Введение к работе
Актуальность темы. Среди большого арсенала лекарственных веществ, действующих преимущественно на центральную нервную систему, широко используются производные фенилалкиламина. Интерес вызывают мидокалм, кетамин, флуоксетин и сиднокарб.
Мидокалм - спазмолитическое средство центрального действия. Отмечены случаи использования мидокалма больными наркоманией для снятия спазмов гладкой мускулатуры при абстинентном синдроме. Передозировка мидокалма вызывает состояние легкого опьянения, описаны смертельные отравления. (Кобзарь Я.В., 1989 г.).
Кетамин относится к группе неингаляционных средств для наркоза. Применение в малых дозировках вызьшает диссоциативное действие на психику человека подобно некоторым наркотическим средствам (фенциклидин) (Бушуев Е.С., 2002 г.).
Флуоксетин - антидепрессант третьего поколения, используется для лечения депрессивных расстройств и шизофрении, чаще всего в сочетании с коаксилом, амитриптилином, грандаксином. Зафиксированы отравления флуоксетином (Wong D.T., 2005 г.).
Сиднокарб - стимулятор центральной нервной системы, широко применяется в психиатрической практике. Относится к допинговым препаратам, не рекомендован для применения в спорте (Веселовская Н.В., 2000 г.).
Резкое увеличение незаконного оборота наркотических веществ в последние годы вызвало активное использование мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба больными наркоманией для усиления состояния наркотического опьянения и облегчения проявлений абстинентного синдрома.
По данным Алтайского краевого Бюро судебно-медицинской экспертизы за последние пять лет на территории края был зарегистрирован ряд случаев смертельного отравления кетамином, в том числе и в сочетании с производными барбитуровой кислоты. Отмечены случаи обнаружения
мидокалма, сиднокарба и флуоксетина в ходе токсикологического мониторинга (Воронкова Л.Г., 2007 г.).
Применение мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба в медицинской практике, использование в качестве наркогенов и случаи передозировок определяют их важное токсикологическое значение. Однако, в доступной литературе не обнаружено методик химико-токсикологического анализа данных препаратов. Использование общепринятых методов изолирования (Васильевой А.А., Стаса-Отто, ацетонового) приводит к низким выходам определяемых веществ (Карташов В.А., 2002 г.).
Разработанные методики идентификации и количественного анализа исследуемых производных фенилалкилмина различными физико-химическими методами не адаптированы к условиям практического химико-токсикологического анализа.
Не разработаны методики обнаружения мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба при совместном присутствии с другими лекарственными препаратами (дифенилгидрамином, производными фенотиазина и т.п.), нет данных о сохраняемости изучаемых веществ при гнилостном разложении биологического материала.
Анализ литературных данных и результатов практических экспертиз выявил необходимость разработки методик химико-токсикологического анализа мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба.
Цель исследования Разработка методик химико-токсикологического анализа мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба в биологических жидкостях и тканях внутренних органов.
Задачи исследования:
-
Определить влияние основных факторов на процесс экстрагирования мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба из водных растворов.
-
Разработать методики изолирования мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба из биологических жидкостей (кровь, моча) и тканей внутренних органов.
-
Подобрать оптимальные условия очистки методом ТСХ.
-
Изучить спектральные характеристики исследуемых веществ методами прямой и дифференциальной спектрофотометрии в УФ области.
-
Разработать скршшговые и индивидуальные методики идентификации мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба методом ТСХ.
-
Определить условия разделения кетамина, сиднокарба, флуоксетина и мидокалма методом ГЖХ с использованием насадочных и капиллярной колонок для идентификации и количественного анализа. Определить основные показатели валидации разработанной методики.
-
Модифицировать методики идентификации и количественного анализа мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба методом изократической и градиентной ВЭЖХ. Определить основные показатели валидации разработанной методики.
-
Разработать схему анализа трупного материала в случаях комбинированных отравлений изучаемыми веществами в сочетании с дифенилгидрамином, прометазином, амитриптилином, тиопенталом.
-
Изучить сохраняемость кетамина, сиднокарба, флуоксетина и мидокалма в трупном материале и установить оптимальные условия и сроки хранения биологических образцов.
Научная новизна работы. Изучено влияние основных факторов на экстрагирование мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба из водной среды.
Разработаны методики изолирования исследуемых веществ из крови, мочи и тканей внутренних органов (печень). Установлен более высокий выход исследуемых веществ при использовании разработанных методик изолирования по сравнению с общепринятыми методами (Васильевой А.А., ацетоновым).
Определены оптимальные условия для идентификации и количественного определения мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба в извлечениях из биологического материала различными физико-химическими методами
-6-анализа: тонкослойная, газожидкостная и высокоэффективная жидкостная хроматография, спектрофотометр в УФ области.
Показана возможность использования разработанной методики химико-токсикологического анализа для исследования случаев комбинированных отравлений изучаемыми веществами в сочетании с дифенилгидрамином, прометазином, амитриптилином, тиопенталом.
Изучена сохраняемость мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба при гнилостном разложении трупного материала и установлены оптимальные условия и сроки хранения биологических образцов.
Практическая значимость работы. Разработаны методики
идентификации и количественного определения мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба в извлечениях из крови, мочи и тканей внутренних органов с применением различных физико-химических методов анализа (ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ, СФМ-УФ), которые могут применяться в судебно-химических лабораториях с целью лабораторной диагностики отравлений и в учебном процессе студентов, обучающихся по специальности «Фармация» при освоении дисциплины «Токсикологическая химия».
Степень внедрения. На основании проведенных исследований разработаны методические рекомендации, основные положения которых апробированы в судебно-химических лабораториях Алтайского краевого Бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 28.05.2007 г.), Новосибирского областного Бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 13.07.2007 г.), Санкт-Петербургского городского Бюро судебно-медицинской экспертизы (акт внедрения от 29.08.2007 г.).
Разработан проект информационного письма «Об определении мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба в трупном материале».
Теоретические положения и результаты экспериментальных исследований используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе кафедры фармацевтической химии с курсом органической и токсикологической химии ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет»
Минздравсоцразвития России и кафедры токсикологической химии ГБОУ ВПО
«Пермская государственная фармацевтическая академия»
Минздравсоцразвития России.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы обсуждены на научно-практических конференциях «Молодежь Барнаулу» (Барнаул, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007 гг.), «Актуальные проблемы судебной медицины и экспертной практики» (Барнаул, 2004, 2005, 2006, 2007 гг.), «Наука о человеке» (Томск, 2005 г.), «Аналитические методы и приборы для химического анализа» (Санкт-Петербург, 2007 г.), на региональной научно-практической конференции (с международным участием) «Состояние, перспективы судебно-токсикологической службы и научных исследований» (Харьков, 2005 г.), российской научно-практической конференции (с международным участием) «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (Пермь, 2009 г.).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 177 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, собственных исследований (3 главы), выводов, списка литературы, включающего 152 источника, из них 51- на иностранных языках, приложений. Работа иллюстрирована 54 таблицами и 37 рисунками.
