Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Общая характеристика глюкозамина, сухого экстракта листьев берёзы и корней лопуха 11
1.1. Лекарственные средства, используемые для лечения остеоартроза
1.1.1 Получение и свойства глюкозамина 14
1.1.2 Фармакологические свойства глюкозамина 17
1.2 Методы анализа глюкозамина 20
1.2.1 Химические методы 20
1.2.2 Физико-химические методы 22
1.3 Вспомогательные вещества, позволяющие снизить побочное действие солей глюкозамина 24
1.4 Гранулы, как лекарственная форма 26
1.5 Растительные объекты, входящие в состав лекарственного препарата 28
1.5.1 Использование лекарственного растительного сырья в лечении заболеваний опорно-двигательной системы 28
1.5.2 Общая характеристика биологически активных веществ лопуха большого , 29
1.5.3 Методы анализа биологически активных веществ корня лопуха большого 31
1.5.4 Общая характеристика биологически активных веществ листьев берёзы 32
1.5.5 Методы анализа биологически активных веществ листьев берёзы 34
1.5.5.1 Химические методы 34
1.5.5.2 Физико-химические методы 35
Заключение по обзору литературы 37
Глава 2. Биофармацевтические исследования и технология гранул с солями глюкозамина 39
2.1 Изучение высвобождения солей глюкозамина через полупроницаемую мембрану 39
2.2 Изучение взхймодействия глюкозамина гидрохлорида с вмс методом ик-спектро скопим 49
2.3 Разработка технологии гранул 52
2.4 Выбор веществ, корригирующих вкус 56'
2.5 Оценка технологических характеристик и норм качества предлагаемых гранул 62
2.6 Выводы по главе 2 68
Глава 3. Разработка методик анализа и норм качества гранул, содержащих глюкозамина сульфат (гидрохлорид) и сухой экстракт листьев березы или сухой экстракт корней лопуха 69
3.1 Методики качественного определения биологически активных веществ в сухом экстракте листьев берёз 69
3.2 Количественное определение биологически активных веществ в сухом экстракте листьев берёзы 71
3.3 Методики качественного определения биологически активных веществ в сухом экстракте корней лопуха у5
3.4 Количественное определение биологически активных веществ в сухом экстракте корней лопуха 78
3.5. Качественный анализ ингредиентов гранул при совместном присутствии 82
3.5.1. Качественный анализ солей глюкозамина в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (сухого экстракта корней лопуха) и вспомогательных веществ 83
3.5.2 Качественный анализ баб сухого экстракта листьев берёзы при совместном присутствии с глюкозамина гидрохлоридом (сульфатом) и вспомогательными веществами 85
3.5.3 Качественный анализ сухого экстракта корней лопуха, глюкозамина гидрохлорида и вспомогательных веществ при совместном присутствии 88
3.6. Количественный анализ ингредиентов 90
3.6.1 количественный анализ глюкозамина гидрохлорида в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (сухого экстракта корней лопуха) 90
3.7 Количественный анализ биологически активных веществ сухого экстракта листьев берёзы в присутствии солей глюкозамина 100
3.8 Количественный анализ биологически активных веществ сухого экстракта корней лопуха в присутствии солей глюкозамина 107
3.9 Выводы по главе 3 114
Глава 4 Изучение стабильности и стандартизация гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха) 116
4.1 Изучение стабильности серии гранул в процессе хранения 116
4.2 Разработка норм качества на гранулы с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха) 128
4.3 Выводы по главе 4 135
Общие выводы 136
Литература
- Получение и свойства глюкозамина
- Изучение взхймодействия глюкозамина гидрохлорида с вмс методом ик-спектро скопим
- Количественное определение биологически активных веществ в сухом экстракте листьев берёзы
- Разработка норм качества на гранулы с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха)
Введение к работе
Актуальность темы. По данным Всемирной организации здравоохранения остеоартрозом болеет около 80 % населения старше 50 лет, а в 10 % случаев он является причиной инвалидности, вызывая ухудшение качества жизни больных и значительные финансовые затраты как со стороны больного, так и общества в целом.
Так как остеоартроз является хроническим заболеванием, при лечении которого невозможно полное выздоровление, больные вынуждены на протяжении жизни после развития заболевания принимать лекарственные препараты, направленные на уменьшение болевого синдрома и стимуляцию регенерации хрящевой ткани. Поэтому длительное использование наиболее известного противоартрозного средства, такого как глюкозамин, обуславливает возможность проявления его побочного действия. Появление нарушений деятельности желудочно-кишечного тракта приводит иногда к отказу от приёма данного лекарственного средства. В тоже время имеются предпосылки для устранения побочных явлений при медицинском применении глюкозамина. Так, в ПятГФА исследования, проведённые под руководством Компанцева В. А., позволили предложить новую лекарственную форму, в которой предусмотрено снижение побочного действия глюкозамина гидрохлорида за счёт его сочетания с пектином. Другие исследования показывают, что использование высокомолекулярных соединений (ВМС) также в определённой степени способствуют устранению некоторых побочных действий лекарственных средств. Таким образом, перед исследователями стоит задача создания и обоснования состава лекарственных препаратов, максимально сохраняющих терапевтическое действие глюкозамина, при минимальных отрицательных явлениях или побочном действии.
На наш взгляд в состав таких лекарственных препаратов, кроме глюкозамина и ВМС, обеспечивающих постепенное высвобождение, должен быть включен растительный экстракт, который может устранять побочные
эффекты глюкозамина, а также самостоятельно проявлять противоартрозную или противовоспалительную активность, или же усиливать терапевтическое действие глюкозамина. К таким экстрактам следует отнести экстракты ивы, лопуха, берёзы, крапивы, сабельника и др. В последнее время очень часто разработчики лекарственных препаратов и, особенно БАД, включают в состав неоправданно большое число сухих экстрактов, иногда до 10 — 15. Это не только затрудняет анализ таких смесей, но и снижает эффективность действия каждого компонента. По мнению фармакологов в состав лекарственного препарата противоартрозного действия с глюкозамином достаточно включения одного — двух экстрактов. Литературные сведения показывают, что не изучена физико-химическая совместимость солей глюкозамина и используемых сухих экстрактов, состав вспомогательных веществ и возможности анализа таких смесей. Поэтому обоснование состава, разработка методов анализа и стандартизация лекарственного препарата с глюкозамином и выбранными нами в качестве объектов исследования сухим экстрактом листьев берёзы и сухим экстрактом корней лопуха является актуальной проблемой для фармацевтической науки и практики.
Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы явилось обоснование возможности создания лекарственных форм глюкозамина с сухим экстрактом листьев берёзы и глюкозамина с сухим экстрактом корней лопуха и разработка методов для их стандартизации.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
обосновать выбор оптимального состава гранул глюкозамина с
сухим экстрактом листьев берёзы и глюкозамина с сухим экстрактом корней
лопуха;
о разработать методики качественного и количественного анализа
глюкозамина и биологически активных веществ сухих экстрактов листьев
берёзы или корней лопуха;
» разработать методики определения продуктов деструкции и изучить стабильность глюкозамина в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (или корней лопуха), а также в присутствии вспомогательных веществ;
обосновать нормы качества и разработать НД на гранулы противоартрозного действия с глюкозамином и сухим экстрактом листьев берёзы (или корней лопуха).
Научная новизна. На основе комплекса физических, физико-химических и биофармацевтических исследований обоснован состав и разработана технология гранул глюкозамина сульфата (гидрохлорида) с сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха). Методами диализа через целлофановую мембрану и ИК-спектроскопии подтверждено наличие слабого взаимодействия высокомолекулярных соединений, таких как пектин, крахмал, метил целлюлоза (МЦ) с солями глюкозамина, что возможно обуславливает постепенное высвобождение глюкозамина из предлагаемой композиции.
Обоснован выбор методик определения норм качества глюкозамина гидрохлорида в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) и вспомогательных веществ, используемых для приготовления гранул, а также сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) в присутствии глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и вспомогательных веществ. Доказана возможность использования спектрофотометрических методик для определения солей глюкозамина (по реакции Эльсона-Моргана), суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев берёзы (по реакции алюминия(Ш) хлорида с фенольными соединениями сухого экстракта) и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха (по реакции с резорцином в кислой среде). Показана их принципиальная применимость для использования при совместном присутствии исследуемых ингредиентов.
Проведенная валидационная оценка показала, что используемые методики количественного определения всех компонентов линейны в области аналитической концентрации, чувствительны, специфичны и точны.
Обоснованы оптимальные условия ВЭЖХ определения примеси в глюкозамине (5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений). Показана возможность установления сроков годности гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) и вспомогательных веществ по определению изменения сумм площадей пиков анализируемых веществ.
Практическая значимость результатов исследования. В результате исследования предложен состав и технология нового комбинированного лекарственного препарата - гранул противоартрозного действия: глюкозамина сульфат (гидрохлорид) 0,5 г; сухой экстракт листьев берёзы (корней лопуха) 0,2 г; пектин 2,0 г; аспартам 0,05 г; кислота лимонная 0,02 г. На основании проведенных исследований разработаны методики идентификации и количественного определения глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и биологически активных веществ (БАВ) сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) при совместном присутствии в гранулах. Установлены нормы качества исследуемых гранул и определена их стабильность в процессе хранения в естественных условиях. Первоначальный срок годности составил 1,5 года. Полученные результаты легли в основу создания «Суставит-актив» (кисель профилактический с экстрактом берёзы) и «Суставит-актив» (кисель профилактический с экстрактом лопуха), которые прошли доклинические исследования, освоены на ООО НИИ «Демиург» и в настоящее время реализуются населению.
Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проекты ФСП на лекарственные препараты «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев берёзы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы». Разработаны и утверждены ТУ на «Суставит-Актив» (кисель профилактический с экстрактом берёзы) и «Суставит-Актив» (кисель профилактический с экстрактом лопуха) 9195-001-73679658-2005 .
Апробация и публикация результатов исследования. Основные результаты диссертационной работы были доложены и обсуждались на ежегодных научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии в 2006-2007 гг.
По теме диссертации опубликовано 8 работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, номер государственной регистрации 01200101060.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы и 18 рисунков, состоит из «Введения», 4 глав, содержащих «Обзор литературы» и результаты экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 114 источников, из них 36 на иностранных языках.
Положения, выдвигаемые на защиту:
1. Результаты исследования по теоретическому и экспериментальному
обоснованию состава гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и
сухим экстрактом листьев берёзы и гранул с глюкозамина сульфатом
(гидрохлоридом) и сухим экстрактом корней лопуха.
2. Выбор, разработка и валидационная оценка методик анализа
глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и сухого экстракта листьев берёзы
(корней лопуха) в предлагаемых лекарственных препаратах.
3. Результаты изучения стабильности гранул с глюкозамина сульфатом
(гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха).
Получение и свойства глюкозамина
Эмпирическая формула глюкозамина гидрохлорида: СбНі405ЖЛ. Молекулярная масса: 215,64. Эмпирическая формула глюкозамина сульфата: CSHHOSNSC Молекулярная масса: 302,26. Глюкозамин получают путем кислотного гидролиза хитина, впервые он был выделен в 1878 г., а также химическим синтезом [22,23,24]. В настоящее время существует несколько подходов к получению солей глюкозамина.
Однако все методы отличаются между собой только источником получения хитина (панцири раков, крабов, омаров, креветок и других ракообразных), временем гидролиза, его температурой и концентрацией кислоты хлористоводородной, а также способами перекристаллизации [25,26].
Полярным научно-исследовательским институтом рыбного хозяйства и океанографии (г. Мурманск) выявлена сырьевая база для получения хитина и глюкозамина. Основным источником являются панцирьсодержащие отходы акклиматизированного в Баренцевом море камчатского краба, численность которого достигла промысловой, и решается вопрос о возможном открытии его промышленного лова в этом регионе. Разработана комплексная технология переработки краба и получение из отходов производства (панциря краба) хитина и глюкозамина [27,28,29,30].
Глюкозамин в форме основания крайне нестабилен и быстро окисляется, в связи с чем целесообразно его получать, хранить и применять в более стабильной солевой форме. Обычно получают его в форме хлористоводородной или сернокислой соли (рисунок 1) [31].
Наибольшее практическое значение имеет кислотный гидролиз панциря крабов и ферментативный гидролиз хитина, конечным продуктом которого является N-ацетилглюкозамин [31].
На базе Пятигорской фармацевтической академии совместно с ООО «НТЦ Экобиотек - Мурманск» велись активные работы по получению и изучению свойств глюкозамина гидрохлорида. Получено регистрационное удостоверение №2000/55/2 на субстанцию глюкозамина гидрохлорида (ФСП 42-0314-1478-01). Предложен способ получения препарата глюкозамина гидрохлорида из панциря криля и креветок [26].
Глюкозамина сульфат, как и глюкозамина гидрохлорид - белые мелкокристаллические порошки без запаха. Легко растворимы в воде, очень мало в спирте этиловом 95%, практически не растворимы в диэтиловом эфире и хлороформе.
Глюкозамин - универсальный предшественник и строительный материал всех необходимых смазок и амортизаторов, известных как глюкозаминогликаны, представляет собой аминосахарид, присутствующий в некоторых тканях животного организма, включая хрящ. В суставе он входит в структуру молекул глюкозаминогликанов, гепаран сульфата, кератан сульфата и гиалуроната. Аминосахара широко распространены в природе, потому что играют очень важную роль в жизненных процессах. Они входят в состав хитина, мукополисахаридов соединительной ткани, гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфатов, полисахаридной части клеточной стенки микроорганизмов.
В большинстве случаев используется сульфатированный глюкозамин, хорошо абсорбируемый из желудочно-кишечного тракта. Но кроме сульфата широко используется глюкозамина гидрохлорид. Будучи биоэквивалентными эти вещества высвобождают в организме глюкозамин основание в количестве 83 % из гидрохлорида и 74 % - из сульфата.
Результаты экспериментов показывают, что биодоступность, фармакокинетика и выведение глюкозамина у человека и животных примерно одинаковы. Глюкозамин имеет константу ионизации рКа=6,91, благоприятную как для абсорбции в тонком кишечнике, так и для прохождения через биологические барьеры организма. После однократного парентерального введения дозы глюкозамина — он быстро выводится из плазмы крови (период полу выведения 0,28 ч.). Через 1-2 часа после приема глюкозамин или его метаболиты находятся в белках плазмы. Концентрация достигает пика через 8-10 часов, а затем снижается, имея период полувыведения 70 часов. После приема внутрь глюкозамина его фармакокинетический профиль примерно такой же, но концентрация в 5 раз меньше, чем после парентерального введения. Очевидно, это обусловлено его метаболизмом в печени [32,33].
В ходе недавних исследований был выяснен механизм действия глюкозамина в случае остеоартрита. Прежде всего, глюкозамин является биологически доступным для суставных тканей, включая суставный хрящ, после системного (в том числе и орального) введения с преимущественным встраиванием хондроцитами в компоненты глюкозаминосульфатных цепей непораженной хрящевой ткани, для которой, следовательно, он является предпочтительным субстратом. Кроме того, глюкозамин стимулирует синтез физиологических протеогликанов и снижает активность катаболически активных ферментов, включая металлопротеазы. Было показано, что подобные эффекты связаны с обратимостью отрицательных эффектов интерелейкина-1 под воздействием глюкозамина. Данный цитокиновый антагонизм является результатом ингибирования интерлейкин-1 -зависимой внутриклеточной цепи передачи сигнала в хондроцитах, в частности, подавления активации NF-kB (п), и вероятно связан с мощной антиоксидантной активностью глюкозамина, снижая таким образом интерлейкин-1-зависимую экспрессию ферментов, которые участвуют в воспалительных процессах и деструкции суставных тканей, таких, как металлопротеазы, индуцированная синтаза окиси азота (iNOS) и циклооксигеназа-2 (СОХ-2) [34].
Изучение взхймодействия глюкозамина гидрохлорида с вмс методом ик-спектро скопим
Технологический процесс, то есть процесс превращения исходных лекарственных и вспомогательных веществ в лекарственную форму, является одним из важнейших биофармацевтических факторов, который во многом определяет стабильность включенных в нее лекарственных веществ, скорость их высвобождения, интенсивность всасывания и, в конечном итоге, терапевтическую активность. Изготовление гранул осуществляли с учетом природы и физико-химических свойств лекарственных и вспомогательных веществ.
Ранее на кафедре фармацевтической химии были проведены работы по изучению выбора оптимального увлажнителя для получения гранул с глюкозамина гидрохлоридом. В качестве увлажнителей были изучены: спирт этиловый 95%; 75%; 40%; крахмальный клейстер 10%; раствор натрий калий метилцеллюлозы 5%; раствор метилцеллюлозы 5%; раствор поливинилпирролидона 10%. В ходе проведенных исследований было установлено, что оптимальным увлажнителем для гранул глюкозамина гидрохлорида с пектином является спирт этиловый 40%. Основываясь на этих данных, дальнейшее приготовление гранул проводили с использованием в качестве увлажнителя спирта этилового 40 %.
Кроме того, исследования, проведенные в ПятГФА под руководством профессора Компанцевой Е. В. показали, что в состав гранул для приготовления гидрогеля противоартрозного действия целесообразно вводить лимонную кислоту в количестве 2% от массы глюкозамина сульфата (гидрохлорида). Согласно литературным данным цитрат стимулирует рост костной ткани [108], а также активизирует обменные процессы в организме. В 1995 году Панченко А. В. С соавторами предложила мазь «Цитралгин», в состав которой кроме анальгетика ввели цитратсодержащий компонент. Это введение авторы обосновали тем, что цитрат-ион является одним из основных метаболитов цикла Кребса, цитрат-ион способствует увеличению синтеза внутриклеточного аденозинтрифосфата. Это даёт возможность нормализовать питание хрящевой и соединительной тканей опорно-двигательго аппарата, улучшить состояние микроциркуляции и показатели свёртываемости крови [108].
Приготовление гранул складывается из вспомогательных работ и основной стадии технологического процесса. Подготовительные работы включают санитарную подготовку производства, подготовку действующих и вспомогательных веществ, их отвешивание, измельчение и просеивание.
Лекарственные вещества измельчали и смешивали по общим правилам приготовления порошков. Первым измельчали пектин, как вспомогательное вещество, затем глюкозамина сульфат (гидрохлорид), так как его количество в 5 раз больше, чем количества сухих экстрактов корней, лопуха и листьев берёзы, в последнюю очередь добавляли аспартам и лимонную кислоту, все тщательно перемешивали.
Основная стадия технологического процесса заключалась в получении гранул: предварительно подготовленный материал (высушенный, измельченный, просеянный) смешивали в соотношении глюкозамина гидрохлорид (сульфат) - пектин - сухой экстракт листьев берёзы (сухой экстракт корней лопуха), аспартам, лимонная кислота в соотношении 0,5:1:0,2:0,005:0,01. Смесь тщательно перемешивали, до однородности полученного порошка. Далее массу увлажняли до получения пластичной массы, способной к гранулированию. Массу протирали через гранулятор с диаметром отверстий 4 мм. Сушку первичного гранулята проводили в сушильном шкафу в течение 60 минут при температуре 37С до остаточной влажности 6%. Высушенный гранулят подвергали сухому гранулированию с целью получения гранул одинаковой формы и размера. После проведения отсева фракцию 1,0 - 2,0мм подвергали анализу, а фракция 0,5мм повторно увлажняли и гранулировали. Полученные гранулы подвергали анализу.
Ввиду того, что в состав гранул входит сырьё растительного происхождения, необходимо учитывать влияние на стабильность факторов внешней среды. Увеличение влажности ведёт к уменьшению прочности гранул и способствует развитию микрофлоры. Воздействие света приводит к разложению светочувствительных компонентов. Поэтому, нами предлагается в качестве упаковки использовать пакеты - саше, которые предохраняют лекарственный препарата от воздействия солнечного света и исключают проникновение влаги внутрь в процессе хранения.
Количественное определение биологически активных веществ в сухом экстракте листьев берёзы
По экспериментальным данным рассчитывали коэффициент корреляции, угловой коэффициент линейной регрессии, свободный член графика. Рассчитанные числовые показатели представлены в таблице 13.
Из таблицы 13 и рисунка 8 следует, что зависимость оптической плотности от концентрации носит линейный характер в пределах концентрации от 0,001 до 0;004%. Коэффициент корреляции равен 0,9988, следовательно, данную методику можно использовать для анализа, флавоноидов сухого экстракта листьев берёзы в пересчёте на рутин в диапазоне концентраций 0,001-0,004%. Анализируемая концентрация рутина (0,002%) находится в указанном выше интервале концентраций.
Примечание 1-. Приготовление раствора стандартного образца (СО). рутина. Около 0,05 г (точная масса)- GO рутина (ТУ 64 - 4 127 - 96), предварительно высушенного при»температуре от 130 до 135 С в течение 3 ч, помещают в колбу вместимостью; 100 мл и прибавляют 85 мл спирта этилового 95%, затем нагревают на: кипящей; водяной бане при перемешивании охлаждают и количественно переносят в мерную колбу вместимостью: 100 мл, доводят объём раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.
Приготовление 2% раствора алюминия хлорида. 3;6 г алюминия хлористого 6-водного (ГОСТ 3759 — 75) помещают в мерную? колбу вместимостью 250 мл, прибавляют постепенно 100 мл спирта- этилового 95% при перемешивании до полного;растворения. Срок годности раствораЗ мес.
Результаты количественного определения суммы фенольных соединений сухого: экстракта листьев берёзьг. в пересчёте: на- рутин представлены в таблице 14 .
Как было сказано в обзоре литературы, корни лопуха содержат углеводы, органические кислоты, эфирные масла, дубильные вещества, флавоноиды и другие биологически активные вещества. На корни лопуха разработана ВФС 42-2878-97, однако в указанной фармакопейной статье оценка качества производится по содержанию экстрактивных веществ, извлекаемых водой. В ней отсутствуют методики качественного и количественного определения основной группы биологически активных веществ.
Сухой экстракт корней лопуха полученный от ООО «ХАРМС» серии 010406 был проанализирован по показателям подлинность согласно ТУ 9199-006-33150849-2004.
Свободные сахара, содержащиеся в сухом экстракте корня лопуха, определяли реакцией Бертрана. Для этого 0,05 г препарата растворяли в 5 мл воды, прибавляли равный объём реактива Феллинга и нагревали на водяной бане. Выпадает оранжево - красный осадок меди оксида (I).
Полисахариды, содержащиеся в сухом экстракте корней лопуха, определяли следующим образом: 0,1 г препарата растворяли в 5 мл воды, прибавляли 5 мл 0,1 % раствора резорцина и 10 мл кислоты хлористоводородной разведенной. Раствор нагревали на водяной бане. Раствор приобретает красное окрашивание.
Спектр раствора препарата, приготовленного для количественного определения, имеет в видимой области максимум поглощения при длине волны 480±2 нм. В качестве стандартного вещества используют фруктозу. Спектры поглощения продуктов взаимодействия фруктозы и раствора, приготовленного из сухого экстракта корней лопуха с резорцином в кислой среде, имеют схожий характер (рисунок 8).
Разработка норм качества на гранулы с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха)
Сравнивая хроматограммы продуктов деструкции глюкозамина гидрохлорида и 5-ГМФ можно сделать вывод, что среди пиков глюкозамина гидрохлорида пику 5-ГМФ соответствует лишь 1 пик с временем выхода равным 8,64 мин, при этом площадь этого пика составляет 6,84 mV сек (пик № 14). Площадь пика СО 5-ГМФ равна 236,25 тУ сек. Таким образом, площадь пика № 14 продукта деструкции глюкозамина гидрохлорида по отношению к площади пика СО 5-ГМФ составляет только 2,9 %. Поэтому, только при значении суммарной площади пиков продуктов деструкции глюкозамина гидрохлорида более 200 mv сек можно считать, что субстанция не проходит тест по показателю «посторонние примеси».
В связи с тем, что сухие экстракты имеют неоднородный состав БАВ, площади пиков будут зависеть от многих факторов, например: время сбора, место произрастания, условия транспортировки, хранения и др. Поэтому, полученные нами суммы площадей пиков были использованы для установления стабильности и определения сроков годности гранул с глюкозамином только на примере конкретных сухих экстрактов. Кроме того, данные таблицы 28 свидетельствуют о наложение пиков продуктов деструкции глюкозамина и вспомогательных веществ (время выхода пика глюкозамина после деструкции 2,066 совпадает с временем выхода пика пектина — 2,025 мин) и с пиками сухих экстрактов (время выхода пика глюкозамина после деструкции 6,798 совпадает с пиком сухого экстракта листьев берёзы - 6,794 и сухого экстракта корней лопуха — 6,748). В связи с этим определение стабильности гранул по сумме пиков продуктов деструкции глюкозамина не представляется возможным. Поэтому для определения стабильности гранул мы принимали во внимание сумму всех пиков хроматограм, полученных до 10 минуты. Учитывая суммарную площадь пиков веществ, входящих в состав гранул можно рассчитать сумму площадей пиков, при которой лекарственный препарат будет считаться стабильным. Так как глюкозамина гидрохлорид не подвергшийся деструкции не имеет пиков, расчёт следует проводить по сумме пиков пектина, аспартама, лимонной кислоты и СЭЛБ в случае с гранулами с сухим экстрактом листьев берёзы и по сумме пиков пектина, аспартама, лимонной кислоты и СЭКЛ в случае с гранулами с сухим экстрактом корней лопуха.- Сумма площадей пиков для гранул с сухим экстрактом листьев берёзы будет составлять 409,5 тУ сек, для гранул с сухим экстрактом корней лопуха -206,51 тУ сек. Нормативные документы на субстанцию глюкозамина гидрохлорида допускают содержание примеси 5-ГМФ и родственных ему соединений в количестве 0,05%. Раствор глюкозамина-гидрохлорида после деструкции до предельно допустимых количеств имеет сумму площадей пиков равную 202,64 тУ сек (см. выше). Таким образом, учитывая величину суммы пиков раствора глюкозамина гидрохлорида подвергшегося деструкции (202,6 тУ сек), а также пектина, аспартама, лимонной кислоты и входящих в состав препарата сухих экстрактов мы получаем значение суммы площадей пиков, которое можно считать максимально допустимой, при которой препарата будет соответствовать критериям качества. Для гранул с сухим экстрактом листьев берёзы это значение равно 612,14 mV ceK, а для гранул с сухим экстрактом корней лопуха — 409,15 соответственно. Полученные данные нами использовались для установления сроков годности лекарственного препарата. Для более корректной оценки нами параллельно с заложенными на анализ образцами гранул, проводился анализ свежеприготовленных гранул. Как правило, суммарная площадь пиков этих гранул в тех же условиях находилась в пределах 360 и 215 тУ сек для гранул с глюкозамина гидрохлоридом и сухим экстрактом листьев берёзы и сухим экстрактом корней лопуха соответственно.
Для изучения стабильности в процессе хранения были использованы 5 серий гранул, для приготовления которых были взяты одни и теже серии сухих экстрактов. Гранулы были заложены на ускоренное старение, согласно методике «ускоренного старения» при повышенной температуре. Параллельно с этим гранулы были заложены на хранение в естественных условиях при комнатной температуре. Определение посторонних примесей глюкозамина гидрохлорида проводили следующим образом:
ВЭЖХ-методика определения посторонних примесей глюкозамина гидрохлорида: 0,65г гранул (точная масса) помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 30 мл воды очищенной и перемешивали до полного растворения, после чего объём доводили водой до метки и вновь перемешивали. Раствор хроматографировали в условиях, приведённых в таблице 27.
В процессе ускоренного хранения при 60С каждые 11,5 суток (что соответствует 6 месяцам хранения) проводили контроль качества гранул по показателям описание, подлинность глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха), количественное определение обоих компонентов. Для определения посторонних примесей оценивали полученные ВЭЖХ хроматограммы.
