Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы. биологически активные вещества и их метаболизм в легких 11
1.1. Серотошн 12
1.2. Катехоламиш 28
1.3. Ацетилхолин
1.4. Кинины
1.5. Гистамин 63
Глава 2. Материал и методика исследования 75
2.1. Общая характеристика клинических наблюдений 79
2.2. Общая характеристика экспериментальных исследований. 82
2.3. Методы определения биологически активных веществ . 86
2.4. Статистическая обработка материала 102
Глава 3. Метаболизм биологически активных веществ в легких в норме и при патологии органа дыхания (экспериментальное исследование) 104
3.1. Биологически активные вещества при перфузии изолированных легких 104
3.2. Биологически активные вещества при ишемии, гипоксической гипоксии и удалении больших объемов легочной ткани...
3.3. Биологически активные вещества при воспалительном бронхолегочном процессе
Глава 4. Обмен биологически активных веществ у больных неспецифмескими заболеваниями легких... 138
4.1. Обмен биологически активных веществ у больных острыми пневмониями 138
4.2. Изменения обмена биологически активных веществ при хронических бронхитах
4.3. Изменения обмена биологически активных веществ при бронхиальной астме 157
4.4. Изменения обмена биологически активных веществ при бронхоэктатической болезни
Выводы 232
Таблицы 236
Литература 3 38
- Общая характеристика клинических наблюдений
- Методы определения биологически активных веществ
- Биологически активные вещества при перфузии изолированных легких
- Обмен биологически активных веществ у больных острыми пневмониями
Введение к работе
Актуальность проблемы. В последнее время уделяется большое внимание проблеме всестороннего изучения нереспираторных функций легких. Результаты подобных исследований, наряду с данными о респираторной функции, позволяют составить целостное представление о функции органа дыхания в нормальных и патологических условиях и способствуют раскрытию отдельных сторон патогенеза некоторых легочных заболеваний.
В развитии легочной патологии определенную роль играют биологически активные вещества (БАВ) - норадреналин, ацетил-холин, серотонин, гистамин и другие соединения, обладающие чрезвычайно широким спектром действия и участвующие в системе нейрогуморальной регуляции. Уровни активности различных БАБ находятся под контролем ЦНС, преимущественно ее лимбико-рети-кулярных структур, в которых обнаружены нейронные системы с норадреналином, дофамином, серотонином, ацетилхолином. Предполагается, что для деятельности лимбико-ретикулярных структур большое значение имеют серотонин и норадреналин и меньшее -гистамин, ацетилхолин и дофамин (Ильюченок Р.Ю., 1965; Утев-ский A.M., Бару A.M., 1967; Матлина Э.Ш., Меньшиков В.В., 1967; Schreiber , 1976; Edvinson et al. 1977; Bell , 1982).
За последние годы получены новые данные, показавшие важную роль легких в обмене БІШ, что позволило охарактеризовать их как одно из звеньев системы нейрогуморальной регуляции, В легких, наряду с печенью и ЦНС, происходит инактивация целого ряда БАВ - норадреналина, ацетилхолина, серотонина, брадикини-на и др. (Дубилей П.В., Уразаева З.В., 1974-; Дубшіей П.В., 1981; Панченко АЛ., 1980; Гомазков О.А. и соавт., 1981; Кисе-
- є -
лев Б.И., 1981; Fishman , 1977; Said et al. , 1980; Simionea-^u, I980;Youdim et al., 1980).
Благодаря этому, легкие препятствуют проникновению значительных количеств БАВ в большой круг кровообращения, обеспечивая тем самым их гомеостаз. Особое положение легких в системной гемодинамике, а также высокая активность катаболических ферментов обеспечивают стабильное функционирование этих процессов.
Поскольку повышение уровня БАВ в циркулирующей крови наблюдается при ряде неспецифических заболеваниях легких (НЗЛ), сопровождающихся развитием бронхоспазма, гипертензией в малом круге кровообращения, нарушением деятельности сердца, можно думать о причастности изменений обмена БАБ в организме к гене-зу упомянутых состояний, в частности, обусловленных нарушением метаболической (барьерной) функции легких.
Таким образом, возникает теоретическая и практическая потребность в детальном изучении обмена БАБ при легочной патологии, выяснение закономерностей, связанных с метаболическими нарушениями в легких и характером течения НЗЛ, выявление при этом связи функциональных нарушений гемодинамики и газообмена со спецификой изменений в уровнях БАБ.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение роли легких в метаболизме серотонина, катехоламинов, ацетилхолина, гистамина, компонентов кининовой системы, выявление изменений этих свойств при патологических состояниях, обусловленных поражением легких.
Исходя из основной цели исследования, в работе были поставлены следующие задачи:
I) изучить состояние обмена БАВ в условиях нормотермиче-
ской перфузии изолированных сердечно-легочных препаратов (ИШШ); 2) исследовать метаболизм БАВ в легких при экспериментальном воспроизведении различных патологических состояний, сопровождающихся нарушением функции дыхания (ишемия легкого, массивная резекция, гипоксическая гипоксия);
3) выявить особенности изменений обмена БАВ в легких при остром и хроническом воспалительном броихолегочном процессе; провести сравнительную оценку этих изменений с характером обмена БАВ в глубоких структурах мозга при их раздражении;
исследовать метаболизм БАБ в легких у больных бронхоэк-татической болезнью на ранних и поздних стадиях заболевания и сопоставить полученные данные с количеством и состоянием тучных клеток в легких;
изучить показатели обмена БАВ (кровь, моча) при некоторых формах пневмоний, хронических бронхитах и бронхиальной астме и попытаться выявить отдельные нозологические формы с качественными и количественными различиями в обмене БАВ;
сопоставить изменения содержания БАВ в крови больных НЗЛ с показателями функции внешнего дыхания и состоянием гемодинамики в малом круге кровообращения.
На защиту выносятся следующие основные положения: I) составной частью метаболической функции легких является участие их в обмене БАВ. Метаболизм БАВ в легких изменяется при развитии патологических процессов в органе дыхания, при этом можно выделить 3 типа метаболических сдвигов:
а) повышение концентрации БАВ в ткани, идущее параллельно
с увеличением активности ферментов, регулирующих их содержание;
б) увеличение содержания БАВ, сочетающееся со снижением ак
тивности ферментов, регулирующих содержание этих веществ в ткани;
в) уменьшение количества БАВ в ткани с подавлением активности ферментов, регулирующих их содержание в легких;
2) нарушения барьерной функции легких по отношению к некоторым БАВ, зависящие прежде всего от снижения активности катабо-лических ферментов, способствует повышению уровней БАВ в системном кровотоке. Степень повышения содержания БАВ в крови находится в соответствии с тяжестью патологического процесса в легких и коррелирует с нарушениями функций внешнего дыхания и гемодинамики в малом круге кровообращения.
Научная новизна работы. На основании комплексного экспериментально-клинического подхода получены новые данные о характере перестройки метаболических процессов в патологически измененной легочной ткани. Выявлено увеличение содержания БАВ и усиление их инактивации при остром патологическом процессе в легких и снижение обмена БАВ в случаях длительно текущих рецидивирующих хронических процессов в легких. Доказано участие легких в синтезе ка-техоламинов, серотонина, ацетилхолина, гистамина, кининов в экстремальных условиях. Выявлено угнетение активности катаболиче-ских ферментов легких при аноксии, гипоксической гипоксии и хро-низации воспалительного бронхолегочного процесса, свидетельствующее о нарушении барьерной функции легких по отношению к БАВ.
Установлена связь между характером изменения БАВ в легочной ткани и жидких средах (в крови, моче) при патологическом процессе в легких, четко прослеживаемая по активности ферментов, инак-тивирующих БАВ, и содержанию их метаболитов.
Определена зависимость между интенсивностью сдвигов в уровнях БАВ в крови и изменениями показателей функции внешнего дыхания и давления в легочной артерии при неспецифических заболеваниях легких.
Разработан и впервые использован флюорометрический метод
определения ацетилхолина в крови.
Практическая ценность работы. Разработан ряд модификаций методов определения БАВ в крови и легочной ткани: флюорометриче-ский метод определения ацетилхолина в крови; биохимический метод определения активности калликреина в крови; определены оптимальные условия для исследования активности кининазы, ацетил-и бутирилхолинэстераз в легочной ткани.
На основании детального клинико-биохимического анализа подтверждено, что неблагоприятным признаком течения острой пневмонии (абсцедирование и затяжное течение) является снижение экскреции 5-ОИУК и увеличение содержания тромбоцитарного серотонина.
Тяжесть течения бронхиальной астмы характеризуется прогрессирующим повышением уровня всех исследованных БАБ, наиболее тесная ее зависимость установлена по отношению к содержанию серотонина в тромбоцитах, снижению концентрации кининогена и прекал-лкреина в крови.
Установленная корреляционная зависимость повышения концентрации ацетилхолина, гистамина и снижения содержания кининогена с интенсивностью гипоксемии позволяет рекомендовать определение этих веществ как дополнительных тестов для оценки легочной недостаточности у больных НЗЛ.
Выявленная зависимость между содержанием ацетилхолина, гистамина, кининогена в крови и давлением в легочной артерии дает дополнительные данные к характеристике легочной гипертензии.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на следующих научных конференциях и симпозиумах:
I) всесоюзная конференция "Современные проблемы биохимии дыхания и клиника", Иваново, 1971; 2) ХШ сессия института сердечно-сосудистой хирургии им.А.Н.Бакулева, Москва, 1972; 3) всесоюзные симпозиумы "Острая ишемия органов и меры борьбы с постише-
- ю -
мическими расстройствами", Москва, 1973, 1978; 4-) всесоюзная конференция "Гиперкапния, гипероксия, гипоксия", Куйбышев, 1974; 5) всесоюзная конференция "Кинины и кининовая система крови", Москва, 1975; 6) всесоюзная конференция "Дыхательная недостаточность в клинике и эксперименте", Куйбышев, 1977; 7) всесоюзная конференция "Современные методы диагностики в пульмонологии", Алма-Ата, 1977; 8) всесоюзная конференция "Аллергия в клинике и эксперименте", Тбилиси, 1977; 9) всесоюзная конференция "Нервные и психические нарушения при заболеваниях внутренних органов", Ленинград, 1978; 10) всесоюзная конференция "Метаболизм легких при неспецифических заболеваниях легких", Ленинград, 1979; II) республиканский П съезд врачей лаборантов, Минск, 1981.
Материалы диссертации использованы также в рационализаторских предложениях: I) "Комплексный метод определения протамин-расщепляющей активности калликреина, прекалликреина, ингибиторов калликреина", рационализаторское предложение Ш 217, зарегистрированное во ВНЙИП 27 ноября 1980 г.; 2) "Флюрометрический метод определения ацетилхолина в крови", рационализаторское пред ложение № 218, зарегистрированное во ВНИЙП 27 ноября 1980г.; 3) "Способ оценки степени гипоксемии по комплексу биохимических параметров", рационализаторское предложение J& 221, зарегистрированное во ВНИЙП 26 декабря I960 г.
Разработанный комплекс внедрен в практику во Всесоюзном научно-исследовательском институте пульмонологии МЗ СССР; на кафедре госпитальной терапии І ЛМИ; в Центральной научно-исследо' вательской лаборатории Карагандинского медицинского института.
- II -
Общая характеристика клинических наблюдений
В соответствии с задачами работы проведен поиск экспериментальных моделей, критериев оценки метаболической (барьерной) функции легких и состояния функции внешнего дыхания и гемодинамики малого круга кровообращения с использованием биохимических данных.
Общепризнано, что исследование изолированных органов в условиях их адекватного функционирования и перфузии является одним из путей изучения метаболизма. В этом же плане могут быть использованы и эксперименты с аноксией органа, а в ряде случаев для доказательства метаболической функции легких правомерно определение БАВ в притекающей (венозной) и оттекающей (артериальной) легочной крови при различных патологических состояниях, которые в той или иной степени приводят к недостатку кислорода в организме. Особенно это касается экспериментального бронхолегочного воспалительного процесса, так как именно такого рода исследования могут способствовать пониманию патогенетического значения метаболических нарушений в легких при легочной патологии.
Большинство экспериментов выполнено на наркотизированных животных. В опытах с изолированными сердечно-легочными препаратами (ИСЛП), при аноксии органа дыхания исследовалась способность легких к собственному синтезу ряда БАВ в экстремальных условиях и были прослежены процессы саморегуляции обмена БАВ. В экспериментах с гипоксической гипоксией у собак, в хронических опытах на кроликах с воспалительным бронхолегочным процессом оценивалась барьерная функция легких по величине концентрационного градиента в уровне БАВ в притекающей к легким (венозной) и оттекающей от них (артериальной) крови и по активности катаболических ферментов, ответственных за эффективность функционирования легочного барьера. Изучение механизмов регуляции метаболической функции легких потребовало моделирования экспериментального воспалительного бронхолегочного процесса, формировавшегося на фоне электростимуляции вентромедиального ядра гипоталамуса. На гомогенатах легких, резецированных у больных бронхоэктазиями, изучалась метаболическая функция как на ранних, так и на поздних стадиях хронического брон-холегочного процесса (давность заболевания свыше 20 лет); исследовалась активная роль тучных клеток, являющихся основным, но не един ственным местом синтеза и депонирования многих БАБ. Изменения метаболизма БАБ при неспецифических заболеваниях легких оценивались по результатам исследования уровня биогенных аминов, ацетилхолина, кининов и активности основных ферментов, участвующих в их инактивации, крови у больных острой пневмонией, хроническим бронхитом и бронхиальной астмой. Данные сопоставлялись с состоянием функции внешнего дыхания и гемодинамикой в малом круге кровообращения.
Круг исследовавшихся БАБ определен нами в соответствии с необходимостью суждения о состоянии нейрогуморальных взаимоотношений и об участии в них легких и ЦНС - основных регуляторов обмена БАБ в организме. При выборе критериев оценки метаболической функции легких учитывали литературные данные, свидетельствующие о более интенсивной инактивации в легких брадикинина, серотонина, в меньшей степени - ацетилхолина и норадреналина и почти полном отсутствии инактивации гистамина, адреналина и дофамина. Обмен кининов исследовался по содержанию кининогена, прекал-ликреина, активности калликреина и его ингибиторов, активности ки-ниназы. Следует заметить, что действию легочной кининазы подвергается 80-90% введенного извне брадикинина ( Bakhle , 1976). Обмен серотонина изучался по определению содержания общего серотонина, его свободных и депонированных тромбоцитами фракций, метаболитов - мелатонина и 5-0ИУК, а также по активности МО-основного фермента окислительного дезаминирования серотонина. По этому пути в легких метаболизируется до 90% эндогенного или введенного извне серотонина (Попова Н.К., 1970), При исследовании обмена катехоламинов использовалось определение содержания их неактивного предшественника ДОФА, дофамина, норадреналина и адреналина, а также активности МАО, воздействию которой в той или иной степени подвергаются все биогенные амины и, прежде всего, норадреналин. Для легких характерна избирательная инактивация его по сравнению с печенью, которая в одинаковой мере метаболизирует адреналин и норадреналин ( Nicholas et al., 1974). Кроме того и серотонин, и норадреналин подвергаются дезаминирова-нию с участием МАО типа А (Ильичева Р.Ф., Горкин В.З., 1979). Обмен ацетилхолина оценивался по концентрации ацетилхолина и активности холинэстераз, а обмен гистамина, соответственно, по содержанию гистамина и активности гистаминазы. При выборе методик исследования отдавали предпочтение общепринятым современным методам, внося в них в случае необходимости некоторые изменения. Как известно, для исследования БАБ и их ферментов, используются две группы методов - биологические и биохимические. Сд ди последних особого внимания заслуживают флюорометрические методы, отличающиеся высокой чувствительностью и специфичностью. Первые флюорометрические методы определения катехоламинов, серотонина и гистамина появились у нас в стране в 60 годы и продолжают успешно развиваться и в настоящее время. Это позволило решить целый ряд методических вопросов, касающихся определения указанных БАВ. Б меньшей степени разработаны флюорометрические методы определения активности ферментов, участвующих в метаболизме биогенных аминов. Поэтому наряду с люминисцентными методами в работе использованы колориметрические и титрометрические.
Для определения содержания ацетилхолина применяются либо различные модификации биохимического метода определения веществ, дающих положительную реакцию неstrin, либо биологические методы, использование которых в клинике затруднено. В связи с этим в работе сделана попытка применения флюорометрического метода Feiiman (1969) для определения ацетилхолина крови у пульмонологических больных.
Для суждения об обмене тех или иных БАВ использовали данные экспериментальных наблюдений с оценкой уровня их в крови, притекающей и оттекающей от легких, а также количества в ткани легкого при экспериментальных моделях. Эти данные сопоставлялись с результатами исследования БАВ в биожидкостях больных ХНЗЛ. Так, например, о состоянии обмена катехоламинов судили при экспериментальных наблюдениях комплексно по содержанию суммарных катехоламинов в биологических жидкостях и концентрации адреналина, нор-адреналина и ДОФА в ткани, а также активности тканевой МАО, а при клинических - по содержанию суммарных катехоламинов крови и экскреции с мочой адреналина, норадреналина дофамина и ДОФА у больных.
Методы определения биологически активных веществ
Определение серстонина и его метаболитов проводилось флюо-рометрическим методом MaiekeJLи, Miilej( 1966,1968,, 1970)в- мо дификациях. (Лобода Е.Б.,Макарова АЛК", 1974; Лобода.Е.Б.,Уша- ".... ковой И.Н., 1976; Лобода Е.Б., 1976). Преимуществом предложенных модификаций, явилось- значительное уменьшение количества исследуемого биологического материала и повышение выхода БАВ за счет снижения неспецифической флюоресценции реактивов и усиления флюоресценции комплекса, образуемого 3,5-замещенными индолами с ортофталевым альдегидом.
Исследовалась кровь, моча, ликвор, ткани легких и мозга, Одновременно исследовали способность легочной ткани инактивиро-вать серотонин по методу Е.А.Солоимской (1969) 0 способности тканей разрушать серотонин судили по уменьшению его концентрации в реакционной смеси за 2 часа инкубации и выражали ее в мкг серо-тонина, разрушенного I г ткани за 2 часа инкубации - мгк/(г.2 ч), а используя коэффициент - 0,7882, переводили в единицы СИ (пмольДс.г.). Эта способность обусловлена наличием в легких серотониновой моноамиоксидазы.
Определение катехоламинов. Существующие флюорометрические методы достаточно специфичны и позволяют раздельно определять адреналин и норадреналин крови. Однако они сложны и требуют специальной аппаратуры. Основным препятствием, затрудняющим их применение в клинике и эксперименте, является большое количество крови, необходимое для анализа. Был использован метод Shaw в модификации Э.Ш.Матлиной (1963), рассчитанный на анализ небольших количеств крови (ОД мл вместо 12,0 мл). Эта методика позволяет определять суммарное содержание катехоламинов. Во всех исследованиях ставились параллельные пробы,-Колориметрирование производилось на спектрофотометре СФ-4А.Из-за недостаточной специфичности метода исследования щоводились комплексно. Адреналин, норадреналин, дофамин и диФА в моче и тканях исследовали чувствительными достаточно специфичными флюоромет- рическими методами (Матлина Э.Ш. и соавт., 1965; Матлина Э.Ш., Рахманова Т.Б., 1967). Измерение флюоресценции проводили на флюориметре типа БИАН, используя 2 набора интерференционных светофильтров: I) 365 нм (для возбуждения) и 510 нм (для измерения флюоресценции); 2) 436 нм (для возбуждения) и 510 нм (для измерения флюоресценции). Определение ацетилхолина. Существующие биохимические методики определения ацетилхолина являются по большей части модификациями оригинального колориметрического метода Hestrin (1949), направленными на повышение его чувствительности (Лившиц Л.Я., Рубин В.И., 1961; Шуцкий И.В., 1967; Мухамедшин Р.И., 1970). Была использована модификация Р.И.Мухамедшина, позволяющая определять ацетилхолин в I мл крови. Следует отметить, что предложенные модификации предусматривают проведение исследования без предварительной экстракции ацетилхолина. В связи с этим ацетилхолин в крови определялся совместно с большой группой веществ (амиды, эфиры карбоновых кислот), дающих положительную реакцию Hestrin. Ввиду того, что наличие ацетилхолина в крови оспаривается многими исследователями, в работе наряду с колориметрическим методом использован флюорометрический метод определения ацетилхолина. В настоящее время описано несколько модификаций этого метода исследования, которые явились новым шагом в развитии методов количественного определения ацетилхолина в биологических материалах по сравнению с биологическими и колориметрическими (Feilman 1969; Bowning , 1972; sPeee 1974). За основу был взят флюорометрический метод Feilman , так как предложенные варианты оказались модификациями его же метода, в частности, Speeg изменил только размер хроматографической колонки. Мы приспособили метод Feilman для исследования ацетилхолина в крови, используя при этом смолу отечественного производства КБ-4. Принцип метода заключается в том, что первоначально ацетил-холин выделяют в виде комплекса с йодом, а затем, после разрушения этого комплекса, сорбируют на ионообменной смоле. В последующем при добавлении гидразина образуется ацетилгидрозин, взаимодействие которого с салициловым альдегидом может регистрироваться, благодаря появлению выраженной флюоресценции. Используя этот принцип, был разработан метод определения ацетилхолина в крови. Отсутствие высококачественных реактивов потребовало дополнительной тщательной обработки и даже замены некоторых из них. Б частности, вместо ионообменной смолы Bio-Rex-70 была использована смола КБ-4-, подвергнутая предварительно специальной обработке. Реактивы: I. 10% раствор трихлоруксусной кислоты. 2. 0,01 н.раствор бромида тетраметиламмония (растворяли 15,4 мг реактива в 10 мл воды, хранили в холодильнике, готовили еженедельно). 3. Насыщенный раствор йода (растворяли I г йодида калия и 2 г кристаллического йода в 20 мл воды. Избыток йода удаляли центрифугированием) 4. 2 М гидразин (готовили непосредственно перед употреблением путем разбавления 0,32 мл гидразина водой до 5 мл. Гидразин получали из гидразингидрата).
Биологически активные вещества при перфузии изолированных легких
Работа выполнена на 27 ЙСЛЇЇ собак без сокращающегося сердца, помещавшихся в перфузионную камеру экспериментальной установки для консервирования легких. В качестве контроля исследовалась кровь, циркулировавшая в той же замкнутой перфузионной системе, но без ИСЛП. Полученные данные представлены в таблицах 2-9. Как видно из таблиц 2, 3, 4, при контрольных исследованиях циркулирующей в перфузионной системе крови обнаружены незначительные изменения содержания в ней БАВ.
Так, уровень адреналиноподобных веществ (АПВ) после 2-часовой циркуляции снизился на 24$, однако, такое снижение оказалось статистически недостоверным. В дальнейшем при 4-6-часовой циркуляции уровень АПВ в крови практически не изменялся, содержание ацетилхолина, гистамина и общего серотонина в плазме крови, богатой тромбоцитами изменялось незначительно. Наблюдалась некоторая тенденция к повышению содержания тромбоцитарного и свободного серотонина при 2-часовой циркуляции. Количество тромбоцитов колебалось в пределах +10$ по отношению к исходным «данным, что может быть следствием ошибки метода. Однако, к 6 часам циркуляции оно уменьшилось на 20$.
Таким образом, длительная циркуляция крови в замкнутой перфузионной системе без ИСЛП сопровождалась некоторыми изменениями в содержании ЕАВ, которые, однако, были статистически недостоверными.
Перфузия ИСЛП характеризовалась более выраженными сдвигами в содержании ЕАВ (табл.2). После 2-часовой перфузии наблюдалось увеличение содержания АПВ на 59$ (Р - 0,01), в то же время уровень ацетилхолина и гистамина изменялся незначительно. При 4-часовой перфузии уровень АПВ продолжал увеличиваться (Р 0,001), но менее интенсивно. Содержание гистамина оставалось прежним. Напротив, содержание ацтелхолина в перфузате снизилось (Р 0,02) Эти соотношения в изменениях АПВ, ацетилхолина и гистамина сохранялись и в дальнейшем, при 6-часовой перфузии.
В опытах с ИСШ отмечались заметные сдвиги в содержании серотоинна, особенно при его фракционном исследовании - в плазме крови богатой и бедной тромбоцитами, с учетом количества последних (табл.3, 4). Так, при 2-часовой перфузии уровень общего серотонина в плазме крови, богатой тромбоцитами, увеличился на 29$, а в дальнейшем содержание его в перфузате почти не отличалось от контрольных величин. При исследовании свободного серотонина и, особенно, тромбоцитарного выявлены более значительные отклонения при 2-часовой перфузии: уровень свободного серотонина в перфузате резко понизился (Р 0,002), а концентрация тромбоцитарного серотонина несколько возросла.
В последующие сроки опытов величины тромбоцитарного и свободного серотонина меньше отличались от исходных данных. При этом следует отметить, что количество тромбоцитов в перфузате изолированных легких медленно снижалось, достигая наименьшего значения при 6-часовой перфузии.
Таким, образом, в условиях перфузии изолированных легких имеет место только некоторая тенденция к повышению захватывающей и депонирующей способности тромбоцитов в отношении серотонина, но эти изменения по сравнению с контрольными данными оказались статистически недостоверными.
Обращает на себя внимание, что длительная "перфузия изолированных легких (6 часов) приводит к снижению содержания большинства ВДВ и их предшественников в самой ткани легкого (табл.5) Так, к 6 часам ДОФА в ткани вообще не был обнаружен, что свидетельствовало об интенсификации процесса его перехода в активные амины, которые затем поступали в перфузат, результатом чего являлось повышение концентрации АПВ в перфузате. Кроме того, после 6-часовой перфузии отмечалась тенденция к снижению содержания - серотонина (Р . 0,01) и гистамина (Р 0,01) в ткани легкого, что в некоторой степени совпадало с направленностью изменений концентрации этих веществ в перфузате. В то же время, суда по .данным исследования ЕАВ в перфузате, можно предположить, что в первые 2 часа перфузии в изолированных легких имело место усиленное образование эндогенных ЕАВ. Так, в первые 2 часа определились высокие концентрации гистамина (в среднем 2609 + 152,9 нмоль/л при норме 1574 + 233,9 нмоль/л). В этот период, очевидно, высоким было содержание катехоламинов и серотонина в ткани, так как в перфузате имело место статистически достоверное увеличение концентрации этих аминов. В дальнейшем же увеличение содержания БАВ происходило менее интенсивно, что, по-видимому, связано с уменьшением запасов как их предшественников, так и энергетических субстратов (исходное содержание глюкозы в перфузате - 1260 + 79 мг/л, через 2 часа - 980 + 69 мг/л и через 4 часа - 910 +90,6 мг/л), а также с усилением процессов инактивации ЕАВ (табл.6).
Обмен биологически активных веществ у больных острыми пневмониями
Как показали наблюдения, развитие острых пневмоний сопровождается определенными сдвигами в содержании БАВ, выраженность которых зависит от характера и тяжести воспалительного процесса в легких. Результаты исследования содержания катехоламинов в крови и моче представлены в таблицах 39, 40. Так, высокий уровень АПВ в крови наблюдался при всех формах острых пневмоний, но в большей степени при крупозной (І5В+ІІ мкг/л, Р 0,001) и, особенно, абсцедирующей (163+30 мкг/л, Р с 0,005). При затяжной пневмонии, которая чаще всего переходит в хроническую, отмечено умеренное повышение содержания АПВ до 103+" 9 мкг/л (Р 0,005). - 139 Одновременно у всех больных острыми пневмониями отмечено снижение содержания в моче ДОФА - основного предшественника кате-холаминов. При этом статистически достоверное увеличение содержания адреналина (Р - 0,007) и тенденция к повышению экскреции норадреналина наблюдались только при абсцедирующей пневмонии. В условиях затяжной формы пневмонии имело место статистически достоверное снижение концентрации адреналина (Р-с 0,001) и норадреналина (Р- . 0,002), а также тенденция к снижению выведения ДОФА.
Одновременно отмечена высокая концентрация ацетилхолина и тастамина в крови больных очаговой (Р - 0,001 и Р : 0,007, соответственно), крупозной (для гистамина Р 0,02) и, особенно, абсцедирующей пневмонией (Р : 0,005; Р .0,05, соответственно). При затяжной пневмонии имело место статистически достоверное повышение содержания ацетидходина (Р .0,01) при нормальном содержании гистамина (табл.41).
Содержание катехоламинов (Р . 0,05), ацетилхолина (Р 0,005 и гистамина (Р- .0,05), повышенное у больных очаговой пневмонией в острой фазе заболевания, по мере ликвидации воспалительного очага в легких почти полностью нормализовалось. Тенденция к нормализации содержания АПВ и гистамина отмечена при крупозной и абсцедирующей пневмониях. При затяжной пневмонии мы не наблюдали положительной динамики в содержании катехоламинов, напротив, сохранялась повышенной их концентрация (Р .0,05).
Протеолитическим ферментам придается большое значение в высвобождении ряда БАБ из неактивных предшественников. Однако, проведенные исследования общей активности протеолитических ферментов и их ингибиторов (табл.42) показали, что сыворотка больных острой пневмонией (исследования выполнялись не позже 7-10 во дней от начала болезни) характеризовались лишь небольшим снижением активности ингибиторов (очаговая пневмония - Р 0,05, крупозная - тенденция к снижению и затяжная - Р-с 0,005). Лишь развитие абсцедирующей пневмонии сопровождалось в ряде случаев повышением активности ингибиторов.
При регрессе клинических симптомов заболевания положительная динамика активности ингибиторов в сыворотке имела место при очаговой и абсцедирующей пневмониях. При крупозной пневмонии и, особенно, затяжной, нам не удалось отметить нормализации данного показателя (рис.14). Напротив, наблюдалось дальнейшее снижение активности ингибиторов в сыворотке крови (Р 0,005).
Известно, что общая антитриптическая активность отражает ингибиторную активность, направленную на подавление активности протеиназ трипсиназного типа, в число которых входит кининобра-зующий фермент калликреин. Это позволяет нам думать о возможности повышения активности самого калликреина в крови на фоне низкой общей антитриптической активности у больных острыми пневмониями. Данные литературы свидетельствуют о том, что при активации кини-ногенеза усиливается процесс перехода кининогена в активную форму - свободные кинины, отсюда убыль кининогена трактуется большинством исследователей как признак интенсификации этого высвобождения. Содержание кининогена в плазме крови в среднем по всей группе снижено, но у части больных повышено (табл.42), при этом нам не удалось отметить зависимости изменения уровня кининогена от момента заболевания. Следует учитывать, что изменения содержания кининогена крови могут быть как следствием усиленной мобилизации его из депо,так и результатом изменения синтеза самого кинино гена, а также выхода этого пептида в экстравазальное пространство. Поэтому характеристика кининогенеза, основанная только на определении одного кининогена может привести к неверным заключениям.
В процессе лечения положительная динамика содержания кининогена в крови отмечена при очаговой:.( Р 0 001) и, в меньшей степени, при крупозной и затяжной пневмонии.
Высвобождению брадикинина из кининогена в значительной мере способствовала высокая активность калликреина в плазме крови, наблюдавшаяся нами в острой фазе заболевания. При исследованиях активности этого фермента, проведенных у 13 больных острыми пневмониями (табл.43), выявлено значительное ее повышение, в среднем до 3,34±0,56 мкмоль/л брадикинина (Р 0,005). В процессе лечения отмечена полная нормализация активности калликреина (1,34±0,28 мкмоль/л при норме 1,26±0,035 мкмоль/л). Активность кининазы - основного фермента, инактивирующего бра-дикинин, чаще всего повышалась (Р 0,005), а в процессе лечения полностью нормализовалась. Отмечена тенденция к повышению активности гистаминазы, при этом активность ацетилхолинэстеразы изменялась незначительно, а активность холинэстеразы была снижена (Р :0,001).
