Введение к работе
Актуальность темы. В связи со значительным ростом числа психических заболеваний в медицинской практике растет и потребность в психотропных препаратах, в том числе в нейролептиках. Вместе с тем нейролептики при передозировке, взаимодействии с другими лекарственными средствами, злоупотреблении ими, повышенной чувствительности организма, могут привести к отравлениям.
Отравления нейролептиками, в том числе производными бензамида, антипсихотического действия прочно занимают 3-4 место среди отравлений лекарственными препаратами. В медицинской практике отравления лекарственными препаратами этой группы занимают 10-15%. Отравления у детей младшего возраста являются случайными, подростки часто применяют антипсихотические нейролептики в смесях с целью получения наркотического эффекта, так как они потенцируют действие наркотических анальгетиков, снотворных и других седативных средств.
=
одинаковая структура молекулы для всех замещенных бензамида
К нейролептикам также относится группа производных бензамида. К этой группе относятся такие лекарственные препараты – амисульприд, сульпирид и тиаприд. Структура производных бензамида представлена на рисунке 1.
Рисунок 1 – Структура молекул замещенных бензамида (амисульприд R1 - C4H7N-CH3, R2 – CH2-CH3, R3 – NH2; сульпирид R1 - C4H7N-C2H5, R2 – NH2, R3 – отсутствует; тиаприд R1 – CH2-N-C4H10, R2 – CH3, R3 – отсутствует)
В настоящее время группа производных бензамида является перспективным направлением для разработки новых лекарственных средств для целей и задач современной медицины и производится их синтез уже нескольких десятков соединений. Группы новых синтезируемых производных лежат в сфере ангиотензивного направления. Ангиотензивные лекарственные средства обладают различными побочными эффектами иногда приводящими к летальному исходу. Таким образом, группа лекарственных средств производных бензамида постоянно расширяется. На основании структурных модификаций молекулы бензамида в Башкирском государственном медицинском университете предложены 36 производных бензамида, которые в будущем будут промышленно синтезироваться и применяться в медицине.
Бесконтрольное и длительное применение производных бензамида сопровождается развитием побочных явлений. При употреблении лекарственных препаратов этой группы в больших дозах (передозировка) наблюдаются: выраженный седативный эффект; нарушение сознания (вплоть до комы); экстрапирамидальные расстройства, остановка сердца, приводящая к так называемому синдрому «внезапной смерти». В связи, с этим сульпирид и тиаприд включены в «Перечень наименований токсичных веществ, наиболее часто встречающихся при острых отравлениях» - приказ МЗ РФ №460 от 29 декабря 2000 г. «Об утверждении учетной документации токсикологического мониторинга».
Анализ отечественной и зарубежной литературы свидетельствует о том, что не были произведены систематические исследования по разработке методик изолирования, идентификации и количественного определения производных бензамида в биологических объектах. Имеются разрозненные работы по исследованию производных бензамида в области судебно-химического или химико-токсикологического анализа. В работе Е.Н. Степановой и В.В. Бажанова изложены данные по идентификации эглонила (сульпирид), содержащегося в извлечении из трупного материала, по сопоставлению его ИК-спектров поглощения с образцом сравнения. Опубликованы тезисы (Скрипниковой Н.В. с соавторами), в которых приведены подходы по судебно-химическому анализу тиаприда в трупном материале хроматографическими и спектральными методами, с установлением факта летального исхода специалистами Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области исследуемым лекарственным средством. В работе Ю.П. Калинина, Р.Г. Мансуровой и С.Л. Шашина описан способ идентификации хромато-масс-спектрометрическим методом большой группы наркотических и психотропных веществ, в том числе и производных бензамида. Также данная проблема не осталось без внимания зарубежных коллег - судебных токсикологов. Французскими экспертами научной лаборатории полиции Марселя Pok P. Rop, Marie H. Sournac, Isabelle Elie, Jolle Burle и Monique Fornaris приведен случай летального исхода сульпиридом при исследовании трупной крови методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Также полицией Европы (Франции и Великобритании) установлен факт употребления тиаприда Анри Полем водителем принцессы Дианы и который является одной из официальных версий в причине автоаварии машин Дианы «Мерседес» и «Фиат Уно» папарацци Джеймса Андансона, в которой погибли принцесса и Доди Аль-Файед.
Отсутствуют данные о систематическом подходе к исследованию группы нейролептиков производных бензамида и их дифференциация между собой в условиях проведения судебно-химического и химико-токсикологического исследования.
Судебно-химическое и судебно-медицинское исследование нейролептиков производных бензамида позволит точно установить факт интоксикации и смертельного отравления вышеуказанными лекарственными средствами, а химико-токсикологический анализ, в том числе в области аналитической токсикологии, таких средств позволяет своевременно диагностировать отравления (острое, хроническое) и является одним из способов борьбы с наркоманией, токсикоманией, так как клиническая картина течения отравлений, результаты патологоанатомических, гистологических и других исследований не позволяют установить и дифференцировать отравления соединениями относящиеся к психотропным лекарственным средствам производным бензамида. Для этого необходима разработка и проведение судебно-химических и химико-токсикологических исследований биологического и трупного на наличие этих соединений для целей и задач судебно-химической практики.
Цель работы. По итогам настоящего комплексного исследования разработать методологический подход в плане систематического анализа к изолированию, обнаружению и количественному определению амисульприда, сульпирида и тиаприда для проведения анализа с использованием современных физико-химических методов.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
установить на основании социологических и медицинских исследований частоту использования в медицинской практике нейролептиков производных бензамида, частоту злоупотреблений пациентами, как часто и какие побочные эффекты встречаются и с какими препаратами других групп они совместно применяются;
предложить на основе практических результатов и теоретического обоснования рекомендации к выбору биологических объектов исследования;
разработать методологический подход к стадии пробоподготовки и изолированию производных бензамида, основываясь на результатах практических исследований и теоретических обоснований;
разработать методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда на стадии качественного определения в извлечениях из биологических жидкостей и тканей трупов;
разработать методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда на стадии количественного определения в извлечениях из биологических жидкостей и объектов;
предложить на основе результатов исследований методологический системный подход к общей схеме судебно-химического и химико-токсикологического анализа данных лекарственных средств, так как клиническая картина течения отравлений, результаты патологоанатомических, гистологических и других исследований не позволяют установить и дифференцировать отравления нейролептиками производными бензамида.
Научная новизна и теоретическая значимость работы. На основании полученных результатов настоящего исследования, их систематизации и анализа предложен методологический подход к систематическому анализу амисульприда, сульпирида и тиаприда для судебно-химического и химико-токсикологического анализа. Впервые теоретически обоснованы условия экстракции производных бензамида из водных растворов (значение рН среды, природа органического растворителя, присутствие электролита, продолжительность экстракции).
Впервые на основе теоретических и практических обоснований рекомендованы в порядке приоритета биологические объекты.
Установлены оптимальные условия изолирования и разработаны методики для всей группы нейролептиков производных бензамида для изолирования из биологических объектов.
Впервые предложен коэффициент для расчетов ориентировочного истинного содержания исследуемых веществ в биологических жидкостях и объектах.
Впервые предложен методологический подход к судебно-химическому и химико-токсикологическому исследованию всей группы нейролептиков производных бензамида, применяющихся в настоящее время в медицинской практике.
Предложены условия идентификации амисульприда, сульпирида и тиаприда в извлечениях из биологических жидкостей и объектов и их последующая дифференциация между собой различными химическими методами - хромогенными и микрокристаллоскопическими реакциями, физико-химическими методами анализа - тонкослойной хроматографией, газожидкостной, высокоэффективной жидкостной хроматографией, оптическими методами (УФ-, ИК-спектрофотометрии), а также при использовании современного метода хромато-масс-спектрометрии. Также разработаны условия количественного определения современными физико-химическими методами для всей группы нейролептиков производных бензамида.
Установлена степень токсичности для изученных нейролептиков группы производных бензамида, дозы ЛД50 и ЛД100 при пероральном введении мышам. Впервые описана картина интоксикации производными бензамида на животных.
Впервые экспериментальными методами установлены рекомендации к выбору внутренних органов в качестве биологических объектов при проведении судебно-химического исследования на производные бензамида.
Практическая значимость работы. Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены методики изолирования, идентификации и количественного определения группы нейролептиков производных бензамида (амисульприд, сульпирид и тиаприд) в биологических жидкостях (кровь, моча, желчь, слюна) и трупном материале (печень), которые позволили разработать методологический системный подход к исследованию данной группы лекарственных средств при проведении судебно-химического и химико-токсикологического анализа.
Использование данных схем анализа производных бензамида позволяет диагностировать острые отравления ими в плане оказания своевременной помощи пострадавшим или установить факт отравления при интоксикации и летальном исходе.
Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке новой медицинской технологии, методических рекомендациях, монографии «Судебно-медицинская (химическая) оценка нейролептиков», а также легли в основу цикла лекций для ординаторов ФГБУ РЦ СМЭ Минздравсоцразвития РФ по теме «Судебно-медицинская диагностика отравлений» и использованы в подготовке монографии «Судебная медицина» раздел «Химическая травма».
Материалы внедрения. По результатам проведенных экспериментальных исследований и теоретически обоснованных и разработанных методик изолирования производных бензамида из биологических объектов, их идентификации и количественного определения составлены новые медицинские технологии. На наиболее распространенный нейролептик группы производных бензамида – тиаприд получено разрешение к применению новой медицинской технологии (ФС №2009/057 от 31.03.2009) - «Определение тиаприда в биологических объектах при проведении химико-токсикологического и судебно-химического анализа», разработаны и опубликованы Методические рекомендации – «Определение нейролептиков производных бензамида (амисульприда, сульпирида и тиаприда) при проведении судебно-химического и химико-токсикологического исследований» (от 02.02.2012г.).
Результаты разработанного методологического подхода к судебно-химическому и химико-токсикологическому исследованию нейролептиков производных бензамида внедрены в учебный процесс цикла лекций для ординаторов ФГБУ РЦ СМЭ Минздравсоцразвития РФ по теме «Судебно-медицинская диагностика отравлений» и в практику работы судебно-химического отделения ФГБУ РЦ СМЭ Минздравсоцразвития РФ.
По материалам диссертационного исследования опубликована монография «Судебно-медицинская (химическая) оценка нейролептиков» (Москва, 2012). Также подготовлена монография «Судебная медицина» раздел «Химическая травма» и сдана ответственному за издание заведующему кафедрой судебной медицины Первого Московского Государственного Медицинского Университета им. И.М. Сеченова, член-корр. РАМН, профессору Ю.И. Пиголкину.
Положения, выдвигаемые на защиту:
Результаты изучения актуальности разработки методологии химико-токсикологического и судебно-химического определения нейролептиков производных бензамида в современное время и реальных условиях.
Данные по изучению токсичности нейролептиков группы производных бензамида, установлению некоторых фармакокинетических показателей, рекомендации по целесообразности исследования органов для целей и задач судебно-химического и химико-токсикологического анализа на амисульприд, сульпирид и тиаприд в качестве биологических объектов.
Результаты теоретического и экспериментального обоснования условий экстракции нейролептиков производных бензамида из водных растворов с учетом влияния следующих факторов: значения рН среды, природы органического растворителя, присутствия электролита и времени экстракции.
Результаты разработки методик пробоподготовки биологических жидкостей (кровь, моча, желчь, слюна) и трупного материала (печень) для изолирования амисульприда, сульпирида и тиаприда.
Результаты экспериментальных исследований по разработке методик идентификации и количественного определения амисульприда, сульпирида и тиаприда в извлечениях из биологических жидкостей и тканей трупа с использованием различных физико-химических методов анализа.
Схема и принципы методологии химико-токсикологического и судебно-химического определения нейролептиков производных бензамида.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 75-летию Российского центра судебно-медицинской экспертизы «Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики на современном этапе» (г.Москва, 2006г.); Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований» (г.Москва, 2007г.); 15-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г.Москва, 2008г.); научно-практической конференции «Материалы Всероссийского совещания судебно-медицинских экспертов по применению правил и медицинских критериев определения степени тяжести вреда, причиненного здоровью человека» (г.Москва, 2008г.); 16-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г.Москва, 2009г.); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы теории и практики судебно-химической экспертизы» (г.Санкт-Петербург, 2009г); Всероссийской научно-практической конференции «О проблемных вопросах в организации производства судебно-медицинских экспертиз» (г.Москва, 2009г.); в виде стендового доклада на 48-й Ежегодной конференции Международной Ассоциации Судебных Токсикологов (TIAFT) (Германия, г.Бонн, 2010г.); 18-ом Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г.Москва, 2011г.); Научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы судебно-медицинской экспертизы» (г.Москва, 2012г.); II Международной научной конференции «Наука в современном обществе» (г.Ставрополь, 2012г.).
Разработанные методики апробированы на базе химико-токсикологической лаборатории Республиканского наркологического диспансера РСО-Алания в г.Владикавказе; судебно-химического отделения Бюро судебно-медицинской экспертизы Ставропольского края в г.Ставрополь и в химико-токсикологической лаборатории в г.Ростов-на-Дону.
Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. Автором лично проведены химические, физико-химические и фармакологические эксперименты. В выполненной работе автором непосредственно осуществлена аналитическая и статистическая обработка полученных результатов, представлено научное обоснование с выводами и практическая реализация. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрения в практику.
Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ Федерального государственного бюджетного учреждения "Российский центр судебно-медицинской экспертизы" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации в рамках НИР Лаборатории судебно-химических и химико-токсикологических исследований «Совершенствование методов судебно-химического исследования наркотических и психотропных веществ в биологическом и трупном материале» (номер гос. регистрации №01200961795).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 научных работ, в том числе 10 – в изданиях, входящих в перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендуемых ВАК, 1 монография, 1 новая медицинская технология, 1 методическая рекомендация.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 326 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (6 глав), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержится 102 таблицы, 58 рисунков. Список цитируемой литературы включает 367 источников, из них – 105 на иностранных языках.
