Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современные представления о свойствах связывающих центров сывороточного альбумина и их изменениях при патологии
1.1 .Биохимические и физико-химические свойства сывороточного альбумина 13
1.1.1. Структура и метаболизм сывороточного альбумина 14
1.1.2. Связывающие центры молекулы сывороточного альбумина 16
1.1.3. Механизм связывания лигандов сывороточным альбумином 20
1.1.4. Факторы, влияющие на изменение структуры центров и связывающей способности сывороточного альбумина 22
1.1.5. Методы исследования свойств связывающих центров альбумина 25
1.2. Флуоресцентный метод определения связывающей способности сывороточного альбумина 27
1.2.1. Флуоресцентный зонд К-35 для исследования альбумина 29
1.2.2. Параметры связывания зонда К-35 с альбумином в сыворотке крови 31
1.2.3. Флуоресцентный способ определения общей и эффективной концентрации альбумина сыворотки крови 35
1.3. Изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина при патологии 37
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования
2.1 . Состав и характеристика обследуемых групп больных 43
2.2.Методы исследования эффективной и общей концентрации альбумина, а также параметров, характеризующих взаимодействие зонда К-35 с альбумином в сыворотке крови 47
2.2.1 Определение общей концентрации альбумина (ОКА) 47
2.2.2 Определение эффективной концентрации альбумина (ЭКА) 48
2.2.3 Определение квантового выхода флуоресценции К-35 в сыворотке крови 49
2.2.4. Определение концентрации центров связывания флуоресцентного зондаК-35 с альбумином 50
2.2.5. Определение константы связыванияфлуоресцентного зонда К-35 с альбумином 51
2.2.6. Определение среднего количества центров связывания К-35 в молекуле альбумина 52
2.3. Определение влияния метаболитов на флуоресценцию зонда К-35 в альбумине 52
2.4. Определение других лабораторных параметров в образцах крови обследуемых групп больных 53
2.5. Статистическая обработка результатов 54
ГЛАВА 3. Аналитические аспекты метода флуоресцентных зондов. влияние различных факторов на свойства связывающих центров сывороточного альбумина в норме и патологии
3.1 . Аналитические характеристики метода флуоресцентных зондов 56
3.2. Влияние времени суток на свойства связывающихцентров сывороточного альбумина 59
3.3. Характеристика флуоресцентных показателей у здоровых лиц 63
3.4. Сравнительный анализ методов определения альбумина сыворотки крови у больных с хирургической инфекцией 65
3.5. Влияние метаболических факторов на флуоресценцию К-35 в условиях патологических ситуаций 69
3.6. Влияние жирных кислот на флуоресценцию К-35 в условиях патологических ситуаций 72
3.7. Влияние гемолиза на свойства связывающих центров сывороточного альбумина в усяовиях патологических ситуаций 74
3.8. Влияние гемодиализа на свойства связывающих центров сывороточного альбумина при заболеваниях почек 76
ГЛАВА 4 . Изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина при патологии
4.1 Изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях желудочно-кишечного тракта 80
4.1.1. Изменения флуоресцентных показателей при гепатите и циррозе печени 81
4.1.2. Изменения флуоресцентных показателей при панкреатите 83
4.2. Изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях
почек 84
4.2.1. Изменения флуоресцентных показателей при пиелонефрите .84
4.2.2. Изменения флуоресцентных показателей при гломерулонефрите 86
4.3. Изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях системы крови 87
ГЛАВА 5 . Изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина и клинико-лабораторных показателей у больных с хирургической инфекцией
5.1. Изменения флуоресцентных показателей у больных с хирургической инфекцией 92
5.1.1. Изменения флуоресцентных показателей при перитоните 92
5.1.2. Изменения флуоресцентных показателей при панкреонекрозе 101
5.1.3. Изменения флуоресцентных показателей при сепсисе 103
5.1.4. Изменения флуоресцентных показателей при холангите 106
5.2. Клинико-лабораторные показатели у больных с хирургической инфекцией 108
5.3. Сравнительный анализ флуоресцентных и клинико-лабораторных показателей у больных с хирургической инфекцией 134
ГЛАВА 6. Клинико - диагностическое значение флуоресцентнфых и других лабораторных показателей при хирургической инфекции
6.1. Изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина у больных с хирургической инфекцией в зависимости от тяжести заболевания 150
6.2. Изменения клинико-лабораторных параметров у больных с хирургической инфекцией в зависимости от тяжести заболевания Л 60
6.3. Прогностическое значение показателей альбумина при хирургической инфекции 167
6.4. Параметры связывающих центров альбумина, ответственные за изменения флуоресценции зонда К-35 при патологии 171
Заключение 175
Выводы 188
Практические рекомендации : 190
Список литературы 191
- .Биохимические и физико-химические свойства сывороточного альбумина
- . Состав и характеристика обследуемых групп больных
- . Аналитические характеристики метода флуоресцентных зондов
- Изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях желудочно-кишечного тракта
Введение к работе
Альбумин составляет более половины массы белков плазмы крови и выполняет в организме важные функции [6,7,112,207]. Среди них - связывание множества амфифильных низкомолекулярных веществ - жирных кислот, билирубина, многих других метаболитов, токсинов и ксенобиотиков ( в том числе лекарственных веществ) и перенос их к органам детоксикации-биотрансформации является весьма значимым в обеспечении гомеостаза в условиях нормы и особенно при патологии [171,172,182,192]. -Нарушение этой функции ведет к накоплению токсичных компонентов, что является существенным составляющим синдрома эндогенной интоксикации. В связи с этим ценным показателем в оценке состояния больных является определение количества альбумина и большинство клиник широко используют его в пракике. Вместе с тем способность альбумина связывать различные метаболиты в настоящее время в широкой клинической практике не оценивается.
А между тем уже нескольких десятилетий назад было замечено, что в условиях различных клинических ситуаций способность молекулы альбумина транспортировать подобные вещества и, следовательно, свойства ее связывающих центров могут заметно изменяться [8,49,52,125,126,130,135]. Адекватная и объективная регистрация таких изменений стала возможной в результате разработки новейших технологий анализа состояния связывающих центров альбумина, основанных на применении специальных флуоресцентных зондов, и прежде всего предложенного российскими учеными - флуоресцентного зонда К-35 [88]. Этот метод оказался очень чувствительным, простым и удобным для практического использования.
Установлено, что интенсивность флуоресценции зонда К-35 в плазме (сыворотке) крови больных различными заболеваниями, может снижаться на десятки процентов и даже в несколько раз, в то время как общая концентрация альбумина не испытывает столь значительных изменений и часто остается в пределах нормы [6,7,198]. Поэтому есть основания полагать, что опреде- ление лишь количества сывороточного альбумина, получившее широкое распространение в клиничес4ой практике, явно недостаточно. Необходима одновременная оценка и свойств связывающих центров сывороточного альбумина. Особенно это относится к заболеваниям, в патогенезе которых эндо-токсикоз играет ведущую роль, зачастую определяя их клиническую картину и исход.
В работах отечественных и иностранных авторов показано, что связывающая способность альбумина снижается при желтухах [322], инфаркте миокарда[49,124], отравлениях [8], ожогах [162], почечной недостаточности и сепсисе [126,129,130], операционных осложнениях [129,155]. Однако в настоящее время остаются до конца не изученными механизмы снижения связывающей способности сывороточного альбумина, патогенетические аспекты этого явления, а также клинические возможности альбуминового теста. Для своего расширенного внедрения в клиническую практику метод флуоресцентных зондов требует уточнения аналитических характеристик, дальнейшего накопления клинико-лабораторных сопоставлений при различных заболеваниях. На сегодняшний день имеются лишь эпизодические сообщения об особенностях динамики флуоресцентных показателей у больных различными заболеваниями, их соотношения с общепринятыми клинико-лабораторными параметрами. Известны отдельные данные о связи этих показателей с тяжестью состояния больного и исходом заболевания.
Недостаточная изученность вместе с зачастую фрагментарным и некомплексным подходом в предыдущих исследованиях изменений свойств связывающих центров сывороточного альбумина при нарушениях функций организма определила цель и задачи настоящей работы.
Цель исследования: выяснить закономерности изменений свойств связывающих центров сывороточного альбумина при патологии,' установить их клинико-диагностическое значение.
Задачи исследования.
1. Установить особенности взаимодействия флуоресцентного зонда К-
35 с альбумином сыворотки -крови при патологии.
2.Изучить аналитические характеристики флуоресцентного метода исследования свойств связывающих центров сывороточного альбумина с помощью зонда К-35.
3.Оценить влияние различных факторов на свойства связывающих центров сывороточного альбумина.
4.Изучить особенности динамики флуоресцентных и клинико-лабораторных показателен при патологии, провести их сопоставление.
5.Провести анализ связи показателей, характеризующих свойства связывающих центров сывороточного альбумина, определяемых методом флуоресцентных зондов, с тяжестью состояния больного и исходом заболевания.
6.Установить клинико-диагностическое значение показателей, характеризующих свойства связывающих центров сывороточного альбумина при патологии.
Научная новизна: Установлена важная роль изменений свойств связывающих центров сывороточного альбумина в патогенезе заболеваний различной природы.
Выявлены общие черты изменений свойств связывающих центров сывороточного альбумина и их особенности при различных заболеваниях.
Доказана связь изменений флуоресцентных показателей с характером течения патологического процесса и тяжестью заболевания.
Показано, что свойства связывающих центров сывороточного альбумина являются интегральным показателем динамики соотношения процессов образования и выведения (обезвреживания) токсических веществ (метаболитов).
Обнаружен характер влияния ряда факторов на свойства связывающих центров сывороточного альбумина.
Комплексное сопоставление клинико-лабораторных и флуоресцентных показателей позволило установить, что диагностическая чувствительность параметров, определяемых методом флуоресцентных зондов, значительно превосходит таковую у традиционных клинико-лабораторных тестов.
Обоснован эффективный способ объективной оценки состояния организма при патологии с использованием флуоресцентных показателей, характеризующих свойства связывающих центров сывороточного альбумина, в частности при хирургической инфекции.
Практическая значимость: С позиций физико-химических и клинико-лабораторных исследований показана необходимость изучения свойств связывающих центров сывороточного альбумина у больных при различных заболеваниях с целью объективной оценки их состояния.
Показана значительно более высокая информативность показателей, характеризующих изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина, определяемых методом флуоресцентных зондов, по сравнению с общепринятыми клинико-лабораторными тестами.
Полученные данные обосновывают критерии оценки изменений флуоресцентных показателей сыворотки крови, а также возможность для клинической интерпретации этих изменений.
Установлен характер влияния практически значимых факторов на результаты измерения флуоресцентных показателей сыворотки крови у больных.
Положения, выносимые на защиту:
1.Флуоресцентные показатели, характеризующие свойства связывающих центров сывороточного альбумина, обладают высокими аналитическими характеристиками, но зависят от ряда факторов.
2.При различных заболеваниях происходят значительные изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина.
3.Параметры, характеризующие свойства связывающих центров сывороточного альбумина, зависят от особенностей течения патологического процесса и отражают его динамику.
4.Диагностическая чувствительность параметров, определяемых методом флуоресцентных зондов, значительно превосходит таковую у традици- онных клинико-лабораторных тестов.
5.Изменения свойств связывающих центров сывороточного альбумина у больных с хирургической инфекцией зависят от степени тяжести заболевания.
.Биохимические и физико-химические свойства сывороточного альбумина
Известно, что многие биологически важные функции плазмы крови, основаны на способности белков плазмы связывать, и переносить органические соединения: гормоны, лекарства, жирные кислоты и другие [111,120,129,130,207]. В настоящее время детально изучены вопросы кон-формационных и функциональных изменений белков плазмы крови, показана их роль в патогенезе, диагностическая и прогностическая значимость при многих заболеваниях [6,7,90,95,171,172].
Более половины массы белков плазмы крови составляет альбумин . Уникальная способность молекулы сывороточного альбумина (СА) связывать большое количество органических и неорганических лигандов определяет одну из основных функций этого белка - транспорт физиологических метаболитов и лекарственных веществ, а также обеспечение механизма регуляции их уровня в крови [94,111,197,206]. Эволюционно эта функция сформировалась в отношении транспорта жирных кислот (ЖК), билирубина (БР), пиридоксальфосфата, альдостерона, триптофана, Са2+, Си2+ [213].
Молекулярные механизмы процессов связывания СА с разными лиган-дами еще не раскрыты полностью, но в течение последних лет достигнуты заметные успехи в направлении идентификации лигандсвязывающих участков на белковой молекуле. Познание тонких структурных механизмов взаимодействия СА с низкомолекулярными веществами способствует пониманию транспортной функции этого физиологически активного белка [171,172,174,184].
1 Здесь и в дальнейшем речь идет только об альбумине крови В результате взаимодействия с разнообразными лигандами молекула СА претерпевает изменения, которые зависят от химических свойств действующих на белок веществ, от характера связей, образующихся в процессе соответствующих реакций. В каждом случае происходят как изменения физико-химических свойств самих лигандов, так и индуцируемые при их связывании структурные пертурбации в молекуле белка. Поэтому, например, происходит ослабление или усиление действия лекарственных веществ в организме. Лигандиндуцированными структурными изменениями белка объясняются известные эффекты стабилизации in vitro препаратов СА, связанного с жирными кислотами (ЖК), триптофаном, ионамидитурирующей температуры, протеолиза, внутримолекулярного дисульфидного обмена. Проявление указанных свойств обусловлено особенностями трехмерной структуры белка, обладающей подвижностью отдельных участков его молекулы при связывании специфических лигандов или в результате их высвобождения [171, 172]. Основой таких структурно-функциональных взаимодействий является структурная лабильность молекулы СА, обеспеченная уникальной петлевой укладкой в пространстве полипептидной цепи [1,3,14,28,81]. Универсальные комплексообразующие свойства альбумина определяются, в конечном счете, особенностями структурной организации этого белка и, в частности, способностью его молекул к конформационным перестройкам [17,51,84,171,172, 211,313].
.Структура и метаболизм сывороточного альбумина Сывороточный альбумин человека (ЧСА) - это глобулярный белок с молекулярной массой около 66 килодальтон. С А синтезируется в печени и секретируется ее клетками в кровь. В плазме крови концентрация ЧСА -35-50 г/л, что составляет 47-62% всех белков плазмы. Всего в кровеносном русле человека содержится около 120-140 грамм альбумина, во внеклеточном пространстве - около 360 грамм [73,316]. Среднее время жизни молекулы альбумина в организме человека - около 20 дней. [172].Структура молекулы альбумина описывается как одна полипептидная цепь, состоящая из 586 аминокислотных остатков. Она включает три так называемых домена, каждый из которых - структурная единица, содержащая 2 большие и 1 малую петли (субдомены). Домены трижды почти точно повторяются в виде индивидуальных глобулярных сегментов, конформация которых фиксирована 17 ди-сульфидными связями [63,171,179,219,327]. Такое сегментированное устройство придает молекуле альбумина значительную подвижность. При этом изолированные домены сохраняют функциональную специализацию, характерную для цепей молекулы СА [157].
Связывающие центры не являются независимыми, и при взаимодействии с белком некоторых лигандов проявляется эффект кооперативности [6, 7]. Зависимость связывания лигандов от молекулярной организации СА может быть подтверждена данными по взаимодействию различных низкомолекулярных веществ с отдельными фрагментами белка, полученными при ограниченном протеолизе. Такие фрагменты, по данным кругового дихроизма, в основном сохраняют вторичную структуру, характерную для них в составе цельной молекулы. Однако было показано, что эквимолярная смесь двух фрагментов бычьего альбумина с последовательностями 1-306 и 307-581 имеет более высокую по сравнению с индивидуальными фрагментами способность к связыванию длинно цепочечных жирных кислот [172]. Показано также, что связывание триптофана комплексом из указанных фрагментов СА вдвое выше, чем это происходит из простой суммы связывающей активности индивидуальных фрагментов [337,342]. Эти результаты исследований явились основанием для развития представления о том, что нативная структура СА формируется из отдельных структурных областей, способныхнезависимо сворачиваться, образуя глобулярные фрагменты во множественных участках полипептидной цепи [246,301,353].
. Состав и характеристика обследуемых групп больных
Состав и характеристика обследуемых групп больных Работа основана на результатах динамического исследования параметров, характеризующих свойства связывающих центров сывороточного альбумина, а также других клинико-лабораторных показателей у 237 больных распространенным перитонитом, у 35 больных панкреонекрозом, у 36 -сепсисом, у 31 - холангитом, находившихся на лечении в Городской клинической больнице скорой медицинской помощи (ГКБ СМП), Городской клинической больнице (ГКБ) № 1 и ГКБ № 7 г. Екатеринбурга с июня 1998 года по октябрь 2000 года. Кроме того, флуоресцентные показатели изучали у больных гепатитом, циррозом, панкреатитом, пиелонефритом, гломерулонефритом и лейкозом. Образцы сыворотки крови этих больных были получены в ГКБ №40 и Областной клинической больнице (ОКБ) №1 г. Екатеринбурга. Средний возраст пациентов и их количество в группах представлены в таблице 2.1.1.
Группу сравнения составили 198 практически здоровых лиц (96 мужчин и 102 женщины, средний возраст 43,0±3,0 лет). Данный контингент был разбит на 6 возрастных групп. В первую группу были включены лица в возрасте до 25 лет, вторую группу составила категория людей 26-35 лет, третью 36-45 лет, четвертую 46-55 лет, пятую 56-65 лет и шестую - старше 65 лет.
В протокол лабораторных исследований образцов сыворотки крови больных с хирургической инфекцией, помимо флуоресцентных показателей, входили общий анализ крови с подсчетом числа эритроцитов, количества гемоглобина, определением лейкоцитарной формулы, СОЭ, а также биохимических показателей: концентраций билирубина, креатинина, глюкозы, мочевины, общего белка, активности аминотрансфераз и а - амилазы, электролитного состава крови. 12 Всего 751 Из общего количества больных первой обследуемой группы перитонит аппендикулярного происхождения отмечался у 57 больных. Перитонит, вызванный патологическими изменениями толстой или тонкой кишки был у 20 больных, перфорация язвы желудка или двенадцатиперстной кишки диагностирована у 57, острый деструктивный панкреатит - у 21 человека, у 6 больных отмечен посттравматический перитонит, у 18 - перитонит, возникший как осложнение различной патологии органов брюшной полости, у 19 - в результате холецистита. Диагноз данного заболевания верифицировался на основании клинико-лабораторных данных и интраоперационно.
В группе больных панкреонекрозом деструктивный характер воспаления поджелудочной железы (жировой, геморрагический, либо смешанный некроз) у всех пациентов был верифицирован интраоперационно. При этом жировой некроз наблюдался у 5 больных, у 13 - геморрагический, у 13 -смешанный некроз и у 4 больных панкреонекроз был отечной формы (мелкоочаговый панкреонекроз без признаков деструкции парапанкреатическои или забрюшинной клетчатки). Всем пациентам с перитонитом и гнойно-деструктивным процессом в поджелудочной железе выполнялись оперативные вмешательства, направленные на купирование воспалительных изменений в брюшной полости, парапанкреатической и забрюшинной клетчатке и самой железе.
В анализируемую группу больных сепсисом вошли лица с различными видами хирургического сепсиса, возникшего при гнойно-воспалительных заболеваниях мягких тканей и железистых органов, легких и плевры, костей и суставов, после экстренных брюшно-полостных и травматологических операций и др. Чаще всего сепсис возникал при острых гнойно-воспалительных заболеваниях (абцессы, флегмоны, гнойные раны и др.): в 55 % случаев.
Группу больных острым гнойным холангитом составили 31 человек (19 мужчин и 13 женщин). Заболевания сердечно-сосудистой системы несколько чаще встречались у больных перитонитом, панкреонекрозом и сепсисом. Среди этой патологии преобладала артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца, у четверти пациентов потребовалась коррекция недостаточности кровообращения. На втором месте в структуре сопутствующих заболеваний оказались болезни обмена: ожирением страдали 14% больных перитонитом, 8% больных панкреонекрозом и 13% больных сепсисом. Сахарный диабет отягощал течение хирургической инфекции в 8% случаев. Хронический пиелонефрит сопровождал заболевания в 4% случаев. В группе больных холангитом сопутствующая патология была выражена в значительно меньшей степени.
Летальность среди больных перитонитом в возрасте до 50 лет составляет 11,2 %, среди больных панкреонекрозом - 31,3 % и сепсисом - 8,7 %. После 50 лет летальный исход в группе больных перитонитом возрастал и составлял 27,1 %, в группе больных панкреонекрозом - 23,5 % и в группе больных сепсисом - 20,0 %.
Все лабораторные тесты у больных с хирургической инфекцией на протяжении 10 суток от начала заболевания. Стандартом лечения у данных групп больных являлось назначение антибиотиков, сульфаниламидов, анальгетиков, антигистоминных средств, дезагрегантов. Для коррекции сопутствующей патологии применяли спазмолитики, глюкокортикоиды, антикоагулянты. При тяжелой интоксикации назначали инфузии объемом от 400,0 до 4000,0 мл.
. Аналитические характеристики метода флуоресцентных зондов
Аналитические характеристики метода флуоресцентных зондов Интенсивность флуоресценции зонда К-35 в сыворотке при измерении ЭКА (первый тест при использовании стандартной методики) [41,42] зависит главным образом от трех величин: концентрации альбуминовых центров связывания (N), константы связывания альбумином зонда (К) и квантового выхода флуоресценции (DQ) тех молекул зонда, которые связывались с альбуминовыми центрами.
Воспроизводимость измерения показателей DQ, N и К была изучена на 17 образцах сыворотки крови больных с хирургической инфекцией (9 мужчин и 8 женщин, средний возраст 46,7±3,2 лет) и 7 - здоровых лиц (3 мужчин и 4 женщин, средний возраст 43,5+5,3 лет) путем независимого приготовления двух параллельных проб каждого образца сыворотки крови, к которым независимо добавляли зонд и определяли изучаемые параметры (табл. 3.1.1.). Параллельные пробы готовили и измеряли в один день. Таблица 3.1.1. Параметры, ответственные за изменение флуоресценции зонда К-35 убольных с хирургической инфекцией и здоровых лиц при повторном измерении одного и того же образца
Воспроизводимость характеризовали величиной относительного среднего квадратичного отклонения V (в процентах) от среднего арифметического значения измеряемого параметра при повторном измерении одного и того же образца. Также использовали значение среднего квадратического отклонения S (в единицах определяемого параметра).
Для оценки расхождения между результатами, полученными в двух сериях (1,2) для каждого (к-го) образца внутри серии вычисляли: расхождение Dk = Xik - Х2к, где Xik , Х2к - среднее арифметическое значение параметра для k-го образца в 1-й и 2-ой серии соответственно; максимальное относительное расхождение:
При добавлении зонда К-35 до конечной концентрации а=14 мкМ к сыворотке крови, разбавленной в 40 раз, практически весь зонд (около 95%) оказывается связанным с альбумином [273].При этом интенсивность его флуоресценции (Fb) пропорциональна концентрации связанного зонда (гь « 0,95а) и выходу Q: Fb = DQxrb« DQ (0,95а), откуда DQ « Fb/13,3, где D - приборная константа, одинаковая независимо от того, какой и когда измеряется образец сыворотки. Для оценки величин N и К проводили титрование каждого образца сыворотки, разбавленной в 400 раз зондом, концентрацию которого увеличивали пятью ступенями по 2 мкМ от 2 до 10 мкМ. Добавленным концентрациям зонда al, а2, аЗ, а4 и а5 соответствовали интенсивности флуоресценции F1, F2, F3, F4 и F5. Если считать, что при 5 мкМ зонда все центры альбумина (их около 2-3 мкМ) заполнены зондом, то приближенно F5 = DQN; N(MKM) = F5/DQ = F5/(Fb/13,3).
В результате проведения вышеописанных экспериментов установлено, что среднеквадратическое отклонение между данными двух измерений квантового выхода флуоресценции в группе больных составило 1,42, а в группе здоровых лиц - 1,13. Коэффициент вариации 2,90% для больных и 1,52% для здоровых.
При оценке константы связывания зонда с альбумином величина сред-неквадратического отклонения составила 0,14 и 0,09, а коэффициент вариации 8,12 и 5,26% для больных и здоровых соответственно. В случае определения концентрации альбуминовых центров связывания величина средне-квадратического отклонения в группе пациентов с хирургической инфекцией равнялась 0,13, а коэффициент вариации был равен 6,89%. У здоровых лиц эти величины были равны 0,07 и 3,57%.
Анализ расхождения между результатами, полученными в двух сериях, (табл. 3.1.2.) показал, что расхождение Dk при определении DQ составило 3,24 (6,48 %) и 2,93 (4,19 %), при определении К - 0,1 (5,56 %) и 0,07 (3,90 %), при определении N - 0,1 (5,29 %) и 0,08 (4,08 %) у больных с хирургической инфекцией и здоровых лиц соответственно. Максимальное относительное расхождение RDmax составило 0,06 и 0,04 при определении DQ, 0,06 и 0,04 при определении К, 0,05 и 0,04 при определении N в обследуемых группах соответственно.
Таким образом, полученные данные показывают, что измерение параметров, характеризующих свойства связывающих центров альбумина является весьма воспроизводимым. Следует отметить, что при измерении этих параметров у здоровых лиц их воспроизводимость выше, чем при аналогичных опытах с образцами сыворотки крови в группе больных.
Изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях желудочно-кишечного тракта
Объективная и своевременная оценка состояния организма при патологии является неотъемлемой задачей современной клинико-лабораторной диагностики. В настоящее время в клинической практике для оценки состояния больных различными заболеваниями существует целый ряд общепринятых диагностических тестов, получивших широкое распространение.
Между тем известно, что важным механизмом компенсации увеличения концентрации продуктов метаболизма, характерного для патологии, является образование комплексов различных соединений с белками плазмы крови, уникальной способностью к которому обладает сывороточный альбумин.
При эндогенной интоксикации, сопровождающей то или иное заболевание, в организме создаются условия для образования форм альбумина с измененными физико-химическими характеристиками, что препятствует обмену между тканями и сосудистым руслом, переносу токсинов к органам де-токсикации-биотрансформации. Поэтому особое значение имеют методы, позволяющие судить не только о количестве, но и функциональной активности альбумина. В этом отношении перспективным представляется использование метода флуоресцентных зондов для оценки свойств связывающих центров альбумина [47,133].
В настоящем разделе представлен клинический материал исследований изменений свойств связывающих центров сывороточного альбумина при заболеваниях различного генеза методом флуоресцентных зондов с использованием К-35.
Нами проведено изучение изменений флуоресцентных показателей у больных гепатитом, циррозом, панкреатитом, пиелонефритом, гломерулонефритом и лейкозом. 4.1. Изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях желудочно-кишечного тракта 4.1.1. Изменения флуоресцентных показателей при гепатите циррозе печени
Общая концентрация альбумина в сыворотке крови при остром и хроническом вирусном гепатите В и циррозе печени не отличалась от таковой в группе сравнения (табл.4.1.1.1.). Напротив, ЭКА у пациентов с этими заболеваниями достоверно ниже (р 0,001) относительно данного показателя в группе сравнения. При этом ЭКА снижается в среднем на 34,3% в группе острого вирусного гепатита В , на 15,6% - в группе хроническокого вирусного гепатита В и на 42,5% - в группе цирроза.
Вследствие этого происходит снижение параметра, представляющего собой отношение ЭКА/ОКА (на 27,5% в группе острого вирусного гепатита В, на 17,1%о в группе хронического вирусного гепатита В и на 33,9% в группе цирроза ) и возрастает индекс токсичности (на 72% и на 78% в данных обследуемых группах пациентов соответственно).
Различия между группой здоровых лиц и больных заболеваниями гепа-тобиллиарной системы становится особенно значительным, если рассмотреть долю пациентов, имеющих сниженную величину ЭКА/ОКА. Так среди лиц группы сравнения величины ЭКА/ОКА ниже 74% не наблюдалось. Больные гепатитом и циррозом печени в основном имели ЭКА/ОКА ниже этой границы. У больных гепатитом низкие величины ЭКА/ОКА отмечены в 81,0%случаев, а в группе цирроза - в 100%. случаев.
Примерно такие же изменения претерпевает индекс токсичности ИТ. В группе сравнения величина ИТ близка к нулю, и только у 15 из 198 здоровых лиц ИТ превышает величину 0,26. Напротив, в группе гепатита 84% больных имеют ИТ больше 0,26, а в группе цирроза все больные имеют высокую величину ИТ (среднее значение - 0,77). Таблица 4.1.1.1. Параметры, характеризующие свойства связывающих центров сывороточного альбумина в группе сравнения и больных заболеваниями гепатобиллиарной системы Примечание: - различия достоверны (р 0,05) относительно группы сравнения Анализ динамики изменений флуоресцентных показателей у больных гепатитом на 1-е, 7-8-еи 14-15-е сутки наблюдения показал их постепенное улучшение, которое, однако, не достигало уровня таковых в группе сравнения. Таким образом, изменения флуоресцентных показателей при заболеваниях гепатобиллиарной системы однонаправленны. Причем при циррозе печени они более заметны, что связано, по-видимому, с более выраженной ге-патодепрессией и накоплением метаболитов при этом заболевании.
