Введение к работе
з
Актуальность темы. Химико-токсикологический анализ (ХТА) лекарственных средств, представляющих интерес с точки зрения потенциальной опасности для человека при острых отравлениях и преступных деяниях, достаточно трудоемкий процесс, где в качестве объектов исследования фигурируют биологические объекты (биожидкости, секреты, органы и т.п.). Основным в аналитической токсикологии является подготовка проб, включающая выделение (изолирование), очистку и концентрирование токсических соединений, правильное использование возможностей различных методов анализа, их рациональное сочетание и умение интерпретировать результаты. В этой области анализа очень большое значение имеет качество измерений, т.е. совокупность свойств, обуславливающих получение результатов с требуемыми точностными характеристиками, в необходимом виде и в установленные сроки.
Метрологическое обеспечение - это цикл мероприятий, правил, действий, направленных на получение достоверных, правильных, точных и воспроизводимых результатов измерений (анализа, контроля и т.п.). Обязательные требования Федерального закона «Об обеспечении единства измерений» предъявляются, в том числе к измерениям, которые выполняются по поручению суда, органов прокуратуры, государственных органов исполнительной власти.
В настоящее время подготовка и обоснование метрологического обеспечения проведения химико-токсикологического анализа, как в отношении живых лиц, так и в отношении экспертных исследований, имеющих судебно-химическую направленность, имеет первостепенное значение. Аналитическая служба Бюро судебно-медицинской экспертизы (Бюро СМЭ) и химико-токсикологических лабораторий (ХТЛ) крайне заинтересована в установлении и применении научных и организационных основ, технических средств, правил и норм, необходимых для достижения единства и требуемой точности измерений.
Обеспечение необходимой точности анализа при реализации аттестованных методик в испытательной лаборатории требует внедрения внутреннего контроля показателей качества результатов анализа. Жизненный цикл методики выполнения измерений позволяет сформулировать требования к современной лабораторно-информационной системе с целью автоматизации метрологических нужд аналитической лаборатории.
Местные анестетики по частоте развития лекарственных осложнений стабильно занимают одно из первых мест в связи с широким применением в медицинской практике и способностью вызывать отравления, в том числе и смертельные, сопровождающиеся негативными реакциями организма от простых форм аллергии до анафилактического шока. Неблагоприятные побочные эффекты токсического характера развиваются, как правило, на фоне повышенных концентраций препарата в крови при использовании их в дозах, превышающих рекомендуемые, при случайном попадании в сосудистое русло, при быстром введении препарата, а также при введении пациентам с медленным типом метаболизма. В Пермской фармакадемии ранее проведены исследования по разработке хроматографических методов определения лидокаина, тримекаина, артикаина и анилокаина в биообъектах . Необходимым этапом использования высокочувствительных методик анализа является их аттестация, оценка пригодности (валидация) и определение форм и методов контроля стабильности получаемых результатов при их реализации в экспертной практике.
Цель и задачи. Целью работы является разработка и оптимизация методик обнаружения и количественного определения ряда местных анестетиков, выработка методического подхода к метрологическому обеспечению проведения испытаний для целей химико-токсикологического анализа.
Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:
Оптимизировать методику изолирования местноанестезирующих средств из биожидкостей на основании изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций.
Разработать скрининговую методику определения группы местных анестетиков на основе капиллярной газо-жидкостной хроматографии для включения в схему химико-токсикологического анализа биожидкостей.
Аттестовать методику выполнения измерений (МВИ) по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в биожидкостях, провести эксперимент по оценке пригодности методики и рассчитать характеристики погрешности результатов анализа при реализации, аттестованной МВИ.
Провести сравнительную оценку требований государственных стандартов к методам проведения испытаний и оценке приемлемости методов при проведении химико-токсикологических исследований.
Определить основные направления реализации процедуры внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа для выработки рекомендаций по его метрологическому обеспечению.
Апробировать проведение внутрилабораторного контроля при проведении химико-токсикологического анализа местных анестетиков с использованием компьютерной программы «Q-Control 5.0».
Научная новизна. Разработаны условия скринингового определения 12 местноанестезирующих веществ в крови и моче на основе капиллярной газожидкостной хроматографии, установлены оптимальные температурные градиенты для разделения всех анализируемых веществ.
6 На основании изучения степени извлечения в диапазоне терапевтических и токсических концентраций оптимизирована методика изолирования местноанестезирующих средств из биожидкостей.
Разработан методический подход на основании идеологии стандарта ГОСТ Р ИСО 5725-2002 к систематизации обязательных этапов деятельности аналитической службы экспертных учреждений по обеспечению достоверности и качества проведения испытаний, к которым относится аттестация аналитических методик, оценка их пригодности в конкретной лаборатории и проведение внутрилабораторного контроля качества.
Определена последовательность процедур по оценке показателей точности методики при её разработке и аттестации, оценке показателей точности результатов анализа при реализации экспертной методики в конкретной лаборатории на примере МВИ по обнаружению и количественному определению местных анестетиков в крови и моче.
Дана оценка функции внутрилабораторного контроля качества по контролю стабильности результатов судебно-химического и химико-токсикологического анализа как стабильности метрологических характеристик измерений для обеспечения точности и сопоставимости результатов.
Обоснована необходимость автоматизации рутинной деятельности химико-токсикологических и судебно-экспертных лабораторий с помощью информационных технологий, определены технические возможности использования отдельных видов контрольных карт на основе программного обеспечения «Q-контроль 5.0» в практике химико-токсикологического анализа.
Практическая значимость. Выполненная работа позволяет принимать научно-обоснованные решения при определении форм и методов реализации требований по метрологическому обеспечению проведения судебно-
химических и хнмико-токсикологическнх исследований, способствующих повышению качества и обеспечению достоверности результатов испытаний.
Разработанные методики определения местных анестетиков в
биожидкостях на основе хроматографических методов внедрены в практику
судебно-химического отделения Пермского бюро судебно-медицинской
экспертизы (акт внедрения от 27 апреля 2009 г.), судебно-химического
отделения Тюменского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт
внедрения от 14 мая 2009 г.), химико-токсикологической лаборатории
областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической
психиатрической больницы (акт внедрения от 05 октября 2009 года).
Усовершенствованная процедура химико-токсикологического исследования
местных анестетиков в биологических жидкостях (кровь, моча) легла в
основу Новой медицинской технологии «Определение
местноанестезирующих препаратов в биожидкостях при судебно-химическом и химико-токсикологическом исследовании», принятой к рассмотрению Российским центром судебно-медицинской экспертизы.
Методические подходы к проведению аттестации методик обнаружения и количественного определения местных анестетиков в биообъектах внедрены в практику судебно-химического отделения Курганского бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 07 апреля 2009 года). Методические подходы к проведению внутрилабораторного контроля при проведении судебно-химических и химико-токсикологических исследований внедрены в работе химико-токсикологической лаборатории МУ ГКБ № 14 при построении системы менеджмента качества (акт внедрения от 16 мая 2009 г.), судебно-химического отделения Кировского областного бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 25 мая 2009 г.), химико-токсикологической лаборатории областного центра острых отравлений Свердловской областной клинической психиатрической больницы (акт внедрения от 05 октября 2009 года).
Апробация работы. Основные материалы работы доложены на межвузовской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: Итоги и перспективы. Вузы и регион» (Пермь, 2003), международной научно-практической конференции «Традиции и инновации в понимании и решении проблем инвалидности» (Пермь, 2005), научной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2006), 80-ой Всероссийской студенческой научной конференции (Казань, 2006), Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и мол. ученых «Молодежь и наука - третье тысячелетие» (Красноярск, 2006), российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА «Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств» (Пермь, 2007), Всероссийской научно - практической конференции, посвященной памяти профессора Ю.М.Кубицкого «Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований» (Москва, 2007), Российской научно-практической конференции «Современное состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения» (Пермь, 2008), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (Пермь, 2009).
Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 172 наименования (53 источника зарубежной литературы), приложения. Работа изложена на 153 страницах машинописного текста, включает 33 таблицы, 22 рисунка и 59 страниц приложения, включающего акты внедрения, документы по аттестации методик выполнения измерений, Новую медицинскую технологию,
