Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Аналитический обзор литературы 9
1.1. Механизмы развития стресс-реакции и ее альтерирующего действия 9
1.2. Структура печени в условиях развития стресс-реакции 22
1.3. Возможности коррекции альтеративных изменений структуры печени при стрессе ; 26
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 44
2.1. Экспериментальная модель стресса 44
2.2. Доза и схемы введения арабиногалактана 44
2.3. Сроки наблюдения 45
2.4. Материал для исследований 45
2.5. Методы исследования 46
2.5.1. Биохимические методы исследований 46
2.5.2. Морфологические, гистохимические и морфометрические методы 46
2.6. Методы статической обработки результатов 47
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 48
3.1. Структура печени в условиях иммобилизационного стресса 48
3.2. Структура печени в условиях иммобилизационного стресса и предварительного введения арабиногалактана 62
3.3. Коррекция стресс-индуцированных нарушений структуры печени с помощью введения арабиногалактана после иммобилизации 74
3.4. Индуцированные стрессом изменения концентрации продуктов ПОЛ
в паренхиме печени и их коррекция арабиногалактаном 87
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 91
Выводы 97
Список цитируемой литературы
- Структура печени в условиях развития стресс-реакции
- Возможности коррекции альтеративных изменений структуры печени при стрессе
- Доза и схемы введения арабиногалактана
- Структура печени в условиях иммобилизационного стресса и предварительного введения арабиногалактана
Введение к работе
Актуальность. Современный экологический кризис диктует необходимость исследования адаптационных процессов и возможностей управления ими. В последние годы, благодаря разработке учения о стрессе, стало очевидным, что стресс может являться фактором патогенеза многих неинфекционных заболеваний. Определены органы, наиболее подвергающиеся стрессорному повреждению [88; 100 - ПО, 130; 75,76; 82; 182; и др.], раскрыт ряд механизмов вторичной альтерации органов и тканей в условиях стресса. Установлены сроки развития максимальных повреждений органов при стрессе. Большинством ученых признана патогенетическая роль стресса в развитии различных заболеваний. Ф.З. Меерсоном и его учениками [100 - 110] предложена концепция о стресс-лимитирующих системах организма, на основе которой разрабатываются эффективные способы предупреждения и коррекции нарушений структуры и функции органов, вызванных стрессом [88; 84; 130; 30; 182; 81].
Многими авторами показано, что одним из главных органов-мишеней стресс-реакции является печень [130; 30; и др.]. Учитывая важнейшую роль этого органа в жизнеобеспечении организма, стрессорные нарушения структуры и функции печени могут усугублять тяжесть основного заболевания. В связи с этим, при различных заболеваниях, проводя базовое лечение, необходимо корригировать и состояние печени. Введение медиаторов и метаболитов стресс-лимитирующих систем дает достаточно хороший саногенетический эффект, но значительно менее действенно при уже развившейся стресс-индуцированной альтерации печени [218; 130; 30 и др.]. Из этого следует необходимость поиска новых гепатопротекторных веществ, способных уменьшить стрессорную альтерацию и стимулировать восстановительные процессы в печени.
Совсем недавно предметом исследований стали биологические эффекты арабиногалактана, полученого из лиственницы сибирской. Выяснено, что это
соединение обладает мембранопротекторным и гепатотропным действием, а также проявляет свойства антиоксиданта и иммуномодулятора [188; 59; 66; 56 и др.]. Эти свойства арабиногалактана дают основание считать перспективным его апробацию для коррекции стресс-индуцированных нарушений структуры и функции печени.
Цель исследования. Выявление гепатопротекторного действия арабиногалактана, полученного из лиственницы сибирской, и разработка на этой основе путей коррекции нарушений структуры печени, вызванных стрессом.
Задачи:
Выявить возможность предупреждения нарушений структуры печени, вызванных иммобилизационном стрессом, с помощью предварительного введения арабиногалактана.
Исследовать структуру печени у стрессированных животных в условиях введения арабиногалактана после окончания стрессорного воздействия.
Изучить изменение содержания продуктов липопероксидации в печени в динамике иммобилизационного стресса и при введении арабиногалактана.
Научная новизна. Выявлены и количественно оценены вызванные иммо-билизационным стрессом изменения структуры печени, проявляющиеся в нарушении кровотока, развитии дистрофических и некробиотических изменений гепатоцитов, истощении депо гликогена вследствие нарушения гликогенмета-болизирующей функции гепатоцитов, разрушении соединительнотканной стро-мы печени и угнетении коллагенсинтезирующей функции фибробластов. Установлено увеличение количества продуктов перекисного окисления липидов в ткани печени при стрессе. Впервые выявлено гепатопротекторное действие арабиногалактана, которое выражается в уменьшении избыточного накопления продуктов липопероксидации и деструктивных изменений в печени, улучшении кровотока и трофики клеток, сохранении гликогенметаболизирующей функции
гепатоцитов, предупреждении снижения активности коллагеногенеза в условиях стресса. Приоритетными являются данные о возможности коррекции стресс-индуцированных нарушений структуры печени путем введения арабиногалак-тана не только перед стрессорным воздействием, но и после его окончания.
Теоретическая и практическая значимость. Доказан гепатопротектор-ный эффект применения арабиногалактана при иммобилизационном стрессе, который проявляется при введении полисахарида как перед стрессорным воздействием, так и после него. Выявлен ряд защитных эффектов арабиногалактана в условиях стресса: ограничение нарушений внутриорганного кровотока и альтерации паренхимы и стромы печени, сохранение гликогенметаболизирующей функции гепатоцитов и коллагенсинтезирующей функции фибробластов. Полученные результаты дают основание рекомендовать применение арабиногалактана с целью предупреждения и коррекции нарушений структуры печени, вызванных стрессом, а также могут служить базой для дальнейшей разработки эффективных профилактических и лечебных мероприятий при различных патологических состояниях печени.
Положения, выносимые на защиту:
При иммобилизационном стрессе арабиногалактан препятствует избыточному накоплению продуктов липопероксидации в печени и оказывает гепато-протекторное действие, существенно уменьшая альтерацию печени к концу стадии тревоги и ускоряя восстановление структуры печени в стадию резистентности.
Превентивное введение арабиногалактана в условиях иммобилизационного стресса является наиболее эффективным для предупреждения нарушений кровотока и активации коллагеногенеза, а его введение в стадию тревоги стресса - для коррекции трофики, гликогенметаболизирующей функции печени и ограничения альтерации паренхимы и стромы.
Апробация полученных результатов. Результаты исследований опубликованы в 7 работах и доложены на научно-практической конференции «Наш вклад в решение актуальных вопросов развития Монголии» (Иркутск, 2004), на заседании Иркутского отделения общества анатомов, гистологов и эмбриологов Российской Федерации (Иркутск, 2004), на заочной электронной конференции «Современные проблемы науки и образования» (15-20 ноября 2004), на заседании ассоциации анатомов Монголии (Улаанбаатар, 2005), на расширенном заседании кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии человека ИГМУ (Иркутск, 2005).
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 129 страницах; написана по традиционному плану, включает введение, обзор литературы, главу о материалах и методах исследования, главу о собственных результатах, обсуждение результатов, выводы, список литературы из 260 источников (206 на русском языке, 54 иностранных). Полученные результаты представлены в 4 таблицах и на 44 рисунках в виде графиков, диаграмм, микрофотографий.
Структура печени в условиях развития стресс-реакции
Гистоструктура печени при иммобилизационном стрессе характеризуется фазными изменениями в зависимости от стадии стресс-реакции. По данным ОМ. Ощепковой [130] через 2 часа после окончания иммобилизации в печени развивается резко выраженное венозное полнокровие, в которое вовлечена большая часть центральных и собирательных вен. В междольковой соединительной ткани встречаются участки, в основном вокруг триад, инфильтрированные лейкоцитами, а в междольковых венах наблюдается краевое стояние лейкоцитов. Синусоидные капилляры печеночных долек расширены, и в их просвете видно большое количество свободных Купферовских кпеток. Паренхима печени, в целом, сохраняет балочное строение, но в гепатоцитах центральной части печеночных долек часто отмечаются явления белковой дистрофии, а на периферии долек встречаются группы гепатоцитов с вакуолями неправильной формы. В таких клетках содержится значительно меньше глыбок гликогена.
Через 39 часов после окончания иммобилизации, по данным Л.С. Васильевой [29], для паренхимы печени характерно формирование множественных мелких очагов некроза. Практически во всех сохранившихся гепатоцитах наблюдается либо жировая, либо ярко выраженная баллонная дистрофия. При этом очень крупные, неправильной формы вакуоли заполняют почти весь объем клетки. Гликоген в таких клетках не выявляется. На всей площади среза печени гликоген обнаруживается в небольшом количестве лишь в единичных гепатоцитах и в узком слое клеток, расположенных под капсулой печени (в этих клетках отсутствуют или слабо выражены признаки дистрофии). Явления стаза крови в сосудах печени выражены в этот срок значительно слабее, чем в первые часы стадии тревоги стресс-реакции, что свидетельствует, вероятно, о частичном восстановлении кровотока. Через 96 часов после окончания иммобилизации в паренхиме печени наблюдаются отчетливые признаки репарации повреждений: очаги некроза, по крайней мере, большая их часть, окружены мелкими, вероятно, вновь образованными, гепатоцитами, имеющими нормальную структуру и содержащими гликоген. Среди маргинальных клеток этого окружения встречаются и митотически делящиеся. Тем не менее, несмотря на выраженные восстановительные процессы, структура паренхимы печени в этот срок стресс- реакции еще далека от нормальной, т.к. все еще сохраняются нарушения кровотока (в виде полнокровия части междольковых и центральных вен), встречаются очаги плотной лейкоцитарной инфильтрации и еще не полностью восстановлены некротизированные участки паренхимы.
По данным Л.С. Васильевой [29] при иммобилизационном стрессе, вызванном у крыс 6-ти часовой иммобилизацией на спине, к концу стадии тревоги у животных максимально активируются процессы ПОЛ и развивается наиболее выраженная вторичная альтерация печени, характеризующаяся формированием множественных очагов некроза паренхимы органа и дистрофическими изменениями гепатоцитов. При этом в печени практически опустошаются запасы гликогена, что в большой мере обусловлено гликогенолитическим действием высоких концентраций гормонов стресс-реализующих систем [218; 249; 250; 251; 254] на протяжении всей стадии тревоги стресс-реакции. В первые 2-3 суток стадии резистентности стресс-реакции отмечается тенденция к торможению ПОЛ и стимуляции восстановительных процессов в печени.
В исследованиях О.М. Ощепковой [130] показано, что через 24 часа после окончания стресса в печени животных наблюдаются очаговые деструктивно-воспалительные изменения: смешанная белково-жировая дистрофия, мелкоочаговый некроз, полнокровие вен и капилляров, диапедез эритроцитов, перива-скулярная лейкоцитарная инфильтрация. Площадь очагов некроза составляет 1,9±0,4%, концентрация лейкоцитов - 10-15 клеток на 1000 мкм2. Соотношение иейтрофилов и мононуклеаров - 1:1. Балочная структура печени сохранена, синусоиды несколько увеличены.
Ультраструктура гепатоцитов претерпевает дистрофические изменения: цитоплазматический матрикс процветлен, контуры ядер приобретают лопастной вид, в кариоплазме отчетливо выражено перераспределение хроматина. Отмечаются незначительные расширения цистерн и канальцев эндоплазматической сети, внутри цистерн и везикул содержится небольшое количество электронно-плотного хлопьевидного материала. Увеличивается число лизосом, в цитоплазме уменьшается количество митохондрий и регистрируется большое количество липидных и миелиноподобных включений. Имеются белковые и углеводные гранулы.
Возможности коррекции альтеративных изменений структуры печени при стрессе
Из проведенного анализа литературы следует, что сано-и патогенетические, принципы защиты структуры печени от альтерирующего действия стресса должны базироваться на управлении функционированием стресс-системы и сопряженных с ней систем организма.
Активность и реактивность стресс-системы регулируются двумя основными механизмами: механизмом саморегуляции и механизмом внешней регуляции.
Механизм саморегуляции реализуется за счет влияния друг на друга компонентов самой системы. Так между КРГ и НА-нейронами в центральном звене стресс-системы существуют нервные связи, приводящие к взаимоактивации этих нейронов: КРГ, выделяемый КРГ-нейронами, активирует НА-нейроны, синего пятна другие и НА-нейроны и соответственно секрецию ими НА, и наоборот, НА-нейроны активируют КРГ-нейроны. По принципу отрициательной обратной связи гормоны, вырабатываемые в системе, ограничивают свою собственную продукцию. Кроме того, глюкокортикоиды ограничивают активность норадреналинового звена стресс-системы, угнетая синтеза, высвобождение и обратный захват НА в симпатических нейронах.
Механизм внешней регуляции осуществляется модуляторными регулятор-ными системами, не входящими в стресс-систему, но тесно с ней связанными. Это так называемые стресс-лимитирующие системы, которые способны ограничивать активность стресс-системы и чрезмерную стресс-реакцию на центральном и периферическом уровнях регуляци [104; 105; 106].
Таким образом, можно выделить два основных принципа коррекции структурных нарушений печени в условиях стресса:
1. Активация стресс-лимитирующих систем или введение их медиаторов и метаболитов, что обеспечит ограничение проявления стресс-реакции, гиперактивацию надпочечников и выброс ими глюкокортикоидных гормонов и адреналина.
2. Медикоментозная терапия, воздействующая на отдельные звенья патогенеза стрессорной альтерации структуры печени.
К основным центральным стресс-лимитирующим системам относятся ГАМК-ергическая система (система нейронов, продуцирующих Y-аминомасляную кислоту - ГАМК, оказывающую тормозное действие на нейроны головного и спинного мозга) и опиоидергическая система, объединяющая нейроны в гипоталамусе и секреторные клетки в гипофизе, продуцирующие опиоидные пептиды (ОП), также оказывающие тормозное действие. КРГ-, АВ-и НА-нейроны стресс-системы, взаимосвязаны с ГАМК и ОП-нейронами. Выделяющиеся при активации стресс-системы НА, КРГ и АВ стимулируют ГАМК и ОП-нейроны, они секретируют ГАМК и ОП, которые в свою очередь ограни- чивают активность стресс-системы в целом (Calogero, 1995; Nikolarakis и соавт., 1986; Андреев и соавт, 1982; Di Micco и соавт., 1986; Werling и соавт., 1987. цит. по [148]). Особо следует подчеркнуть ингибиторное влияние ГАМК и агонистов бензодиазепиновых рецепторов на функцию КРГ-нейронов, которые, координируют эндокринные, метаболические и поведенческие реакции организма на стрессоры. Это влияние реализуется главным образом путем угнетения высвобождения КРГ из терминален КРГ-нейронов (Calogero, 1995. цит. по [148]).
Тормозное действие ГАМК и ОП на катехол аминов о е звено стресс-системы осуществляется не только в ЦНС, но и на периферии: рецепторы для ГАМК и ОП локализованы на аксонах симпатических нейронов, иннервирующих органы . и ткани, и в самых органах, что обеспечивает ограничение высвобождения кате-холаминов и их влияния (Fuder, 1985; Snyder, 1984; Erdo, 1985, цит. по [148]). Доказана совместная локализация стресс-гормонов и ОП: катехоламинов и эн-кефалинов в хромаффинных пузырьках медуллы надпочечников, вазопрессина и динорфина в нейронах гипоталамуса (Boarder, McArdle, 1985; Whitnall и соавт, 1983. цит. по [148]), АКТГ и бета-эндорфина в гипофизе. В результате выброс стресс-гормонов может сопровождаться выходом ОП, причем интенсивность этого выхода прямо пропорциональна степени активации стресс-системы. Доказано также, что в гипофизе АКТГ и ОП (бета-эндорфины) образуются из общего , предшественника (пропиомеланокортина) и выделяются при стрессе в эквимо-лярных количествах (Guillemin и соавт, 1977; Fraioli и соавт, 1980. цит. по [148]). В регуляции стресс-системы участвуют также другие нейропептиды. Важная роль отводится субстанции Р, которая образуется в гипоталамусе и ами-гдале и оказывает тормозное действие на КРГ нейроны и секрецию КРГ (Faria и соавт, 1991 цит. по [148]). Продуцируемая в надпочечниках субстанция Р модулирует высвобождение из них катехоламинов, уменьшая выброс этих гормонов при стрессе (Оэме и соавт, 1984 цит. по [148]). Доказано также, что субстанция Р на центральном уровне угнетает стрессорную гипертензивную реакцию и по-1 вышает устойчивость к эмоциональном стрессу. Определенную роль в анти-стрессорном противогипертензивном действии субстанции Р играет способность этого нейропептида угнетать фермент, превращающий ангиотензин І в ангиотензин II (Бадиков и соавт, 1985; Юматов и соавт, 1984; Verma и соавт, 1982. цит. по [148]).
Названный «стрессорной молекулой» нейропептид Y оказывает угнетающее действие на НА-нейроны синего пятна, но стимулирует активность КРГ нейронов в гипоталамусе и потенцирует вазоконстрикторное действие катехо-ламинов при стрессе (Zukowska-Grojec, 1995. цит. по [148]).
Действие стресс-системы на уровне органов и тканей ограничивают системы «локальной» регуляций - локальные стресслимитирующие системы, т.е. системы простагландинов, аденозина, ОП и других соединений в самих органах и периферических нейроэндокринных структурах [100; 147]. Они угнетают высвобождение катехоламинов из нервных окончаний и надпочечников, и действие этих моноаминов, тем самым они уменьшают активацию свободноради-кального окисления (СРО) и ограничивают чрезмерную стресс-реакцию и ее повреждающее действие на органы и ткани. Важную роль в органичении активации СРО и повреждений при стрессе играют также относящиеся к локальным стресс-лимитирующим системам антиоксидантные системы в органах и тканях, включающие в себя антиоксидантные ферменты (каталазу, супероксиддисмута-зу и глутатионпероксидазу), а также антиоксиданты - альфа токоферол (витамин Е), витамин А, аскорбиновую кислоту и др. [104; 109]. Таким образом, базальная активность стресс-системы и ее активация при стрессе зависят от активности стресс-лимитирующих систем.
Доза и схемы введения арабиногалактана
Опыты проведены на 150 беспородных крысах-самцах массой 170-190 г в осенне-зимний период. Содержание, питание, уход и выведение из эксперимента соответствовали «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных приказом № 755 от 12.08.77. В соответствии с поставленными задачами все подопытные животные были разделены на 4 группы (в 1 группе 10 крыс, в остальных - по 40-45). Животных 1-ой группы не подтвергали стрессорному воздействию, а оставляли интактными. Животным 2-ой группы (контрольная группа) в качестве стрессора применяли апробированную Н. Selye (1936) модель нервно - мышечного напряжения -иммобилизация ненаркотизированных крыс в горизонтальном положении на спине в течение 6 часов однократно. Животные 3-ей и 4-ой групп подтвергались тем же воздействиям (иммобилизации на спине), но им вводили природный полисахарид арабиногалактан, выделенный из лиственницы сибирской.
Доза и схемы введения арабиногалактана. В эксперименте использовали арабиногалактан, выделенный из лиственницы сибирской в Иркутском институте органической химии. Доза арабиногалактана (АГ) подбиралась с учетом его максимального цитопротекторного эффекта. В работах В.И. Дубровиной и Е.П. Голубинского с соавторами [55; 56; 57], В.И. Дубровиной и С.А. Медведевой с соавторами [58] показано, что АГ в дозе 200 мг/кг проявляет мембранотропные свойства, обладает иммуномодуляторной активностью и снижает интенсивность процессов ПОЛ. Арабиногалактан вводили внутримышечно однократно: третьей группе крыс за 30 мин. до иммоби лизации, четвертой группе крыс - через 24 часа после окончания иммобилизации. Первый вариант введения АГ (до стрессорного воздействия) позволяет оценить его саногенетический гепатопротекторный эффект при стрессе, второй вариант введения (после стрессорного воздействия) дает возможность выявить эффективность терапевтического применения арабиногалактана в условиях стресса.
Сроки наблюдений. Животных выводили из эксперимента через 39 часов, 4 и 7 суток после окончания иммобилизации. Эти сроки наблюдений выбраны по данным предыдущих исследований, в которых показано, что при используемой нами модели стресса стадия тревоги продолжается 39 часов, в течение которых развивается максимальная вторичная альтерация органов и тканей - эрозии и язвы желудочно-кишечного тракта, очаги некрозов в печени и др. [86; 130]. После 39 часов развивается следующая стадия стресс-реакции - стадия резистентности, во время которой постепенно восстанавливается гомеостаз и нормализуется структурно-функциональное состояние органов. Чтобы оценить скорость восстановительных процессов у животных контрольной и подопытных групп, материал для исследования брали в начальный период развития стадии резистентности стресс-реакции (через 4 суток после иммобилизации) и в конечный период этой стадии (через 7 суток после иммобилизации).
Материал для исследований. В указанные сроки после окончания стрессорного воздействия крыс дека-питировали, а затем извлекали печень и иссекали из нее 2 кусочка. Один кусочек использовали для биохимических исследований, второй кусочек размером 1см - для морфологических исследований. Для каждого срока наблюдений брали материал от 13-14 животных.
Для оценки активности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) у подопытных животных в гомогенате печени (от 10 крыс на каждый срок) определяли содержание первичных продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов (ДК) и промежуточного продукта - малонового диальдегида (МДА). Гомогенат печени готовили на физиологическом растворе в пропорции 1 г ткани на 9 мл физиологического раствора. Концентрацию ДК определяли в надосадочной жидкости по методу В.В. Гаврилова и М.И. Мишкорудной [40]. Принцип этого метода основан на получении с помощью гептан-изопропаноловой смеси конью-гированных диеновых структур (ДК), которые интенсивно поглощают свет в области 232-234 нм. Расчет содержания ДК проводили в мкМ на 1 г ткани.
Малоновый диальдегид (МДА) - промежуточный продукт ПОЛ - определяли по методу И.Д. Стальной, Т.Г. Гаришвили [112] с помощью тиобарбиту-ровой кислоты. Суть метода заключается в том, что при высокой температуре в кислой среде МДА реагирует с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК), образуя окрашенный в розовый цвет триметиновый комплекс с максимумом поглощения при длине волны 532 нм. Концентрацию МДА в надосадочной жидкости измеряли спектрофотометрически и выражали в мкМ на г ткани.
Ткань печени фиксировали в 10 % нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы толщиной 7 мкм окрашивали следующими методами [111]: 1) гематоксилин-эозином для морфометрических исследований, 2) пикрофуксином по Ван-Гизону - выявление новообразованного коллагена (фуксинофильного), 3) по Маллори в модификации Слинченко для выявления коллагена и фибрина, 4) выявление кислой фосфатазы по Гомори для регистрации макрофагов, 5) ШИК-реакция по Шабадашу с контролем амилазой (выявление гликогена).
Морфометрию срезов проводили на световом микроскопе МБИ-15 с применением окулярной сетки и окулярной линейки. В паренхиме печени определяли объёмную долю гепатоцитов, сосудов, очагов некробиоза и некроза, новообразованных коллагеновых волокон, а также подсчитывали процентное количество дистрофически измененных клеток (с белковой, жировой, гидропической и баллонной дистрофией), двуядерных гепатоцитов, клеток Купфера, измеряли размер гепатоцитов. Наличие жировой дистрофии выборочно контролировали окраской препаратов суданом-Ш. Количество гликогена оценивали в баллах по четырехбальной шкале (0, 1, 2, 3 балла), затем высчитывали гистохимический показатель по формуле [29]: ГХП=(0 Пі+1 П2+2 п3+3 п4)/Цпі+П2+пз+П4), где ni,n2, n3,n4 - количество гепатоцитов.
Структура печени в условиях иммобилизационного стресса и предварительного введения арабиногалактана
Проведенное исследование позволило выявить закономерные изменения структуры печени в динамике иммобилизационного стресса. Эти изменения логично объясняются механизмами реализации стресс-реакции. В стадию тревоги стресса под действием глюкокортикоидных гормонов надпочечников и высоких концентраций адреналина в печени происходит мобилизация запасов гликогена, но одновременно глюкокортикоиды стимулируют и катаболизм белков, необходимый для глюконеогенеза. Следствием этого является распад белковых струк- тур в клетках печени, развитие белковой дистрофии и ферментемия. Кроме того, стресс-реализующие гормоны активируют процессы ПОЛ, этот факт в настоящее время доказан многими авторами [16; 106; 107]. На фоне развивающейся ферментемии в ткани накапливается избыток продуктов ПОЛ, под действии-ем которых могут разрушаться мембранные структуры клеток [17; 27; 133; 135; 193; 199; 202]. В результате этого развивается жировая, гидропическая, а затем и баллонная дистрофия, часто заканчивающаяся некрозом клетки. Дистрофические и деструктивные изменения нарастают быстро, по принципу каскадных реакций, и сопровождаются нарушением кровотока. Все это ярко проявилось в -нашем исследовании: максимальная стрессорная альтерация печени развивается менее чем за 2 суток - уже через 39 часов после иммобилизации - и охватывает 75% объема печени.
В стадию резистентности, когда снижается продукция надпочечниками глюкокортикоидов и адреналина, деструктивные изменения в печени постепенно уменьшаются, восстанавливается ферментативная активность, начинают развиваться репаративные процессы, но даже через 7 суток после окончания иммобилизации структура печени, по нашим данным, не нормализуется. Соединительнотканная строма и запасы гликогена не восстанавливаются, сохраняются, полнокровие, единичные мелкие очаги некроза, продолжается пролиферация гепатоцитов.
Таким образом, на основании данных литературы и результатов собственных исследований можно выделить основные механизмы стрессорной альтерации печени: 1) катаболизм белков под действием высоких концентраций глюко-кортикоидов; 2) гиперактивация ПОЛ и избыточное накопление в ткани первичных продуктов; 3) нарушение кровотока, как дополнительный фактор дистрофии и гибели клеток.
Для коррекции выявленных стресс-индуцированных нарушений структуры печени нами не случайно был выбран арабиногалактан. Преимущество этого полисахарида перед другими природными соединениями, которые апробируются в качестве пищевых добавок или биологически активных веществ, состоит в том, что он не токсичен, обладает мембранопротекторными свойствами и при этом имеет сродство к асиаловым рецепторам гепатоцитов [161; 65].
Введение арабиногалактана перед стрессорным воздействием уменьшило нарушения кровотока (ограничило явления стаза и расширение синусоидных капилляров) и потерю гликогена гепатоцитами в стадию тревоги стресс-реакции (рис.43), существенно затормозило развитие некробиотических и некротических изменений гепатоцитов и распад междольковой соединительнотканной стромы печени (рис.44), снизило концентрацию продуктов ПОЛ (рис.42).
На основании этих данных логично предположить два механизма действия арабиногалактана на клетки печени. Первый механизм связан с ограничением избыточного накопления в печени продуктов липопероксидации.
Корреляционный анализ полученных данных выявил высокую степень прямой корреляции между относительным объемом очагов повреждения и количеством ДК в ткани печени и (г=0,92), а также концентрацией МДА (г=0,72) и суммарным количеством продуктов ПОЛ(г=0,89), что указывает на несомнен 93 ную взаимосвязь степени деструкции печени с активностью процессов ПОЛ в ней.
Второй механизм действия арабиногалактана может быть обусловлен взаимодействием арабиногалактана с клеточными рецепторами гепатоцитов, что позволяет ему, как полисахариду, взаимодействовать своими гидроксильными группами с углеводами гликокаликса клеток, усиливая защитные свойства гли-кокаликса и препятствуя взаимодействию рецепторов цитолеммы с токсичными продуктами обмена и распада.
Рассматривая с этих позиций полученные данные, можно легко их объяснить. В частности, в условиях предварительного введения арабиногалактана у стрессированных животных значительно уменьшался относительный объем очагов повреждения паренхимы, хотя количество гепатоцитов с жировой и гид-ропической дистрофией в несколько раз превышало их количество у стрессированных животных, не получавших арабиногалактан. Из этого следует, что, даже в случае развития балонной дистрофии, арабиногалактан препятствовал разрыву клеточных мембран и способствовал сохранности гепатоцитов, их внутриклеточной регенерации и более быстрому и полному восстановлению паренхимы печени (к 7 суткам наблюдения).
При введении арабиногалактана в стадию тревоги стресса (через 24 часа после иммобилизации), т. е когда альтерирующие механизмы стресса уже запущены, также проявляется защитный эффект этого полисахарида. Уже через 12-14 часов после введения АГ (т.е. через 39 часов после иммобилизации) в печени существенно снижается концентрация продуктов ПОЛ. Несмотря на развитие дистрофических изменений в гепатоцитах, их распад почти полностью купируется (рис.44).
