Введение к работе
Актуальность темы. Лекарственные растения занимают важное место в фармацевтической практике. В общей номенклатуре лекарственных средств приблизительно 40% составляют препараты растительного происхождения. По сравнению с синтетическими, растительные препараты, наряду с мягким многосторонним действием характеризуются, как правило, почти полным отсутствием нежелательных побочных эффектов. Изучение и внедрение в научную медицину новых растительных объектов стали одними из самых актуальных задач современной фармакогнозии.
Многие растения семейства губоцветные - Lamiaceae {Labiatae) обладают широким спектром биологической активности и используются как в научной, так и в народной медицине. К числу таких представителей принадлежат виды рода пустырник - Leonurus L.. Во многих видах этого рода были обнаружены различные группы биологически активных веществ: флавоноиды (рутин, генкванин, кверцетин), дубильные вещества, сапонины, азотсодержащие соединения (леонурин, стахидрин) [Дикорастущие полезные растения России, 2001; Растительные ресурсы, 1991]. Разные виды рода пустырник являются официнальными и включены в Национальные Фармакопеи многих стран мира. В Российскую Фармакопею XI издания включены пустырник сердечный {Leonurus cardiaca L.) и пустырник пятилопастный {Leonurus quinquelobatus Gilib.). Во Вьетнамскую и Китайскую Фармакопеи включен другой вид - пустырник японский {Leonurus japonicus Houtt.) [Китайская Фармакопея, 2000; Вьетнамская Фармакопея, 2002]. Причем официнальные на территории России виды пустырника известны своим выраженным седативным действием (в 2-3 раза сильнее, чем у настойки валерианы), a L. japonicus применяется в китайской и вьетнамской медицине как средство, нормализующее регулы, родовспомогательное, укрепляющее миометрий после родов. Фармакологическими исследованиями за рубежом выявлены также гормоноподобное, противоопухолевое, антимикробное, противовоспалительное и антиоксидантное действия L. japonicus (Chinwala, 2003; De Souza et al., 2004; Do, 2004; Sun, et al, 2005; Yang, 2002).
В России L. japonicus произрастает на территории Хабаровского и Приморского края, где является преобладающим среди других видов рода Leonurus L. (Крестовская Т. В., 1987, 1989; Пробатова Н. С, 1995; Куприянова
Л. А., 1954; Черепанов С. К., 1995). По данным зарубежных исследователей L japonicus имеет очень богатый набор биологически активных соединений, исследуемых в настоящее время в Японии, Китае и Вьетнаме. Но до сих пор стандартизация сырья L. japonicus во Вьетнаме проводится лишь по содержанию экстрактивных веществ, что мало отражает качество сырья в общем. Поэтому актуальными являются разработка нового современного метода стандартизации сырья, а также изучение данного вида с целью введения его в научную медицину России. Для этого следовало решить целый ряд задач, чему посвящена настоящая диссертационная работа.
Работа выполнена на кафедре фармакогнозии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии в соответствии с научным направлением «Изыскание и изучение биологически активных веществ синтетического, микробного и растительного происхождения для создания на их основе импортозамещающих оригинальных отечественных лекарственных субстанций» и тематическим планом научно-исследовательских работ СПХФА по теме «Мониторинг перспективных лекарственных растений флоры России». Исследования с использованием приборных хроматографических и спектроскопических методов выполнены в лаборатории аналитических методов НИУ академии и лаборатории экологии растительных сообществ Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН.
Цели и задачи исследования. Целью данного исследования является проведение фармакогностического изучения и стандартизация травы L. japonicus.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Провести фотохимический анализ надземной части L. japonicus и сравнительное изучение надземной части L. japonicus и L. quinquelobatus.
Установить основные группы биологически активных веществ, разработать методики их количественного определения, провести исследование динамики накопления действующих веществ в надземной части L. japonicus.
Выделить и установить структуру основных биологически активных веществ.
Установить макро- и микроскопические признаки сырья L. japonicus.
Провести товароведческий анализ для установления норм качества лекарственного растительного сырья.
Обобщить полученные данные и на их основе разработать проект нормативного документа на траву L. japonicus.
Изучить возможность интродукции L. japonicus в Ленинградской области.
Научная новизна. Впервые было проведено сравнительное фитохимическое изучение L. japonicus и L. quinquelobatus, а также сырья L. japonicus, заготовленного в разных географических зонах. Проведено сравнительное изучение надземной части L. japonicus и L. quinquelobatus, в результате которого было показано их различия по качественному, а также количественному содержанию таких биологически активных веществ как фенольные кислоты, флавоноиды и терпеноиды. Изучен компонентный и мономерный состав, динамика накопления биологически активных веществ (БАВ) в разные фазы вегетации растения. Выделен и изучен комплекс флавоноидов, содержащийся в траве L. japonicus, впервые выделен и идентифицирован флавоноид генкванин 4'-глюкозид. Впервые изучен состав стероидных соединений надземной части L. japonicus. Выделены и идентифицированы 5 стероидных соединений: р-ситостерол, стигмастерол, 22,23- дигидроспинастерон, стигмаст-4-ен-З-он и кампестерол, причем три последних соединения выделены и идентифицированы впервые. Впервые выделены и идентифицированы 5 тритерпеновых соединений из надземной части L. japonicus (луп-20(29)-ен-3-он; олеан-12-ен-З-он; урсан-12-ен-З-он; урсан-9(11),12-диен-3-он; а-амирин). Определен состав фенольных кислот, липидов, мономерный и компонентный состав полисахаридов. Определен набор макро- и микроэлементов L. japonicus. Изучена возможность выращивания L. japonicus в Ленинградской области.
Практическая значимость. Предложены методики количественного определения суммы флавоноидов в траве L. japonicus и L. quinquelobatus. Модифицированная методика количественного определения суммы флавоноидов в траве L. quinquelobatus введена в практику научных исследований растительных объектов и учебного процесса на кафедре фармакогнозии СПХФА. Разработанная методика количественного определения суммы терпеноидов в надземной части L. japonicus и L. quinquelobatus может быть использована при анализе других видов растительного сырья. Данные о
фитохимическом составе, полученные в результате проведенных исследований, могут быть использованы при целенаправленном создании новых фитопрепаратов из травы L. japonicus, а также для введения растения в научную медицину России. Определены сроки и оптимальная фаза вегетации для заготовки сырья, а также предельный размер сырьевой части, подлежащей заготовке. Разработаны критерии, позволяющие установить подлинность сырья - травы L. japonicus, определены показатели его доброкачественности. Результаты работы использованы при разработке проекта ФСП на предлагаемый новый вид лекарственного сырья «Пустырника японского трава».
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: конференции, посвященной 40-летию основания фармацевтического факультета Рязанского государственного университета имени академика И. П. Павлова «Актуальные проблемы фармации» (Рязань, 2006 г.); 62-й региональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2007 г.); региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007 г.); 63-й региональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2008 г.); Ш международном форуме « Интегративная медицина» (Москва, 2008 г.); XII съезде русского ботанического общества «Фундаментальные и прикладные проблемы ботаники в начале XXI века» (Петрозаводск, 2008 г.).
Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 9 научных работах, в том числе 3 статьи опубликованы в журналах, входящих в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАКом».
Основные положения, выносимые на защиту.
Результаты общего фотохимического изучения надземной части L. japonicus.
Результаты изучения состава липидов надземной части L japonicus.
Результаты сравнительного изучения полифенольного комплекса из надземной части L. japonicus и L. quinquelobatus: анализ фенольных кислот и флавоноидов; выделение, установление структуры и изучение динамики накопления.
Результаты изучения полисахаридов из надземной части L. japonicus и L. quinquelobatus: выделение, качественный и количественный анализ водорастворимых полисахаридов; выделение и изучение состава пектиновых веществ и гемицеллюлоз.
Содержание Р-ситостерола в траве L. japonicus и L. quinquelobatus. Определение общего содержания тсрпсноидов в сырье.
Выделение и установление структуры некоторых стероидных и тритерпеновых соединений из надземной части L. japonicus.
Содержание макро- и микроэлементов в траве и в отдельных частях (листья, стебля, плоды) L japonicus.
Результаты товароведческого анализа сырья «Пустырника японского трава» и его стандартизация.
Результаты изучения возможности интродукции L. japonicus в Ленинградской области.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 173 страницах машинописного текста, иллюстрирована 57 рисунками и 38 таблицами. Диссертация состоит из введения, 5 глав (обзор литературы, материалы и методы, и 3 главы, содержащие результаты экспериментальных исследований), обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 150 источников, из них 68 на иностранных языках и 2 приложений.
Во введении сформулированы актуальность темы, цель и задачи исследования, научная новизна, практическая значимость работы. В первой главе представлен обзор литературы, в котором рассмотрены ботанико-географическая характеристика, химический состав и биологическая активность всех видов рода Leonurus. Во второй главе приведены основные использованные материалы и методы исследований. В третьей главе приведены результаты фотохимического, элементного анализа надземной части L. japonicus и L. quinquelobatus. В четвертой главе отражены результаты разработки показателей подлинности и качества травы пустырника японского. В пятой главе приведены результаты изучения возможности интродукции L. japonicus в Ленинградской области. В разделе «Обсуждение результатов» обобщены полученные теоретические и экспериментальные данные, обосновывающие необходимость и объективность проведенных исследований. В разделе «Основные результаты и выводы» приведены заключительные выводы
по проделанной работе. Приложение 1 - Проект ФСП на сырье «Пустырника японского трава». Приложение 2 - Акт внедрения методики количественного определения суммы флавоноидов в траве пустырника пятилопастного.
![Фармакогностическое изучение травы коровяка скипетровидного (Verbascu denseflorum bertol.) [Электронный ресурс]](/i/i/4236/197572.png "Фармакогностическое изучение травы коровяка скипетровидного (Verbascu denseflorum bertol.) [Электронный ресурс] Ахмед М.С. Алкилани")
![Формакогностическое изучение травы тысячелистника широколопастного [Электронный ресурс]](/i/i/4713/201091.png "Формакогностическое изучение травы тысячелистника широколопастного [Электронный ресурс] Глушко Маргарита Петровна")
