Введение к работе
Актуальность темы.
В настоящее время злоупотребления лекарственными средствами (ЛС) занимают одно из лидирующих мест среди употребления других наркотических средств (НС) и психотропных веществ (ПВ) [Холодов В.С. и соавт., 2007]. Список ЛС, злоупотребление которыми отмечается на территории РФ, ежегодно пополняется новыми медикаментами, поступающими на фармацевтический рынок.
В последнее время в России отмечается значительное увеличение немедицинского использования тианептина (Коаксила). Наличие антидепрессивного, противотревожного и рединамизирующего эффектов доказано в целом ряде клинических исследований. По сравнению с другими трициклическими антидепрессантами, тианептин имеет менее выраженные побочные эффекты. При употреблении тианептина в дозах, в десятки раз превышающих терапевтические, наблюдается мощный стимулирующий эффект [Крупицкий Е.М. и соавт., 2007].
Одним из направлений борьбы с наркоманией является проведение медицинского обследования подозреваемых с целью установления факта употребления наркотика, результаты которого зависят от лабораторного исследования биологических проб. Значение такого исследования резко возрастает с увеличением сроков, прошедших со времени последнего употребления наркотика. Поэтому создание новых методик определения психоактивных препаратов в биологических объектах является актуальной задачей токсикологической химии.
В настоящее время для определения тианептина в биологических объектах в основном применяется высокоэффективная жидкостная хроматография с УФ-детектором (ВЭЖХ-УФ) или масс-селективным детектором (ВЭЖХ-МС) [Khedr A., 2007]. Эти методы являются подтверждающими методами при проведении химико-токсикологического анализа (ХТА), в то время как предварительного метода для обнаружения тианептина в биологических объектах нет. Также методы ВЭЖХ-УФ и ВЭЖХ-МС сложны в плане пробоподготовки, довольно дорогие, и далеко не в каждом регионе Российской Федерации в распоряжении химико-токсилогической лаборатории имеется такое оборудование.
Поэтому разработка методик анализа тианептина методами тонкослойной хроматографии (ТСХ), газовой хроматографии (ГХ) и газовой хроматографии – масс-спектрометрии (ГХ-МС) является актуальным.
Все вышеизложенное определило цель и задачи исследования.
Цель исследования.
Разработать подходы к химико-токсикологическому анализу тианептина и его метаболитов в моче и волосах при недавнем и отдаленном употреблении.
Задачи исследования:
-
оценить возможность анализа тианептина иммунохимическими методами;
-
разработать методики пробоподготовки мочи и волос, обеспечивающие наибольшую эффективность экстракции;
-
подобрать оптимальные хроматографические условия для анализа тианептина и его метаболитов методами ТСХ, ГХ, ГХ-МС;
-
провести идентификацию метаболитов тианептина методом ГХ-МС;
-
на основании проведенных исследований предложить вероятную схему метаболизма тианептина в организме человека;
-
оценить возможность использования методик анализа в лабораторной практике путем их валидации.
Научная новизна.
Впервые разработаны оригинальные методики анализа тианептина и его метаболитов в моче и волосах методами ТСХ, ГХ, ГХ-МС.
Методами ГХ и ГХ-МС идентифицировано большинство метаболитов тианептина, описана их структурная формула и предложена вероятная схема метаболизма.
Практическое применение.
Подобраны оптимальные условия пробоподготовки с учетом доступных реактивов и материалов, оценены возможности использования различных систем растворителей и хроматографических пластинок (для анализа методом ТСХ), а также различных капиллярных колонок и условий температурного режима (для анализа методом ГХ и ГХ-МС).
Показано, что разработанные методики анализа тианептина и его метаболитов в моче и волосах могут использоваться для установления факта недавнего и отдаленного употребления для целей химико-токсикологических и судебно-химических лабораторий.
Положения, выносимые на защиту:
-
разработанные методики пробоподготовки и хроматографического анализа тианептина и его метаболитов в моче и волосах;
-
схемы фрагментации и масс-спектры тианептина и его метаболитов;
-
вероятная схема метаболизма тианептина в организме человека.
Внедрение результатов в практику:
Разработанные методики анализа тианептина и его метаболитов в моче и волосах внедрены и используются в практике Химико-токсикологической лаборатории (ХТЛ) Наркологической клинической больницы № 17 ДЗ г. Москвы (акт внедрения от 23 марта 2010 г. № 14), ХТЛ Наркологического диспансера № 1 г. Тулы (акт внедрения от 22 декабря 2009 г.), ХТЛ ГУЗ «Ярославская областная наркологическая клиническая больница» (акт внедрения от 14 декабря 2009 г. № 1), ГУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (акт внедрения от 5 октября 2009 г.).
Апробация работы.
Апробация работы проведена на конференции кафедры фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета ГОУ ВПО ММА имени И.М. Сеченова и Химико-токсикологической лаборатории Наркологической клинической больницы № 17 ДЗ г. Москвы 24 мая 2010 г.
Основные результаты работы доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства» (Шыкмент, 2009 г.), научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (Пермь, 2009 г.), научно-практической конференции с международным участием в рамках конгресса «Интерполитех» (Москва, 2009 г.), итоговой научной студенческой конференции с международным участием «Татьянин день» (Москва, 2009 г.), конкурсе на лучший научный и инновационный проект студентов и молодых ученых ММА им.И.М.Сеченова (Москва, 2008 г).
Связь задач исследования с проблемным планом.
Диссертационная работа является частью исследований, которые разрабатываются на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета ГОУ ВПО ММА им. И.М.Сеченова. Тема включена в план научных исследований кафедры фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета ММА им. И.М. Сеченова, № Государственной регистрации – № 01.2.006 06352.
Публикации.
По результатам диссертационного исследования опубликовано 6 печатных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов и списка литературы из 82 источников (66 из которых зарубежные). Работа иллюстрирована 24 рисунками и 24 таблицами.
