Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 20
1.1. Современное состояние фармацевтического производства лекарственных средств и перспективы развития отрасли на период до 2020 года 20
1.2. Лекарственные средства и биологически активные добавки к пище из сырья растительного происхождения: номенклатура, состав, применение 26
1.3. Стандартизация и контроль качества лекарственных средств и биологически активных добавок к пище из сырья растительного происхождения на фармацевтическом производстве 27
1.3.1. Стандартизация и контроль качества лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов на фармацевтическом производстве 27
1.3.2. Стандартизация и контроль качества биологически активных добавок к пище на фармацевтическом производстве 62
1.4. Аттестация аналитических методов на фармацевтическом производстве 62
Выводы к ГЛАВЕ 1 69
Экспериментальная часть 71
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 71
2.1. Объекты исследования 71
2.2. Реактивы 73
2.3. Стандартные вещества 74
2.4. Оборудование и посуда 75
2.5. Приготовление растворов 77
2.6. Методы исследования 80
2.7. Определение удельного показателя поглощения 82
2.8. Резано-прессованное сырье 83
2.9. Статистическая обработка результатов анализа 85
ГЛАВА 3. Совершенствование характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья различных морфологических групп и лекарственных сборов 86
3.1. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Цветки" 87
3.1.1. ТСХ-анализ Пижмы цветков 87
3.2. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Листья" 91
3.2.1. Разработка и дополнение раздела "Микроскопия" 91
3.2.1.1. Микроскопическое исследование Крапивы листьев резано-прессованных 91
3.2.1.2. Дополнения к разделу "Микроскопия" для Мяты перечной листьев 102
3.2.2. Разработка раздела "Качественные реакции" 104
3.2.2.1. ТСХ-анализ Крапивы листьев 104
3.2.2.2. ТСХ-анализ Мяты перечной листьев 107
3.2.2.3. ТСХ-анализ Шалфея листьев 110
3.3. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологических групп "Травы" и "Побеги" 112
3.3.1. Разработка раздела "Микроскопия" 112
3.3.1.1. Дополнения к разделу "Микроскопия" для Донника травы 112
3.3.1.2. Дополнения к разделу "Микроскопия" для Золототысячника травы114
3.3.1.3. Дополнения к разделу "Микроскопия" для Мелиссы лекарственной травы 116
3.3.1.4. Дополнения к разделу "Микроскопия" для Чистотела травы 117
3.3.1.5. Дополнения к разделу "Микроскопия" для Багульника болотного побегов 118
3.3.2. Разработка раздела "Качественные реакции" 121
3.3.2.1. ТСХ-анализ Золототысячника травы 121
3.3.2.2. ТСХ-анализ Мелиссы лекарственной травы 124
3.3.2.3. ТСХ-анализ Тысячелистника травы 127
3.3.2.4. ТСХ-анализ Фиалки травы 129
3.3.2.5. ТСХ-анализ Чабреца травы 132
3.3.2.6. ТСХ-анализ Черники обыкновенной побегов 135
3.4. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Кора" 138
3.4.1. ТСХ-анализ Дуба коры 138
3.5. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологических групп "Плоды", "Соплодия" и др 140
3.5.1. Разработка раздела "Микроскопия" 140
3.5.1.1. Микроскопическое исследование Рябины плодов 140
3.5.2. Разработка раздела "Качественные реакции" 141
3.5.2.1. ТСХ-анализ Боярышника плодов 141
3.5.2.2. ТСХ-анализ Рябины плодов 145
3.5.2.3. ТСХ-анализ Фасоли обыкновенной плодов створок 148
3.5.2.4. ТСХ-анализ Хмеля соплодий 151
3.5.2.5. Определение характеристики спектра для Чаги 153
3.6. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы" 156
3.6.1. ТСХ-анализ Бадана корневища 156
3.6.2. ТСХ-анализ Кровохлебки корневищ и корней 159
3.6.3. ТСХ-анализ Лапчатки корневищ 161
3.7. ТСХ-анализ лекарственных сборов 164
3.7.1. ТСХ-анализ сбора Грудного №4 165
3.7.2. ТСХ-анализ сбора Желудочно-кишечного 172
3.7.3. ТСХ-анализ сбора Желчегонного № 3 175
3.7.4. ТСХ-анализ сбора Противогеморроидального 181
Выводы по ГЛАВЕ 3 185
ГЛАВА 4. Разработка и совершенствование раздела "количественное определение" для лекарственного растительного сырья различных морфологических групп и лекарственных сборов 187
4.1. Разработка методик количественного определения БАВ для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Цветки" 187
4.1.1. Количественное определение суммы флавоноидов в Ноготков цветках 187
4.1.2. Количественное определение суммы флавоноидов в Пижмы цветках .. 195
4.2. Разработка методик количественного определения БАВ для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Листья" 202
4.2.1. Количественное определение суммы флавоноидов в Крапивы листьях 202
4.3. Разработка методик количественного определения БАВ для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Травы" 211
4.3.1. Количественное определение суммы флавоноидов в Душицы траве 211
4.3.2. Количественное определение суммы ксантонов в Золототысячника траве 219
4.3.3. Количественное определение суммы флавоноидов в Пастушьей сумки траве 227
4.3.4. Количественное определение суммы флавоноидов в Тысячелистника траве 234
4.3.5. Количественное определение суммы флавоноидов в Хвоща полевого траве 242
4.3.6. Количественное определение суммы флавоноидов в Череды траве 250
4.4. Разработка методик количественного определения БАВ для лекарственного
растительного сырья морфологической группы "Кора" 258
4.4.1. Количественное определение суммы оксиантрахинонов в Крушины коре
258
4.5. Разработка методик количественного определения БАВ для лекарственного растительного сырья морфологических групп "Плоды" и др 264
4.5.1. Количественное определение суммы флавоноидов в Кукурузы столбиках с рыльцами 264
4.5.2. Количественное определение суммы органических кислот в Рябины плодах 271
4.5.3. Количественное определение суммы фенольных соединений в Чаге... 275
4.6. Разработка методик количественного определения БАВ для лекарственных сборов 281
4.6.1. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе Желудочно-кишечном 281
4.6.2. Количественное определение суммы оксиантрахинонов в сборе Противогеморроидальном 286
Выводы к ГЛАВЕ 4 294
ГЛАВА 5. Оценка качества биологически активных добавок к пище (бад) на основе лекарственного растительного сырья 296
5.1. Разработка методик качественного анализа БАВ в БАД 296
5.1.1. Разработка методик оценки подлинности БАД "Фиточай "Щедрость
природы" "Мальвовый"" 296
5.1.2. ТСХ-анализ БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"" 300
5.2. Разработка методик количественного определения БАВ в БАД 303
5.2.1. Количественное определение суммы антоцианов в БАД Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" 303
5.2.2. Количественное определение суммы флавоноидов в БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"" 307
Выводы к главе 5 314
Общие выводы 316
Список литературы
- Лекарственные средства и биологически активные добавки к пище из сырья растительного происхождения: номенклатура, состав, применение
- Приготовление растворов
- Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Листья"
- Количественное определение суммы флавоноидов в Пижмы цветках
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Требования Всемирной организации здравоохранения относительно формирования современной стратегии в области лекарственных средств, а также Федеральная целевая программа "Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу" диктуют необходимость разработки и внедрения современных стандартов качества лекарственных средств, а также необходимость постоянного совершенствования системы государственной стандартизации и контроля на всех этапах их обращения. Так как одной из целей стандартизации является повышение уровня безопасности жизни и здоровья граждан, а в дополнение к этому - обеспечение конкурентоспособности и качества продукции и создание систем обеспечения качества продукции в соответствии с Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. №184-ФЗ "О техническом регулировании", совершенствование стандартизации и контроля качества лекарственных средств на фармацевтических производствах остается актуальным направлением отрасли.
По данным ВОЗ, около 80 % населения земного шара используют лекарственные средства растительного происхождения. Мировой объем продаж лекарственных средств на растительной основе в 2011 г. оценивался в 26 млрд. долларов. В нашей стране лекарственные растительные препараты (ЛРП) очень популярны среди населения - около 60 % пациентов предпочитают использовать именно такие препараты, а около 65 % всех лекарственных средств производятся с использованием биологически активных веществ (БАВ), выделенных из лекарственного растительного сырья (ЛРС). Безусловно, растительные препараты не могут полностью заменить терапию синтетическими препаратами, но за счет их этиопатогенетического действия, легкости индивидуального подхода к больному, возможности длительного приема, высокой степени их безопасности при достаточной эффективности, а также за счет доступности и относительной дешевизны ЛРП находят применение при различных патологиях.
Стандартизация ЛРС и ЛРП является гарантией их качества и обеспечивает эффективность и безопасность их применения. Вопросы стандартизации и контроля качества ЛРС и ЛРП, производимых в России, продолжают оставаться весьма актуальными, так как сохраняется тенденция увеличения отечественных лекарственных средств растительного происхождения при одновременном значительном увеличении количества форм потребительских упаковок фасованной продукции (пачки, брикеты, пакеты, фильтр-пакеты). В медицинскую практику вводятся новые виды лекарственных растений и новые виды ЛРС из ранее известных представителей отечественной и зарубежной флоры, а также препараты на их основе.
Сегодня актуальными являются исследования, направленные на создание стандартов качества (ФСП, ФС, НД) на ЛРС и ЛРП, гармонизированных с требованиями ведущих мировых фармакопей и Директив Европейского союза, так как в соответствии с Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. №184-ФЗ "О техническом регулировании" стандартизация должна осуществляется в соответствии с принципами применения международного стандарта, как основы разработки национального стандарта и обеспечения условий для единообразного применения стандартов.
Повышение уровня стандартизации продукции на основе растительного сырья (ЛРП, биологически активные добавки к пище (БАД)), производимой на фармацевтическом производстве - это не только обеспечение соответствия производства надлежащей практике (организации) производства (GMP), но и этап в подготовке частных фармакопейных статей для Государственной Фармакопеи (ГФ) XII издания, так как действующая ГФ XI издания устарела - во многих ФС отсутствуют такие разделы как "Микроскопия", "Качественные реакции", "Хроматография", "УФ-спектр", "Количественное определение" и др., и другая НД, отвечающая современным международным требованиям.
Цель исследования.
Теоретическое и экспериментальное обоснование методологии стандартизации и контроля качества средств растительного происхождения в фармацевтическом производстве, как основа создания разделов фармакопейных статей предприятия (ФСП) и нормативных документов (НД), гармонизированных с ведущими зарубежными фармакопеями и требованиями Директив Европейского союза, а также как этап в подготовке частных фармакопейных статей для ГФ XII издания.
Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:
1. Провести изучение уровня требований к качеству отечественной и зарубежной нормативной документации на ЛРС, выявить тенденции развития методов оценки его качества и на основе информационно-аналитических исследований предложить методологические подходы к оценке качества растительного сырья в соответствии с современным уровнем требований.
2. Используя системный подход к оценке качества средств растительного происхождения разработать новые и усовершенствовать имеющиеся методы контроля качества ЛРС и лекарственных сборов с целью включения их в стандарты качества фармацевтической продукции.
3. Гармонизировать национальные подходы к валидации аналитических методик с требованиями GMP.
4. Разработать новые и усовершенствовать имеющиеся методы контроля качества БАД с целью включения их в нормативную документацию (НД) на данный вид продукции.
Научная новизна и теоретическая значимость.
На базе информационно-аналитических исследований отечественной и зарубежной нормативной документации, а также научных публикаций на ЛРС предложен единый методологический и унифицированный подход для разработки и совершенствования методов контроля качества средств растительного происхождения, основанный на изучении морфолого-анатомических особенностей строения различных морфологических групп ЛРС, исследовании химического состава БАВ и совершенствовании методик определения содержания различных групп БАВ, используя современные и объективные методы анализа и установление норм, характеризующих качество ЛРС.
В целях гармонизации национальных стандартов с требованиями ведущих зарубежных фармакопей и Директивами Европейского союза впервые предложена методология разработки характеристик подлинности и раздела "Количественное определение" для ЛРС, ЛРП и БАД на основе валидации аналитических методик с использованием критериев: специфичность, линейность, правильность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и устойчивость (пригодность хроматографических систем), в зависимости от объекта исследования и метода определения.
С учетом современных требований разработаны критерии оценки подлинности, показатели, нормы и методы контроля качества для 28 видов ЛРС и ЛРП (сырье Багульника болотного, Бадана, Боярышника, Донника, Дуба, Душицы, Золототысячника, Крапивы, Крушины, Кровохлебки, Кукурузы, Лапчатки, Мелиссы лекарственной, Мяты перечной, Ноготков, Пастушьей сумки, Пижмы, Рябины, Тысячелистника, Фасоли обыкновенной, Фиалки, Хвоща полевого, Хмеля, Чабреца, Чаги, Череды, Черники обыкновенной и Шалфея), а также для 4 лекарственных сборов: Грудной сбор № 4, сбор Желудочно-кишечный, сбор Желчегонный №3 и сбор Противогеморроидальный.
Предложены характеристики подлинности, показатели, нормы и методы контроля качества для БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"", производимых на фармацевтическом предприятии.
Практическая значимость и внедрение результатов исследований в практику.
С помощью разработанного методологического и унифицированного подхода с учетом гармонизации национальных подходов к валидации аналитических методик с требованиями GMP, используя современные и объективные методы анализа:
разработан и дополнен раздел "Микроскопия" для 8 видов ЛРС разных способов переработки - Крапивы листьев, Мяты перечной листьев, Донника травы, Золототысячника травы, Мелиссы лекарственной травы, Чистотела травы, Багульника болотного побегов, Рябины плодов. Показана возможность идентификации резано-прессованного сырья Крапивы и Мяты перечной по основным анатомо-диагностическим признакам. Результаты исследований были включены в 13 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него;
предложены ТСХ-методики для 18 видов ЛРС - Пижмы цветков, Крапивы листьев, Мяты перечной листьев, Шалфея листьев, Золототысячника травы, Мелиссы лекарственной травы, Тысячелистника травы, Фиалки травы, Чабреца травы, Черники обыкновенной побегов, Дуба коры, Боярышника плодов, Рябины плодов, Фасоли обыкновенной плодов створок, Хмеля соплодий, Бадана корневищ, Кровохлебки корневищ и корней, Лапчатки корневищ; для 4 лекарственных сборов (сбора Грудного №4, сбора Желудочно-кишечного, сбора Желчегонного № 3 и сбора Противогеморроидального), позволяющие идентифицировать компоненты сбора. Для сырья Чаги предложено проводить определение подлинности по спектральным характеристикам (УФ-спектр). Результаты исследований были включены в 30 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него и в 8 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на лекарственные сборы;
разработаны показатели, нормы и методы контроля БАВ для 13 видов ЛРС - Ноготков цветков, Пижмы цветков, Крапивы листьев, Душицы травы, Золототысячника травы, Пастушьей сумке травы, Тысячелистника травы, Хвоща полевого травы, Череды травы, Крушины коры, Кукурузы столбиков с рыльцами, Рябины плодов, Чаги; для 1 лекарственного сбора - сбора Противогеморроидального; апробирован метод контроля БАВ для сбора Желудочно-кишечного, которые были включены в 23 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него, а также в 3 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на лекарственные сборы;
определены характеристики подлинности, а также показатели, нормы и методы контроля БАВ для 2 БАД - БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и для БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"", которые включены в 2 ТУ ОАО «Красногорсклексредства» на данные биодобавки.
Результаты проведенных исследований были включены в 59 НД (57 ФСП и 2 ТУ), которые используются для контроля качества промышленной продукции выпускаемой фармацевтическим предприятием ОАО "Красногорсклексредства".
Апробация работы.
Материалы диссертации обсуждены на съездах: Международный съезд VIII, IX, X, XII, XIII, XIV, XV "Фитофарм 2004", "Фитофарм 2005", "Фитофарм 2006", "Фитофарм 2008", "Фитофарм 2009", "Фитофарм 2010", "Фитофарм 2011", 2004, 2005, 2006, 2008, 2009, 2010, 2011 гг.; IX Международный съезд и конференция молодых ученых Европейского Фитохимического Общества "Растение и Здоровье" (Санкт-Петербург, 2005); I Съезд натуротерапевтов России (Москва, 2009); II Российский Фитотерапевтический съезд (Москва, 2010), конгрессах: ХI, ХIV, ХV, ХVI, ХVII, ХVIII Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", 2004, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011; Х Международный конгресс "Здоровье и образование в XXI веке" (Москва, 2009); VII Международный конгресс "Традиционная медицина" (Москва, 2009), форумах: Международный форум "Интегративная медицина - 2008" (Москва, 2008); "Интегративная медицина - 2009" (Москва, 2009), на научно-практических конференциях: Региональная научно-практическая конференция, посвященная 40-летию фармацевтического факультета КГМУ: Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики (Курск, 2006); IV, V Российская научно-практическая конференция: Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов (Москва, 2007, 2009); Научно-практическая конференция "Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации" (Воронеж, 2008); I Всероссийская конференция "Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции" (Москва, 2009), в научных программах выставок: XIII, XIV Международная специализированная выставка "Аптека 2006" (Москва, 2006); "Аптека 2007" (Москва, 2007).
Конкретное участие автора в получении научных результатов.
Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов (95% общего объема). В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведено планирование исследований, выполнены экспериментально-аналитические исследования по разработке и валидации аналитических методик, осуществлена статистическая обработка полученных результатов, обобщены полученные результаты. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии и выполнении всех этапов исследования: от постановки задач и их реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и их внедрения в практику.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности.
Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2, 3 и 6 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Публикации.
Основное содержание диссертации представлено в 92 публикациях, из них 21 статья в изданиях, рекомендованных ВАК.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова "Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований" (Рег. номер 01.2.00606352).
Положения, выносимые на защиту:
Разработка методологических подходов к стандартизации и контролю качества средств растительного происхождения, гармонизированных с международными стандартами.
Результаты изучения анатомо-диагностических признаков 8 видов ЛРС разных способов переработки (цельного, измельченного, резано-прессованного сырья и сырья в виде порошка).
Результаты изучения характеристик подлинности 18 видов ЛРС, 4 лекарственных сборов и 2 БАД с использованием метода ТСХ, а также изучения подлинности 1 вида ЛРС на основании спектральных характеристик.
Результаты разработки показателей, норм и методов контроля БАВ для 13 видов ЛРС, 2 лекарственных сборов и 2 БАД.
Результаты валидации разработанных аналитических методик (26 методик оценки характеристик подлинности ЛРС и 17 методик количественного определения БАВ).
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 349 страницах машинописного текста, содержит 141 таблицу и 163 рисунка и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственно экспериментальных исследований, общих выводов и приложения. Список литературы содержит 475 источников, из них 203 на иностранном языке.
Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, определены научная новизна и практическая значимость работы.
В первой главе рассмотрено современное состояние фармацевтического производства лекарственных средств и перспективы развития отрасли на период до 2020 года. Кроме того, проанализированы вопросы стандартизации и контроля качества лекарственных средств и БАД из сырья растительного происхождения на фармацевтическом производстве. Предложен методологический подход для разработки и совершенствования методов контроля качества средств растительного происхождения на фармацевтических предприятиях с учетом требований ведущих зарубежных фармакопей и современных национальных требований. Во второй главе представлена характеристика объектов исследования - ЛРС, лекарственных сборов и БАД, приведено краткое описание методов анализа, приборов и реактивов, использованных в работе, а также статистической обработки результатов анализа. В третьей главе приведены результаты исследований по совершенствованию характеристик подлинности для ЛРС различных морфологических групп и лекарственных сборов. Четвертая глава посвящена разработке и совершенствованию раздела "Количественное определение" для ЛРС различных морфологических групп и лекарственных сборов. В пятой главе освящены результаты исследований по разработке показателей качества БАД.
Лекарственные средства и биологически активные добавки к пище из сырья растительного происхождения: номенклатура, состав, применение
Анализ текущего состояния отечественной фармацевтической и медицинской промышленности указывает на ее отставание от аналогичных отраслей экономически развитых стран по номенклатуре выпускаемой продукции. В результате чего в структуре потребления ежегодно растет доля импортных лекарственных препаратов, медицинской техники и изделий медицинского назначения [173].
В настоящее время в целях реализации государственной политики в сфере разработки и производства лекарственных средств, медицинской техники и изделий медицинского назначения Правительством Российской Федерации утверждена федеральная целевая программа "Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу" [168]. Целью данной Программы является переход фармацевтической и медицинской промышленности на инновационную модель развития. Инновационное развитие отечественной фармацевтической и медицинской промышленности это одно из приоритетных направлений модернизации экономики Российской Федерации. Для чего необходимо решить ряд задач, в том числе и создание конкурентоспособной и экономически доступной продукции [168].
Сегодня объем потребления лекарственных препаратов, производимых в Российской Федерации, составляет не более 20 % рынка в денежном выражение и не более 65 % в натуральном. Отечественные производители лекарственных средств проигрывают в рыночной конкуренции не только крупнейшим мировым фармацевтическим корпорациям, разрабатывающим новейшие инновационные препараты, но и производителям воспроизведенных лекарственных средств и сырья для их производства преимущественно из Китая и Индии. Аналогичная ситуация сложилась на рынке медицинской техники и изделий медицинского назначения. Это приводит к тому, что, несмотря на наличие положительного эффекта от реализации государственной политики в сфере здравоохранения, продукция отече ственной фармацевтической и медицинской промышленности замещается импортной. Наблюдается тенденция снижения конкурентоспособности отечественной фармацевтической и медицинской промышленности, что отрицательно сказывается на темпах роста российской экономики в целом. Также наблюдается тенденция постоянного удорожания импортных лекарственных препаратов и медицинской техники, что затрудняет их доступность для потребителей, в особенности для социально незащищенных категорий граждан Российской Федерации. При этом технологический уровень производственных мощностей предприятий фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации не отвечает современным стандартам производства. Такая ситуация неприемлема с точки зрения национальной безопасности [168, 172, 173].
Федеральная целевая программа "Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу" призвана не только технологически перевооружить производственные мощности предприятий, а также государственных учреждений науки и образования на базе технологических инноваций, но одновременно стимулировать в Российской Федерации разработку и производство наукоемкой фармацевтической и медицинской продукции, но и поднять уровень отечественной фармацевтической и медицинской промышленности до мирового и успешно конкурировать с зарубежными производителями, как на внутреннем, так и на внешнем рынке [168].
Реализация Программы планируется осуществлять в 2011-2020 годах в два этапа [168]. На первом этапе (2011-2015 годы) планируется преодолеть существующее научно-техническое, технологическое и производственное отставание отечественной фармацевтической и медицинской промышленности, обеспечить импортоза-мещение в части производства лекарственных средств, входящих в перечень стратегически значимых лекарств, производство которых должно быть обеспечено на территории Российской Федерации, и перечень жизненно, необходимых и важнейших лекарственных препаратов, а также производства необходимых системе здравоохранения в первоочередном порядке медицинской техники и изделий медицинского назначения. В ходе реализации данного этапа Программы планируется решить следующие задачи:
На втором этапе (2016-2020 годы) предусматривается завершить переход отечественной фармацевтической и медицинской промышленности к модели устойчивого инновационного развития, обеспечение российского здравоохранения и потребительского рынка широким ассортиментом доступной и качественной продукции отечественной фармацевтической и медицинской промышленности.
На втором этапе планируется решить следующие задачи [168]: удовлетворение внутреннего спроса на лекарственные средства за счет отечественного производства на 50 % в денежном выражении, на 90 % по номенклатуре перечня стратегически значимых лекарственных средств и перечня жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов;
Реализация Программы должна способствовать укреплению основ национальной безопасности за счет удовлетворения потребностей российского здравоохранения в высокотехнологичной продукции отечественной фармацевтической и медицинской промышленности и гарантировать высокие стандарты жизнеобеспечения российских граждан в сфере здравоохранения [465].
Приготовление растворов
На начало 2008 года в отечественной фармацевтической отрасли насчитывалось около 600 предприятий, имеющих лицензии на производство лекарственных средств. При этом на долю 10 наиболее крупных заводов приходилось более 30 % всех выпускаемых в России лекарственных средств в денежном выражении [173].
Для российского рынка лекарственных растительных препаратов, в частности для лекарственных трав и сборов, в настоящее время характерна тенденция к росту. Однако объем рынка и его доля в общем объеме рынка фармацевтических препаратов на сегодняшний день выглядят довольно скромно, составляя 11-12 млн. долларов США или 0,5-1,5 %. Примечательно, что в странах Евросоюза аналогичная продукция занимает до 10 % от общего объема лекарственного рынка [369].
В настоящее время на российском рынке представлено около 100 производителей лекарственных трав и сборов. Большинство производителей имеет статус региональных, осуществляя реализацию продукции лишь в пределах своих областей, около 20 % российских производителей работают в национальном масштабе. Несмотря на относительно малую численность российских производителей лекарственных трав, и сборов, ими выпускается 80 % лекарственных растительных средств, занесенных в Государственный реестр [58].
В десятку ведущих российских фармацевтических корпораций на отечественном рынке входит ОАО "Красногорсклексредства", которое занимает первое место среди российских производителей лекарственных растительных препаратов и третье место в общем рейтинге производителей БАД [369]. На ОАО "Красногорсклексредства" на сегодняшний день осуществляется переработка лекарственного растительного сырья и производства готовых продуктов на основе лекарственного растительного сырья. Ассортимент продукции, выпускаемой предприятием, насчитывает более 160 наименований (табл. 1.2.1 и 1.2.2 в Приложении 2 к Главе 1.2).
Одной из основных задач Стратегии развития фармацевтической промышленности Российской Федерации на период до 2020 года [172] является повышение конкурентоспособности отечественной фармацевтической промышленности путем гармонизации российских стандартов по разработке, производству и контролю качества лекарственных средств с международными требованиями, для чего необходим обязательный перехода отечественных предприятий фармацевтической промышленности на стандарты идентичные международным правилам GMP, что обеспечит не только выпуск более качественной продукции для отечественного потребителя, но и ее выход на международные рынки. Российские производители ЛРП, в том числе и ОАО "Красногорсклексредства", ежегодно разрабатываются и реализуются текущий планы по внедрению GMP с целью обеспечения потребителя исключительно качественной, безопасной и эффективной продукцией. И что не маловажно эта продукция доступна всем слоям населения.
Контроль качества лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов является частью ГОСТ Р 52249-2009 "Правила производства и контроля качества лекарственных средств (GMP)" и должен осуществляться на всех этапах производства продукта (отбор проб, проведение испытаний (анализов) и оформление соответствующей документации) с описанием в соответствующих НД предприятия (стандарты предприятия, СОП, инструкции предприятия и т.п.). Основные требования к контролю качества на фармацевтическом производстве, это:
Наличие необходимых помещений и оборудования, обученного персонала, утвержденных методик по отбору проб, проверке и проведению испытаний исход ных и упаковочных материалов, промежуточной, нерасфасованной и готовой про дукции, контролю окружающей среды в соответствии с требованиями правил GMP.
Проведение отбора проб исходных и упаковочных материалов, промежуточной, нерасфасованной и готовой продукции аттестованным персоналом в соответствии с методиками, утвержденными отделом контроля качества.
Так как лекарственные растительные препараты (ЛРП), т.е. лекарственные препараты, произведенные или изготовленные из одного вида лекарственного рас 29 тигельного сырья или нескольких видов такого сырья и реализуемые в расфасованном виде во вторичной (потребительской) упаковке [230] имеют сложную природу и разнообразные характеристики, при их производстве особую роль играет контроль исходных материалов, условий хранения и переработки.
Исходными материалами при производстве ЛРП могут быть необработанные растения, растительное сырье, т.е. в основном, целое, разделенное и разрезанное растение, части растения, морских водорослей, грибов, лишайников в необработанной, обычно высушенной форме, но иногда и в свежем виде; некоторые экссудаты (выделения) из растений, которые не прошли специальную обработку, также относятся к растительному сырью [63] или промежуточные продукты, т.е. продукты, полученные путем переработки растительного сырья, например, экстракцией, перегонкой, отжимом, разделением на фракции, очисткой, концентрацией или ферментацией.
В соответствии с требованиями ГОСТ Р 52249-2009 "Правила производства и контроля качества лекарственных средств (GMP)" растительное сырье должно иметь требуемое качество и сопровождаться документацией для производителя промежуточных продуктов и лекарственных средств из растительного сырья. Поэтому Правила GMP для производства лекарственных средств из растительного сырья предполагают контроль от стадии выращивания, сбора и заготовки исходных материалов до стадии переработки в готовую продукцию, включая упаковывание готового лекарственного средства, в соответствии с нормативными документами. В Правилах GMP отмечается, что исключительно важное значение имеет контроль растительного сырья и промежуточных продуктов, используемых для производства лекарственных средств. Они должны соответствовать требованиям, установленным при государственной регистрации и указанным в Спецификации, которая содержит требования к материалам и продуктам, используемым или получаемым при производстве, и является основой для оценки качества лекарственных средств [47, 143, 147]. Стандарты качества на ЛРС и ЛРП предполагают обязательное содержание перечня показателей качества и методов контроля качества на лекарственное средство для медицинского применения [11, 54, 143]:
Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Листья"
В настоящее время в действующей НД [261] на Пижмы цветки отсутствует раздел "Качественные реакции", а в Европейской фармакопее монография на сырье пижмы не включена [391, 413, 414, 418, 450, 456]. Поэтому при разработке методики оценки подлинности Пижмы цветков методом ТСХ был учтен тот факт, что в соответствии с ГФ XI, вып.2, ст. 11 количественное определение БАВ в Пижмы цветках проводится по содержанию суммы флавоноидов и фенолкарбоновых кислот, что делает возможным проводить определение подлинности пижмы цветков по этим группам соединений.
При разработке ТСХ-методики были подобраны оптимальные условия разделения, в том числе были проанализированы подвижные фазы, широко использующиеся для идентификации фенольных соединений [355, 391, 413, 414, 416, 418, 450,456,467]:
В качестве экстрагента использовали спирт 96 %. Исследования проводили на пластинах для тонкослойной хроматографии "Сорбфил" ПТСХ-П-А (Россия) размером 100 х 100 мм. В качестве раствора сравнения был использован 0,05 % спиртовый раствор СО рутина, зона которого выполняла функцию метчика и занимала срединное положение на хроматограмме. В качестве раствора для детектирования использовали 1 % спиртовый раствор дифенилборилоксиэтиламина и 5 % спиртовый раствор полиэтиленгликоля. Поскольку в разных сериях сырья количество зон варьирует, при описании хроматограмм учитывали зоны наибольшей интенсивности.
Методика. Аналитическую пробу Пижмы цветков измельчали до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 1,0 г цветков измельченных помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 10 мл спирта 96 % и нагревали с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 5 мин. После охлаждения извлечение фильтровали через бумажный фильтр (испытуемый раствор).
На линию старта хроматографической пластинки "Сорбфил" ПТСХ-П-А (Россия) размером 100 х 100 мм в виде полос длиной 10 мм наносили 0,01 мл (10 мкл) испытуемого раствора и параллельно 0,003 мл (3 мкл) СО рутина. Пластинку сушили при комнатной температуре в течение 5 мин, затем помещали в камеру со смесью растворителей этилацетат - уксусная кислота ледяная - вода (68:16:16) (выложенную изнутри фильтровальной бумагой, предварительно насыщенную в течение 40 мин) и хроматографировали восходящим способом.
После прохождения фронтом растворителей расстояния не менее 8 см пластинку вынимали из камеры, высушивали до удаления следов растворителей (под тягой при комнатной температуре). Далее пластинку нагревали в сушильном шкафу в течение 5-10 мин при 100-105 С и теплую обрабатывали последовательно 1 % спиртовым раствором дифенилборилоксиэтиламина и 5 % спиртовым раствором полиэтиленгликоля. Через 15 мин после обработки пластинку просматривали в УФ-свете при длине волны 365 нм. Фотография и схема расположения зон на хроматограмме приведены на рис. 3.1.1.1.
На хроматограмме испытуемого раствора обнаружены следующие зоны фенольных соединений: зоны от желтой до оранжево-желтой цвета с Rg (по рутину) около 2,0 и 3,0; зоны от голубой до зеленовато-голубой цвета с Rg около 1,1, 1,7 и 2,4. Возможно наличие и других зон.
Валидацию методики проводили по специфичности и пригодности хромато-графической системы. Специфичность методики оценивали по совпадению хрома-тографических профилей различных серий сырья, заготовленных в разные годы, по основным зонам между собой и их соответствию описанию методики. Количество испытуемых серий сырья было не менее трех. Критерием приемлемости являлось совпадение хроматографических профилей различных серий сырья и их соответствие описанию методики. Хроматографические профили различных серий сырья совпали по основным зонам между собой и соответствовали описанию методики. Методика позволяет четко определять зоны в испытуемых сериях по цвету и расстоянию от линии старта относительно пятна СО (рис. 3.1.1.1).
В качестве показателя пригодности хроматографической системы выбрали і разрешение между характерными зонами на хроматограмме. Таким образом, разработана и валидирована методика определения подлинности для сырья пижмы методом ТСХ, которая может быть включена в новый Стандарт качества лекарственного средства. 3.2. Разработка характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья морфологической группы "Листья"
Современные требования к НД на ЛРС предполагают обязательное включение в документ раздела "Микроскопия" с описанием диагностических признаков всех частей сырья, с иллюстрациями (микрофотографии или рисунки) основных диагностических признаков. Следует отметить, в последние редакции зарубежных монографий на ЛРС добавлены рисунки анатомо-диагностических признаков [418, 450,456].
В НД на Крапивы листья [118] приведены микрофотографии основных анатомо-диагностических признаков, в Европейской фармакопее в монографии на данный вид сырья [439] представлены рисунки основных диагностических признаков. Однако в настоящее время для технологического обеспечения производства большинства видов растительного сырья в фильтр-пакетов рассматриваются различные возможности специальной предварительной обработки ЛРС, так как измельченное сырье и порошок сырья обладает низкими технологическими свойствами (в том числе плохой сыпучестью, затрудняющей дозирование сырья при работе, особенно на скоростных производственных линиях). Одним из таких способов переработки является получение резано-прессованного сырья (РПС). и в частности РПС крапивы. Использование дополнительной переработки сырья предполагает обязательные исследования по изучению влияния технологической переработки сырья на возможность определения основных анатомо-диагностических признаков в сравнение с уже зарегистрированными на фармацевтическом рынке формами выпуска сырья крапивы (измельченное сырье в пачках и крупный порошок в фильтр-пакетах).
При рассмотрении микропрепаратов под микроскопом видны обрывки эпидермиса листа с извилистыми или прямостенными клетками. Устьица аномоцитного типа окружены 3-5 эпидермальными клетками. Часто встречаются цистолиты в виде продолговатых, округлых и неправильной формы образований зернистой структуры, в центре которых, как правило, хорошо заметно основание ножки в виде кружочка. Встречаются волоски трех типов: ретортовидные, жгучие и головчатые. Ретортовидные волоски одноклеточные с расширенным основанием, встречаются как в виде обломков, так и неповрежденные. Жгучие волоски, состоящие из многоклеточного основания и погруженной в него крупной конечной клетки с легко обламывающейся головкой, чаще встречаются обломанными. Реже встречаются мелкие головчатые волоски с двух- или трех - клеточной головкой на одноклеточной ножке. Иногда встречаются фрагменты ткани черешков и крупных жилок с цепочками мелких друз оксалата кальция вдоль сосудов, имеющих спиральные вторичные утолщения стенок.
Порошок (рис.3.2.1.1.6 - 3.2.1.1.10), резано-прессованное сырье (рис.3.2.1.1.11 - 3.2.1.1.18). При исследовании микропрепаратов порошка под микроскопом видны: фрагменты листьев и черешков с диагностическими признаками, характерными для данного вида сырья, отдельные фрагменты в поперечном сечении, отдельные многоклеточные волоски и их фрагменты, а так же многочисленные фрагменты, не несущие диагностических признаков.
Количественное определение суммы флавоноидов в Пижмы цветках
В действующей НД на Хмеля соплодия [237] в разделе "Качественные реакции. Хроматография. 1." приведена ТСХ-методика определения флавоноидов. Нами были внесены изменения в имеющуюся методику: в качестве раствора для детектирования использовали 1 % спиртовым раствор дифенилборилоксиэтиламина и 5 % спиртовый раствор полиэтиленгликоля, т.к. этот реактив более чувствительный к флавоноидам и фенолкарбоновым кислотам, также было введено 2 стандартных образца - рутин и гиперозид, что позволяет провести валидационные мероприятия при оценке пригодности хроматографической системы.
Методика. Аналитическую пробу Хмеля соплодий измельчали до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,0 г измельченных соплодий помещали в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 25 мл спирта 70 % и нагревали с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения извлечение фильтровали через бумажный фильтр {испытуемыйраствор).
На линию старта хроматографической пластинки "Сорбфил" ПТСХ-АФ-А (Россия) размером 100 100 мм в виде полос длиной 10 мм, шириной не более 2 мм наносят 30 мкл (0,03 мл) испытуемого раствора и последовательно в одну полосу по 1 мкл (0,001 мл) 0,05 % спиртовые растворы СО рутина и СО гиперози-да. Пластинку высушивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем помещали в камеру со смесью растворителей этилацетат - уксусная кислота ледяная -вода (5:1:1) (выложенную изнутри фильтровальной бумагой, предварительно насыщенную в течение 40 мин) и хроматографировали восходящим способом.
После прохождения фронтом растворителей расстояния не менее 8 см пластинку вынимали из камеры, высушивали до удаления следов растворителей (под тягой при комнатной температуре). Далее пластинку нагревали в сушильном шкафу в течение 5-Ю мин при 100-105 С и теплую обрабатывали последовательно 1 % спиртовым раствором дифенилборилоксиэтиламина и 5 % спиртовым раствором полиэтиленгликоля. Через 15 мин после обработки пластинку просматривали в УФ-свете при длине волны 365 нм.
Фотография и схема расположения зон на хроматограмме приведены на рис. 3.5.2.4.1 (см. в Приложении 23 к Главе 3.5.2.4).
На хроматограмме растворов СО рутина и СО гиперозида в УФ-свете при 365 нм обнаружены зона желтого или желто-зеленого цвета с Rf около 0,2-0,4 (рутин) (принятая за Rg=l,0) и зона желтого или желто-зеленого цвета с Rs около 1,4-1,6 (гиперозид).
На хроматограмме испытуемого раствора обнаружены следующие зоны фенольных соединений: зоны желтого или желто-зеленого цвета с Rs (по рутину) около 1,0 (рутин), около 1,3-1,4 и около 1,6-1,7; зона зеленого цвета с Rs около 2,0-2,1. Возможно наличие и других зон.
Валидацию методики проводили по специфичности и пригодности хромато-графической системы. Специфичность методики оценивали по совпадению хрома-тографических профилей различных серий сырья, заготовленных в разные годы, по основным зонам между собой и их соответствию описанию методики. Количество испытуемых серий сырья было не менее трех. Критерием приемлемости являлось совпадение хроматографических профилей различных серий сырья и их соответствие описанию методики. Хроматографические профили различных серий сырья совпали по основным зонам между собой и соответствовали описанию методики. Методика позволяет четко определять зоны в испытуемых сериях по цвету и расстоянию от линии старта относительно пятна СО (рис. 3.5.2.4.1 в Приложении 23 к Главе 3.5.2.4).
В качестве показателя пригодности хроматографической системы выбрали разрешение между характерными зонами на хроматограмме. Для данной методики выбрано разрешение между зонами с Rs = 1,0 (рутин) и Rs около 1,4-1,6 (гиперозид). Разрешение между указанными зонами рассчитывали по формуле (см. Глава 3.1.1), где tR2 - расстояние от линии старта до середины зоны гиперозида с Rs около 1,4-1,6, мм; tR1 - расстояние от линии старта до середины зоны рутина с Rs около 1,0, мм; Wbl, Wb2 - расстояние между верхней и нижней границами каждой из указанных зон (ширина зон), мм.
Значение разрешения между указанными зонами составляло не менее 1,5 (табл. 3.3.2.4.1).
Таким образом, модифицирована и валидирована методика определения подлинности для Хмеля соплодий методом ТСХ для включения в новый Стандарт качества лекарственного средства. Определение характеристики спектра для Чаги В настоящее время в НД на Чагу [264] отсутствует раздел "Качественные реакции". В ведущих фармакопеях мира монографии на данный вид сырья отсутствуют.
Многочисленные литературные данные свидетельствуют о наличии в сырье чаги различных групп биологически активных веществ: фенолы, флавоноиды, кар-боновые кислоты, птерины, стерины, аминокислоты, макро- и микроэлементы [18, 19, 266, 267]. В связи с вышесказанным, представляется возможным проводить стандартизацию чаги по фенольным соединениям.
Был проведен анализ спектров хлороформных извлечений из сырья чаги (1:50). Показано, что во всех исследуемых образцах в интервале 250-350 нм присутствуют максимумы поглощения при 275+2 нм и 285+2 нм (рис. 3.5.2.5.1). Параллельно был снят спектр 0,01 % раствора резорцина в хлороформе, который имел максимум при длине волны 275+2 нм (рис. 3.5.2.5.2 и 3.5.2.5.3).
Методика. Аналитическую пробу Чаги, измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 1,0 г измельченной чаги, помещали в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл хлороформа, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Затем колбу охлаждали до комнатной температуры. Содержимое колбы фильтровали через бумажный складчатый фильтр. Измеряли оптическую плотность фильтрата на спектрофотометре в диапазоне длин волн от 250 до 320 нм.
В качестве раствора сравнения использовали хлороформ. На УФ-спектре присутствовал максимумы поглощения при 275+2 нм и 285+2 нм. УФ-спектр фильтрата должен соответствовать приведенному спектру (рис. 3.5.2.5.3).
Валидацию методики проводили по специфичности. Специфичность методики оценивали по совпадению молекулярных спектров и максимумов основных пиков в ультрафиолетовой зоне у различных серий сырья, заготовленных в разные годы, и их соответствие описанию методики. Количество испытуемых серий сырья было не менее трех. УФ-спектры различных серий сырья совпадали по максимумам между собой и соответствовали описанию методики (рис. 3.5.2.5.3).
![Стандартизация и контроль качества лекарственных средств группы фторхинолонов методами хроматографии и ИК-спектроскопии [Электронный ресурс]](/i/i/4375/184827.png "Стандартизация и контроль качества лекарственных средств группы фторхинолонов методами хроматографии и ИК-спектроскопии [Электронный ресурс] Коновалов Андрей Александрович")
