Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы. основные закономерные процессы регенерации тканей кожи 9
1.1. Посттравматическая регенерация тканей кожи 9
1.1.1. Общая характеристика раневого процесса 9
1.1.2. Регенерация эпителия и соединительной ткани кожи 15
1.2. Источники посттравматической регенерации тканей кожи 22
1.2.1. Эпителий кожи 23
1.2.2. Соединительные ткани дермы кожи 29
1.3. Заключение 35
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 36
2.1. Материал исследования 36
2.2. Методы исследования Результаты исследования и их обсуждение 41
Глава 3. Морфологическая характеристика тканей кожи и гематогенных элементов в регенерационном гистогенезе при механической травме в эксперименте 48
3.1. Морфофункциональная организация тканей кожи экспериментальных животных до нанесения механической травмы 48
3.2. Количественная и цитохимическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов периферической крови в фазе воспаления у мышей 59
3.3. Морфофункциональное и иммуногистохимическое исследование клеточных источников пролиферации в раневом процессе у мышей 68
3.4. Клеточно-дифферонный состав и процессы пролиферации в перинекротической области дермы у крыс 85
Глава 4. Математическое моделирование закономерности формирования и развития гистионов во времени 102
Глава 5. Обсуждение полученных результатов 109
Заключение 132
Выводы 136
Практические рекомендации 138
Литература 139
- Общая характеристика раневого процесса
- Источники посттравматической регенерации тканей кожи
- Методы исследования Результаты исследования и их обсуждение
- Количественная и цитохимическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов периферической крови в фазе воспаления у мышей
Введение к работе
Актуальность. Развитие современного общества характеризуется возрастанием нагрузки негативных антропогенных факторов на человека. К указанным факторам относятся и механические повреждения различной этиологии. Анализ научной литературы показал, что прикладным и клиническим аспектам изучения раневого процесса посвящено много работ (Аничков Н.Н. и соавт., 1951; Давыдовский И.В., 1952; Гир-голав С.С., 1956; Ерюхин И.А., 1992). Значительный вклад в изучение данной проблемы внесли гистологи Военно-медицинской академии им. СМ. Кирова - А.А. Заварзин (1947), Н.Г. Хлопин (1946), СИ. Щелкунов (1977), А.А.Клишов (1984).
Большой фактический материал, накопленный к настоящему времени, свидетельствует о том, что в основе регенерационного гистогенеза лежат процессы физиологической регенерации (Кнорре А.Г., 1971; Михайлов В.П., 1980). Своеобразие течения репаративного гистогенеза в тканях различного генеза во многом определяется биологией ткани (Чу-масов Е.И., 1981; Данилов Р.К., 1993; Кругляков П.П., 2005). Конкретные ткани реализуют свои регенераторные возможности в соответствии с общими закономерными процессами эмбрионального гистогенеза (Валькович Э.И., 1995; Верин В.К., 1996; Martin Р., 1997).
Фундаментальные исследования репаративного гистогенеза, проведенные коллективом кафедры гистологии Военно-медицинской академии, позволили сформулировать концепцию клеточно-дифферонной организации тканей и регенерационного гистогенеза (Клишов А.А., 1984; Данилов Р.К. и соавт., 2004). После механического и огнестрельного повреждения в перинекротической области развертываются основные процессы регенерационного гистогенеза, структурные составляющие которого являются надежными критериями оценки жизнеспособности тканей после механического и огнестрельного повреждения (Голо-лобов В.Г., 1997; Графова Г.Я., 1982; Хилова Ю.К., 1986; Одинцова
5 И.А., 2003; Григорян Б.А., 2006).
В развивающейся грануляционной ткани формируются новые межклеточные взаимодействия, которые изменяются как по разнообразию видов клеток, так и по степени их дифференцировки. Это позволило высказать гипотезу о функциональных гистионах (Клочков Н.Д., 1997; Данилов Р.К. и соавт., 2000). Регенерационный гистион имеет сложный клеточный состав, который закономерно изменяется и служит диагностическим, а также прогностическим критерием оценки течения раневого процесса.
Разрабатываемая концепция о гистионе позволяет по-новому оценить фазность течения раневого процесса с учетом взаимоотношения клеток в гистионе и его последующей трансформации при заживлении раны.
Использование методов иммуногистохимии и цитоспектрофото-метрии позволит получить комплекс показателей, свидетельствующий о жизнеспособности клеток и тканей в зонах повреждения, на основе которых разрабатываются способы оптимизации течения раневого процесса, методы тканевой заместительной терапии и способы оценки их эффективности.
Использование метода многофакторного статистического анализа взаимоотношений элементов гистиона позволит установить индивидуальные закономерности процессов развития, реактивности и функциональной активности клеток и тканей.
Цель исследования - выявить морфофункциональные свойства тканей кожи и гематогенных элементов на этапах заживления кожной раны при механической травме в эксперименте.
Задачи исследования:
1. Изучить морфофункциональную организацию и ультраструктуру тканевых элементов кожи до и после нанесения механической травмы.
Оценить функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов периферической крови в динамике заживления кожной раны.
Исследовать процессы пролиферации, дифференцировки и гибели клеток тканей кожи в различные фазы заживления раны.
Выявить изменения клеточного состава функциональных гистионов в регенерационном гистогенезе соединительной ткани.
Разработать статистическую модель фазности регенераци-онного гистогенеза соединительной ткани кожи.
Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые на модели повреждения кожи быстродвижущимся снарядом с помощью комплекса современных гистологических методов проведено изучение клеточного состава функциональных гистионов грануляционной ткани. Выявлено закономерное изменение клеточного состава функционального гистиона нулевой фазы регенерации, который трансформируется в гистион воспаления и далее в регенерационный гистион.
Выявлены изменения ультраструктур тканевых элементов функциональных гистионов при заживлении кожной раны после механической травмы в эксперименте.
Методами иммуногистохимии и цитоспектрофотометрии выявлена фаза активации и пролиферации клеточных источников регенерации тканей кожи.
Дана морфофункциональная характеристика реактивным изменениям клеточных элементов дифферона нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, а также гематогенным элементам в перинекро-тической области в различные фазы регенерационного гистогенеза.
Предложена математическая модель для характеристики перестройки клеточного состава функциональных гистионов грануляцион-
7 ной ткани, которая позволяет учитывать индивидуальный характер течения раневого процесса.
Результаты исследования могут быть использованы для диагностики жизнеспособности клеток и тканей в зонах повреждения и течения раневого процесса, а также для разработки способов фармакологической регуляции заживления раны и методов тканевой заместительной терапии.
Положения, выносимые на защиту:
Регенерационный гистогенез при заживлении кожной раны характеризуется последовательной сменой следующих фаз: активации и пролиферации камбиальных источников развития, дифференциации и последующей адаптивной перестройки тканевых элементов. Эти процессы основаны на закономерных проявлениях физиологической регенерации тканей.
Травма кожи и развитие фазы воспаления сопровождается изменением как количественных, так и качественных характеристик дифферонов системы крови, среди которых наиболее существенные изменения наблюдаются в диффероне нейтрофильных гранулоцитов.
В развивающей грануляционной ткани в области дефекта кожи изменяются во времени взаимоотношения клеточных дифферонов соединительной ткани и крови. Клеточный состав функционального гистиона фазы воспаления трансформируется в регенерационный гистион, который перестраивается в адаптивной фазе регенерационного гистогенеза.
Выявленные межклеточные взаимоотношения в функциональных гистионах в процессе заживления раны позволяют использовать методы математического моделирования для построения линейно-классификационных уравнений для
8 гистологических элементов соединительной ткани и крови с целью диагностики индивидуального характера течения раневого процесса.
Апробация материалов исследования. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: международной научной конференции «Фундаментальные проблемы морфологии» (Минск, 2004); V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004); научной конференции ученых-морфологов Санкт-Петербурга «Современные проблемы морфологии» (Санкт-Петербург, 2006); научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2006; 2007); Международном симпозиуме «Применение современных методов анализа в изучении структуры и функции клетки» (Архангельск, 2006; 2007); Всероссийской конференции «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2007).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 работ, в том числе в ведущих рецензируемых журналах, входящих в перечень ВАК; оформлено одно рационализаторское предложение.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, двух глав результатов собственных исследований и одной главы по их обсуждению, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Она представлена в одном томе объемом 157 страниц.
Работа иллюстрирована 16 таблицами и 50 рисунками, которые включают микрофотографии, электронные микрофотографии, графики, схемы. Список литературы содержит 176 источников, из них 126 работ отечественных авторов.
Общая характеристика раневого процесса
Фундаментально-теоретическим направлением в учении о ранах является познание биологических законов заживления раны (Раны ..., 1990; Ерюхин И.А. и соавт., 1992). Рана - это нарушение целостности кожи или слизистых оболочек на всю их толщину, часто и глубоколе-жащих тканей и органов, вызванное механическим воздействием (Энциклопедический ..., 1984). Источником механического воздействия на ткани и органы (ранения) могут быть разные предметы.
Более 15 лет на кафедре гистологии Военно-медицинской академии изучаются реактивные изменения тканей опорно-двигательного аппарата, возникающие при огнестрельном повреждении. Среди основных повреждающих факторов огнестрельного снаряда выделяются: кинетическая энергии движущегося снаряда и передача этой энергии тканям, микробное обсеменение и термическое повреждение в результате контактного воздействия пороховых газов. Комплекс воздействия всех перечисленных факторов на органы и ткани приводит к возникновению повреждения, которое характеризуется индивидуальностью течения раневого процесса, о чем свидетельствуют работы, главным образом, ученых Военно-медицинской академии: Н.Н. Аничкова и соавторов (1951), С.С. Гирголава (1956), И.В. Давыдовского (1952), Д.С. Саркисова и соавторов (1981), А.А. Клишова (1984), Ю.Г. Шапошникова и соавторов (1984)и др.
В отличие от резаных и колотых ран, огнестрельное ранение характеризуется сложной конфигурацией раны, образованием больших дефектов тканей и неравномерным повреждением по ходу раневого канала, обширной зоной тканей с пониженной жизнеспособностью и др. (Зу барев П.Н. и соавт., 2002). Поражающее действие огнестрельного стрелкового оружия зависит от массы, скорости и момента инерции ранящего снаряда (Чиж И.М. и соавт., 2004).
Среди всех факторов наиболее повреждающее воздействие на ткани оказывает фактор быстродвижущегося предмета. Уже через 0,0005 с проникающий в тело огнестрельный снаряд начинает оказывать взрыво-подобное действие, отслаивая кожу и формируя временную пульсирующую полость. Время существования пульсирующей полости может в десятки раз превышать время прохождения пули по всему раневому каналу. Размеры полости, продолжительность и число пульсаций, величина давления на окружающие ткани зависят от величины энергии, поглощенной тканями. Последняя зависит от калибра, скорости полета и устойчивости пули, а также от вида повреждаемых тканей (Рудаков Б.Я., 1984; Попов В.Л. и соавт., 1994). При своем поступательном движении пуля оказывает пробивное действие, заключающееся в образовании дефектов в органах и тканях. Как показывают исследования, в момент ранения и сразу после него в среде регистрируются три типа волн: ударная, давления и разряжения. Первые два типа действуют на ткани как положительное давление, а третий тип характеризуется отрицательным давлением (Исаков В.Д. и соавт., 1993; Попов В.Л. и соавт., 1994). Биологические ткани более устойчивы к положительному давлению и в меньшей степени способны противостоять отрицательному. Отрицательное давление в водной и водонасыщенной среде приводит к развитию явления кавитации, т.е. образованию вакуумных полостей - каверн. При схлопывании каверн возникают ударные волны значительной силы, приводящие к перепадам давления в несколько сот и даже тысяч атмосфер. В этой связи есть основание считать, что известное «боковое ударное действие», прежде всего, связано с явлением кавитации. Действие кавитационных сил на биологические ткани приводит к их разрушению и разрыву, то есть к нарушению целостности их структуры (Попов В.Л. и соавт., 1994).
В первые часы после ранения в зоне раневого канала преобладают некротические и воспалительные изменения. Морфологические признаки некроза в окружающих раневой канал тканях выявляются при гистологическом исследовании в мышечной ткани через 4-6 часов после ранения, в коже и подкожной клетчатке - через 12-15 часов (Агеев А.К. и соавт., 1965). Непосредственно к области тканей, полностью потерявших жизнеспособность в момент ранения или в ближайшие часы после него, т.е. к зоне первичного некроза, примыкают ткани, в которых изменения менее выражены. Если зона первичного некроза (т. е. непосредственное разрушение тканей) формируется в основном в момент ранения и проявляется вскоре после него, то в тканях, находящихся на некотором отдалении от раневого канала, происходят более сложные изменения, отодвинутые по времени. В дальнейшем жизнеспособность клеток в этих тканях обусловливается не только действием ранящего снаряда, но и теми функциональными сдвигами, которые происходят в области, примыкающей к повреждению, и во всем организме. Изменения, происходящие в этой области, носят обратимый характер при рационально выбранном лечении, но могут привести к гибели тканей с формированием зоны вторичного некроза, развитию гнойных и других осложнений. Разносторонние исследования по изучению функционального состояния тканей в окружности огнестрельных ран подтверждают положение о том, что здесь наблюдаются как нежизнеспособные ткани, так и ткани, сохраняющие регенераторный потенциал (Рудаков Б.Я., 1984).
Источники посттравматической регенерации тканей кожи
Вопрос о клеточных источниках регенерации тканей кожи имеет более чем вековую историю, но до настоящего времени в определенной степени остается одним из наиболее сложных (Мяделец О.Д. и соавт., 1993; 1995; Шубникова, Е.А., 1996; Юрина Н.А. и соавт., 1996; Сухих Т.Г. и соавт., 2002; Jeh J. et al., 1999).
Клеточные диффероны эпителия кожи имеют разный генез, но образуют единую целостную систему, регенераторные свойства которой определяются ведущим диффероном - эпителиоцитами (кератиноцита-ми). Эпителий кожи обладает высокой регенераторной способностью и является самообновляющейся тканевой системой. В клетках ведущего дифферона многослойного плоского ороговевающего эпителия кожи постоянно происходит несколько процессов. После деления клетки базаль ного слоя эпидермиса мигрируют в сторону поверхности, постепенно ороговевая и превращаясь в роговые чешуйки, которые слущиваются с поверхности кожи (Шубникова Е.А., 1996; Юрина Н.А. и соавт., 1996; Bikle D., 1995; Dal Pra I. et al., 1997; Teraki Y. et al., 1999).
В современной научной литературе описано несколько источников пролиферации эпителиоцитов (Терских В.В. и соавт., 1995; Watt F., 1998; Waikel R. et al, 2001). В работе Г.Я. Графовой (1982) дано представление о том, что обновление эпидермиса происходит в составе столбчатых структур - эпидермально-пролиферативных единиц (ЭПЕ). Клетки базального слоя, находящиеся в основании ЭПЕ, обладают различными пролиферативными потенциями. Периферические кератиноци-ты характеризуются более высокой митотической активностью, чем центральные. Среди трех - четырех центральных клеток находится одна стволовая, которая при гибели периферических кератиноцитов способна воссоздавать структуру ЭПЕ.
Эпидермальные стволовые клетки у человека обнаружены в ба-зальном слое эпидермиса и в волосяных фолликулах (Сухих Т.Г. и соавт., 2002). Они участвуют в обновлении эпителия кожи, а также волосяных фолликулов, сальных и потовых желез. Показано, что в культуре кератиноцитов in vitro единичные клетки - предшественники формируют колонии, различающиеся по способности к самообновлению и диф-ференцировочному потенциалу (голо-, меро- и параклоны). Существует мнение, что только голоклоны являются истинно эпидермальными стволовыми клетками. Они способны к самовоспроизведению в течение более 140 делений. Выявлен поверхностный маркер рбЗ, позволяющий иммунофенотипически идентифицировать эти стволовые клетки у человека (Сухих Т.Г. и соавт., 2002). Высказывается гипотеза, что фенотип и другие параметрические характеристики стволовых клеток у взрослых могут различаться в зависимости от органной принадлежности, но одни и те же стволовые клетки, мигрируя в другой орган, могут изменять фенотип и дифференцировочный потенциал под влиянием нового микроокружения.
Отмечается, что значительная часть стволовых эпидермальных клеток располагается в особых выпячиваниях - бугорках наружных волосяных влагалищ, расположенных у основания волосяной воронки, под устьем выводных протоков сальных желез (Costarelis G. et al., 1990). Здесь содержатся клетки, дающие начало эпителиоцитам покровного эпителия, эпителиоцитам наружного и внутреннего волосяных влагалищ. Кроме того, эпителий воронки содержит запас клеток Меркеля, Лангерганса, предшественников меланоцитов (Hirobe Т., 1995).
Изучение способности стволовых эпидермальных клеток к коло-ниеобразованию показало, что существует три их разновидности в зависимости от локализации. Клетки первой разновидности дают начало только ЭПЕ. Клетки второй разновидности служат источником развития волоса и внутреннего волосяного влагалища. Клетки третьей разновидности являются родоначальниками эпителиоцитов наружного волосяного влагалища (Costarelis G. et al., 1990). В эпидермисе содержатся только первые. В бугорках наружных волосяных влагалищ - все три разновидности. В луковице волоса стволовые клетки единичны.
О том, что в эпителии кожи существуют две разновидности стволовых колониеобразующих клеток, пишут Р.К. Данилов и Г.Я. Графова (2001). Одни из них - это унипотентные предшественники дифферона ороговевающих кератиноцитов, а другие - полипотентные предшественники эпителиоцитов наружного корневого волосяного влагалища и дифферона кератиноцитов. Авторы отмечают, что унипотентные предшественники располагаются среди базальных клеток межсосочковых участков эпидермиса и на вершинах эпителиальных гребешков в толстой коже. Они участвуют в регенерации эпидермиса после поверхностных повреждений. Полипотентные стволовые клетки сосредоточены в тех участках наружных эпителиальных корневых влагалищ, которые расположены под устьем протоков сальных желез. Они служат источником восстановления эпидермиса после полной его гибели. Стволовые клетки отличаются от транзитных (переходных) базальных некоторыми особенностями (McCauley R. et al., 1992). Например, они не экспресси-руют теломеразу, как это свойственно активно делящимся клеткам, но характеризуются высокой экспрессией кератина - 19. С другой стороны, они экспрессируют большее количество интегринов, благодаря чему прочнее связаны с базальной мембраной (Данилов Р.К. и соавт., 2001).
Методы исследования Результаты исследования и их обсуждение
В обработке полученного материала использовался алгоритм исследования регенерационных процессов в тканях, разработанный на кафедре гистологии Военно-медицинской академии им. СМ. Кирова. Данная методология позволяет изучить гистогенетические процессы в цепочке ДНК-РНК-белок с использованием количественных методов функционального анализа клеток и тканей: обзорные гистологические, гистохимические, цитофотометрические, морфометрические, статистические методы исследования и электронную микроскопию (Методы ..., 2004).
Световая микроскопия. Из области, непосредственно прилегающей к ране, брали кусочки кожи размером 0,5x1,5 см. Для этого на соответствующих участках тела скальпелем делали надрезы в виде прямоугольника, повторно углубляя их до подкожного слоя мышц, ориентируя так, чтобы длинная сторона прямоугольника проходила параллельно продольной оси тела, совпадая с направлением роста волос. Затем кусочки расправляли на картоне дермой кверху, по краям скрепляли булавками. Фиксировали в смеси В.Я. Бродского (1966): формалин - 100% - спирт - 96% - ледяная уксусная кислота в соотношении 3:1:0,3 в течение 12-18 часов при +4С.
Заливку материала производили в парафин по общепринятой методике, отработанной на кафедре гистологии ВМедА. По рекомендациям «Руководства по изучению кожного покрова млекопитающих» (1988) материал выдерживали в парафине сутки.
Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, гематоксилином Майера, азуром II - эозином, толуидиновым синим (Микроскопическая ...,1995).
В препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, оценивали гистотопографию раны. В гистологических препаратах, окрашенных азуром П - эозином, толуидиновым синим, выявляли показатели функциональной активности клеток и соотношение клеток гематогенного происхождения в очаге повреждения в ходе регенерационного гистогенеза.
В области дефекта и перинекротической области подсчитывали количество нейтрофильных гранулоцитов, тканевых базофилов, макрофагов, фибробластов и фиброцитов, эндотелиоцитов (на 500 клеток).
Для исследования содержания ДНК в ядрах использовали метод одноволновой цитоспектрофотометрии с предварительным определением коэффициента негомогенности распределения вещества в ядре. Обработку парафиновых срезов производили по Фельгену в модификации де Томази (Количественные методы..., 1988). Стандартном диплоидных клеток служили лимфоциты крыс.
Цитоспектрофотометрию производили на усовершенствованном лабораторном цитоспектрофотометре (Удостоверение на рацпредложение № 9617/6 от 08.11.2005 г.). Разработанный нами лабораторный ци-тоспектрофотометр включает следующие основные узлы: микроскоп МЛ - 2Б (ЛОМО), объектив с морфометрической сеткой, стабилизаторы лампы накаливания, питание ФЭУ - 76, блок питания высоковольтный ХЛМЩ - 01, микроамперметр Ф 195, монохроматор типа СФ - 4, осветитель.
Источником света служит лампа накаливания, питаемая стабилизированным напряжением. Монохроматор образует спектр в плоскости выходной щели, выполненной в виде диафрагмы с регуляторами. В качестве приемника света используется ФЭУ - 76, питаемый высоковольтным стабилизированным источником напряжения ХЛМЩ - 01. Отсчеты снимаются с табло микроамперметра Ф 195. Для освещения всего поля зрения служит дополнительный осветитель. Для формирования зонда диаметром 1 мкм используется диафрагма от прибора СПО - I (рис. 4).
Модифицированный цитоспектрофотометр для количественной оценки гистохимических реакций (Чепурненко М.Н., Ханиева Д.Р., Данилов Р.К., 2005). Обозначения: 1 - лампа накаливания, 2 - монохроматор, 3 - диафрагма, 4 - полуотражательная пластинка, 5 - подсветка, 6 -зеркало, 7 - объектив, 8 - диафрагма, 9 - ФЭУ-76, 10 - высоковольтный стабилизатор напряжения ХЛМ1Ц-11, 11 - микроамперметр Ф195, 12 -стабилизатор напряжения.
Материал для исследования методами иммуногистохимии фиксировали в 4% параформе на фосфатном буфере в течение 24 ч, заливали в парафин, готовили срезы толщиной 4 мкм, которые наносили на высокоадгезивные стекла и высушивали при температуре 37 С в течение 18 часов.
Восстановление антигенной активности клеточных дифферонов тканей кожи проводили в миниавтоклаве «2100Retrieval» («Pick Cell») при температуре 121 С в течение 20 мин. с последующим остыванием в течение 90 мин.
Восстановление проводили в цитратном буфере рН=6,0. В качестве детекционной системы применяли систему «EnVision» («Dako»), в качестве хромогена - диаминобензидин. Для получения результатов, пригодных для количественной обработки, реакции проводили с помощью автоматического иммуногистостейнера «Avtosteiner Dako». Данная часть работы выполнялась на базе ФГУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена Мин-здравсоцразвития РФ».
Количественная и цитохимическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов периферической крови в фазе воспаления у мышей
Подавляющее большинство клеток в нем принадлежит к одному клеточному дифферону, являющемуся функционально ведущим в данной ткани, а именно - эпителиоцитам (кератиноцитам). Свойствами именно этого дифферона определяются основные функции эпителия кожи - покровная, пограничная, защитная. Представители неэпителиальных клеточных дифферонов - внутриэпидермальные макрофаги, мела-ноциты и тактильные эпителиоциты - встречаются крайне редко и располагаются в нижних слоях многослойного плоского ороговевающего эпителия кожи. Выраженность внутридифферонной гетероморфии основного клеточного дифферона эпителия кожи следует охарактеризовать как достаточно высокую в связи с тем, что встречаются тканевые элементы, находящиеся на различных стадиях дифференцировки, причем, по мере дифференцировки клетки удаляются от базальной мембраны в сторону поверхности эпителия. В физиологических условиях в поверхностном эпителии кожи не обнаруживаются клетки, ультраструктура которых позволяла бы отнести их к миоэпителиоцитам.
Основную часть кожи спины крысы занимает дерма. Субэпидер-мальный слой содержит фибробласты, макрофаги, тканевые базофилы, лимфоциты. Сетчатый слой дермы представлен плотной неоформленной соединительной тканью толщиной 200-750 мкм. Соединительные ткани дермы кожи являются полидифферонными. В их состав входят фибробласты, макрофаги, тучные клетки, гематогенные элементы (рис. 13). Ведущим клеточным диффероном соединительной ткани кожи является фибробластический дифферон. Фибробласты соединительной ткани кожи относятся к долгоживущей популяции клеток. Тканевые базофилы благодаря своим секреторным продуктам участвуют во многих физиологических процессах соединительной ткани кожи. Количественное соотношение различных клеток в субэпидермальном и сетчатом слоях дермы кожи спины крысы представлено в таблице 4.
Глубже сетчатого слоя дермы располагаются кожная мышца, заключенная в соединительнотканный футляр, и гиподерма (750 - 1500 мкм). Кожная мышца является поперечнополосатой и состоит из тонких мышечных волокон. В целом толщина кожной мышцы составляет 200 мкм. Эта мышца окружена рыхлой соединительной тканью, в которой в большом количестве встречаются адипоциты, юные фибробласты с крупными светлыми ядрами. Кроме того, здесь обнаруживаются макрофаги, лимфоциты, тканевые базофилы.
Таким образом, степень выраженности междифферонной гетеро-морфии в эпителии интактой кожи животных следует оценить как очень низкую.
В рыхлой волокнистой соединительной ткани интактной кожи животных междифферонная гетероморфия тканевых элементов высокая, так как в ней встречаются представители различных клеточных диффе-ронов - фибробластического, макрофагального, лаброцитарного и других. Количественно преобладающим, основным клеточным диффероном является фибробластический. Внутридифферонная гетероморфия основного клеточного дифферона рыхлой волокнистой соединительной ткани может быть охарактеризована как умеренная в связи с тем, что можно выделить юные, функционально мало активные клетки и зрелые фибробласты, основной функцией которых является синтез компонентов межклеточного вещества и выведение его за пределы клетки. Миофиб-робластов не обнаружено.
Количественная и цитохимическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов периферической крови в фазе воспаления у мышей Травма органов с нарушением целостности кожных покровов тесно связана как с общими, так и местными проявлениями реакции организма. Важнейшее место в общей системной реактивности организма принадлежит системе крови и органам кроветворения и иммунной защи ты (Фриденштейн А.Я., 1974). Нейтрофильные лейкоциты - эффекторы острого воспаления, характеризуются способностью к фагоцитозу, высвобождению лизосомальных ферментов и свободных кислородных радикалов. Нейтрофильные гранулоциты являются источником цитокинов - фактор некроза опухоли - а, интерлейкина-1-р\ интерлейкина-8, сосудистого фактора роста и др. (Scapini P. et al., 2000). Морфологическим маркером функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов являются катионные белки (Нагоев Б.С., 1982; Кокряков В.Н., 1990).
В группе контроля периферическая кровь мышей характеризуется преобладанием лимфоцитов (Физиологические.., 2001). Данные контрольной группы животных представлены в таблице 5.
