Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Фармакокинетические аспекты распределения лекарственных веществ в организме 11
1.2. Аналитические методы, применяемые при исследовании фармакокинетики лекарственных средств... 20
1.3. Фармакологические аспекты изучаемых лекарственных препаратов 22
1.3.1. Антидепрессанты (тетриндол, пиразидол, инказан) 22
1.3.2. Ноотропы (линоприд, дигам) 25
1.3.3. Противовирусные препараты (арбидол) 39
1.3.4. Антиаритмики (нибентан) 49
1.4. Выводы по главе 55
Собственные исследования
ГЛАВА 2. Фармакокинетика антидепрессантов
2.1.ФармакокинетикаТЕТРИНДОЛА 57
2.1.1. Кинетика в крови 60
2.1.2. Распределение по органам 61
2.1.3. Выведение 64
2.1.4. Метаболизм ТЕТРИНДОЛА 68
2.2. Фармакокинетика ПИРАЗИДОЛА 74
2.2.1. Кинетика в крови 75
2.2.2. Метаболизм ПИРАЗИДОЛА 79
2.3. Фармакокинетика ИНКАЗАНА 85
2.3.1. Кинетика в крови 85
2.3.2. Распределение по органам 90
2.3.3. Метаболизм ИНКАЗАНА 91
2.4. Сравнительная фармакокинетика и метаболизм тетриндола, пиразидола, инказана 99
2.5. Выводы по главе 101
ГЛАВА 3. Фармакокинетика ноотропов
3.1. Методы, хроматография 103
3.2. Фармакокинетика ЛИНОПРИДА ПО
3.2.1. Кинетика в крови ПО
3.2.2. Распределение по органам 114
3.2.3. Кинетика линоприда в амниотической жидкости 118
3.2.4. Выведение 122
3.3. Фармакокинетика ДИГАМА 124
3.3.1. Кинетика в крови 124
3.3.2. Распределение по органам 126
3.3.3. Выведение 131
3.4. Сравнение фармакокинетики линоприда и дигама с фармакокинетикой пирацетама 133
3.5. Сравнение результатов фармакокинетического исследования с данными токсикологических и фармакологических тестов... 135
3.6. Выводы по главе 137
ГЛАВА 4. Фармакокинетика арбидола
4.1. Методы 139
4.2. Кинетика в крови 141
4.3. Распределение по органам 144
4.4. Выведение 145
4.5. Метаболизм арбидола 147
4.6. Изучение кинетики арбидола и его влияния на репродукцию 157
4.6.1. Изучение кинетики действия арбидола на вирусную репродукцию 159
4.6.2.Изучение распределения арбидола в клетках, клеточных мембранах и внеклеточной среде 160
4.7. Сравнительное изучение фармакокинетики и биодоступности таблеток АРБИДОЛА (0.1 г), покрытых суспензионной и пленочной оболочками 161
4.8. Выводы по главе 166
ГЛАВА 5. Фармакокинетика нибентана
5.1. Методы, хроматография 168
5.2. Кинетика в крови 171
5.3. Распределение по органам 172
5.4. Выведение 174
5.5. Метаболизм НИБЕНТАНА 175
5.6. Выводы по главе 185
Этапы проведения доклинических исследований фармакокинетики оригинальных лекарственных средств 186
ГЛАВА 6. Методология изучения метаболизма лекарственных препаратов
Этапы проведения доклинического исследования метаболизма лекарственных средств 193
6.1. Метаболизм препаратов группы производных этиленимина (дипин, тиодипин, тиофосфамид)
6.1.1. Масс-спектры 193
6.1.2. Строение продуктов гидролиза дипина и тиофосфамида... 197
6.1.3. Изучение строения продуктов биотрансформации препаратов дипина, тиодипина и тиофосфамида 205
6.1.4. Гидразинсульфат - ингибитор окислительного десульфи-
рования тиофосфамида и тиодипина 221
Заключение 225
Выводы 227
Практические рекомендации 228
Список литературы 229
Список работ, опубликованных по теме диссертации.
- Фармакологические аспекты изучаемых лекарственных препаратов
- Метаболизм ТЕТРИНДОЛА
- Кинетика линоприда в амниотической жидкости
- Изучение кинетики арбидола и его влияния на репродукцию
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Создание нового синтетического лекарственного препарата - процесс
сложный и трудоемкий. Комплекс необходимых для решения этой задачи
исследований, начиная с химического синтеза, выявления биологической
активности, оценки безопасности на животных, включает множество этапов,
прежде чем потенциальный лекарственный препарат поступит в клинику для
проведения испытаний на людях. В этой связи роль доклинических
исследований трудно переоценить. Они направлены, прежде всего, на
обеспечение безопасности дальнейшего применения новых лекарственных
средств в широкой медицинской практике. Неотъемлемой частью
доклинических исследований потенциального препарата является
всестороннее изучение его фармакокинетики на животных. Практическое
приложение доклинических фармакокинетических исследований весьма
многосторонне. Изучение фармакокинетических свойств препаратов
позволяет уже на доклиническом уровне определить оптимальные пути их
введения, что, в дальнейшем, способствует подбору рациональной дозировки
для использования их в лечебной практике. Сведения о
фармакокинетических свойствах лекарственных средств позволяют уточнить показания и противопоказания к их применению. Так, вещества, хорошо проникающие через гематоплацентарный барьер, следует с осторожностью применять при беременности. Противомикробные препараты, активно экскретирующиеся почками или накапливающиеся в печени, пригодны для лечения инфекций мочевых или желчных путей соответственно. Данные фармакокинетических исследований во многом способствуют лучшему пониманию механизма действия лекарственных препаратов. Фармакокинетика препаратов создает основу для рационального поиска новых лекарственных средств с желаемыми закономерностями
распределения в организме, а в некоторых случаях и с более высокой активностью или более широким спектром действия, например при выявлении метаболитов, обладающих преимуществами перед исходным веществом по специфической активности или безопасности. Разрабатываемые на этапе доклинических фармакокинетических исследований аналитические методы количественного определения неизмененного препарата и его метаболитов в биообъектах позволяет использовать эти методики при изучении фармакокинетики препарата в клинике и при фармакокинетическом мониторинге.
Следует подчеркнуть, что проведение этого комплекса работ
невозможно без использования современных физико-химических методов
исследования строения веществ таких, как ЯМР-спектроскопия,
хроматомасс-спектрометрия, высокоэффективная жидкостная
хроматография и др. Использование этих методов позволяет решать самые сложные задачи, возникающие при проведении фармакокинетических исследований.
Вместе с тем, к настоящему времени не до конца сформулирована методология фармакокинетического доклинического исследования оригинальных препаратов, а именно: что входит в схему "полной" программы изучения фармакокинетики потенциального лекарственного препарата и какими средствами она реализуется.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Разработать основные принципы и методологию доклинического исследования фармакокинетики новых оригинальных лекарственных средств.
Данная цель достигается путем решения следующих задач: 1. Разработать методы количественного определения оригинальных отечественных лекарственных препаратов в биообъектах (сыворотке крови, органах и тканях, моче, фекалиях) таких, как: антидепрессанты (тетриндол,
пиразидол, инказан), противовирусный препарат (арбидол), антиаритмик (нибентан), потенциальные ноотропы (дигам, линоприд) на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Разработать физико-химические подходы к выделению метаболитов лекарственных препаратов из биосред и их идентификации с применением ВЭЖХ, масс-спектрометрии и ЯМР-спектроскопии. Продемонстрировать на примере противоопухолевых алкилирующих агентов возможности использования комбинации физико-химических методов для установления строения метаболитов, а также связь терапевтической эффективности и степени биотрансформации.
Разработать комплексный подход к доклиническому исследованию фармакокинетики оригинальных лекарственных препаратов с использованием различных современных физико-химических методов. Создать поэтапную схему изучения фармакокинетики.
4. Разработать подходы к изучению метаболизма новых лекарственных
препаратов, установлению химического строения и оценке их
фармакотерапевтического вклада в общую активность препарата. Создать
поэтапную схему изучения метаболизма.
НА УЧНАЯ НОВИЗНА
Разработаны методики количественного определения отечественных антидепрессантов (тетриндола, пиразидола, инказана) в биообъектах с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Изучена фармакокинетика тетриндола, пиразидола, инказана на животных при различных способах введения. Изучен метаболизм тетриндола, пиразидола, инказана. Установлено строение метаболитов с помощью масс-спектрометрии и ЯМР-спектроскопии.
Разработана методика количественного анализа противовирусного препарата арбидола в сыворотке крови, различных органах, моче и фекалиях.
Изучена фармакокинетика и метаболизм арбидола у животных с применением методов ТСХ, ВЭЖХ, масс- и ЯМР-спектроскопии.
Проведен весь комплекс доклинической фармакокинетики нового антиаритмика нибентана, включая разработку метода количественного определения, распределение в крови, органах, метаболизм и выведение.
Изучена фармакокинетика потенциальных ноотропных препаратов линоприда и дигама.
Изучен метаболизм у животных трех алкилирующих противоопухолевых препаратов группы этиленимидов фосфорной и тиофосфорной кислот.
Предложен общий подход доклинического изучения биотрансформации лекарственных препаратов.
ПРАКТИЧЕСКАЯЗНА ЧИМОСТЬ
Разработанные методики количественного определения препаратов в биологических жидкостях с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии применяются в клинической практике, а также при проведении различных фармацевтических исследований.
Предложенная методология доклинического исследования фармакокинетики лекарственных средств применима для изучения процессов всасывания, распределения, метаболизма и выведения оригинальных потенциальных препаратов.
Разработанный подход к изучению метаболизма с использованием комбинации физико-химических методов может применяться для
установления строения продуктов биотрансформации широкого круга лекарственных препаратов.
ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ
Проведение всего комплекса доклинических исследований фармакокинетики антидепрессантов тетриндола, пиразидола, инказана, противовирусного препарата арбидола, антиаритмика нибентана позволило внедрить данные препараты в клиническую практику.
По результатам фармакокинетических исследований на животных двух потенциальных ноотропных препаратов линоприда и дигама получено решение Государственного Фармакологического комитета для их клинических испытаний.
Методологию фармакокинетических доклинических исследований фармакокинетики рекомендуется использовать в разработке новой научно-технической документации по проведению качественных доклинических исследований новых фармакологических веществ.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзных научных конференциях, совещаниях и международных конгрессах (I Всесоюзная конференция по применению хроматографии в биологии и медицине (Москва), VI Международный симпозиум по биофармации и фармакокинетике (Братислава), 3-я Всесоюзная конференция по фармакокинетике (Москва), Всесоюзная конференция по масс-спектрометрии (Харьков), III Всесоюзное совещание по доклинической токсикологии (Томск), II IV и VIII конгрессы "Человек и Лекарство" (Москва), 1983-2003 гг. и др.). Всего 18 выступлений.
ПУБЛИКАЦИИ
По теме диссертации опубликовано 31 печатная работа.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ
Диссертация состоит из введения, 6-ти глав, заключения и списка
литературы, изложена на 256 страницах, содержит 42 рисунка, 33
таблицы, 13 схем. Список литературы включает 239 наименование, из
них 100 зарубежных.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
результаты комплексного доклинического исследования фармакокинетики и метаболизма оригинальных антидепрессантов тетриндола, пиразидола, инказана;
- результаты изучения фармакокинетики потенциальных ноотропов
линоприда и дигама;
результаты доклинического исследования фармакокинетики и метаболизма противовирусного препарата арбидола;
результаты изучения фармакокинетики первого отечественного антиаритмика III класса нибентана.
Фармакологические аспекты изучаемых лекарственных препаратов
Вторая половина XX века в психиатрии прошла под знаменем интенсивного изучения и внедрения в практику современных психотропных средств, важное место среди которых занимает антидепрессивная терапия. Антидепрессанты являются в настоящее время самым распространенным методом лечения различных расстройств депрессивного спектра.
В настоящее время в мире синтезировано более 100 антидепрессантов с различными особенностями спектра фармакологического и клинического действия. Биохимическим субстратом эмоционального реагирования являются медиаторы ЦНС активирующего типа, такие как норадреналин (НА), серотонин (С), и гамма-аминомасляная кислота[12,190].
Депрессивные состояния обусловлены нарушением НА и С обмена. Когда эти биогенные амины не инактивируются и могут накапливаться в синапсе - проведение возбуждения по синапсам ЦНС восстанавливается и депрессия купируется[12]. На этом основан механизм действия антидепрессантов - за счет улучшения проведения по синапсам, которое достигается либо инактивацией моноаминоксидазы (МАО), либо блокированием обратного нейронального захвата. Первую функцию выполняют ингибиторы МАО, вторую - так называемые ингибиторы обратного нейронального захвата или трициклические антидепрессанты[ 1,12].
История открытия антидепрессантов (АД) связана с 1957 годом, когда было обнаружено эйфоризирующее действие производных гидразина изоникотиновой кислоты имипрамина (первый представитель трициклических АД) и ипрониазида (первый из группы ингибиторов МАО).
Современная классификация АД [1]включает в себя: 1. ингибиторы МАО а) необратимые (ипрониазид, ниаламид (нуредал) Существенным побочным эффектом этих АД является так называемый "сырный" синдром, связанный с нарушением дезаминирования тирамина, содержащего в сыре, бобовых, копченостях, вине и проявляющийся повышением артериального давления по типу гипертонических кризов, а также токсическим действием на паренхиматозные органы - печень, почки. б) обратимые (пиразидол, тетриндол, инказан, индопан, бефол) 2. Ингибиторы обратного нейронального захвата а) неизбирательные (амитриптилин, азафен, мапротилин (лудиомил), имизин (мелипрамин, тофранил), кломипрамин (анафранил) б) избирательные (флуоксетин (прозак), флувоксамин, сертралин (золофт), тразозон 3. Разных групп а) сиднофен б) цефедрин
Для современной психиатрии большой интерес представляют антидепрессанты, влияющие преимущественно на серотонинергические процессы. В их число входят ингибиторы моноаминоксидазы типа А обратимого действия (ИМАО А). Вызывая торможение моноаминоксидазы А они приводят к быстрому увеличению внутриклеточной концентрации моноаминов, при этом в наибольшей степени повышается уровень мозгового серотонина[201].
В условиях эксперимента эти соединения вызывают ряд фармакологических эффектов, сходных с эффектами трициклических антидепрессантов (ТА), однако между ними имеется ряд отличительных особенностей. Антирезерпиновые эффекты выражены у ИМАО А в большей степени, чем у ТА. Другим выраженным свойством ИМАО А является способность потенцировать действие предшественников катехол- и индоламинов, что не отмечено при действии ТА[155,225]. Важное значение в действии ИМАО А имеет их влияние на эффекты тирамина. Обратимые ИМАО А усиливают действие тирамина в значительно меньшей степени, чем необратимые и неизбирательные ИМАО. При клиническом применении обратимых ИМАО А гипертонических "сырных" реакций отмечено не было.
Из новых антидепрессантов - ИМАО А обратимого действия наиболее известны: из отечественных препаратов - ПИР АЗИД О Л (пирлиндол, ЦХЛС-ВНИХФИ, Россия), ТЕТРИВДОЛ (ЦХЛС-ВНИХФИ, Россия), ИНКАЗАН (метралиндол, ЦХЛС-ВНИХФИ, Россия), бефол (Институт фармакологии РАМН, Россия).
Сравнительное фармакологическое изучение пиразидола, тетриндола, инказана и "эталонного" антидепрессивного средства имипрамина[201] по основным тестам антидепрессивного действия, проведенное на беспородных белых мышах, показало, что наиболее активным является тетриндол. Существенным отличием ИМАО А обратимого действия от имипрамина оказалось отсутствие у них антихолинергических свойств[4,95].
Перед нами стояла задача исследования фармакокинетики вышеуказанных препаратов на экспериментальных животных, выявления скоростей поступления активных начал в системный кровоток (при внесосудистом введении), распределение по важнейшим органам, что происходит с препаратами в результате биотрансформации, с какой скоростью выводятся из организма.
Метаболизм тетриндола
Полученные нами результаты при исследовании фармакокинетики тетриндола[131], а именно, небольшой процент от введенной дозы препарата, экскретирующегося с мочой животных в неизмененном виде, послужили основанием для предположения о высокой степени метаболических процессов, происходящих с препаратом в организме.
Задачей дальнейшей нашей работы являлось разработка методики разделения и выделения метаболитов тетриндола, выводимых из организма крыс с мочой с использованием метода высоко-эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и установление их строения методами ЯМР- и масс-спектрометрии.
Материалы и методы исследования. Эксперимент проведен на беспородных крысах-самцах, массой тела 200—220 г. Животные получены из питомника АМН РФ. Крыс содержали в стационарных условиях при естественном световом режиме и на стандартном рационе (комбикорм и вода). Животных лишали пищи за 18—20 ч до начала эксперимента. После введения препарата крыс пересаживали в специальные метаболические клетки. В тех же условиях содержалась и контрольная группа крыс.
Субстанцию препарата вводили в дозе 300 мг/кг перорально в крахмальном геле. Пробы мочи брали в интервалах 0—6, 6—24, 24—48 ч после введения препарата.
Пробы мочи (2 мл) отфильтровывали, подщелачивали с помощью насыщенного раствора ИаНСОз до рН 8 и лиофилизировали досуха. Метаболиты тетриндола экстрагировали 6 мл хлороформа, затем метанолом. Экстракты упаривали, сухой остаток растворяли в 1,2 мл метанола, фильтровали и хроматографировали. Фракции, отвечающие пикам, собирали в полиэтиленовые пробирки, растворы упаривали под вакуумом и остатки анализировали с помощью масс- и ЯМР-спектрометров. В работе использовали жидкостный хроматограф фирмы «Gilson» с автосэмплером, вводимый объем пробы (петля) 50 мкл, УФ-детектор, длина волны 280 нм, колонка Lichrosorb RP8, 10 мкм 250-4,6 мм. Состав элюента: 50 % метанола и 50 % воды. Скорость потока 1 мл/мин. Объем вводимой пробы 50 мкл. Масс-спектрометр МАТ-122 фирмы «Finnigan» (Швейцария), прямой ввод образца в источник ионов, ускоряющее напряжение 70 эВ. Спектрометр ЯМР «Varian» (Швейцария), рабочая частота на протонах 200 МГц. Результаты и обсуждение.
На хроматограмме хлороформного экстракта мочи подопытных крыс, получавших препарат, по сравнению с контролем фиксируются до 7 пиков с Rt 9, 10, 13,5, 16, 18,5, 20 и 22,5 мин, принадлежащих метаболитам тетриндола (рис. 8а). Сам препарат в этой хрома-тографической системе имеет Rt 25 мин и сильно размыт. В метанольном экстракте присутствовали те же метаболиты, только в меньших количествах. В разных временных интервалах изменялось лишь соотношение метаболитов.
В спектре ЯМР- Н тетриндола наблюдаются сигналы ароматических протонов при 7 58 м. д. (Н-7) и 7,48—7,50 м. д. (Н-9 и Н-10), триплеты от Н-1 и Н-2 при 4,15 и 4,38 м. д. соответственно, сигналы при 3,12, 3,02, 2,32 м. д., принадлежащие соответственно Н-4, Н-6, Н-5, и уширенные сигналы циклогексильного остатка при 1,3—1,9 и 2,62 м. д. (Н-1 ).
Масс-спектры метаболитов представлены на рис. 9. Как видно из спектров, хроматографическому пику / (Rt=9 мин) соответствует метаболит с молекулярной массой 308. Изменения четности молекулярной массы по сравнению с исходной молекулой тетриндола не произошло. Мол. масса увеличилась на 14 а. е. м. В спектре наблюдается максимально интенсивный пик [М-28]+, а также пик m/z 211, что свидетельствует о том, что правая часть молекулы (тетрагидропиразинокарбазольная система) осталась без изменения, а превращения связаны с циклогексильным заместителем. Наиболее естественно предположить, что эти изменения заключаются в появлении в циклогексильном кольце двойной связи и гидроксильной группы (Ат=14). М 30в
В масс-спектре метаболита 2 (Rt = 10 мин) (II) также наблюдается пик молекулярного иона с m/z 308. Совпадают и значения основных характеристичных ионов метаболитов 1 и 2. По-видимому, метаболит 2 является изомером / и отличается от последнего положением гидроксильной группы или двойной связи. При сопоставлении спектра ЯМР Н тетриндола со спектром суммарной фракции 1 и 2 в последнем наряду с сигналами в ВО алифатической (1,0—4,5 м. д.) области наблюдаются ряд сигналов в области 7,1—7,7 м. д. и уширенные сигналы при 6,1 м. д. Вместе с тем известно, что величины химических сдвигов олефиновых протонов в замещенном циклогексене при отсутствии сопряжения между двойной связью и фенильным заместителем лежат в интервале 5,4—5,9 м. д. В то же время сигналы протонов при сопряжении следует ожидать в области 6,0—7,3 м. д. Эти данные согласуются с выдвинутым выше представлением о наличии двойной связи в циклогексильном кольце, причем они позволяют считать, что эта связь находится в сопряжении с индольным циклом: Метаболит 3 (Rt =13,5) имеет мол. массу 290. Это на 4 а. е. м. меньше массы исходной молекулы тетриндола. В масс-спектре 3 сохраняется основной характер фрагментации, присущей тетриндолу, т. е. наличие максимально интенсивного пика [М-28]+ m/z 262 и m/z 211. Это позволяет предположить структуру метаболита с двумя двойными связями в циклогексильном заместителе. Можно полагать, что образование метаболита 3 связано с появлением двух двойных связей в циклогексильном заместителе при сохранении тетрагидропиразолокарбазольного ядра.
Кинетика линоприда в амниотической жидкости
На рисунке 17 и в таблице 15 представлены результаты фармакокинетического исследования распределения линоприда по таким основным органам, как печень, почки и головной мозг.
Как видно из рисунка и таблицы, линоприд обладает высокой тропностью к исследованным органам. Максимальное количество неизмененного препарата, рассчитанное на грамм органа, фиксируется уже через 30 мин в почках и мозге, через 1 ч - в печени, причем его содержание в органах существенно превышает таковое в крови (Стах в печени и почках составляет около 3.5 мкг/г, в мозге - около 800 нг/г, в то время как в сыворотке крови это значение - около 160 нг/мл). Существенное количество неизмененного линоприда в мозге говорит о легком проникновении этого соединения через ГЭБ, что важно для средства, действующего на уровне головного мозга. В таблице 16 приведены значения коэффициента распределения линоприда между сывороткой крови и органами в разные моменты времени. На рисунке 18 приведены графики, отражающие изменение коэффициента распределения с течением времени. Значения коэффициента распределения рассчитывали по формуле:
К = концентрация в органе / концентрация в сыворотке крови. Из таблицы и графика видно, что во все моменты времени концентрация линоприда в органах выше, чем в сыворотке крови. В печени значение коэффициента распределения постоянно уменьшается от 27.6 до 10.8. Это говорит о том, что из печени препарат элиминируется быстрее, чем из крови (периоды полуэлиминации для сыворотки крови и печени, соответственно, 1.89 ч и 1.08 ч). Для почек коэффициент распределения сначала резко падает от 33.5 до 10.8, что можно объяснить тем, что время достижения максимальной концентрации в почках (Ттах) составляет 30 мин, а в сыворотке крови - 1 час, то есть концентрация в крови "догоняет" концентрацию в почках. Затем (после 2 часов) значение коэффициента распределения в почках возрастает от 10.8 до 27.6, что связано с более медленной элиминацией линоприда из почек (периоды полуэлиминации для сыворотки крови и почек, соответственно, 1.89 и 2.39).
Наименьшие значения коэффициента распределения - в мозге, что связано с наличием ГЭБ. Однако даже в данном случае коэффициент распределения принимает значения от 4.7 до 8.7, что говорит о хорошем проникновении линоприда в мозг. Здесь так же, как и в почках коэффициент распределения сначала уменьшается от 6.6 до 4.7 (Ттахв мозге также 30 мин), а затем медленно возрастает (после 2 часов) от 4.7 до 8.7 (Ті/2 для сыворотки крови и мозга, соответственно, 1.89 и 1.96). В среднем концентрация линоприда в головном мозге примерно в 6 раз больше, чем в сыворотке крови.
Соотношение площадей под фармакокинетическими кривыми, описывающими кинетику препарата в органах, также указывает на то, что ГЭБ затрудняет проникновение линоприда в мозг. Это соотношение выглядит следующим образом: печень : почки : мозг = 3.05 : 3.39 : 1 То есть общее количество линоприда, проникающее в мозг, более чем в 3 раза меньше, чем количество препарата, проникающее в почки и печень. При анализе фармакокинетических кривых также видно, что содержание линоприда в мозге в течение 3 ч после введения в 3-4 раза меньше, чем в печени и почках.
В печени регистрируется меньше неизмененного линоприда, чем в почках, что можно объяснить биотрансформацией препарата.
Кумуляцию линоприда в исследуемых органах не наблюдали. Период полуэлиминации составил, в среднем, около 2 ч из почек и мозга и около 1 ч из печени. Среднее время удержания линоприда составило около 3.1 ч в почках и головном мозге и 1.8 ч в печени. Это говорит о том, что из печени линоприд элиминируется быстрее, чем из головного мозга и почек. Если соотнести периоды полуэлиминации линоприда, то мы получим следующую пропорцию: печень : почки : мозг = 1 : 2.2 : 1.8 То есть скорость элиминации препарата из печени примерно в 2 раза выше скорости элиминации из почек и мозга. Это может быть следствием высокой скорости биотрансформации линоприда, которая протекает с участием ферментов печени.
Средние времена удержания линоприда в органах различаются в несколько меньшей степени, так как они описывают не только элиминацию препарата, но весь фармакокинетический процесс в целом. Соотношение MRT в разных органах имеет вид: печень : почки : мозг = 1 : 1.8 : 1.7 То есть среднее время нахождения молекул линоприда в печени примерно в 1.75 раза меньше, чем в почках и головном мозге.
Изучение кинетики арбидола и его влияния на репродукцию
Увеличение времени экспозиции арбидола при концентрациях 1 и 10 мкг/ мл с клетками сопровождается уменьшением его содержания во внеклеточной среде и параллельно увеличением его уровня в клетках (рисунок 34). Эти изменения достигают максимума через 3 - 5 ч после добавления препарата к клеткам.
При этом наблюдается хорошая корреляция между убыванием препарата из внеклеточной среды и накоплением его в клетках. При дальнейшем увеличении времени экспозиции арбидола с клетками до 24 ч суммарное количество определяемого препарата в клетках и внеклеточной среде составляет менее 50 % от добавленного к клеткам, что может свидетельствовать о его разрушении или метаболизме.
Анализ клеточных мембран показал, что при добавлении арбидола в культуральную среду в концентрации 1 мкг/мл препарат в мембранах клеток не определяется (возможно, вследствие больших потерь при выделении клеточных мембран), а при концентрации 10 мкг/мл его содержание составляет всего 0,5-1,2 % от добавленного к клеткам в среду культивирования. Наибольшее содержание арбидола в клеточных мембранах отмечается в интервале времени от 3 до 4 ч. Дальнейшее увеличение времени экспозиции препарата с клетками приводит к уменьшению его содержания в клеточных мембранах.
Таким образом, полученные данные показывают, что наибольшее количество арбидола обнаруживается в клетках и клеточньк мембранах через 3 - 4 ч после добавления препарата к клеточной культуре. Этот временной интервал совпадает с наибольшим антивирусным эффектом арбидола. Следовательно, максимальная концентрация арбидола в клеточной мембране обеспечивает ее стабилизацию и ингибирует слияние с ней липидной мембраны вируса, препятствуя тем самым проникновению вируса в клетку.
Сама по себе субстанция арбидола имеет горьковатый привкус. Поэтому было принято решение покрыть таблетки оболочкой. Выбраны два типа: покрыть в одном случае суспензионной оболочкой, в другом - защитной пленкой.
Использовали кроликов "шиншилла" (2.5-3.8 кг). Таблетки давали per os по 5-7 шт. на кролика в зависимости от веса животного. В перекрестном опыте каждому кролику давали эквивалентные дозы как таблеток, покрытых суспензионной оболочкой, так и с пленочным покрытием. Применяли ВЭЖХ-метод количественного определения арбидола в сыворотке крови, приведенный выше.
Результаты. Результаты количественной оценки содержания неизмененного арбидола в сыворотке крови кроликов при пероральном применении таблеток с суспензионным и пленочным покрытием представлены на рис. 35 в координатах "концентрация - время" по средним значениям со стандартной ошибкой с нормировкой к дозе 150 мг/кг. В таблице 31 приведены основные фармакокинетические параметры, рассчитанные модельно-независимым способом. На рис. 36 представлены графики значений концентраций по каждому кролику.
При сравнении биодоступности двух лекарственных форм сравнивали такие параметры, как AUC (площадь под кривой "концентрация - время", кэл. (константу элиминации) или период полуэлиминации, Смакс. и Тмакс. (максимальную концентрацию препарата в крови и время ее достижения).
Из приведенных рисунков и таблицы видно, что профили концентраций при применении таблеток с суспензионной оболочкой практически повторяют профили концентраций при использовании таблеток с пленочным покрытием. Во всех случаях максимальные количества неизмененного препарата в крови фиксируются для двух исследуемых лекарственных форм в одно и то же время (значение Тмакс=1 час). Уровни концентраций (средние значения Смакс.) близки и составляют для таблеток с суспензионной оболочкой и пленочным покрытием, соответственно
