Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Характеристика лекарственного растительного сырья, фасованного в фильтр-пакеты и используемого для изготовления водных извлечений 9
1.2. Анализ нормативной документации на порошкованное лекарственное растительное сырье и лекарственную форму «Настои и Отвары» 12
1.3. Современное состояние изучения порошкованного лекарственного растительного сырья и водных извлечений на его основе 20
1.4. Изучение микробной чистоты порошкованного лекарственного растительного сырья и водных извлечений 26
1.5. Антиокислительная активность растительного сырья и способы ее определения 28
1.6. Характеристика фильтр-пакетов 31
Выводы 35
Экспериментальная часть 36
Глава 2. Объекты и методы исследования 36
Глава 3. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья в фильтр-пакетах 44
3.1. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «листья» 44
3.2. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «травы» 47
3.3. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «цветки» 50
3.4. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «плоды» и «коры» 52
3.5. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья, представленного подземными органами 53
Выводы 55
Глава 4. Хроматографическии анализ водных извлечений из лекарственного растительного сырья в фильтр-пакетах 56
4.1. Исследование сырья и водных извлечений методом планарнои хроматографии 56
4.2. Изучение сырья и водных извлечений методом ВЭЖХ 92
Выводы 102
Глава 5. Изучение физико-химических характеристик настоев и отваров из фильтр-пакетов 103
5.1. Органолептическая характеристика настоев и отваров 103
5.2. Определение показателя удельного вращения водных извлечений из лекарственного растительного сырья, фасованного в фильтр-пакеты 110
5.3. Определение сухих остатков, окисляемых и действующих веществ в настоях и отварах из лекарственного растительного сырья в фильтр-пакетах 112
5.3.1. Определение сухого остатка настоев 113
5.3.2. Определение содержания окисляемых веществ 114
5.3.3. Определение содержания действующих веществ 116
Выводы 121
Глава 6. Изучение микробиологической чистоты лекарственного растительного сырья и его водных извлечений 122
6.1. Определение содержания аэробных бактерий 122
6.2. Количественное определение грибов 128
6.3. Идентификация микроорганизмов, выделенных из исследуемых извлечений 129
6.4. Исследование антибактериальной активности извлечений, полученных из растительного сырья в фильтр-пакетах 135
Выводы 138
Глава 7. Определение антиокислительной активности водных извлечений из лекарственного растительного сырья, фасованного в фильтр-пакеты 139
Выводы 145
Глава 8. Изучение влияния бумаги, используемой для производства фильтр-пакетов, на выход биологически активных веществ 146
Выводы 155
Общие выводы 15 6
Список литературы
- Анализ нормативной документации на порошкованное лекарственное растительное сырье и лекарственную форму «Настои и Отвары»
- Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «травы»
- Определение показателя удельного вращения водных извлечений из лекарственного растительного сырья, фасованного в фильтр-пакеты
- Идентификация микроорганизмов, выделенных из исследуемых извлечений
Введение к работе
Укрепление и охрана здоровья людей является одной из актуальных социальных программ современного общества. Несмотря на бурное развитие различных отраслей промышленности, в том числе фармацевтической, и появления новых высокоэффективных синтетических лекарственных средств, в последнее время наблюдается возврат к старым методам лечения. Среди них одно из ведущих мест занимает фитотерапия. Лекарственное растительное сырье (ЛРС) обладает малой токсичностью и, практически, не оказывает побочного действия при длительном применении, широко используется при лечении различных хронических заболеваниях. Из ЛРС, разрешенного в настоящее время государственным реестром лекарственных средств для медицинского применения, около половины используется для приготовления настоев и отваров.
Для изготовления водных извлечений используют все морфологические группы сырья: цветки, листья, травы, почки, коры, плоды, семена и подземные органы. В настоящее время все большую популярность приобретает лекарственное растительное сырье, фасованное в фильтр-пакеты (ФП), в которых размеры частиц сырья не превышают 2 мм. Сырье, выпускаемое в ФП, представлено в основном листьями, травами, цветками, плодами, в меньшей степени корами и подземными органами. Сырье с такой степенью дисперсности еще недостаточно хорошо изучено относительно выхода биологически активных веществ, их концентраций в водных извлечениях. В фильтр-пакетах дисперсность сырья находится в широких пределах от 2 мм до 0,16 мм и менее, что в свою очередь требует тщательного всестороннего изучения с последующим нормированием измельченности в НД на данную лекарственную форму сырья. Переход БАВ из сырья в водные извлечения определяется наряду с размером частиц так же морфологическими особенностями сырья и химическим составом. Поэтому представляет интерес изучение порошкованного лекарственного
6 растительного сырья из различных морфологических групп и различных по химическому составу.
Целью настоящего исследования является фармакогностическое изучение порошкованного лекарственного растительного сырья, используемого для изготовления фильтр-пакетов и обоснование системы стандартизации сырья и водных извлечений получаемых из фильтр-пакетов. Задачи исследования:
Провести анализ современного состояния нормативной документации,
методик получения, стандартизации настоев и отваров из
порошкованного ЛРС.
Разработать характеристики подлинности и показатели качества настоев
и отваров, получаемых из фильр-пакетов.
Изучить влияние размера частиц, условий настаивания порошкованного
сырья, выпускаемого в фильтр-пакетах на качество настоев и отваров.
С использованием современных физико-химических методов анализа
провести углубленное изучение химического состава порошкованого
ЛРС и водных извлечений.
Разработать требования к качеству водных извлечений из
порошкованного ЛРС, фасованного в фильтр-пакеты.
Работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакогнозии ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом антропогенных факторов, оценки качества и сертификации» (код темы 04.07.093, проблема № 1006 АМН РФ, Государственный регистрационный номер: 01200110546).
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Научная новизна исследования заключается в комплексном изучении водных извлечений из сырья, фасованного в фильтр-пакеты, во взаимосвязи с измельченностью и условиями настаивания.
Изучено влияние измельченности на качество получаемых водных извлечений для 30 видов ЛРС, различных морфологических групп и фасованного в ФП. Установлены оптимальные для каждого вида размеры частиц сырья, позволяющие получать настои и отвары с более высоким содержанием действующих веществ. Выявлены закономерности влияния размера частиц сырья и химического состава на качество водных извлечений. Для характеристики сырья, используемого при изготовлении водных извлечений, предложен показатель «Экстрактивные вещества при настаивании», регламентирующий содержание в сырье гидрофильной группы биологически активных веществ.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.
Научно обоснована возможность использования методики получения водных извлечений, приводимой в инструкции по применению в фильтр-пакетах.
Разработан проект общей фармакопейной статьи «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье», в котором для характеристики сырья, используемого для изготовления водных извлечений, включен показатель: «Экстрактивные вещества при настаивании».
Показана целесообразность введения регламентации в порошкованном лекарственном растительном сырье фракций, обеспечивающих максимальное содержание действующих веществ.
Показана необходимость использования для изготовления фильтр-пакетов только обмолоченной травы.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты работы доложены на 2-ой Всероссийской научно-методической конференции «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования», Воронеж - 20-22 апреля 2005г, на научно-практической конференции «Современные методы стандартизации и контроля качества лекарственных средств», Москва- 30-31 мая 2006г, на 3-й Всероссийской научно-методической конференции «Пути
и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ», Воронеж - 22-24 марта 2007.
ПУБЛИКАЦИИ. По диссертации опубликовано 15 печатных работ в научных журналах, сборниках международных конференций и научных трудах.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
Характеристики подлинности и показатели качества порошкованного ЛРС.
Результаты исследования измельченности ЛРС, технологии изготовления настоев и отваров и влияния бумаги на качество получаемых извлечений.
Данные по антиокислительной активности ЛРС.
Изучение микробиологического состояния сырья и водных извлечений из
ЛРС.
Анализ нормативной документации на порошкованное лекарственное растительное сырье и лекарственную форму «Настои и Отвары»
В Государственной фармакопее XI издания имеются 20 общих фармакопейных статей (ОФС), посвященные методам анализа ЛРС и 80 ЧФС на отдельные виды сырья, в то время как к медицинскому использованию в
России разрешено около 260 видов сырья [47,48]. На остальные и новые виды растительного сырья действуют чаще всего устаревшие государственные стандарты (ГОСТы), фармакопейные статьи Государственных фармакопеи СССР предыдущих изданий, а так же временные фармакопейные статьи (ВФС) и отдельные ФС, не вошедшие по разным причинам в ГФ XI издания.
Из 20 ОФС 13 статей включают общее методы контроля ЛРС. Важным показателем качества порошкованного растительного сырья является его измельченность. В ГФ XI, вып. 2., включена ОФС «Определение измельченности порошков и сита», регламентирующая методику определения размера частиц синтетических веществ и сырья растительного происхождения [48].
Для растительного сырья ГФ XI приводит характеристику сит, используемых для определения измельченности цельного и измельченного сырья (размер отверстий от 10,0 до 0,5 мм) и сит для работы с растительными порошками (размер отверстий от 0,31 до 0,16 мм).
В фармакопеях различных стран мира так же существуют частные фармакопейные статьи по определению измельченности порошков. Количество их видов варьирует от 7 (Великобритания) до 3 (Германия). В немецкой и американской фармакопеях отдельно выделены разделы для порошкованного лекарственного растительного сырья. В немецкой фармакопее самый крупный порошок имеет размер частиц 1,0 мм, в британской- 1,7 мм, а в американской- 3,26 мм. Во всех статьях регламентируются как нижняя, так и верхняя границы измельченности, за исключением самого мелкого порошка в статье фармакопеи США - 0,18 мм. [62].
Таким образом, анализ литературных данных показывает, что необходимо в новой редакции ГФ пересмотреть общую статью «Порошки», включив в нее классификацию растительных порошков по размеру частиц, учитывая опыт зарубежных и отечественных фармакопеи.
Одна из ОФС посвящена ЛФ, получаемой из растительного сырья «настои» и «отвары», представляющую собой водные извлечения из ЛРС, а также водные растворы сухих или жидких растительных экстрактов (концентратов) [47, 48].
Настои и отвары - это одна из древнейших лекарственных форм, упоминание о них встречается в трудах арабских и древнегреческих врачей и ученых [5, 65, 79]. Настои и отвары входили во все издания Российской фармакопеи, начиная с первого (1802г.- РФ, входили 2 статьи), основой которого стал сделанный в 1798г. перевод с латинского на русский язык 2-го издания гражданской фармакопеи. Сведения о водных извлечениях были систематизированы в руководствах по изготовлению лекарственных препаратов (А.А. Иовского, Н. Неезе, А.П. Нелюбова, Ю.К. Траппа) [79]. Общие правила изготовления водных извлечений впервые регламентированы в РФ 1866, в статьях «Настои» и «Отвары» [79].
Статьи, посвященные настоям и отварам, во всех изданиях фармакопеи, вплоть до XI (1987г.), представляли собой конкретные указания по технологии изготовления водных извлечений (условия экстрагирования, фильтрования и т.д.), что обусловлено сложностью оценки качества этой лекарственной формы. В первых семи изданиях Российской фармакопеи существовали две отдельные статьи: «Настои» и «Отвары». Настои делились на горячие и холодные. При изготовлении «горячих» настоев - Infusecalide calide parata - сырье настаивали с кипящей перегнанной водой в течение 15 или 30 мин (РФ I, II) или 5 мин (РФ III-IV), затем медленно охлаждали, остаток ЛРС выжимали. «Холодные» настои- Infusa frigidae parata -изготовляли путем мацерации сырья водой комнатной температуры в течение 12 часов (РФ III- 4 часа).
При изготовлении отваров или взваров (Decocta Apozemata) ЛРС с водой настаивали на кипящей водяной бане 30 мин и процеживали отвары ещё теплыми. В первых изданиях фармакопеи существовали комбинированные формы: настои с отваром и отвар с настоем. При изготовлении настоя с отваром (Infuso - Decoctum) вначале получали настой, затем из отжатого ЛРС готовили отвар, отваривая сырьё с водой, потом обе жидкости смешивали. При приготовлении отвара с настоем (Decocto -Infiisum) готовили отвар из сырья, содержащего нелетучие вещества; полученный отвар использовали для изготовления настоя из остальных видов сырья. По другому способу: в конце приготовления отвара добавляли ЛРС, содержащие летучие вещества.
Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «травы»
Было проведено изучение морфологического состава фракций порошка трав. Исследование показало, что фракции с размером частиц от 2,0 мм до 0,5 мм представлены в основном стеблями (от 50 до 95%), в 3-ей фракции с размером частиц 0,5-0,25 мм содержание листьев, цветков и стеблей у травы душицы и череды примерно одинаково, у травы зверобоя 50 % составляют листья, в траве пустырника содержание стеблей и листьев одинаково, а цветков не более 20 %. В фракциях 4 и 5 с размером частиц от 0,25 мм до 0,16 мм преобладающими являются листья и цветки. В сырье зверобоя содержание цветков в 5-ой фракции достигает 70 %. (табл. 7).
Проведенные исследования показали, что соотношение стеблей, листьев и цветков в изучаемых фракциях трав для различных растений неодинаково. Это связано в первую очередь с морфолого-анатомической характеристикой самих растений (опушенность, размеры листовой пластинки, характером
Примечание: Ст- стебли, Л- листья, Цв - цветки. соцветий и строением цветка и т.п.). Трава тысячелистника во всех фракциях представлена в основном стеблями, что связано с наличием у данного растения толстого, разветвленного стебля и небольших по размеру ланцетовидных, дваждыперисторассеченных, с трех надрезанными сегментами листьев, а так же мелких (не более 5 мм), многочисленных корзинок собранных на верхушке стеблей в сложный щиток. В остальных изучаемых объектах соотношение стеблей, листьев и цветков прямо пропорционально размеру частиц: с увеличением дисперсности сырья в нем уменьшается содержание стеблей (они труднее измельчаются) и увеличивается - листьев и цветков, в которых в основном и содержатся биологически активные вещества. 3.3. Изучение дисперсности лекарственного растительного сырья «цветки»
Для безрецептурного отпуска разрешено небольшое количество сырья «цветки» (10 наименований). В фильтр-пакетах выпускается 5 наименований. Для анализа были использованы наиболее часто употребляемые населением цветки в фильтр-пакетах: ромашки, календулы, гибискуса, липы. Анализ дисперсности цветков, фасованных в фильтр-пакеты, показал, что в сырье календулы преобладают 1 и 3 фракции с размером частиц от 2,0 до 0,25 мм, а в ромашке 1 фракция представлена в наименьшем количестве, основными же являются 3 и 4 фракции с размером частиц от 0,5 до 0,16 мм.
Для сырья гибискуса с достаточно плотными, грубыми лепестками преобладающими являются фракции с размером частиц 2,0-0,5 мм (табл. 8).
Сырье цветков ноготков, расфасованное в фильтр-пакеты, представляет собой отдельные части соцветия различной формы, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, коричнево-оранжевого цвета со слабым специфическим запахом. Цвети ромашки - отдельные части соцветия различной формы, желтовато-зеленого цвета со специфическим ароматным запахом. Цветки липы достаточно равномерно измельчаются в процессе переработки и основное содержание частиц наблюдается в первых трех фракций (табл. 9).
Менее 0,16 мм 15±1,5 40±4 40±4 5±0,5 Сырье в фильтр-пакете представлено смесью обвертки, краевых, срединных цветков и других частей цветоложа (табл. 9). Самыми хрупкими частями соцветия календулы и ромашки являются краевые язычковые и срединные трубчатые цветки. Наиболее трудно поддаются измельчению части обвертки цветоложа. Основные действующие вещества, формирующие фармакологическое действие сырья накапливаются в язычковых и трубчатых цветках соцветий.
Лекарственное растительное сырье «плоды» сем. Сельдерейные (Apiaceae) фасуется в цельном виде. Плоды жостера, черемухи и черники как моносырье поступают в аптеки в цельном виде для приготовления отваров. Для исследований были взяты фильтр-пакеты, таких наиболее употребимых плодов, как плоды шиповника и боярышника.
Сырье «кора» в номенклатуре аптек представлена только тремя видами: крушина, дуб, калина. Для исследований использовали фильтр-пакеты крушины, как наиболее часто используемое сырье. Калина пока в фильтр-пакетах не выпускается, сырье поступает в аптечную сеть ограниченно.
Наиболее трудно измельчаемым сырьем оказались плоды боярышника и соплодия ольхи. В этих объектах преобладает 1-я фракция с размером частиц от 2,0 до 1,0 мм (табл. 10).
Определение показателя удельного вращения водных извлечений из лекарственного растительного сырья, фасованного в фильтр-пакеты
Анализ полученных данных показывает, что содержание полисахаридов в настоях из сырья, фасованного в фильтр-пакеты (водные извлечения из цветков ромашки, календулы, травы череды) ниже, чем в настоях, изготовленных из отдельных фракций сырья. Данные результаты могут объясняться адсорбцией полисахаридов на бумаге фильтр-пакета. Четкой зависимости перехода полисахаридов из ЛРС в водные извлечения в зависимости от дисперсности сырья не установлено.
Содержание флавоноидов в водных извлечениях из ФП и отдельных фракций имеют близкие значения. При изучении влияния дисперсности сырья фильтр-пакетов на переход флавоноидов в воду установлено, что наибольшее содержание суммы флавоноидов в настоях из последних трех фракций сырья (0,5-0,25 мм; 0,25-0,16 мм; менее 0,16 мм).
Содержание арбутина в водных извлечениях из отдельных фракций сырья выше, чем из самого ФП, что также возможно связано с влиянием бумаги. Содержание арбутина в листьях брусники и толокнянки наивысших значений достигает при размере частиц от 1,0 мм до 0,25 мм.
Фармакологический эффект водных извлечений из лекарственного растительного сырья определяется всей суммой биологически активных веществ переходящих из сырья в настой. Определение группы БАВ или отдельных соединений для стандартизации сырья и лекарственной формы не дает полного представления о всей сумме БАВ, оказывающих на организм фармакологический эффект. Кроме того сырье, используемое для изготовления водных извлечений, часто стандартизуют по соединениям плохо или практически нерастворимым в воде. Совокупность факторов
119 показывает необходимость введения числового показателя, характеризующего весь комплекс гидрофильных веществ находящихся в ЛРС и переходящим в настой.
Использование для этих целей показателя «экстрактивные вещества извлекаемые водой» не рационально, поскольку условия экстракции при определении этого показателя и условия получения настоев различны. Для ЛРС, используемого для получения водных извлечений целесообразнее введение показателя экстрактивные вещества при настаивании, который будет характеризовать сумму гидрофильных веществ ЛРС, полученную в условиях, соответствующих условиям получения лекарственной формы «настоев» и «отваров».
В сырье, используемом для изготовления водных извлечений, необходимо определять экстрактивные вещества при настаивании.
Для водных извлечений, приготовленных по методике ГФ XI в разведении 1:10, можно использовать следующую методику: 10 г измельченного сырья (точная навеска), просеянного сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, помещаем в коническую колбу вместимостью 200 мл заливаем 100 мл дистиллированной воды комнатной температуры, нагреваем на водяной бане после закипания 15 минут, далее охлаждаем в течение 45 мин, фильтруем и объем извлечения доводим до 100 мл. Далее 5 мл водного извлечения помещаем в взвешенную до постоянной массы выпарительную чашку, выпариваем на водяной бане до суха и высушиваем в течение 2 часов в сушильном шкафу при температуре 100-103 С, затем охлаждаем в эксикаторе в течение 30 мин и взвешиваем на аналитических весах с точностью до 0,001 г. Высушивание продолжаем до постоянной массы, пока разность между взвешиваниями не будет превышать 0,01г.
Содержание экстрактивных веществ при настаивании в процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле: _ лі-100-ІОО Х Л«,-(100-ЙТ) 120 где м- масса сухого остатка, в граммах; Mi- масса сырья, в граммах (10,0г); w- потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.
Для водных извлечений, приготовленных из ЛРС, фасованного в фильтр-пакеты, используется следующая методика:
1 фильтр-пакет (точная навеска) помещаем в коническую колбу вместимостью 200 мл заливаем 100 мл кипятка и настаиваем в течении 15 минут (хрупкая гистологическая структура сырья) или 30 мин (плотная гистологическая структура сырья), далее фильтруем и объем извлечения доводим до 100 мл. Далее 15 мл водного извлечения помещаем в взвешенную до постоянной массы выпарительную чашку, выпариваем на водяной бане до суха и высушиваем в течение 2 часов в сушильном шкафу при температуре 100-103 С, затем охлаждаем в эксикаторе в течение 30 мин и взвешиваем на аналитических весах с точностью до 0,001 г. Высушивание продолжаем до постоянной массы, пока разность между взвешиваниями не будет превышать 0,01г.
Содержание экстрактивных веществ при настаивании в процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляли по формуле: м-100 -100 мх -(ЮО-яг) где м- масса сухого остатка, в граммах; мг масса сырья, в граммах (1,5г); w- потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.
Идентификация микроорганизмов, выделенных из исследуемых извлечений
Количественный учет грибов проводили на среде Сабуро, в 10 мл которой методом «глубинного посева» вносили по 1 мл разведений исследуемых образцов. Инкубацию при ежедневном просмотре проводили до 3-4-х суток при 25 С. Sabouraud Fluid Medium: жидкая среда Сабуро-используется для культивирования дрожжей и плесневых грибов. Sabouraud Fluid Medium рекомендуется как стандартная среда для исследования грибкового заражения фармацевтических продуктов. Состав данной среды следующий: казеиновый пептон (5,0 г/л), декстроза (20,0 г/л), мясной пептон (5,0 г/л), конечное значение рН 5,7+0,2.
Большинство выделенных грибов по характеру колоний и структуре мицелия относились к плесневым грибам родов Aspergillus, Mucor и Penicillium. Частота обнаружения дрожжевых грибов была незначительна.
Видовой состав исследуемых извлечений был достаточно однородным. В значительном количестве выделялись бактерии рода Bacillus, которые можно, скорее всего, отнести к свободноживущим, подвижным почвенным бациллам (рис. 29-34). Подвижность выделенных микроорганизмов определяли в нативных мазках с помощью темнопольной микроскопии.
Попытка идентифицировать часть выделенных бацилл с помощью идентификационных пластин арі 50СНВ/Е значительного результата не принесла. В нескольких случаях выделенные микроорганизмы можно было отнести к Bac.mycoides и Bac.coagulans, в подавляющем большинстве случаев полученные при идентификации коды не соответствовали кодам в каталоге. Вероятно, подобные результаты связаны с большим разнообразием видов рода Bacillus и недостаточным описанием их биологических свойств.
Выделенные на ЦПХ—агаре грамотрицательные палочки, по-видимому, относились к роду Pseudomonas и во всех случаях давали отрицательный тест на цитохромоксидазу.
Данные исследований обсемененности лекарственного растительного сырья в фильтр-пакетах от времени показали различные результаты в зависимости от вида сырья. Увеличение общего количества микроорганизмов в извлечениях, приготовленных из листьев подорожника большого и плодов шиповника, по-видимому, говорят о том, что из данных видов сырья экстрагируются вещества, способствующие размножению, как бактерий, так и грибов.
Наиболее загрязненным, несмотря на литературные данные об антибактериальных свойствах, были извлечения, приготовленные из листьев подорожника большого. В наших экспериментах антибактериальные свойства подорожника выявлены не были.
Динамика роста микроорганизмов из водных извлечений подорожника значительно превосходила все остальные извлечения. Наибольшее значение этот показатель имел через 3 часа хранения.
Общая обсемененность извлечений из листьев мяты перечной, оставалась без изменений до 6 часов хранения, затем количество микроорганизмов увеличивалось и оставалось без изменения до 24 часов. Подобные результаты, по-видимому, связаны с наличием в ее составе эфирных масел, способных оказывать определенный антибактериальный эффект. Наши эксперименты показали, что настои из листьев мяты обладают антибактериальной активностью в отношении таких бактерий как стафилококки и энтеробактерии.
Водные извлечения, приготовленные из листьев толокнянки обыкновенной, содержали незначительное количество микроорганизмов, относящихся к роду Bacillus, и не содержали грибов. В процессе хранения извлечений происходило постепенное самоочищение и через 6 часов количество бактерии достигало наименьшего значения. Поэтому количество бактерий в этих случаях мы определяли методом прямого «глубинного посева» неразведенных извлечений. Исследование, направленное на определение антимикробной активности толокнянки, показало ее широкий спектр антибактериальной и противогрибковой активности, что совпадает с многочисленными данными литературы.
Анализ изменений видового состава в зависимости от времени хранения извлечения показал различные результаты для разных образцов.
Так, в извлечениях, приготовленных из листьев мяты перечной, увеличение количества происходило в основном за счет плесневых грибов. Бактерии рода Pseudamonas за 6 часов исчезали.
Изменения микробиологической обсемененности во времени относительно извлечений, приготовленных из листьев подорожника большого и плодов шиповника, происходили примерно в одинаковой степени, как за счет бацилл, так и грибов. Обращает на себя внимание появление в извлечениях из листьев подорожника псевдомонад, которые не были обнаружены в первичных посевах. Возможно, данные извлечения содержат биологически активные вещества, стимулирующие рост этих бактерий (табл. 38, 39).
