Содержание к диссертации
Введение
Глава І. Клинико-морфологические аспекты реактивности и пластичности тканей конъюнктивы в условиях офтальмотрансплантологии 10
1.1 Социальные и медицинские аспекты офтальмотрансплантологии 10
1.2 Морфология повреждений и реактивности тканей глаза 12
1.3 Методы и средства стимуляции регенерации 17
1.4 Виды трансплантационных материалов, используемых в офтальмохирургии переднего отдела глаза 21
Глава II Материал и методы исследования 27
Глава III Результаты собственных исследований 36
3.1 Гистологическая и биомеханическая характеристики кадаверного перикарда 36
3.2 Экспериментально-гистологическая оценка реактивности и пластичности тканей конъюнктивы в условиях ее травматизации 43
3.3. Структурно-функциональная характеристика нонапептидергической нейросекреторной системы гипоталамуса кроликов при травматических повреждениях конъюнктивы 53
3.4 Морфологические исследования раневого дефекта конъюнктивы в условиях местного применения окситоцина 64
3.5 Морфофункциональная характеристика репаративных гистогенезов конъюнктивы при аллотрансплантации перикарда, в том числе в условиях экзогенного введения окситоцина 81
Глава IV Обсуждение полученных результатов 91
Выводы 99
Литература 102
Приложение 123
- Морфология повреждений и реактивности тканей глаза
- Виды трансплантационных материалов, используемых в офтальмохирургии переднего отдела глаза
- Экспериментально-гистологическая оценка реактивности и пластичности тканей конъюнктивы в условиях ее травматизации
- Морфофункциональная характеристика репаративных гистогенезов конъюнктивы при аллотрансплантации перикарда, в том числе в условиях экзогенного введения окситоцина
Введение к работе
Актуальность темы
С каждым годом растет функциональная нагрузка на зрительный анализатор людей всех возрастных групп. При этом увеличивается число случаев патогенных воздействий на орган зрения, включая травматические повреждения его переднего отдела, что связано с развитием производственных технологий и неблагоприятными факторами внешней среды (СВ. Логвинов с соавт., 2006; А.А. Жданкина, 2006).
Это обстоятельство, в свою очередь, приводит к необходимости
лечебной коррекции различного рода повреждений вспомогательного
аппарата глаза, в том числе с использованием методов
офтальмохирургии, включающих разнообразные способы пластического
замещения дефектов конъюнктивы с использованием
трансплантационных материалов и объектов.
Пластические операции с применением ауто- и аллогенных тканей конъюнктивы, роговицы, слизистой оболочки ротовой полости, теноновой оболочки, амниона, твердой мозговой оболочки, аорты, капсулы почки широко практикуются офтальмологами для закрытия дефектов фиброзной оболочки глазного яблока (В .Д. Кукса, 1966; О.Д.Морозова, 1971; Г.А.Макеева, 1983; В.Н. Канюков с соавт., 1995, 1996, 2001, 2U05, 2006).
Основными недостатками аутотрансплантации являются ограниченная возможность забора тканей и неизбежность дополнительной травмы, сопровождающей эту манипуляцию (П.П. Коваленко, 1976; Э.Р. Мулдашев с соавт., 1978). Главным препятствием для масштабного использования аллотрансплантатов является реакция тканевой несовместимости по типу иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису пересаженной ткани с
последующим грубым рубцеванием (К.Е. Seiffert, 1967, 1970; J.C. Тайго et al., 1991; Э.Р. Мулдашев, 1994). В случаях использования ксеногенных тканей реакция тканевой несовместимости протекает острее, чем при аллотрансплантации и принимает характер острого иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису трансплантата (J.C. Танго et al., 1991; С.А. Муслимов, 2000). Таким образом, при алло- и ксенотрансплантации основным фактором, влияющим на результаты операций, является антигенная активность тканей трансплантата. При пересадке консервированных тканей выраженной иммунной реакции не наблюдается, а трансплантаты с различной скоростью замещаются новообразованной тканью или инкапсулируются в зависимости от метода консервации (С.А. Муслимов, 2000).
В настоящее время ткани перикарда ауто-, алло- и ксеногенного происхождения широко используются в сердечно-сосудистой хирургии в качестве пластического материала. Получены положительные результаты при применении трансплантатов из перикарда крупного рогатого скота в офтальмологии для хирургического лечения инволюционной хориоретинальной макулодистрофии.
Вместе с тем до сих пор нет данных о результатах специальных исследований биологических свойств перикарда и поврежденной конъюнктивы при взаимодействиях тканевых структур в условиях замещения дефектов аллотрансплантатом из консервированного трупного перикарда. Остаются открытыми вопросы возможности использования в офтальмологии консервированной ткани трупного перикарда для пластики обширных дефектов различного генеза. С другой стороны, по данным ряда авторов, гипоталамические нонапептиды (окситоцин, вазопрессин) позитивно влияют на репарацию тканей различного генеза (А.А. Стадников, 1995, 1999, 2001). Однако их
роль в репаративных гистогенезах тканей глазного яблока, в том числе условиях заместительной трансплантации, не изучалась.
Цель исследования - экспериментально-морфологическое и нейробиологическое обоснование целесообразности использования консервированного трупного перикарда для замещения обширных дефектов конъюнктивы.
Для реализации этой цели поставлены следующие задачи:
Выявить структурно-функциональные изменения эпителия и соединительной ткани конъюнктивы в условиях ее механической травмы.
Исследовать особенности морфофункциональной реорганизации тканей поврежденной конъюнктивы в условиях, замещения дефекта аллотрансплантатом из консервированного трупного перикарда.
Определить роль гипоталамических нейрогормонов в процессах репаративных гистогенезов конъюнктивы.
Научная новизна исследования
Впервые экспериментально - гистологически, включая ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ, изучены структурно-функциональные изменения в аспекте восстановительных процессов эпителия и соединительной ткани конъюнктивы в условиях механической травмы, а также установлены особенности морфофункциональной реорганизации тканей поврежденной конъюнктивы в условиях замещения дефекта аллотрансплантатом из консервированного трупного перикарда, в том числе при местном воздействии окситоцина. Впервые дана оценка влияния гипоталамических нонапептидных нейрогормонов на репаративные гистогенезы конъюнктивы, индуцированные перикардиальным аллотрансплантатом.
Практическая значимость работы
Полученные данные о структурно-функциональных изменениях тканей конъюнктивы в условиях механической травмы, а также о тканевых превращениях консервированного трупного перикарда позволили разработать новый методический подход к оптимизации замещения её раневых дефектов, основанный на применении консервированного трупного перикарда с использованием нейроэндокринных факторов стимуляции репаративных гистогенезов, что существенно для офтальмохирургии.
Внедрение результатов исследования
Полученные данные по морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы, а также в условиях замещения слизистой оболочки перикардом с использованием нейрогормонов, служат теоретическим обоснованием для использования данного биоматериала с целью хирургической коррекции патологии переднего отдела глаза, его вспомогательного аппарата в условиях офтальмохирургических клиник.
Согласно этим новым данным возможна разработка эффективных методов хирургического лечения посттравматических дефектов слизистой оболочки конъюнктивы.
Основные положения, выносимые на защиту
В условиях травматических повреждений слизистой оболочки конъюнктивы экспериментальных животных отработаны гистологические, ультраструктурные и иммуноцитохимические (р53, bcl-2) критерии оценки течения репаративных гистогенезов.
Дисрегенераторный характер посттравматического воспаления тканей конъюнктивы сопряжен с рассинхронизацией секреторного цикла нонапептидергических гипоталамических ядер, включая
блокировку высвобождения нейропептидов на уровне аксовазальных комплексов нейрогипофиза.
3. Пластическое замещение дефектов конъюнктивы
аллоперикардом оптимизирует ход репаративных процессов,
обеспечивая фиксацию трансплантата соединительнотканными
элементами.
4. Включение с лечебной целью' окситоцина в условиях
трансплантации аллоперикарда оказывает эффект модификации
репаративных гистогенезов (уменьшение экспрессии проапоптических
генов, формирование органотипического регенерата).
Апробация работы и-публикации результатов исследования Материалы диссертации представлены и обсуждены на IV научно-практической'конференции «Новые технологии микрохирургии глаза» г. Оренбург, 1995; научно - практической конференции «Пластическая хирургия придаточного аппарата глаза и орбиты» Москва, 1996; научно - практической конференции «Брошевские чтения» г. Самара, 1997; научно - практической конференции «Хірургічне лікування та реабілітація хворих з офтальмологічною патологізю» г. Киів, 2004; VII Всероссийской конференции «Нейроэндокринология-2005» С.-Петербург, 2005; IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии, г. Екатеринбург, 2006 (диплом за лучший стендовый доклад); диплом лауреата премии Правительства Оренбургской области в сфере науки и техники (за экспериментально — гистологическое изучение биотрансплантатов в офтальмохирургии) г. Оренбург, 2007.
По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для опубликования основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук. Получен 1 патент РФ на изобретение.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 9 таблицами, 28 рисунками. Список литературы содержит 183 источника, в том числе 56 иностранных. Диссертация изложена на русском языке.
Морфология повреждений и реактивности тканей глаза
Данные научной литературы, касающиеся изучения особенностей репаративных процессов в области операционных ран или травматического повреждения тканей глаза, весьма немногочисленны.
Повреждения конъюнктивы, других анатомических образований глазного яблока изолированно встречаются крайне редко. Как правило, это бывают сочетанные поражения близлежащих тканей: роговицы, склеры, конъюнктивы век и глазного яблока. Травма тканей, глаза сопровождается воспалительным процессом, который может протекать по типу реактивно-асептического, а также инфекционно-гнойного или симпатизирующего (Р.А. Гундорова с соавт., 1986, 1999). При этом существенное влияние на течение раневого процесса оказывают: величина глубина и форма раны, наличие или отсутствие зияния и выпадения внутренних оболочек глаза, наличие вторичного инфицирования. Следует заметить, что патогенез сосудисто-воспалительной реакции при травме органа зрения до конца не изучен (G. Weissmann, 1974; Н. Nossel et al, 1982; J.V. Hurley, 1983; H. Movat, 1985; S.K. Bhattacharya et al., 1988).
Изучая воспаление, ряд авторов обращают внимание на зависимость микроскопической картины от действия трех основных факторов. Первый фактор - природа повреждающего агента (травма, микроорганизмы, аллергены, трансплантированная ткань). Второй -фактор времени наблюдения. Третий фактор - иммунный статус организма. В процессе заживления ран обычно выделяют три фазы: первичного очищения, воспаления и регенерации. В тех случаях, когда процесс протекает по типу асептического воспаления, рана заживает первичным натяжением. Образуется грануляционная ткань с последующей эпителизацией поверхности раны. При этом формируется узколинейный рубец (Э.С. Аветисов, 1978). Раны с расхождением краев или с гнойной инфильтрацией заживают вторичным натяжением: При этом рубец широкий, грубый, неправильной формы.
Согласно теории А. Д. Адо и Н.А.Клименко (1994) в основе воспалительной реакции лежит расстройство кровообращения и микроциркуляции. Авторы объясняют данную реакцию с одной стороны - аксоно - рефлекторным, возбуждением вазодилятаторов, а с другой — непосредственным сосудорасширяющим эффектом медиаторов воспаления: нейропептидов,, ацетилхолина, гистамина, брадикинина, простагландинов и др. Следует иметь в виду, что в основе любой формы воспаления, как правило, лежит реакция живых тканей на раздражение различными флогогенными агентами, проявляющаяся однотипно высвобождением эндогенных веществ, опосредующих кардинальные признаки медиаторов воспаления (Т. Ishisaka et al., 1985; D.R. Robinson, 1987; J.D.Levine et al., 1988; P.A.Ward et al., 1988; A. Perianin et al., 1989; J.M. Cavailon, 1990).
Высвобождение медиаторов воспаления является неспецифическим ответом организма на различные флогогены, поскольку появление этих веществ в. меньшей степени зависит от действия воспалительного агента на ткань (первичной альтерации) и в большей мере является результатом последующего хода обмена веществ в формирующемся очаге воспаления (вторичной альтерации) [R.A. Levis, 1984; N.C. Bams, J.F. Costello, 1986; J.A. Higgs, 1986; B. Langer, 1986; R. Hirschelmann, 1987]. В настоящее время не существует общепринятой классификации медиаторов воспаления. Предлагается их деление по происхождению на гуморальные (плазменные) и клеточные (тканевые) [C.R. Baumgarten, 1989; A.M. Дыгай, Н.А. Клименко, 1992], а также по способу активации, применительно к латентным гуморальным медиаторам или по способу образования для вновь синтезированных медиаторов клеточного происхождения. В этом случае выделяют пересинтезированные (клеточного или гуморального происхождения) медиаторы, существующие в депонированной или латентной формах, и вновь синтезированные (клеточного происхождения) [В.В. Серов, А.Б. Шехтер; 1981; Н. Frits et al., 1986; A.M. Дыгай, Н.А. Клименко, 1992].
Ряд авторов классифицируют медиаторы по механизму их действия в отношении сосудистых реакций (H.Z. Movat, 1987). Так медиаторы разделяют на прямодействующие: вазоактивные амины (гистамин, серотонин); кинины (брадикинин); интактные анафилатоксины (фрагменты комплемента СЗа, С5а); и нейтрофилзависимые, действующие через продукты лейкоцитов: активные компоненты комплемента (СЗа, С5а, des Arg), продукты арахидоновой кислоты (лейкотриен В4); фактор, активирующий тромбоциты; цитокины (интерлейкин - 1). Однако, следует заметить, что при рассмотрении факторов воспаления недостаточно учитывать только медиаторную функцию, тем более, что она нередко не является одноплановой для- одного и того же вещества (например гистамина) или компонентов одной и той же медиаторной системы (например, калликреин - кинин, циклооксигеназной, нейропептидной и др.) [G. Weissmann, 1974; S.H. Ferriera, 1986; C.L. Malmsten, 1986; J.F. Burka, 1987; R. Gamse et al., 1987; G.A. Higgs, 1987; N. Hirasawa et al., 1987; PJ. Jose, 1987; D.A. Oven, 1987; PJ. Piper et al., 1987; K.I. Williams et al., 1988; Y.Landry, 1990].
Изучая проблему сосудистой реактивности Б.М. Мхадхби (1997) отмечает их активную реакцию на различные вещества в соответствии с гидродинамическими факторами. По мнению данного автора это и является пусковым механизмом в развитии воспалительной сосудистой реакции, конечным этапом которой является активная гиперемия и увеличениепроницаемости сосудистой стенки. К настоящему времени предложено классифицировать регенерацию на физиологическую и репаративную (А.А. Клишов, 1981; В.А. Смолянникова с соавт., 1984; М.А. Воронцова, Л.Д. Лиознер, 1985; В.В. Фасенко, Н.Л. Сивцова, 1990; F. Bernerd et al., 1997). В основе физиологической регенерации лежит принцип обновления клеток путем интенсификации митоза, гипертрофии, дифференцировки; межклеточной интеграции и программированной гибели клеток, которые специфичны для- каждого вида тканей. Репаративная же регенерация по сути своей является реставрацией поврежденной тканевой основы путем синтеза и рекапитуляции механизмов физиологической регенерации (F. Bernerd et al., 1997).
Любое нарушение анатомической целостности ткани приводит к формированию воспалительной реакции, биохимической основой которой являются окислительные процессы. Гипоксический фактор при этом является ведущим в процессе стимуляции мезенхимальных элементов, фибробластов, адвентициальных клеток, эндотелиоцитов (И.В. Давыдовский, 1969). При этом высокоактивные макрофаги, находящиеся в гранулеме и секретирующие моноциты из крови под влиянием лимфокинов, поддерживают инфильтрацию (Е.А. Ефимов, 1995; F. Bernerd et al., 1997).
Виды трансплантационных материалов, используемых в офтальмохирургии переднего отдела глаза
Ранения, ожоги и другие повреждения в зоне переднего сегмента глаза чреваты развитием посттравматических осложнений, приводящих к снижению зрения и возможной последующей инвалидизацией. Одним из оптимальных способов хирургической коррекции подобных повреждений можно считать операции с применением различных видов трансплантационных материалов для замещения образовавшихся дефектов с целью укрепления краев раны и уменьшения процесса швартообразования в послеоперационном периоде, а также для стимуляции процессов регенерации и цитодифференцировки вновь образованных тканей (В.И. Шумаков, П.П. Коваленко, 1976; Э.Р. Мулдашев, 1978; Р.Т. Нигматуллин, 1981; Р.А. Гундорова, 1985; Т.П. Нифонтова, 1991; М.М.Краснов, 1992; И.А.Филатова, 1994; В.М. Малов, 1999; И.А. Филатова, 2001; В.М. Машковцев с соавт., 2006). Накопленный огромный опыт в современной отечественной и зарубежной офтальмотрансплантологии, позволяет осуществлять адекватный подбор трансплантационного материала, способного восстановить морфологическую и функциональную целостность поврежденных тканей глаза реципиента (А.С. Иммамалиев, 1975; Э.Р. Мулдашев с соавт., 1978, 1987; D. J. Weissgold et al., 2001; В.С.Беляев, А.А. Каспаров, 1982; Э.Р. Мулдашев, 1994; S.A. Sibayan, М.А. Latina, 1997; В.К. Суркова с соавт., 1998; O.D. Schein, 1998). Согласно международной терминологии по трансплантации тканей, принятой в 1967 году в Вене, различают ауто-, алло-, и ксенотрансплантаты. При аутотрансплантации пересадка тканей осуществляется в пределах одного организма. При этом отсутствует реакция тканевой несовместимости, а трансплантат максимально приживляется после пересадки (И.П. Хорошилова - Маслова, 2000). Однако, исходом такого приживления может быть фиброз (J.C. Tauro et al., 1991; М.Р. Vrabec et al., 1993). В ряде случаев возможно возникновение некроза. Как правило, это бывает при недостатке кровоснабжения близлежащих тканей. Главный недостаток аутотрансплантации - ограниченная возможность забора тканей и дополнительная травма здорового организма с возможной рубцовой деформацией донорского, органа (B.C. Крылов с соавт., 1982; А.И. Неробеев, 1988; Г.И. Прохватилов, 1998; И.Е. Волкова с соавт., 2005;). При аллотрансплантации донорским источником служит трупная ткань (Э.Р. Мулдашев с соавт., 1978, 1986, 1987; А.А.Каспаров, 2001; И.А. Абрамова, 2005). Основными преимуществами метода являются: возможность консервации и широкого забора донорской ткани, структура и гистохимические свойства которой определяют структуру регенерата (В.Я. Бедило с соавт., 1980). Тем не менее, основное препятствие при аллотрансплантации — это тканевая несовместимость, проявляющаяся „„развитием иммунной воспалительной реакции с последующим лизисом пересаженной ткани и рубцеванием органотипических структур в исходе (К.Е. Seiffert, 1967, 1970; J.C. Tauro et al., 1991; Э.Р. Мулдашев, 1994). Однако вместе с тем установлено, что гораздо меньше реакций отторжения наблюдается на консервированный пересаженный материал (А.А.Каспаров, 2001; В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина 2001, 2005; И.А. Абрамова, 2005;).
При ксенотрансплантации тканевая несовместимость особенно сильно выражена и имеет характер острого иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису трансплантата, взятого у индивидуума другого биологического вида (J.C. Tauro et al., 1991; Ю.А. Чеглаков с соавт., 1997; А.Б. Аветисян, 2005). При консервации в альдегидах возможно подавить иммунную активность ксенотрансплантата, но при этом возрастает вероятность выраженной клеточной инфильтрации с набуханием и разволокнением пучков соединительнотканных волокон (К.А. Johnson et al., 1.999) с последующей инкапсуляцией плотной волокнистой капсулой в поздние сроки (Т. Schmidt et al., 1991), так как при обработке альдегидом соединительные ткани устойчивы к ферментативному лизису (Е. Jorde — Herrero et al., 1999). Кроме того, при всей доступности забираемых для пересадки тканей, простоте данной процедуры, возможны не только иммунологические, но и сложности этического и психологического характера.
Как правило, через некоторое время после пересадки подобный трансплантат обычно замещается новообразованной соединительной тканью реципиента (Э.Р. Мулдашев с соавт., 1977, 1983; Р.Т. Нигматуллин с соавт., 1981, 2000; О.В.Родионов с соавт., 1986; Н.Н. Курчатова с соавт., 2000).
Новые и оригинальные экспериментально - гистологические исследования в этом отношении подтверждают наличие специфических межтканевых корреляций, устанавливаемых при трансплантации различных соединительнотканных структур, что обосновывает необходимость подбора трансплантируемых объектов с учетом возможностей реализации ими гистологических и органобластических потенций в зависимости от структурных особенностей воспринимающего ложа реципиента (В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина, 2005). Широкое применение в современной офтальмохирургии нашли различные виды биоматериала серии «Аллоплант». При пластике слизистой оболочки глазного яблока и век «Аллоплантом» отмечено, что поверхность конъюнктивы покрывалась регенерирующим многослойным эпителием (С.А. Муслимов, 1984, 2000; В.Н. Канюков с соавт., 2006, 2007). При исследовании клеточного инфильтрата в течение всего периода резорбции и замещения различных видов биоматериала «Аллоплант», отмечены слабые его антигенные свойства (Г.Е. Ефимов с соавт, 1983; Э.Р. Мулдашев с соавт., 1983). Сходные процессы отмечены при трансплантации коллагена (Р.В. Van Wachem et al., 1999). В последнее время значительно расширился диапазон используемых материалов для пластики дефектов тканей глазного яблока, в том числе и переднего его отдела. Результаты, полученные при экспериментальных и клинических исследованиях, демонстрируют преимущества небиологических материалов. В офтальмологической практике нашли свое применение силиконовая резина (для противоптозных операций); сивиленовые протезы (для лакориностомии); силиконовые пленки (для дренирования передней камеры); интраокулярные линзы и кератопротезы из полиметилметакрилата; силиконовые жгуты и ленты для витреоретинальной хирургии) [В.Ф. Даниличев, Н.А. Ушаков, 1992; Р.А. Гундорова с соавт., 1992]. Известно также использование поливиола, пластических масс ЭГ - масс - 12, супрамида, гидроколлоидных акрилатов, стирокрила, пенополиуретана, тефлона (фторопласт - 4), титана, лавсана, пенополистерола и других (Л.З. Рубинчик, 1973).
Экспериментально-гистологическая оценка реактивности и пластичности тканей конъюнктивы в условиях ее травматизации
Прежде чем приступить к описанию фактического материала, касающегося реактивных изменений тканевых структур конъюнктивы экспериментальных животных (кроликов породы Шиншилла) в условиях моделирования ее посттравматических дефектов, мы сочли необходимым представить гистологические сведения о структуре данной области глаза у этих животных (зоны fornix conjunctivae и глазного яблока).
В этих участках конъюнктива состоит из многослойного цилиндрического эпителия и подстилающей его lamina propria, представленной сильно развитой рыхлой волокнистой неоформленной соединительной тканью, обеспечивающей весьма выраженную ее подвижность.
Конъюнктива у данных животных распространяется от внутренней поверхности век по направлению к склере, и в месте соединения склеры с роговицей переходит в многослойный плоский неороговевающий (прозрачный) эпителий роговицы глаза. Описываемое данное пространство между веками и передней частью глазного яблока обычно обозначается как «конъюнктивальный мешок» (Б.М. Пэттен, 1954).
По нашим светооптическим данным, в составе многослойного эпителиального пласта, выстилающего конъюнктиву, всегда встречаются клетки, по своему фенотипу соответствующие бокаловидным (слизьпродуцирующим) экзокриноцитам [рис. 5]. На всем протяжении исследованной области мы отмечали многочисленные и довольно глубокие инвагинации покровного эпителия в подлежащую соединительную ткань lamina propria (так называемые конъюнктивальные углубления), строение которых напоминает гистоструктуру простых неразветвленных трубчатых желез. При этом от собственной пластинки слизистой оболочки навстречу эпителиальным углублениям, как правило, отходят структурные образования, соответствующие традиционным соединительнотканным сосочкам, получившим в гистологической литературе название «папиллярных телец».
В lamina propria tunica mucosae конъюнктивы мы также обнаружили мелкие трубчато-альвеолярные железы серозного характера и небольшие скопления лимфоцитов и плазматических клеток. При этом секреторные отделы желез (ацинусов) имеют ясно выраженный просвет, и в них обнаруживаются многочисленные межклеточные секреторные канальцы. В составе концевых отделов данных желез определяются функционально активные сероциты и миоэпителиальные клетки, плотно прилегающие к базальной мембране. В стадии активного накопления . секреторного материала в цитоплазме аденоцитов появляются гранулы мукоидного секрета (ПАС позитивные, амилазоустойчивые субстраты), что позволило нам отнести данные железистые структуры к мукосерозным. Миоэпителиальные клетки секреторных отделов характеризуются высокой пиронинофильностью, что свидетельствует об их активном внутриклеточном синтезе рибонуклеопротеидов.
Нами также показано, что ряд секреторных концевых отделов желез конъюнктивы могут быть соединены небольшими по протяженности внутридольковыми выводными протоками, в составе которых определяются структуры, напоминающие исчерченные протоки (слюнные трубки). Именно такие железы, имеющие крупные секреторные клеточные элементы, открываются в область «конъюнктивального мешка».
В условиях моделируемого посттравматического дефекта конъюнктивы гистологический анализ исследованного материала (на светооптическом и в последующем ультраструктурном уровнях) позволил нам установить комплекс защитно-приспособительных и реактивных изменений эпителиальных, соединительнотканных структур, сосудов микроциркуляторного русла данного отдела глаза экспериментальных животных в ответ на соответствующее травматическое повреждение.
Так, в ранние сроки (1-3 сутки эксперимента) развивается выраженная первичная альтерация тканей, которая связана с травматическими повреждениями клеток, межклеточных структур, и, особенно, митохондриальных и лизосомальных компартментов. Прогрессивно повреждающее действие внутриклеточных лизосомальных ферментов «значительно усиливает процессы протеолиза, липолиза и гидролиза клеточных элементов, которые в- свою очередь являются ведущими гуморальными факторами воспаления. Они оказывают выраженное влияние на транссосудистую экссудацию и эмиграцию лейкоцитов, других форменных элементов крови за счет расширения микроциркуляторных сосудов, увеличения количества функционирующих гемокапилляров и повышения кровенаполнения в раневой области [рис. 6]. Весьма характерной особенностью ранних сроков эксперимента является, выраженный стаз форменных элементов крови, как правило, возникающий в сосудах венозной части микроциркуляторного русла (из-за резкого повышения- сосудистой проницаемости и нарастающей экссудации плазмы и форменных элементов крови). При этом эритроциты образуют «монетные столбики», границы между ними стираются, и в просвете микрососуда образуется сплошная масса -«сладж». В последующем в раневой зоне усиливаются процессы выраженной экссудации, обусловленной, прежде всего, повышением проницаемости микроциркуляторного русла [рис. 7] вследствие существенного изменения эндотелиоцитов (внутриклеточный их отек, расширение у них канальцев эндоплазматического ретикулума, деконденсация хроматина1 ядра, возрастание численности его поровых комплексов, значительное возрастание количества пиноцитозных пузырьков). Более выражен процесс экссудации был в венулах и капиллярах исследованной области.
Морфофункциональная характеристика репаративных гистогенезов конъюнктивы при аллотрансплантации перикарда, в том числе в условиях экзогенного введения окситоцина
Экспериментально-гистологическое исследование трансплантации перикарда в зону раневого дефекта конъюнктивы позволило-установить следующее. Через 3-е суток эксперимента вокруг пересаженных фрагментов перикарда развивалась умеренная воспалительная реакция с преобладанием экссудативного компонента с явлениями диапедеза форменных элементов крови (преимущественно гранулоцитов, из гемокапилляров конъюнктивы). Некробиотические и некротические изменения трансплантата на этой стадии отсутствовали. В периферических его участках мы отметили незначительную гомогенизацию коллагеновых и эластических волокон, отечность их аморфного матрикса. В центральных зонах пересаженных объектов гистоструктура волокнистого каркаса полностью сохраняется.
В эти сроки по краю трансплантата, соприкасающегося с тканями реципиента, формируется лейкоцитарный вал, включающий в себя нейтрофильные, эозинофильные и базофильные гранулоциты, а также моноциты [рис. 23]. Сопоставляя данные наблюдения с таковыми, имеющими место в предыдущей серии опытов (моделирование дефектов конъюнктивы без замещения их перикардиальным трансплантатом) мы установили, что в данных условиях лейкоцитарный вал был выражен в 2,5-3 раза больше. При этом на 1/3 возрастала численность моноцитов, трансформирущихся в последующем в макрофагические клетки.
При этом новообразованная соединительная ткань, постепенно претерпевающая свою дифференцировку, в последующем замещает краевые участки перикардиального трансплантата, которые подвергаются лизированию со стороны макрофагальных элементов. В результате этого через 30 суток величина пересаженного в конъюнктиву объекта уменьшается на 50-60%. С другой стороны, общая площадь зоны трансплантации существенно не меняется, поскольку она состоит не только из сохраненной гистоструктуры трансплантированного перикарда, но и из новообразованной соединительной ткани.
На 30 сутки происходят тотальная морфофункциональная дифференцировка пролиферирующих фибробластов и активный коллагеногенез, приводящий к образованию рубцовой соединительной-ткани, инкапсулирующей оставшуюся часть перикардиального трансплантата. Можно высказать суждение о том, что замещение посттравматического дефекта конъюнктивы перикардом кадавера все-таки не обеспечивает должное поддержание продуктивной фазы воспаления (в аспекте образования малодифференцированной соединительной ткани- в трансплантационном ложе), что, в свою1 очередь, ограничивает реализацию органотипического гистогенеза в зоне раневого дефекта. Поэтому трансплантируемый перикард, подвергаясь постепенному лизированию, лишь, инкапсулируется in situ. При этом фиксация его гистоструктур обеспечивается плотной, неоформленной соединительной тканью.
По своей светооптической и. ультраструктурной характеристике образующаяся на месте перикардиального трансплантата соединительная ткань, в основном соответствует таковой, свойственной стромальному компоненту конъюнктивы. В этой связи мы формулируем положение о том, что используемый нами трансплантационный материал, может быть использован для коррекции механических (опорных) свойств поврежденной конъюнктивы (по критериям гистологической оценки ее фиброархитектоники). Однако; в, данных моделируемых нами условиях, не реализуется- в полной мере весь диапазон репаративных гистобластических и органотипических возможностей конъюнктивы (особенно это касается репаративной регенерации ее покровных и железистых эпителиальных структур). Данное заключение базируется на том, что тканеспецифическая трансформация перикардиального трансплантата не создавала адекватных условий для полноценной регенерации всех характерных тканевых элементов конъюнктивы и особенно ее эпителиальных гистоструктур.
Полученные нами в данном разделе работы сведения можно интерпретировать с позиций учения об эволюционной динамике тканей (Н.Г. Хлопин, 1946; А.А. Заварзин, 1986). Исходя из основных положений тканевой биологии, соединительные ткани различной органной локализации в процессе индивидуального развития и дифференцировки приобрели специфические особенности и не являются равноценными. Так, стромальные элементы конъюнктивы в эмбриогенезе развиваются из эктомезенхимы, а перикард из кардиогенной спланхомезодермы («миоэпикардиальной пластинки»). Это обстоятельство позволило нам высказать суждение о том, что наблюдаемые гистологические изменения перикардиального трансплантата в экспериментальных условиях безусловно связаны с гисто- и органотипической спецификой тканевых компонентов конъюнктивы реципиентов и трансплантируемого перикарда.
Это в свою очередь обеспечило возможность оптимальной реализации эпителиальными структурами конъюнктивы своих гистиотипических свойств. И доказательством данного заключения явились процессы краевой эпителизации в области трансплантата и формирования железистых элементов в регенерате.
В серии опытов, когда в зону трансплантированного перикарда вводили окситоцин, мы получили результаты, отличающиеся от описанных выше. Прежде всего, это касалось динамики структурно -функциональных изменений соединительной ткани конъюнктивы.
