находилась вода с добавкой поверхностно активного вещества (мыла). Градуированная трубка соединялась со шприцом (4), с помощью которого граница разделения двух жидкостей устанавливалась строго по метке градуированной трубки.
Лапа крысы, находящейся под легким эфирным наркозом (для расслабления мышц конечности), помещалась в сосуд так, чтобы граница галеностопного сустава строго соответствовала риске на сосуде (1). Уровень жидкости в сосуде поднимался выше риски, после чего шприцем отсасывали жидкость до тех пор, пока ее уровень не устанавливался в сосуде 1 вновь на риске. Объем вытесненной жидкости, соответствующий конечности, считывали с градуированной трубки по изменению уровня границы двух жидкостей.
Плетизмометр для определения объема конечностей крыс Обозначения: 1 - Сосуд для погружения конечности; 2 - Метка на градуированной трубке; 3 - Раствор хлороформа, подкрашенный Суданом III; 4 - Шприц, соединенный с градуированной трубкой. Контрольной группе животных на протяжении 14 дней вводили с помощью зонда равнообъемные количества воды, после чего ставили эксперимент, как описано выше. Противовоспалительную активность препаратов рассчитывали по формуле [65]: (V -V) V. где: X - степень угнетения воспаления; VK - среднее увеличение объема отечной лапы в контроле; V — среднее увеличение объема отечной лапы в опыте.
Считалось, что препарат обладает выраженной противовоспалительной активностью, если полученный результат превышал 30% [112].
Моделью хронического воспаления служила известная методика образования воспалительной гранулемы. Эта методика показательно и четко дает представление об образовании грануляционной ткани вокруг инородного тела, введенного в подкожную клетчатку крыс, воссоздавая типичную картину асептического воспалительного процесса. В ответ на вшивание инородного тела (в нашем случае стерильного хлопчатобумажного шарика известной массы) резко активируется процесс синтеза белка и образования коллагена. Давно установлено, что примерно к 7 дню процесс стабилизируется с образованием вокруг инородного тела воспалительной гранулемы, покрытой соединительной капсулой, легко отделяющейся от окружающих тканей [180].
Крысам, находившимся под эфирным наркозом, в области спины тщательно выстригали шерсть и в асептических условиях делали продольные разрезы кожи и подкожной клетчатки длиной 1-2 см.
Влияние на функцию почек
Противомикробные свойства водного извлечения из сбора «Нефролен» определяли по методике, приведенной в Изменении № 2 ГФ XI издания (раздел 3 «Определение антимикробного действия нестерильных лекарственных средств», п. 3.3.1. «Модификация метода Госфармакопеи XT») от 29.10.2001 г. Питательные среды №8 для стафилококков и синегнойной палочки и №3 для кишечной палочки готовили, как указано в ГФ XI издания. Стандартные тест-штаммы микроорганизмов были получены из Государственной Коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л. А. Тарасевича.
Из сбора получали отвар как описано выше. Затем отвар сгущали в 10 раз на водяной бане. Полученный концентрированный отвар вносили в пробирки с жидкой питательной средой в концентрациях 10%, 5%, 2,5% и 1%. После этого в каждую пробирку добавляли по 1 мл на каждые 10 мл питательной среды стандартной взвеси соответствующего тест-штамма (разведение бульонной культуры не менее чем в 1000 раз). В контрольные пробирки вместо концентрированного отвара вносили равное количество фосфатного буферного раствора с натрия хлоридом и пептоном, рН = 7,0. Посевы инкубировали при температуре 32,5 С в течение двух суток. Затем производили высевы на твердую питательную среду и после их суточной инкубации визуально оценивали наличие или отсутствие роста микроорганизмов.
В химико-фармакологическом анализе использовали полученные ранее в нашей лаборатории данные о противовоспалительной, антиоксидантной, противомикробной и диуретической активности водных извлечений из сборов лекарственных растений Алтайского края [4, 56, 94].
В фармакологическом действии большинства лекарственных растений и фитопрепаратов, полученных из них, существенную роль играют растительные фенольные соединения. С наличием именно биологически активных фенольных соединений связывают выявленные у растений противовоспалительные, антиоксидантные, противомикробные и диуретические свойства [11, 72, 87, 193]. При этом наиболее активными фенольными соединениями являются флавоноиды, фенолокислоты, в том числе оксикоричные кислоты, а также некоторые простые фенолы [48, 72, 75, 110, 113, 141, 155]. Учитывая это, для установления зависимости ранее выявленных в нашей лаборатории фармакологических свойств от химического состава, было изучено содержания некоторых биологически активных фенольных соединений в водных извлечениях из сборов, составленных из лекарственных растений Алтайского края.
Содержание фенольных соединений в водных извлечениях из сборов Фитохимическое исследование водных извлечений из сборов лекарственных растений Алтая осуществляли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «Милихром А-02».
Учитывая кислотный характер определяемых фенольных веществ, в качестве подвижной фазы (элюента) использовали 0,1% водный раствор трифторуксусной кислоты (ТФУК) - элюент А и смесь ацетонитрила с 0,1% ТФУК в соотношении 7:3 соответственно - элюент В. Градиентное соотношение элюентов А и В определяли опытным путем, добиваясь оптимального разделения и симметричности пиков всех веществ на хроматограммах. Объем анализируемой пробы составлял 2 мкл, скорость подачи элюента - 100 мкл/мин, температура колонки - 35С. Подробные условия хроматографирования анализируемых веществ приведены в таблице 1.
Схема подготовки проб для хроматографического анализа БАВ представлена на Рис. 2.
Нативные отвары использовали в качестве анализируемых проб для определения салициловой и бензойной кислот, а также суммарного количества веществ, поглощающих при длине волны 280 нм, к которым преимущественно относятся вещества фенольной структуры (далее сумма фенольных соединений).
Флавоноиды и оксикоричные кислоты являются БАВ, близкими по химическим свойствам. Обе группы веществ обладают достаточно интенсивным поглощением в длинноволновой области УФ спектра. На этом основан ряд методик прямого спектрофотометрического определения суммы оксикоричных кислот, суммы флавоноидов или общего суммарного содержания флавоноидов и оксикоричных кислот [33, 49, 50]. На этом же было основано определение общей суммы флавоноидов и оксикоричных кислот методом ВЭЖХ при длине волны X = 360 нм, которая лежит в области максимума поглощения большинства флавоноидов и является длиной волны, при которой интенсивно поглощают оксикоричные кислоты. Так, при хроматографировании равных количеств флавоноидов и оксикоричных кислот были получены пики сопоставимой величины (Рис. 3).
Антиоксидантная активность
Опираясь на результаты химико-фармакологического анализа сборов из лекарственных растений флоры Алтая, решено было составить новую рациональную композицию из лекарственных растений. При этом предполагалось создание сбора с высоким содержанием именно тех фенольных соединений, для которых была выявлена определенная фармакологическая активность. К таким соединениям относятся арбутин, салициловая кислота, флавоноиды и оксикоричные кислоты. При выборе растений учитывалось также их фармакологическое действие и наличие сырьевой базы.
Для создания высокой концентрации флавоноидов в состав сбора была введена трава володушки многожильчатой. Известно, что для этого лекарственного растительного сырья характерно значительное содержание флавоноидов (до 8%), а также наличие противовоспалительного и анальгезирующего действия [66, 67]. Качество травы володушки регламентировано требованиями ВФС 42-580-76.
Трава мелиссы лекарственной вошла в состав сбора, как лекарственное растительное сырье, содержащее оксикоричные кислоты и обладающее спазмолитическим, болеутоляющим, антиоксидантным, противомикробным и легким седативным действием [87, 139, 175]. Качество сырья регламентируется ФС 42-3645-98 и Изменениями №1 к ФС 42-3645-98 от 15.12.1999 г.
Включение в состав сбора травы тысячелистника обыкновенного определено наличием в ее химическом составе флавоноидов, салициловой и оксикоричных кислот [13, 87]. Кроме этого, известно, что трава тысячелистника обыкновенного обладает спазмолитическим, противовоспалительным и кровоостанавливающим действием [87, 168, 194]. Качество сырья регламентирует ГФ XI издания и Изменения №1 от 27.04.98 г., №2 от 16.06.99 г.
Плоды малины обыкновенной введены в состав сбора для создания высокой концентрации салициловой кислоты. Для этого лекарственного растительного сырья характерно значительное содержание салициловой, а также других органических кислот и наличие противовоспалительного и потогонного действия [89, 111]. Качество плодов малины нормируется требованиями ГФ X издания.
Кроме этого, в состав сбора «Нефролен» были включены листья грушанки круглолистной, обладающие высоким содержанием арбутина и флавоноидов [81, 87, 100]. Ранее в нашей лаборатории было показано, что водные отвары из листьев грушанки круглолистной обладают противовоспалительными, противомикробными и диуретическими свойствами [79, 80, 81]. Кроме этого, было обнаружено антиоксидантное действие указанных извлечений, что, изначально, по-видимому, связано с их прооксидантной активностью, наличие которой при длительном введении растительного препарата обеспечивает активацию защитных свойств организма к действию свободных радикалов [6]. Качество листьев грушанки круглолистной регламентировано требованиями ТУ 9198-192-21428156-04. В нашей лаборатории готовится к рассмотрению проект фармакопейной статьи на листья грушанки круглолистной.
Таким образом, был получен сбор «Нефролен» следующего состава: Сбор «Нефролен» Трава володушки многожильчатой 1 ч. Трава мелиссы лекарственной 1 ч. Трава тысячелистника обыкновенного 1 ч. Плоды малины обыкновенной 1 ч. Листья грушанки круглолистной 3 ч. Все компоненты, кроме листьев грушанки, введены в состав сбора в равном соотношении.
Относительно листьев грушанки круглолистной следует отметить, что их количество было увеличено в 3 раза по отношению к остальным компонентам сбора. Это связано с тем, что листья грушанки круглолистной содержат большие количества арбутина и флавоноидов, для которых была выявлена зависимость противовоспалительного и антиоксидантного действия сборов из лекарственных растений Алтая.
Сбор готовили из лекарственного растительного сырья, заготовленного в Павловском, Первомайском, Косихинском, Топчихинском, Тюменцевском районах Алтайского края, в НИИ садоводства имени М.А. Лисавенко, ботаническом саду АГУ, а также в окрестностях города Барнаула, и соответствующего требованиям нормативных документов (трава тысячелистника обыкновенного - ГФ XI издания, плоды малины обыкновенной - ГФ X издания, трава мелиссы лекарственной - ФС 42-3645-98, трава володушки многожильчатой - ВФС 42-580-76, листья грушанки круглолистной - ТУ 9198-192-21428156-04).
В водном отваре из полученного сбора изучали количественное содержание фенольных соединений методом ВЭЖХ по методике, описанной ранее.
Данные о количественном содержании индивидуальных фенольных соединений в отваре из сбора «Нефролен» представлены в таблице 4. Из таблицы видно, что водный отвар из исследованного сбора содержит арбутин, гидрохинон, рутин, кверцетин, кофейную, феруловую, а также бензойную и салициловую кислоты.
