Содержание к диссертации
Введение
Глава1. Обзор литературы 10
1.1. Современные сведения о строении и функции костного мозга человека... 10
1.2. Биоаминсодержащие клетки 19
1.3. Современные представления о биогенных аминах и гепарине. 25
1.4. Сведения о костномозговом кроветворении при гематологических заболеваниях 34
Глава 2. Материал и методы исследования 39
Глава 3. Результаты собственных исследований 43
3.1. Исследование морфологических структур костного мозга человека в референтной группе 43
3.1.1. Миелограмма 43
3.1.3. Распределение гепарина 45
5.7.3.. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс 47
3.2. Исследование морфологических структур костного мозга больных острым миелобластным лейкозом 51
3.2.1. Миелограмма 51
3.2.2. Распределение гликозаминогликанов 54
3.2.2. Распределение гепарина 54
3.2.3. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс 56
3.3. Исследование морфологических структур костного мозга больных недиффереицируемым лейкозом 59
3.3.1. Миелограмма 59
3.3.2. Распределение гепарина 62
3.3.3. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс 63
3.4. Исследование морфологических структур костного мозга больных миеломной болезнью 67
3.4.1. Миелограмма 67
3.4.2. Распределение гепарина 70
3.4.3.. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс 72
3.5. Исследование морфологических структур костного мозга больных железодефицитной анемией 75
3.5.1. Миелограмма 75
3.5.3. Распределение гепарина 77
3.5.3. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс 80
3.6. Исследование морфологических структур костного мозга больных железодефицитной анемией 83
3.6.1. Миелограмма 83
3.6.2. Распределение гепарина 85
3.6.3. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс 88
3.7. Корреляционный анализ биоаминных взаимодействий 92
Глава 4. Обсуждение результатов и заключение 99
Выводы 113
Список литературы 114
- Сведения о костномозговом кроветворении при гематологических заболеваниях
- Исследование морфологических структур костного мозга больных острым миелобластным лейкозом
- Исследование морфологических структур костного мозга больных недиффереицируемым лейкозом
- Исследование морфологических структур костного мозга больных железодефицитной анемией
Введение к работе
Актуальность темы. Проблема злокачественных новообразований продолжает оставаться одним из наиболее актуальных вопросов современной медицины. Продолжается поиск новых наиболее эффективных методов диагностики, профилактики и лечения опухолей различных локализаций. Тем не менее, в настоящее время до конца не изучены причины появления, развития и гибели опухолевых клеток, механизмы взаимодействия этих клеток между собой и окружающими структурами. С современных позиций все виды лейкозов развиваются на основе патофизиологических закономерностей, имеющих общее значение, как для лейкозов, так и для опухолей других локализаций. Исторически, именно на этой модели сформулированы основные представления об опухолевой клетке. Легко доступные для исследования, лейкозные клетки - удобная модель для изучения закономерностей опухолевого роста (Владимирская Е.Б.,2003).
В доступной нам литературе имеются сведения о биоаминном обеспечении тимуса (Москвичев Е.В., 2004; Михайлова М.Н.,2004), селезенки, печени (Голубцова Н.Н., 2000, 2001), кожи (Гурьянова Е.А., 2004), лимфатических узлов (Смородченко А.Т., 1996), крови (Демиденко Г.М. и др.,2005, Любовцева Е.В., 2005), аппендикса и гипофиза (Любовцева Л.А., 2002). Описаны функции клеток, продуцирующих и регулирующих содержание нейромедиаторов в различных морфологических структурах (Быков В.Л., 1999; Пащенков М.В., Пинегин Б.В. , 2001; Бережная Н.М., Сепиашвили Р.И., 2003). В 1993 году Л.А.Любовцевой, а в 1997 году В.В. Ермолаевым изучено влияние биогенных аминов на миелоидное кроветворение лабораторных животных (крыс) при различных внешних воздействиях. В 2004 году Б.Г.Юшков описал изменения, происходящие в костном мозге при облучении и кровопотере. Однако до настоящего времени значение биоаминсодержащих структур и биогенных аминов в регуляции костномозгового кроветворения человека и патогенезе гематологических заболеваний, в том числе и гемобластозов, изучено недостаточно.
Следуя литературным данным (Любовцева Л. А., 1994), можно предположить, что некоторые гематологические заболевания связаны с нарушением обмена биогенных аминов в клетке, приводящим к возникновению патологических сдвигов в функционировании красного костного мозга, однако причина такого сдвига в обмене биогенных аминов не известна. В последнее время в патогенезе онкологических заболеваний все большее значение придается морфологическим структурам, участвующим в местной регуляции тканевых процессов, а также биологически активным веществам, которые вырабатываются ими (Быков В.Л., 1999, Макаренкова В.П. и др., 2002). Кроме того, большое внимание уделяется влиянию дендритных клеток на индукцию иммунитета и патогенез онкологических заболеваний (Макаренкова В.П. и др., 2002), активно ведется разработка противоопухолевых вакцин на основе этих структур (Москалева Е.Ю., Северин С. Е., 2002; Коростелев С.А.,2005). Дендритные клетки выявляются в различных органах и тканях люминесцентно-гистохимическими методами в виде гранулярных люминесцирующих клеток (Стручко Г.Ю., 2003), однако в костном мозге человека при нарушениях гемопоэза эти клетки до настоящего времени не исследованы.
Таким образом, изучение патологического кроветворения необходимо для того, чтобы разобраться в механизмах, регулирующих процессы роста и дифференцирования клеток в норме и патологии, что даст возможность найти точки приложения воздействий, корректирующих болезненные состояния. Мы полагаем, что на этом уровне исследования может находиться один из ответов на вопрос о причинах сбоя регуляции развития, в результате которого клетка получает импульс к неконтролируемому делению, давая начало злокачественной опухоли.
Настоящее исследование является фрагментом комплексного исследования кафедры гистологии, цитологии, эмбриологии Чувашского государственного университета им. И.Н.Ульянова и входит в программу "Университеты России" - раздел "Гистохимия биогенных аминов, морфофункциональное состояние органов и тканей в норме и эксперименте" (№ госрегистрации 01.97.0007431).
7 Учитывая актуальность и социальную значимость проблемы гематологических заболеваний, было проведено настоящее исследование.
Цель исследования - изучить локализацию биогенных аминов в биоаминсодержащих структурах костного мозга человека при нарушении кроветворения.
В соответствии с целью работы поставлены следующие задачи:
Определить локализацию и содержание катехоламинов, гистамина и серотонина в биоаминсодержащих структурах костного мозга человека в референтной группе.
Определить содержание серотонина, гистамина, катехоламинов и гепарина в биоаминсодержащих структурах костного мозга человека при остром миелобластном лейкозе, недифференцируемом лейкозе, миеломной болезни, железодефицитной и мегалобластной анемии.
Выявить корреляционные связи между биогенными аминами в структурах костного мозга в референтной группе и при вышеуказанных заболеваниях.
Выявить значение серотонинового индекса в различных костномозговых структурах и определить влияние соотношения серотонин/катехоламины на кроветворение при различных нарушениях гемопоэза.
Научная новизна работы.
Впервые с помощью люминесцентно-гистохимических методов определены качественные и количественные характеристики биоаминсодержащих структур костного мозга человека в норме, при остром миелобластном лейкозе, недифференцируемом лейкозе, миеломной болезни, железодефицитной и мегалобластной анемии.
Впервые определено значение числа и функционального состояния гранулярных люминесцирующих (APUD-клеток и дендритных макрофагов) и тучных клеток для костномозгового кроветворения при вышеперечисленных заболеваниях крови.
Впервые установлено, что нарушения гемопоэза при заболеваниях крови сопровождаются увеличением числа корреляционных связей между серотонином, гистамином и катехоламинами биоаминсодержащих структур костного мозга.
Впервые выявлено влияние соотношения серотонин/катехоламины в биоаминсодержащих структурах костного мозга на ход гемопоэтических процессов при нарушении костномозгового кроветворения человека.
Выявлено, что гранулярные люминесцирующие (клетки APUD системы и дендритные макрофаги) и тучные клетки регулируют содержание
биогенных аминов в структурах костного мозга человека и влияют на ход гемопоэтических процессов.
Научно-теоретическая значимость.
Полученные в ходе исследования сведения существенно расширяют и дополняют современные представления об автономной регуляции костномозгового кроветворения и механизмах ее нарушения при остром миелобластном лейкозе, недифференцируемом лейкозе, миеломной болезни, железодефицитной и мегалобластной анемии. Данные о биоаминном обеспечении красного костного мозга человека в норме и при вышеперечисленных заболеваниях, а также значение гранулярных люминесцирующих и тучных клеток в регуляции гемопоэза и развитии гемобластозов представляют интерес для гистологии, гематологии, иммунологии и онкологии.
Практическая значимость.
Результаты исследования используются в лекциях, читаемых на кафедре цитологии, эмбриологии, гистологии, на курсе онкологии медицинского факультета Чувашского госуниверситета, а также в работе врачей Республиканского клинического онкологического диспансера МЗ ЧР, лаборатории иммуногистохимической диагностики опухолей. Результаты работы нашли отражение в опубликованных статьях, тезисах и сообщениях.
9 Практические рекомендации Полученные в работе данные о механизмах влияния биогенных аминов и биоаминсодержащих структур на процессы костномозгового кроветворения при различных патологических состояниях дополняют существующие представления о возникновении нарушений гемопоэза и могут быть использованы при чтении лекций и проведении практических занятий по теме «Органы кроветворения».
Люминесцентно-гистохимические методы определения содержания биогенных аминов в костномозговых структурах могут быть использованы в дифференциальной диагностике лейкозов и других заболеваний крови. Основные положения, выносимые на защиту:
1. Тучные и гранулярные люминесцирующие клетки (клетки APUD
системы и дендритные макрофаги) являются основными биоаминсодержащими
структурами костного мозга человека, влияющими на костномозговое
кроветворение.
2. При миеломной болезни, остром миелобластном и
недифференцируемом лейкозе происходит резкое снижение числа гранулярных
люминесцирующих (клеток APUD системы и дендритных макрофагов) и
тучных клеток в костном мозге. Властные формы клеток накапливают
гистамин.
3. Активация гемопоэза при мегалобластной и железодефицитной анемии.
сопровождается увеличением числа гранулярных люминесцирующих (клеток
APUD системы и дендритных макрофагов) и тучных клеток. Нарастает число
дегранулирующих форм тучных клеток.
4. При изученных гематологических заболеваниях появляются
корреляционные связи между биогенными аминами костномозговых структур,
не выявляемые в норме.
Апробация работы. Промежуточные результаты работы докладывались на ежегодных итоговых научных конференциях Чувашского государственного университета (Чебоксары, 1995-2004). Результаты диссертации изложены в
10 материалах 6 Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации в 2000 году (Израиль), доложены на Международной конференции по функциональной нейроморфологии «Колосовские чтения -2002» (г.Санкт-Петербург).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 4 статьи, 4 - тезисы (материалы Международных, Всероссийских и республиканских научных конференций; сборниках научных трудов). Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста (собственно текста - 113 страниц), состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, раздела собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 36 рисунками. Список литературы включает 299 источников, в том числе 127 зарубежных.
Сведения о костномозговом кроветворении при гематологических заболеваниях
Лейкозы - опухоли, исходящие из кроветворной ткани с первичным опухолевым поражением костного мозга. По данным Ibternational Agency for Research on Cancer (IARC) общая заболеваемость острой лейкемией по всему миру составляет 4 на 100000 человек. В приближенном исчислении, каждое третье онкологическое заболевание у детей - острый лейкоз(7а!Те E.S. et al., 2001). Острый миелобластный лейкоз составляет 70% всей заболеваемости острой лейкемией, чаще встречается у взрослых с медианой составляющей 60 лет. Заболеваемость острым миелобластным лейкозом нарастает с каждым годом возрастного периода и в возрасте старше 60 лет составляет 10 на 100000 человек в год (Sandler D.P., Ross S.A., 1997; Smith М.А. et al., 1995). Острый лимфобластный лейкоз встречается чаще у детей и составляет 75% заболеваемости острой лейкемией. Этиологические факторы вызывающие онкогематологические заболевания, несмотря на проводимые исследования, во многом неясны. Вирусное поражение клеток костного мозга и микроокружения, ионизирующее излучение (Мухин В.Н., 2000), а так же воздействие химических агентов в настоящее время считаются ведущими причинными факторами (D. Zipori et al., 1979; Greenberger J.S. etal.,1979; Sandler D.P., Ross S.A., 1997). Существует мнение, что лейкозная трансформация происходит на уровне полипотентных стволовых клеток (Grilli G. et al., 1981).
Так, например, доказано, что хронический миелолейкоз (ХМЛ) и острый лимфобластный лейкозы (ОЛЛ) происходят из одного предшественника - стволовой полипотентной клетки (Janossy G., Greaves М., 1978). Till (1976, 1982), учитывая общность реагирования на регуляторные факторы нормальной и лейкозной популяции гемопоэтических клеток, приходит к выводу, что наиболее реальными клетками - мишенями для лейкозной трансформации являются нормальные полипотентные стволовые клетки. В настоящее время считается доказанным, что лейкемическая популяция не является однородной. Только небольшая, меняющаяся в динамике роста опухоли доля клеток находится в митотическом цикле - «ростовая фракция», остальные клетки опухоли пребывают вне митотического цикла, в фазе GO (Е.Б.Владимирская, 2003). Доказана роль хромосомных нарушений в развитии лейкозов (Nowell Р.С., 1976; McCulloch T.F. et al., 1979), а также наличие генетической лабильности злокачественного клона (Nowell Р.С., 1978). Считается, что лейкоз, как и большинство опухолей, имеет моноклональное происхождение (Воробьев А.И., Бриллиант М.Д.,1976; Fialkow P.J et al., 1980; Fonn et al., 1982, McCulloch; 1979; Senn et al., 1980). Характерной чертой кроветворения при лейкозе является клональное доминирование и угасание нормальных клонов. Нормальные стволовые кроветворные клетки сохраняются и поиск факторов, способствующих нормализации кроветворения, реален. В случае индуцированного лейкоза у мышей доказана роль кроветворного микроокружения клеток хозяина для возникновения лейкозных клеток. Однако по мере прогрессии, опухолевый клон приобретает независимость от микроокружения. Имеются данные, что лейкоз может быть результатом выхода нормальных клеток из-под обычного контроля регуляции.
Значимость регуляторных нарушений, обуславливающая поиск факторов, способствующих повышению дифференцировки клеток при лейкозе, доказывается фактом того, что при остром миелолейкозе человека лейкозный клон сохраняет способность к дифференцировке в направлении миелопоэза (McCulloch Е.А. et al, 1978), а при хроническом лимфолейкозе - до конечной функциональной стадии -лимфоцита (Parker, 1979). Имеются наблюдения рецидива лейкоза, которые обусловлены злокачественной трансформации донорских костномозговых клеток (Fialkow P.J. et al., 1971; Thomas, 1972), что может быть объяснено сбоем в звене регуляции пролиферативной активности клеток (Thomas, 1982). Нарушения регуляции гемопоэза подтверждено также с помощью диффузионных камер, содержащих лейкозные клетки и имплантированных в организм интактных животных. В диффузионных камерах наблюдалось резкое падение содержания лейкозных клеток, что может быть объяснено проникновением в камеру особого фактора, вызывающего дифференцировку клеток из организма интактного животного (Stelle et al.,1977). Острый лейкоз - это увеличение клона бластов в красном костном мозге, периферической крови или других тканях. Большое значение для субклассификации опухолей крови имеет цитогенетическое и генотипическое исследование (Caligiuri М.А. et al., 1997; Downing J.R., 1999; Grimwade D. et al., 1998; Bloomfield CD., 1997; Raimondi S.C. et al., 1999). В настоящее время считается, что важную роль в патогенезе острого лейкоза играет гемопоэзиндуцирующее микроокружение (Столбовская О.В., Хайруллин P.M., 1999; Шацева Т. А. и др., 1998, Bekkum D.W. et al., 1981). Одной из причин изменения морфофукционального состояния стромы при гематологических заболеваниях является цитокиновый дисбаланс, обусловленный наличием опухолевого клона (Е.Б.Владимирская, 2003; Mayani Н. etal., 1992).
Исследование морфологических структур костного мозга больных острым миелобластным лейкозом
При остром миелобластном лейкозе все пунктаты костного мозга, окрашенные по методу Паппенгейма для подсчета миелограммы, имели умеренную, либо повышенную клеточность (рис.6). Клеточный состав на 42,17-59,8 % был представлен бластными клетками (табл.6), которые во всех препаратах имели признаки миелоидной линии дифференцировки. Бласты имели средние размеры, большие, чем эритроциты или зрелые лимфоциты, и в большинстве случаев правильную округлую форму. Цвет цитоплазмы бластов в разных препаратах варьировал от базофильных до серо-голубых тонов, в некоторых клетках в цитоплазме содержалась неспецифическая пылевидная зернистость. Во всех случаях ядерно-цитоплазматическое соотношение оказывалось высоким. Ядра описываемых клеток имели нежную мелкогранулярную структуру хроматина и несколько, чаще 2-3, нуклеол. В единичных бластных клетках определялись палочки Ауэра. Нейтрофильный росток во всех препаратах был сужен, в ряде случаев -резко угнетен и представлен преимущественно зрелыми формами клеток. Клетки гранулоцитарного ряда часто были трудно дифференцируемы из-за выраженных черт диспоэза: диссоциации созревания ядра и цитоплазмы, гипо-или агранулярности. Наблюдались гигантские нейтрофилы до 15-16 мкм, множество разрушенных клеток и ядер без цитоплазмы. Эритроидный росток не имел выраженных особенностей, в ряде случаев в препаратах были встречены акантоциты и микроциты. МКЦ встречались редко, большая часть их не имела отшнуровывающихся тромбоцитов.
В ряде препаратов МКЦ не выявлялись совсем, однако, в этом случае выявлялись свободно лежащие тромбоциты. В окрашенных по методу Унна препаратах эритроидный росток был представлен однотипными по форме и окраске эритроцитами, либо дегенеративными их формами, которые были ортохромными. Реже встречались эритроциты с остатками ядерной субстанции, имевшие более базофильную окраску. Нормобласты также были ортохромными, но имели несколько большие размеры и небольшое базофильное ядро, часто с характерным колесовидным рисунком хроматина. Миелоидный росток был представлен обилием бластов (рис. 7), которые отличаются от остальных клеток крупным ортохромным ядром, имевшим одно - два едва различимых ядрышка, и небольшой ортохромной цитоплазмой, окаймлявшей ядро. Ядерно-цитоплазматическое соотношение в этих клетках было резко смещено в сторону ядра. В цитоплазме некоторых бластов находились единичные (3-4) мелкие более интенсивные по окраске гранулы. Властные клетки чаще располагались скоплениями по 3-4 клетки. Встречались также митотически делящиеся бласты. Картина митоза в них была ортохромна, как и цитоплазма. Полинуклеары в препаратах выявлялись значительно реже, их ядра были ортохромны, а цитоплазмы не окрашенными. Ядра МКЦ были окрашены неинтенсивно, чаще у-метахроматично, у части этих клеток от ортохромной цитоплазмы отшнуровывались тромбоциты. В препаратах также вотмечались отдельно расположенные группы мелких темно-голубых тромбоцитов. Большая часть лимфоцитов была окрашена ортохромно, вокруг ядра синим, тонким ободком располагалась цитоплазма. Зрелые лимфоциты имели едва различимую, нежную у-метахромазию ядра. Были выявлены также плазматические клетки с голубоватой цитоплазмой и у-метахроматичным ядром, в клетках был хорошо различим "светлый дворик", расположенный около ядра в виде кольца или полумесяца. Аминоциты и ТК методом Унна в препаратах костного мозга больных острым миелобластным лейкозом не были выявлены.
Однако в препаратах имеются отдельно расположенные округлые мелкие у-метахроматичные гранулы в количестве 0,37±0,16 (0-3 скопления в 5 п/зр), которые, вероятно, принадлежат этим клеткам. В отличие от костного мозга исследуемых референтной группы, в костном мозге больных ОМЛ не были выявлены ТК. Легкая у-метахромазия, т.е. наличие зрелого гепарина, была отмечена в клетках лимфоидного ростка. Содержание серотонина и катехоламинов (метод Фалька). Свечение препаратов имело бледный, зеленовато-оранжевый оттенок. Во всех случаях исследуемые препараты имели умеренную, либо повышенную клеточность. Эритроидный росток был представлен темными слабосветящимися эритроцитами, расположенными скоплениями по 5-6 либо в виде отдельных клеток. Пораженный клон клеток был представлен округлыми люминесцирующими элементами с ядерно-цитоплазматическим отношением, которое было резко смещено в сторону ядра. Вышеописанные структуры идентифицированы как миелобласты (рис. 8). Они были локализованы в препаратах скоплениями по 3-5, либо в виде отдельно расположенных клеток. У большей части описываемых клеток ядро имело большую интесивность свечения по сравнению с межклеточным веществом. Часть клеток имела одинаковое свечение как цитоплазмы, так и ядра, выделяясь на фоне межклеточного пространства более яркой интенсивностью люминесценции (табл. 7).
Исследование морфологических структур костного мозга больных недиффереицируемым лейкозом
При недифференцируемом лейкозе умеренной или повышенной клеточности пунктаты костного мозга были представлены большим количеством (51,85-90,24%) резко анаплазированных бластов, что отражает тяжесть патологии (табл.8) Властные клетки различались между собой по размеру, имели округлую, овальную или неправильную форму. Ядерно-цитоплазматическое соотношение было резко смещено в сторону ядра (рис.9). Цитоплазма бластов имела цвета базофильных тонов. Структура хроматина ядра неодинакова у разных клеток: от крупно- до мелкоглыбчатой. Количество нуклеол в клетках также варьировало от 1 до 4. Дифференцировка гранулоцитов была затруднена из-за резко выраженных черт диспоэза: агранулярности клеток и диссоциации созревания ядра и цитоплазмы. Гранулоцитарный росток был представлен преимущественно полинуклеарами. Эритроциты в ряде случаев были представлены патологическими формами: лептоцитами, акантоцитами. МКЦ, в отличии от нормального костного мозга, встречались крайне редко в виде единичных клеток в отдельных препаратах и были представлены одноядерными формами без видимой отшнуровки тромбоцитов. В части препаратов МКЦ не встречались совсем. Скопления тромбоцитов встречались в препаратах также нечасто. ТК и ГК в препаратах методом Паппенгейма не были выявлены. Основную массу клеток составляли клетки с резко выраженными патологическими чертами. Был резко выражен полиморфизм клеток, которые различались по форме и размеру, всегда содержали очень крупное ядро, по различное количество нуклеол. Недифференцируемые бласты различались также по окраске: одни из них имели у-метахроматичное ядро, другие - ортохромное (рис.10). Структура хроматина ядер в большинстве случаев была грубой. Цитоплазма всегда -ортохромной. Зрелые клеточные элементы костного мозга встречались крайне редко. Большая часть эритроцитов были ортохромны. Ядра единичных полинуклеаров были ортохромны, а цитоплазма - неокрашенной и не содержала окрашенных гранул. МКЦ встречались в виде единичных клеток без отшнуровки тромбоцитов и имели у-метахроматичное ядро. ТК и аминоцитов в препаратах, окрашенных методом Унна, не было обнаружено.
Однако, в препаратах встречались единичные мелкие у-метахроматичные гранулы, очевидно принадлежавшие ТК или ГК. В целом, картина костного мозга при недифференцируемом лейкозе имела те же черты, как и при ОМЛ. 3.3.3. Содержание биогенных аминов и серотониновый индекс. Содержание серотонина и катехолалшнов (метод Фалька). На темном слабо светящемся фоне располагались одиночные и группы из клеток (по 4-8 клеток) со слабосветящимся ядром и обладающей зеленоватым свечением цитоплазмой - бласты (табл. 9, рис.11). Часть бластных клеток обладали сливным свечением (в них не были различимы цитоплазма и ядро), а у другой части цитоплазма определялась нечетко. Структура хроматина, а так же наличие и количество нуклеол в ядрах были не различимы. Эти клетки имели различные размеры: от 10 мкм до 30 мкм. Эритроциты в препаратах не люминесцировали. ТК и ГЛК не было выявлено.
В виде пылевидной зернистости и скоплениями в препаратах имелись гранулы этих клеток в незначительном количестве, которые обладали ярким желто-зеленым и оражевым свечением (С - 24,6± 0,39 у.е., КА - 11,16± 0,29 у.е.). В сравнении со зрелыми клетками миелопоэза референтной группы исследования, в бластах недифференцируемого лейкоза достоверно (р 0,05) в 1,3 раза было увеличено количество КА, количество С достоверно не различались. В межклеточном веществе отмечено увеличение количества С в 3,9 раза, КА — в 7,9 раза. Содержание гистамина (метод Кросса). Препараты имели зеленоватое свечение. Ярким зеленоватым свечением обладали бластные формы клеток (табл.9, рис.13). Они различаются по размеру и характеру свечения, то есть пораженный клон клеток не являлся однородным. Часть таких клеток - имели небольшие размеры - 10-12 мкм с более темным, чем цитоплазма ядром, другие, более крупные клетки, имели ярко светящееся ядро и более темную цитоплазму, у третьих ядро и цитоплазма не различались по характеру свечения (рис. 12), но имели более ярко люминесцирующую околоклеточную зону межклеточного вещества.
Исследование морфологических структур костного мозга больных железодефицитной анемией
В препаратах костного мозга больных мегалобластной анемией определялись характерные признаки мегалобластического типа кроветворения (табл.17). Костный мозг был повышенно клеточным. В большей части препаратов основным морфологическим субстратом костного мозга являлись крупные округлые клетки - мегалобласты (рис. 23), окрашенные в интенсивно-голубые и синие тона, вследствие чего препараты выглядели «синими». Эритроидный росток был раздражен и представлен преимущественно крупными синего цвета клетками, имевшими круглое, часто эксцентрично расположенное ядро с нежной структурой хроматина. Округлой и овальной формы крупные эритроциты (макроциты) не имели центральной зоны просветления, но часто содержали ядерные дериваты - кольца Кеббота и тельца Жолли. Клетки миелоидного ряда были представлены всеми переходными формами. Крупные полинуклеары, чаще нейтрофильного ростка, были гиперсегментированы. Встречались так же лимфоциты и лимфобласты без структурных особенностей. МКЦ были крупными, часто многоядерными (2-3 ядра в клетке). ТК и аминоциты в препаратах методом Паппенгейма не были выявлены. В препаратах больных мегалобластной анемией обращали на себя внимание крупные 20-30 мкм клетки, имевшие ортохромную окраску, - мегалобластьт. Бледно-голубое, округлое ядро мегалобластов, занимавшее практически всю клетку, было окружено более интенсивной по цвету голубой цитоплазмой.
Вышеописанные клетки чаще встречались скоплениями по 4-5. Эритроциты были однотипными, бледно-голубого цвета с выраженной зоной просветления в центре. Клетки лимфоидного ряда - лимфоциты и лимфобласты были окрашены в бледно-голубой цвет. Гранулоцитарный ряд был представлен мононуклеарами и гиперсегментированными полинуклеарами. Цитоплазма и ядра этих клеток были ортохромны. В цитоплазме клеток часто визуализировались мелкие ортохромные гранулы по 5-6 в клетке. Ядра МКЦ были у-метахроматичными. Аминоциты методом Унна при мегалобластной анемии не выявлялись. В большом количестве, по сравнению с референтной группой, в препаратах встречались тотально дегранулированные ТК (табл.18, рис.24, рис.25). Иногда 3-4 такие клетки располагались в одном поле зрения, рядом друг с другом. Тотально дегранулировавшие клетки выявлялись как массивное скопление у-метахроматичных гранул, более плотно расположенные в центре и менее плотно - ближе к периферии участка, в толще таких скоплении, как правило, располагалось 5-6 мелких более темных гранул. Другая часть популяции ТК сохранили свою структуру, они были у-метахроматичны, компактны, имели малые размеры (чуть меньше эритроцита) и треугольную форму. Наряду с вышеописанными формами в препаратах встречались отдельные скопления мелких у-метахроматичных гранул. Особенностью костного мозга больных мегалобластной анемией явилось наличие выраженной дегрануляции ТК. Межклеточное вещество препаратов костного мозга больных мегалобластной анемией имело темно-зеленое свечение и содежало С в количестве 11,83± 0,37 у.е., КА - 12+ 0,33 у.е. Отмечено достоверное увеличение количества КА в 2 раза по сравнению с референтной группой. На вышеописанном фоне были хорошо различимы округлые клетки большую часть которых занимало ядро, светившееся слабее цитоплазмы, - мегалобласты (рис.26). Эритроциты были тусклыми, темно-зелеными.
В препаратах были выявлены МКЦ с не светившимся неправильной формы ядром. Округлые лимфоциты имели более темное ядро и тонкий ободок светившейся по периферии цитоплазмы. Полинуклеары имели темные ядра и светлую цитоплазму. Часть полинуклеаров имели кольцевидные ядра. У ГЛК встречавшихся в препаратах в количестве 0-1 на 5 полей зрения (табл.19). Эти клетки имели неправильную полициклическую или треугольную, древовидную форму с центрально расположенным ядром и разнокалиберными светящимися гранулами, уровень содержания С в них был равен 78,6± 0,34 у.е., КА - 44,7± 0,35 у.е.(табл. 20). Содержание С и КА было достоверно выше, чем в аналогичных структурах референтной группы, в 3,2 и 2,5 раза соответственно. ТК имели размеры 12-16 мкм и уровень свечения С 83,9 ± 0,23 у.е и КА 35,8 ± 0,32 у.е. Содержание С и КА было увеличенным по сравнению с ТК референтной группы в 2,2 и 1,7 раза соответственно. Они имели овальную форму с темным слабо светящимся ядром, цитоплазма содержала однотипные, мелкие гранулы в виде зернистости. Повсеместно встречались гранулы ГЛК и ТК светившиеся в желтом и оранжевом спектрах (табл. 19, рис. 26). Гранулы были увеличены в размерах и распределялись равномерно или скоплениями. Содержание гистамина (метод Кросса). Межклеточное вещество имело диффузное зеленоватое свечение (20,26± 0,41 у.е.). Большую часть клеточного состава занимали крупные округлые клетки, имевшие нечеткие границы -мегалобласты. Уровень свечения этих клеток был выше свечения фона и составлял 74,7 ± 2,47 у.е. (рис.27). Эритроциты не люминесцировали. ТК были овальные с равномерной зернистостью и уровнем свечения 64,7 ± 0,31 у.е., что было ниже, чем свечение ТК референтной группы в 1,2 раза. ГЛК имели полициклическую, иногда треугольную или древовидную форму, округлые мелкие ядра и расположенную по периферии разнокалиберную зернистость. Уровень свечения Г в них составлял 64,73 ± 0,37 у.е., что было выше чем в ГЛК референтной группы на 6,3 у.е.
