Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 12
Глава II. Материалы и методы .34
2.1.Клиническая характеристика обследованных беременных .34
2.2. Методы исследования 37
Глава III. Результаты собственных исследований. Исследование факторов мукозальной защиты репродуктивного тракта при физиологической беременности.49
3.1. Содержание трефоилового пептида-3 и муцинов (5АС и 6) в церви-ко-вагинальном секрете и эндометрии у первородящих и повторонородящих женщин 50
3.2. Содержание трефоилового пептида-3 и муцинов (5АС и 6) в церви-ко-вагинальном секрете и эндометрии у женщин в зависимости от состояния микрофлоры.54
Глава IV. Результаты собственных исследований. Уровень провос-палительных и противовоспалительных цитокинов в плазме крови и эндометрии при физиологической беременности.61
4.1. Уровень провоспалительных цитокинов у первородящих и повто-ронородящих женщин 61
4.2. Уровень провоспалительных цитокинов у женщин в зависимости от состояния микрофлоры 64
4.3. Уровень противовоспалительных цитокинов у первородящих и по-второнородящих женщин 71
4.4. Уровень противовоспалительных цитокинов у женщин в зависимости от состояния микрофлоры.73
Глава V. Результаты собственных исследований. Уровень адипо-кинов и продуктов метаболизма коллагена I типа при физиологической беременности77
5.1. Уровень глюкозы, инсулина в плазме крови и HOMA-IR у первородящих и повторонородящих женщин .77
5.2. Уровень глюкозы, инсулина в плазме крови и HOMA-IR у женщин в зависимости от состояния микрофлоры80
5.3. Уровень адипонектина и резистина в плазме крови у первородящих и повторонородящих женщин .81
5.4. Уровень адипонектина и резистина в плазме крови уженщин в зависимости от состояния микрофлоры .83
5.5. Уровень CrossLaps (телопептид коллагена I типа) и CiCP (пропеп-тид проколлагена I типа) в плазме крови у первородящих и повторонородя-щих женщин 86
5.6. Уровень CrossLaps (телопептид коллагена I типа) и CiCP (пропеп-тид проколлагена I типа) в плазме крови у женщин в зависимости от состояния микрофлоры 88
Заключение .92
Выводы .99
Список литературных источников 100
- Содержание трефоилового пептида-3 и муцинов (5АС и 6) в церви-ко-вагинальном секрете и эндометрии у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
- Уровень провоспалительных цитокинов у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
- Уровень противовоспалительных цитокинов у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
- Уровень глюкозы, инсулина в плазме крови и HOMA-IR у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
Введение к работе
Актуальность проблемы. На современном этапе приоритетным направлением демографической политики является повышение рождаемости, снижение заболеваемости и материнской смертности [Спирин А.В., Гринберг Л.М., 2008]. Достижение данных целей возможно путем более детального изучения и осмысления этиопатогенетических факторов акушерско-гинекологической патологии. Нормальное осуществление репродуктивной функции у женщин возможно благодаря наличию ряда иммунологических, гормональных, метаболических механизмов. Данные механизмы контролируют скоординированное функционирование клеток и тканей, обеспечивающих физиологическое течение беременности [Т.Н. Погорелова с соавт., 2012]. Но наряду со значительными успехами в изучении молекулярных и клеточных процессов физиологической беременности, многие механизмы остаются до сих пор не изученными.
Во время беременности происходят значительные изменения в метаболических процессах, что обуславливает актуальность изучения данного вопроса. Установлено, что эндокринная активность жировой ткани при беременности возрастает, что выражается в изменении концентраций адипокинов в материнской крови [А. В. Шестопалов с соавт., 2011]. Беременность является уникальным состоянием, при котором происходит физиологическое увеличение резистентности к инсулину. Таким образом, даже нормальная беременность является «диабетогенным состоянием». При беременности развивается состояние относительного гиперинсулинизма с периферической инсулиновой резистентностью за счет увеличения концентрации контринсулярных гормонов, а также действия адипокинов жировой ткани.
Стоит обратить внимание, что дифференцировка адипоцитов, фибробластов и остеобластов следует от единой клетки-предшественницы – мезенхимальной стволовой клетки [ еt al., 2008]. Во время беременности изменяется функциональная активность клеток, продуцирующих коллаген, что сопровождается изменениями в процессах синтеза и деградации коллагена. Метаболизм коллагена – и синтез, и деградация, наиболее активен в период роста, при этом образуется большое количество промежуточных метаболитов, используемых в качестве оценки активности обменных процессов в соединительной ткани. Считается, что дефект метаболизма коллагена может приводить к осложнениям беременности [Sheldon I.M. 2011].
Для нормального течения беременности особое значение имеют системные и локальные иммунные факторы. Важными компонентами защиты репродуктивного тракта являются механизмы врожденной или неспецифической резистентности [Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько 2003]. Особое место среди таких врожденных компонентов иммунной системы занимают малоизученные муцины и тре-фоиловые пептиды, которые участвуют не только в защите от распространения патогенов, но и в восстановлении целостности ткани. Вероятно, что оперативное родоразрешение первой беременности приводит не только к нарушению целостности ткани эндометрия и миометрия, но и к изменению микробного
пейзажа репродуктивного тракта, что влияет на изменение продукции муцинов и трефоиловых пептидов. Взаимодействие эпителиальных и иммунных клеток, а также различных белков, гликопротеинов и других биологически активных веществ обеспечивает тканевую интегральность, что является непременным условием для развития нормальной беременности.
Стоит учитывать, что ранее перенесенная беременность сопровождается изменением микрофлоры репродуктивного тракта, а также метаболизма. В свою очередь, это может привести к изменению системы мукозального барьера репродуктивного тракта и метаболизма мезенхимальных тканей при повторной беременности. Достаточно широко изучен вопрос о влиянии микроорганизмов ЖКТ на метаболизм жировой ткани, клеточный и гуморальный иммунитет, эндокринную систему[Michael A. Mc Guckin, 2011]. Напротив, в литературе отсутствуют данные о влиянии микрофлоры репродуктивного тракта на метаболизм мезенхимальных тканей. В связи с этим, в данном исследовании проводится оценка влияния синан-тропной флоры репродуктивного тракта на продукцию мукозальных факторов защиты, цитокинов и адипокинов.
Актуальность изучения регуляторных процессов гестации и родовой деятельности имеет не только теоретическое значение, но и практическую значимость, которая заключается в понимании причин нарушения физиологических процессов при патологиях беременности [С.А.Сельков, Павлов, 2007; Т.Н. По-горелова с соавт., 2012]. Особого внимания заслуживает цитокиновая регуляция. Основная часть иммунных функций опосредуется растворимыми факторами, то есть цитокинами. Многочисленные цитокины создают специфические условия, в которых происходит взаимодействие между матерью и плодом [Т.Н. Погорелова с соавт., 2012].
Учитывая, что метаболизм мезенхимальных тканей претерпевает существенные изменения, следует предположить, что при повторной беременности они могут проявляться с другой степенью выраженности. Очевидно, что нормы клинико-лабораторных показателей для повторнородящих женщин должны формироваться в самостоятельную группу, учитывая изменения, происходящие при повторной беременности.
Таким образом, целью исследования явилась оценка факторов мукозальной защиты репродуктивного тракта, определение инсулинорезистентности, уровня адипокинов и цитокинов, а также продуктов метаболизма коллагена I типа у женщин с первой и повторной физиологической беременностью.
Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи исследования:
-
Исследовать уровни муцинов (MUC 5AC, MUC 6) и трефоилового фактора-3 (TFF-3) в цервико-вагинальном секрете и эндометрии у женщин с первой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.
-
Определить уровни провоспалительных и противовоспалительных цито-кинов в плазме крови и ткани эндометрия у женщин спервой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.
-
Определить показатели инсулинорезистентности, уровни адипонектина и резистина в плазме крови у женщин с первой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.
-
Определить уровень пропептида проколлагена I типа (CiCP), телопептида коллагена I типа (CrossLaps) в плазме крови у женщин с первой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.
-
Провести оценку роли изучаемых биорегуляторных факторов физиологической беременности, установить корреляционные связи между ними с целью выявления новых биохимических показателей, характеризующих первую и повторную физиологическую беременность.
Научная новизна. Впервые определено содержание муцинов 5 АС и 6, а также трефоилового пептида -3 в цервико-вагинальном секрете и эндометрии. Выявлено влияние микрофлоры репродуктивного тракта беременной на концентрацию факторов мукозального барьера. Впервые показано, что при повторной беременности в ткани эндометрия происходит увеличение содержания MUC 5AC и TFF-3 на фоне снижения MUC 6, а в цервико-вагинальном секрете снижение концентрации MUC 5AC, MUC 6, TFF-3. Впервые установлено, что у первородящих женщин, микрофлора которых характеризуется отсутствием роста лактобацилл, снижается концентрация MUC 6 в ткани эндометрия. У повторнородящих женщин, в микрофлоре которых отсутствует рост лактобацилл, происходит снижение содержания MUC 5АС в ткани эндометрия. У повторнородящих женщин наблюдается сильная отрицательная корреляция между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем муцина 6 в церви-ко-вагинальном секрете.
Впервые исследовано влияние микрофлоры репродуктивного тракта на метаболизм мезенхимальных тканей. Установлены корреляционные связи между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем муцина 6, ин-терлейкинов, CiCP.
Определены концентрации провоспалительных (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО) и противовоспалительных (ТФР, ИЛ-1РА) цитокинов в плазме крови и ткани эндометрия при первой и повторной беременности. Впервые установлено, что у повторнородящих женщин, которые в анамнезе имели оперативное родоразре-шение, в ткани эндометрия происходило снижение концентрации ИЛ-1 и ФНО на фоне увеличения ИЛ-6. Тогда как в плазме крови у этих женщин увеличивалась концентрация ИЛ-8 и снижалась ИЛ-6. Вместе с этим выявлена взаимосвязь между микрофлорой и уровнем провоспалительных цитокинов. Установлено, что отсутствие роста лактобацилл в репродуктивном тракте беременных приводит к снижению содержания ФНО в ткани эндометрия у первородящих женщин и ИЛ-8 в плазме крови у повторнородящих. У повторнородящих женщин наблюдается сильная положительная корреляция концентрации лактобацилл репродуктивного тракта с плазменным уровнем ИЛ-8 и ТФР.
Исследован уровень адипокинов (адипонектина, резистина) у беременных, родоразрешенных путем кесарева сечения. Впервые показан рост степени выраженности инсулинорезистентности при повторной беременности. Выявлено,
что отсутствие роста лактобацилл в репродуктивном тракте у повторнородящих женщин, приводит к повышению концентрации резистина.
Впервые изучен уровень продуктов метаболизма коллагена I типа в плазме крови у перво- и повторнородящих женщин, родоразрешенных оперативным путем. Установлено, что уровень CrossLaps одинаково повышается при первой и повторной беременности, а уровень CiCP достоверно повышается у повторнородящих женщин. У первородящих женщин отмечена сильная отрицательная корреляция между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и плазменным уровнем CiCP
Теоретическая и практическая значимость. Полученные в ходе исследования данные расширяют представления о роли факторов мукозальной защиты, цитокинов, адипокинов, а также продуктов метаболизма коллагена I типа в развитии и поддержании физиологической беременности.
Расширены представления о роли TFF и муцинов в защите репродуктивного тракта. Установлена взаимосвязь между микробным пейзажем репродуктивного тракта и концентрацией таких компонентов мукозального барьера, как муцины и TFF-3.
Исследован вклад жировой ткани в механизмы формирования инсулиноре-зистентности при первой и повторной физиологической беременности.
Материалы исследования внедрены в работу клинико-диагностической лаборатории МБУЗ «ГБСМП г.Ростова-на-Дону», клинико-диагностической лаборатории ЗАО «Наука», г. Ростов-на-Дону, а также в курс лекций на кафедре общей и клинической биохимии №2 РостГМУ.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Предыдущая беременность в анамнезе и микробиологический пейзаж репродуктивного тракта беременной влияют на продукцию муцинов и трефоило-вого фактора-3 в репродуктивном тракте, а также цитокинов как в ткани эндометрия, так и в плазме крови.
-
При первой и повторной физиологической беременности формируется различной степени выраженности инсулинорезистентность, обусловленная продукцией адипокинов, на концентрацию которых оказывает влияние микрофлора репродуктивного тракта.
Апробация работы. Результаты работы представлены на Международной научно-технической конференции «Европейский инновационный конвент» (г.Вена, Австрия 20-21 декабря 2013г.) («EastWest» Association for Advanced Studies and Higher Education GmbH, Wien, sterreich); на Международной заочной научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования и науки» (г. Тамбов, Россия, 30 декабря 2013г); на XII Международной научно-практической конференции «Тенденции и инновации современной науки» (г. Краснодар, 26 февраля 2014г.).
Публикация результатов исследования. По теме диссертационного исследования опубликовано 9 работ, в том числе 4 из них в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых журналов, рекомендованных для пуб-
ликации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени, 1 статья в зарубежном издании.
Работа выполнена при поддержке гранта Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «У.М.Н.И.К.» и конкурса уникальных молодежных инновационных проектов «КУМИР».
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах и содержит – общую характеристику работы, главы – обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, заключение, выводы, список литературы, включающий 16 отечественных и 128 зарубежных источников. Работа содержит 1 схему, 22 таблицы, иллюстрирована 36 рисунками.
Содержание трефоилового пептида-3 и муцинов (5АС и 6) в церви-ко-вагинальном секрете и эндометрии у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
Слизистый слой является местом прикрепления синантропных микроорганизмов, которые являются важным защитным фактором. Микрофлора репродуктивного тракта здоровых женщин включает широкий спектр анаэробных и аэробных бактерий, среди которых преобладают факультативные, микроаэрофильные анаэробы рода Lactobacillus. Доминирующим видом является Lactobacillus Acidophilus. У здоровых женщин также часто встречаются L. сrispatus, L.iners, L. gasseri. У некоторых женщин были определены дополнительные виды, такие как L. jensenii, L.gallinarum и L.vaginalis. Интересно, что у некоторых практически здоровых женщин микрофлора характеризуется отсутствием Lactobacillus, но присутствием таких видов как Atopobium, Megasphaera и Leptotrichia, которые также как и лактобациллы продуцируют молочную кислоту [32,42, 52].
Поэтому принято считать важным механизмом защиты против роста патогенных микроорганизмов продукцию молочной кислоты и поддержание кислого рН. Решающее значение для поддержания здоровой микрофлоры имеет уровень молочной кислоты, независимо от преобладающего вида бактерий. Так же важное значение имеет способность лактобацилл производить перекись водорода и бактериоцины, которые принимают активное участие в антимикробной защите [136]. Состав экосистемы влагалища не является статическим и изменяется с течением времени и в ответ на эндогенные и экзогенные факторы [52]. Активность лактобацилл помогает поддерживать естественный здоровый баланс влагалищной микрофлоры [117]. Эта роль особенно важна во время беременности, потому что нарушения в микрофлоре влагалища, такие как бактериальный вагиноз и аэробный вагинит, провоцируют преждевременные роды, перинатальные осложнения, а также осложнения послеродового периода [39].
Достаточно широко изучен вопрос о влиянии микроорганизмов ЖКТ на метаболизм жировой ткан, клеточный и гуморальный иммунитет, эндокринную систему [95]. Напротив, в литературе отсутствуют данные о влиянии микрофлоры репродуктивного тракта на метаболизм мезенхимальных тканей. В связи с этим, в данном исследовании проводится оценка влияния микроорганизмов репродуктивного тракта на продукцию факторов мукозального барьера и метаболизм мезенхимальных тканей.
В нашем исследовании все женщины были поделены на 3 группы: 1 группа – общая, поделенная на 2 подгруппы: женщины, у которых отмечен рост лактобацилл в репродуктивном тракте и женщины, микрофлора которых характеризуется отсутствием роста лактобацилл; 2 и 3 группы перво-и повторнордя-щих женщин, соответственно, также поделенные на 2 подгруппы: женщины, у которых отмечен рост лактобацилл в репродуктивном тракте и женщины, микрофлора которых характеризуется отсутствием роста лактобацилл.
При исследовании концентрации MUC 5 AC в ткани эндометрия у женщин с различным микробиологическим пейзажем было отмечено достоверное повышение его уровня на 29,9 % в группе женщин, у которых отмечен рост лактобацилл в репродуктивном тракте в сравнении с женщинами, у которых отсутствует рост лактобацилл в репродуктивном тракте (p 0,05). При этом в группе первородящих женщин достоверных отличий не наблюдалось. Напротив, в группе повторнородящих женщин с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте концентрация MUC 5АС достоверно повышалась на 40% относительно повторнородящих женщин, у которых отсутствует рост лактобацилл (р 0,02) (табл. 3.3).
Вместе с тем, статистически значимых отличий не было установлено при исследовании содержания MUC 6 в ткани эндометрия в общей группе и группе повторнородящих женщин. При этом было отмечено повышение концентрации MUC 6 в группе первородящих женщин с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте на 25,9%относительно женщин с отсутствием роста лактобацилл (р 0,02).
Содержание TFF-3 в эндометрии в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта, % Таким образом, наличие лактобацилл в репродуктивном тракте влияет на содержание MUC 5AC, не влияя на уровень MUC 6 и TFF-3. Муцины имеют центры связывания с микроорганизмами, что обеспечивает их взаимодействие с синантропной флорой. Учитывая, что MUC 5AC секретируется клетками непосредственно в слизистый слой, а MUC 6 локализуется ближе к базальной мембране, можно предположить, что именно MUC 5AC взаимо-действовует с микрофлорой. У трефоиловых пептидов отсутствуют такие центры связывания. Вероятне всего, это и обуславливает влияние лактоба-цилл на продукцию только MUC 5AC.
При исследовании цервико-вагинального секрета женщин с различной микрофлорой статистически значимых отличий не наблюдалось. В цервико-вагинальном секрете отмечалась сильная отрицательная корреляция между MUC 5AC и TFF-3 в общей группе женщин с ростом лак-тобацилл в репродуктивном тракте (r = - 0,90; р 0,03). При этом у повторнородящих женщин отмечена сильная отрицательная корреляция между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем MUC 6 в церви-ко-вагинальном секрете (r= -0,97; р 0,004).
Содержание TFF-3 в цервико-вагинальном секрете в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта, % Таким образом, при исследовании концентрации MUC 5AC в ткани эндометрия было установлено, что у повторнородящих женщин концентрация MUC 5AC выше относительно первородящих. Наряду с этим, в общей группе женщин с отсутствием роста лактобацилл в репродуктивном тракте концентрация MUC 5AC меньше, чем у женщин с ростом лактобацилл. При этом в группе повторнородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл отмечено снижение концентрации MUC 5AC, тогда как у первородящих женщин достоверных отличий не наблюдалось.
Напротив, в цервико-вагинальном секрете у повторнородящих женщин отмечается снижение концентрации MUC 5AC относительно первородящих. Вместе с тем не было отмечено достоверных отличий в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта.
Концентрация MUC 6 в ткани эндометрия была достоверно ниже у повторнородящих женщин по сравнению с первородящими. При этом не отмечалось изменений в зависимости от микрофлоры репродуктивного тракта. Было отмечено снижение MUC 6 в эндометрии в группе первородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл в репродуктивном тракте в сравнении с беременными, у которых присутствует рост лактобацилл.
Уровень провоспалительных цитокинов у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
Наличие молочнокислой микрофлоры в репродуктивном тракте женщин имеет важное значение для поддержания иммунного ответа и гомеоста-за. Наиболее важной функцией молочнокислых бактерий является модуляция иммунного ответа через продукцию цитокинов. Цитокины и их регулирование иммунной системы интенсивно изучались в течение многих лет на клеточных линиях, как грызунов, так и человека [123].
В работах Hanne R. Christensen и соавторов была продемонстрирована связь между продукцией цитокинов и концентрацией бактерий. Так, например, концентрация 10 мкг / мл L. Casei индуцируют высокий уровень IL-64 , IL-6 и ФНО, но почти не влияют на IL-10, а 100 мкг / мл индуцируют тотже уровень IL -12, но, гораздо, более высокий уровень IL-10.При этом, различные виды Lactobacillus могут дифференцированно влиять на иммунный ответ, поддерживая продукцию цитокиновTh1 , Th2 или Th3 [28].
Miettinen установил, что Bifidobacterium bifidum влияет на продукцию ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО [73]. Относительная высокая способность индуцировать IL-6 наблюдается у всех штаммов Lactobacillus, что согласуется с общим выводом, о том, что многие виды молочнокислых бактерий вызывают индукцию IL-6 и повышают ответ IgA [28,88]. Также имеются работы, указывающие на способность непатогенных кислотообразующих бактерий стимулировать продукцию такого провоспалительного цитокина как ИЛ-8 [103].
В нашем исследовании мы проанализировали концентрацию провоспа-лительных цитокинов у беременных женщин в зависимости от их микробиологического статуса репродуктивного тракта. Перво- и повторнородящие женщины были поделены на подгруппы: беременные с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте и беременные с отсутствием роста лактобацилл.
При исследовании провоспалительных цитокинов в эндометрии статистически значимые отличия наблюдались только в содержании ФНО. Так у женщин с отсутствием роста лактобацилл в репродуктивном тракте в общей группе отмечено снижение концентрации ФНО на 45,5% относительно женщин с ростом лактобацилл (р 0,05). Такая же тенденция отмечена в группе первородящих женщин, где в подгруппе женщин с отсутствием роста лактобацилл отмечено снижение концентрации ФНО на 65,3% (р 0,01).
Несмотря на то, что другие провоспалительные цитокины не показали значимых отличий, между ними наблюдалась корреляционная связь. В общей группе присутствовала положительная корреляция между ИЛ-8 и ИЛ-6 в эндометрии как в подгруппе женщин с ростом лактобацилл (r=0,94; р 0,00001), так и в подгруппе женщин с отсутствием роста лактобацилл (r=0,90; р 0,000001). При этом связь между ИЛ-8 и ИЛ-6 была отмечена в подгруппе первородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл (r=0,91; р 0,002), а также в подгруппе повторнородящих с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте (r=0,96; р 0,0004) и без лактобацилл (r=0,95; р 0,0002) (табл.4.3).
Содержание ФНО в эндометрии в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта беременных, % Наряду с этим, при исследовании концентрации провоспалительных цитокинов в плазме крови достоверные отличия были отмечены только у ИЛ-8. Наблюдалось снижение концентрации ИЛ-8 на 31,3% у женщин с отсутствием роста лактобацилл в репродуктивном тракте в общей группе (р 0,002), а так же у повторнородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл на 38,8% (р 0,05).
При этом в плазме крови отмечалась средней силы положительная корреляция между ИЛ-8 и ФНО только в общей группе женщин с отсутствием роста лактобацилл (r = 0,44; р 0,04).
Вместе с тем, корреляционная связь наблюдалась в некоторых группах между провоспалительными цитокинами и факторами мукозального барьера. Так в общей группе женщин с отсутствием роста лактобацилл отмечена связь между MUC 6 цервико-вагинального секрета и ИЛ-1 плазмы крови (r = 0,67; р 0,007). В группе повторнородящих женщин с ростом лактобацилл отрицательно коррелировали в эндометрии MUC 5AC и ИЛ-1 (r = - 0,78; р 0,03) и положительно MUC 5AC и ФНО (r = 0,78; р 0,03,) а также у них отмечена сильная положительная корреляция между концентрацией лактобацилл и уровнем ТФР (r= 0,81; р 0,02) и ИЛ-8 (r= ,070; р 0,07) плазмы крови .
Уровень противовоспалительных цитокинов у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
При изучении противовоспалительных цитокинов в эндометрии статистически значимых отличий не наблюдалось. При этом в группе первородящих женщин отмечалась отрицательная корреляционная связь между ИЛ-1 и ИЛ-1РА (r= - 0,46; р 0,05), а в группе повторнородящих женщин была отмечена положительная корреляция между ТФР и ИЛ-1 (r=0,52; р 0,02) .
При исследовании содержания противовоспалительных цитокинов вплазме крови статистически значимых отличий также не было выявлено. При этом в группе первородящих женщин ФНО коррелировал с ТФР (r=0,60; р 0,004), а также отмечалась слабая корреляционная связь с ИЛ-1 (r=0,37; р 0,09). Во II группе присутствовала корреляция между ТФРэндометрия и ТФР плазмы крови (r=0,50; р 0,03) .
Статистически значимых отличий в группах не было выявлено. В эндометрии в общей группе женщин с ростом лактобацилл присутствовала средней силы положительная связь между ИЛ-1РА и ИЛ-6 (r = 0,72; р 0,01), а так же между ИЛ-1РА и ИЛ-8 (r = 0,71; р 0,01). В группе повторнородящих женщин с ростом лактобацилл сильная положительная корреляция была между ТФР и ИЛ-1 (r = 0,78; р 0,03), ИЛ-1РА и ИЛ-6 (r = 0,85; р 0,01), ИЛ-1РА и ИЛ-6 (r = 0,89; р 0,006) (табл.4.7).
В эндометрии положительная корреляция между ИЛ-1РА и ИЛ-6 (r =0,58; р 0,008), ИЛ-1РА и ИЛ-8 (r =0,49; р 0,02) отмечалась в общей группе женщин с отсутствием лактобацилл в репродуктивном тракте. В общей группе женщин с ростом лактобацилл появляется умеренная положительная корреляция между ТФРР и ФНОа (г =0,59; р 0,04), ТРФр и ИЛ-ір (г =0,64; р 0,02).
Появляется корреляция в группе первородящих женщин. Так в плазме женщин с ростом лактобацилл сильная корреляционная связь отмечается между ТФР и ИЛ-1 (r =0,97; р 0,004), ИЛ-1РА и ИЛ-8 (r =0,90; р 0,03). У женщин с отсутствием роста лактобацилл наблюдается сильная положительная связь между ТФР и ФНО (r =0,81; р 0,003).
В группе повторнородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл корреляция наблюдается между ИЛ-1РА и ИЛ-6 (r =0,65; р 0,02) (табл.4.8). Таблица 4.8 Содержание ИЛ-1РА в плазме крови в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта беременных, % Содержание противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1РА, ТФР пг/мл) в плазме крови в зависимости от микробиологического пейзажа
Таким образом, при изучении концентрации противовоспалительных цитокинов у женщин с различным микробиологическим пейзажем репродуктивного тракта, как в эндометрии, так и в плазме крови статистически значимых отличий не наблюдалось. Вместе с тем, отмечалась корреляционная связь между про– и противовоспалительными цитокинами.
Во время беременности метаболизм организма матери претерпевает ряд изменений. В первую очередь эти изменения касаются углеводного обмена. Под действием различных гормонов формируется относительная инсулинорезистентность, направленная на адекватный транспорт глюкозы к плоду [83].
В целом, физиологическая инсулинорезистентность оказывает положительную биологическую роль, приводя к гипергликемии и обусловливая градиент концентрации глюкозы в крови между матерью и плодом, что позволяет проникать глюкозе через плаценту посредством облегченной диффузии. При этом у здоровой женщины при нормальных эндогенных резервах инсу-линорезистентность является компенсированной [3].
Многие исследования посвящены изучению инсулинорезистентности в пределах текущей беременности, то есть от момента имплантации и до родов. В нашем исследовании, мы наблюдали, как изменяются соматометриче-ские показатели и показатели инсулинорезистентности у женщин с первой и повторной беременностью.
Согласно нашему исследованию у повторнородящих женщин уровень инсулина (р 0,03), глюкозы (р 0,02), а так же HOMA-IR (р 0,03) выше в сравнении с первородящими женщинами. При этом статистически значимых отличий соматометрических показателей, таких как вес, рост и ИМТ не наблюдалось. Вместе с тем, показатели контрольной группы были достоверно ниже в сравнении с первородящими женщинами: вес (р 0,0001), ИМТ (р 0,0001), инсулин (р 0,001), HOMA –IR (р 0,0007), однако, концентрация глюкозы статистически значимо не отличалась. Так же показатели контрольной группы были ниже и по отношению к повторнородящим женщинам: вес (р 0,0001), ИМТ (р 0,0001), инсулин (р 0,00001), HOMA –IR (р 0,000008), глюкоза (р 0,02) (табл.5.1).
Таким образом, мы видим, что с наступлением последующей беременности происходит нарастание инсулинорезистентности. Так у первородящих женщин уровень инсулина, НOMA-IR и ИМТ увеличивается в 2,8; 4,2 и 1,2 раза соответственно, в сравнении с небеременными женщинами. Однако, уровень глюкозы при этом остается практически одинаков в сравнении с небеременными женщинами. Тогда как у повторнородящих уровень инсулина, глюкозы, НOMA-IR и ИМТ увеличивается в 5; 1,2; 7,8; 1,3 раза соответственно в сравнении с небеременными женщинами и в 1,7; 1,1; 1,8 в сравнении с первородящими, но ИМТ достоверных отличий не имел по сравнению с первородящими.
В работах Hotamisligil G.S. впервые было высказано предположение, что провоспалительные цитокины способны индуцировать резистентность к инсулину [63,135]. Как про- так и противовоспалительные цитокины принимают участие в индукции и поддержании подострого воспалительного состояния, связанного с лишним весом. Цитокины и хемокины, включают внутриклеточные пути, которые способствуют развитию инсулинорезистентности и сахарного диабета 2 типа. В нашем исследовании было установлено, что в группе первородящих женщин в плазме крови присутствует отрицательная корреляционная связь между ИЛ-1 и ИМТ (r = - 0,53; р 0,01), тогда как в эндометрии между ИЛ-8 и ИМТ (r = - 0,53; р 0,01). Напротив, в группе повторнородящих женщин в плазме крови отсутствует какая-либо корреляция, но появляется отрицательная связь в эндометрии между ИЛ-1РА и ИМТ (r = - 0,53; р 0,02).
Таким образом, у первородящих женщин наблюдается отчетливая отрицательная связь между провоспалительными цитокинами плазмы крови и индексом массы тела, тогда как у повторнородящих женщин уже наблюдается отрицательная связь между противовоспалительным цитокином эндометрия и ИМТ.
Уровень глюкозы, инсулина в плазме крови и HOMA-IR у женщин в зависимости от состояния микрофлоры
При исследовании концентрации глюкозы, инсулина, HOMA-IR и со-матометрических показателей у женщин с различным микробиологическим фоном репродуктивного тракта статистически значимых отличий не было выявлено. Можно предположить, что на данные показатели микробиологический пейзаж не оказывает явного влияния (табл.5.2).
На протяжении всей беременности происходят активные изменения в жировой ткани. В ней синтезируются различные адипокины, которые активно участвуют в метаболических процессах. Такие адипокины, как адипонек-тин и резистин, участвуют в процессах регуляции энергетического гомеоста-за и сенсетивности тканей к инсулину. Так адипонектин повышает чувствительность тканей к инсулину и толерантность к глюкозе, уменьшает содержание липидов в клетках, оказывает противовоспалительное и антиатероген-ное действие. Резистин так же регулирует чувствительность клеток к инсулину. В опытах на мышах резистин описывался как связующее вещество между ожирением и инсулинорезистентностью.
Согласно результатам нашего исследования уровень адипонектина плазмы крови между группами перво – и повторнородящих женщин не имел значимых отличий. При этом, концентрация адипонектина в группе первородящих женщин снижалась в 1,5 раза (р 0,008), а повторнородящих – в 1,6 раза в сравнении с контрольной группой (небеременные) женщин (р 0,001). Вместе с тем, отношение адипонектина к резистину в группе перородящих снижалось в 7,8 раз, а у повторнородящих в 8,8 раз.
Наряду с этим, показатели резистина плазмы крови у беременных увеличивались. В группе первородящих уровень резистина увеличивался в 6,2 раза (р 0,000006), а у повторнородящих в 5,3 раза (р 0,000002) по сравнению с контрольной группой (табл. 5.3).
В группе небеременных выявляется умеренная отрицательная корреляционная связь между уровнем адипонектина и весом женщин (r = - 0,76; р 0,009). Вместе с тем, концентрация резистина не имела достоверных корреляционных связей ни с одним из рассматриваемых показателей для группы небеременных.
Уровни резистина и адипонектина в крови первородящих женщин не имеют достоверных корреляционных зависимостей с другими исследуемыми показателями. Но вместе с тем, отмечена положительная корреляционная связь между резистином и ИЛ-1РА плазмы крови (r = 0,51; р 0,02), а так же между резистином и ИЛ-8 (r = 0,50; р 0,02). При этом во II группе женщин отмечена корреляция между адипонектином и ростом (r = 0,58; р 0,006), резистином и ИЛ-1РА (r = 0,48; р 0,03).
Примечание: - различия статистически значимы в сравнении и с первородящими, и с повторнородящими женщинами; Таким образом, при сравнительной оценке беременных, мы видим, что происходит снижение концентрации адипонектина, но повышение резистина относительно небеременных женщин. Что является вариантом физиологической нормы для беременных. Изменения инсулинорезистентности и эндокринологической активности жировой ткани, обеспечивает развитие комплекса адаптивных программ для жизнедеятельности и фетоплацентарной системы, и организма матери. Повышение инсулинорезистентности организма матери необходимо для мобилизации энергетических субстратов для полноценного развития плода. Центральную роль в данных изменениях играет адипо-кинпродуцирующая функция жировой ткани.
Существует предположение, что увеличение массы тела способствует-развитию воспаления в метаболически активных тканях (жировой ткани). Цитокины активируют воспалительные механизмы в жировой ткани, что приводит к формированию инсулинорезистентности [95]. В свою очередь, воспаление в жировой ткани может зависеть от взаимодействия организма с синантропной флорой и бактериальными продуктами, такими как ЛПС и бактериальные липопептиды, которые могут достигать адипоцитов и активировать TLR [133]. Недавно Cani с соавторами провел исследование, в котором показал, что воспаление, индуцированное эндотоксинемией, может вызывать ожирение, резистентность к инсулину и нарушение толерантности к глюкозе [85]. Они обнаружили, что эндотоксемия вызывает 35%-ное снижение системной чувствительности к инсулину, в сочетании с подавлением в жировой ткани экспрессии рецептора инсулина-1, не затрагивая функцию -клеток поджелудочной железы и значительно повышая экспрессию системных провоспалительных цитокинов и адипокинов [27,47].
В группах беременных были выявлены множественные корреляционные связи адипокинов не только с про- и противовоспалительными цитоки-нами, но и с факторами мукозального барьера.
В общей группе женщин с ростом лактобацилл уровень адипонектина плазмы крови отрицательно коррелирует с ИЛ-8 плазмы крови (r = - 0,63; р 0,02), а резистин – положительно с ИЛ-6 (r = 0,64; р 0,02). Вместе с тем, в общей группе женщин с отсутствием роста лактобацилл в репродуктивном тракте адипонектин положительно коррелирует с ИЛ-1 эндометрия (r = 0,66; р 0,07), а резистин - с ФНО эндометрия (r = 0,49; р 0,03), а также с ИЛ-8 плазмы крови (r = 0,55; р 0,008) и ФНО плазмы крови (r = 0,60; р 0,003).
В группе первородящих женщин с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте выявляется сильная обратная корреляция между уровнем адипо-нектина и ФНО плазмы крови (r = - 0,82; р 0,08), тогда как уровень резистина положительно коррелирует с ИЛ-8 плазмы крови (r = 0,90; р 0,03). Вместе с тем, в группе женщин с отсутствием роста лактобацилл отмечается прямая корреляция между уровнем резистина и ФНО плазмы крови (r = 0,75; р 0,01).
У повторнородящих женщин с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте, в плазме крови выявлена умеренная положительная корреляционная связь между концентрацией резистина и ИЛ-6 (r = 0,77; р 0,04). Напротив, в группе женщин с отсутствием роста лактобацилл резистин коррелирует с ИЛ-8 (r = 0,70; р 0,01) и ИЛ-1РА (r = 0,69; р 0,01) плазмы крови. В этой же группе отмечается взаимосвязь между уровнем резистина и трефоиловым пептидом -3 эндометрия (r = 0,56; р 0,07).Также наблюдается связь между адипонектином и ИЛ-1 эндометрия (r = 0,66; р 0,07); резистином и ФНО эндометрия (r = 0,62; р 0,09).
При исследовании концентрации продуктов метаболизма коллагена I типа у беременных не было выявлено статистически значимых отличий между группами перво-и повторнородящих женщин. При этом уровень CrossLaps первородящих женщин увеличивался в 2,8 раза (р 0,00005), а у повторнородящих - в 2,7 раза (р 0,00003) в сравнении с контрольной группой. В отношении уровняCiCP у первородящих была отмечена тенденция к увеличению (р 0,07), а у повторонородящих статистически значимо увеличивалась концентрация CiCPв 1,3 раза (р 0,05) относительно контрольной группы.
В группе первородящих женщин отмечены корреляционные связи между CrossLaps плазмы крови и ИЛ-1 эндометрия (r=0,48; р 0,03); CrossLaps плазмы крови и TFF-3 эндометрия (r=0,49; р 0,02). Отмечена положительная корреляция между CiCP плазмы крови и ИЛ-6 эндометрия (r=0,54; р 0,01).
