Введение к работе
Актуальность темы. В большинстве развитых стран мира в последние десятилетия отмечено резкое увеличение количества аллергических заболеваний. Проведенные в различных регионах Российской Федерации эпидемиологические исследования показали прямую зависимость уровня аллергических заболеваний от состояния окружающей среды. По данным медиков аллергические заболевания в среднем охватывают 10% населения земного шара, но эта величина колеблется от 1 до 50% и более в разных странах, особенно в отдельных регионах и среди отдельных групп.
На сегодняшний день фармакотерапия аллергических состояний является основным способом борьбы с распространенным недугом, что приводит к появлению на лекарственном рынке все новых и новых средств отечественного и импортного производства. В связи с побочным действием при определённых условиях некоторые из них могут быть причиной фатальных осложнений, интоксикаций различной степени тяжести, острых и хронических отравлений.
С увеличением рынка лекарственных средств, расширяется круг судебно -химических и токсикологически значимых соединений, что требует разработки методик изолирования, идентификации, количественного определения в биологических объектах и включения их в скрининг токсических веществ.
Кетотифен, обладающий антианафилактической активностью, широко применяется в медицинской практике в качестве антигистаминного средства. В связи с побочными явлениями (потенцирование действия снотворных, седативных, других антиаллергических средств, алкоголя) кетотифен используется в немедицинских целях, а при передозировке имеет токсикологическое значение. Критический обзор доступной нам литературы показал, что фармакологическому и клиническому изучению кетотифена посвящено значительное количество работ. Однако информация о его химико-токсикологическом анализе крайне недостаточна. Способы изолирования и доказательства в биосубстратах не разработаны.
Для современной диагностики отравлений, учитывая нехарактерность клинической картины, особое значение и актуальность приобретают результаты анализа кетотифена в биологических объектах, что подтверждает необходимость разработки методик его химико-токсикологического исследования.
Цели и задачи исследования. Целью диссертационной работы является исследование по разработке и оптимизации методик изолирования, обнаружения и количественного определения кетотифена в применении к его химико-токсикологическому анализу.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
РОСНЛЦИОМАЛЫГЛЯ | ЄИБЛИОТЕКА J
Теоретически прогнозировать и экспериментально подтвердить
оптимальные условия изолирования кетотифена и применить полученные
результаты для разработки методик выделения его из биологических
объектов;
Предложить эффективные способы очистки кетотифена, выделенного из биологического материала;
Провести изучение хроматографического поведения кетотифена на различных сорбентах и в различных системах растворителей ВЭТСХ с целью введения в ХТС скрининг;
Исследовать возможности идентификации кетотифена в извлечениях из биосубстратов с помощью химических и современных инструментальных методов;
Разработать чувствительные методики количественного определения кетотифена на основе УФ — спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии;
Изучить пригодность разработанных методик обнаружения и количественного определения для химико-токсикологического анализа кетотифена.
Научная новизна. Впервые разработана научно обоснованная
методология химико-токсикологического анализа биологических объектов при отравлениях кетотифеном.
Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность прогнозирования оптимальных условий экстрагирования кетотифена в зависимости от рКа, рН среды и природы органического растворителя.
Изучены хроматографические параметры на пластинках ВЭТСХ, Сорбфил, Merck, Силуфол и разработаны условия его обнаружения на основе поэтапного комбинированного детектирования.
Установлено, что кетотифен укладывается в условия ХТС скрининга токсикологически значимых лекарственных средств.
Разработаны методики идентификации кетотифена на основе реакций окрашивания и методов ВЭТСХ, ВЭЖХ, ГХ, ГХ/МС, ИК - и УФ -спектроскопии. Предложена микрокристаллоскопическая реакция на кетотифен с кислотой золотохлористоводородной..
Изучены спектральные характеристики кетотифена в различных растворителях и разработаны методики его количественного определения на основе методов УФ - спектроскопии и ВЭЖХ.
Разработаны схемы химико-токсикологического анализа биологических объектов при диагностике-дтравлений кетотифеном.
Показано влияние процессов биодеградации на определение кетотифсна в крови, моче, печени при сроках их хранения 1 и 3 месяца.
Практическая значимость и внедрение результатов исследования.
Исследование выполнено по запросу Бюро СМЭ Республики Бурятия. Разработанные методики пробоподготовки, изолирования, очистки извлечений, обнаружения и количественного определения кетотифена рекомендованы для использования в химико-токсикологических лабораториях для аналитической диагностики отравлений, а так же в учебном процессе на кафедрах токсикологической и фармацевтической химии фармацевтических вузов.
По результатам работы оформлено информационное письмо «Об определении кетотифена при химико-токсикологическом исследовании».
Методики химико-токсикологического анализа кетотифена внедрены в практику работы Центра экстракорпоральных методов детоксикации Управления здравоохранения г. Нижний Тагил Свердловской области, судебно - химического отделения ГУЗОТ Областного Бюро судебно - медицинской экспертизы, г. Пермь, СХО Бюро судебно - медицинской экспертизы Минздрава Республики Бурятия, г. Улан - Удэ, СХО ГУ Бюро судебно -медицинской экспертизы Минздрава Республики Марий — Эл, г. Йошкар-Ола, а также в учебный процесс на занятиях интернов - аналитиков на кафедре фармацевтической ФДПО и ФЗО и токсикологической химии Пермской государственной фармацевтической академии.
Разработанные методики включены в практику судебно - медицинских и химико-токсикологических лабораторий через постоянно действующие курсы специализации и усовершенствования врачей - лаборантов и врачей судебно -медицинских экспертов в региональном учебно-методическом центре аналитической диагностики наличия наркотических средств, психотропных и других токсических веществ Пермской государственной фармацевтической академии (1999 - 2003 гг.).
Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены с опубликованием на Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции» (Санкт - Петербург, 1999г.); на Международном конгрессе «Научная молодежь на пороге XXI века (Томск, 2000г.); на VIII и ГХ Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва 2001, 2002гг.); на 111 и IV Международном конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" (Томск, 2002, 2003гг.); на юбилейной научной конференции "Молодые ученые Волго - Уральского региона на рубеже веков" (Уфа, 2001г.); на межвузовской научно - практической конференции "Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы" (Пермь, 2000г.); на юбилейной межвузовской научно -практической конференции профессорско - преподавательского состава "Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы", посвященной 85-летию высшего образования на Урале (Пермь
2001г.); на юбилейной научной конференции молодых ученых, студентов и аспирантов "Молодежная наука Прикамья - 2002" (Пермь, 2002г.).
В полном объеме результаты диссертационного исследования доложены на межкафедральной конференции Пермской фармацевтической академии, 2004г.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 22 таблицы и 29 рисунков. Работа состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы, включающего 160 источников, из них41 на иностранных языках и приложения (24 стр.).
