Введение к работе
Актуальность проблемы
Выраженное влияние частоты бесплодных браков на демографическую ситуацию в популяции имеет важное социальное значение.
До сих пор остаются малоразработанными и спорными вопросы этиологии, патогенеза, а также выбор наиболее эффективных схем лечения различных форм бесплодия.
В структуре гинекологических нозологии воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) занимают первое место, в 60% случаев причиной ВЗОМТ являются инфекции, передаваемые половым путем [А. Л. Тихомиров, С. И. Сарса-ния, 2004]. Н.С. Wiesenfeld [2002] установил прямую зависимость частоты бесплодия от количества перенесенных в прошлом обострений воспалительных заболеваний половых органов.
Уменьшение овариального запаса может быть важным фактором, когда никакое другое очевидное объяснение происхождения бесплодия не найдено [Use A.J. van Rooij, Frank J.M. Broekmans et aL, 2006; Г.И. Табеева, JI.A. Марченко, 2009]. Установлено, что высокой точностью определения овариального резерва обладают методы, основанные на определении уровня различных пептидов, вырабатываемых в яичнике (ингибин-А и ингибин-В, активин-А, антимюллеровый гормон). Прикладные методы оценки овариального резерва, применяемые для установления риска развития бесплодия, не имеют до настоящего времени объяснения причин этого явления и роли в его патогенезе ингибинов, в частности, ннги-бина-А.
В настоящее время ряд исследователей [A. Bukman, М. J. Heine man, 2004] пришли к выводу, что даже наличие достаточных уровней ингибина-А в крови не всегда гарант успеха при лечении бесплодия. Вероятно, это связано с наличием у пациентов биохимических факторов воспаления (цитокинов,
острофазовых белков - БОФ), вызывающих снижение биологической активности ингибина-А. Выяснить этот механизм мы и попытались в нашем исследовании.
Цель исследования
Установить характер изменения уровня ингибина-А и факторов воспаления (цитокинов, БОФ) в сыворотке крови и их взаимосвязь с развитием бесплодия у женщин, страдающих хроническим трихомониазом.
Задачи исследования
-
Разработать способ выделения и очистки ингибина-А.
-
Определить уровень ингибина-А в сыворотке крови женщин, страдающих хроническим трихомониазом.
-
Оценить продукцию интерферона-гамма (IFNy), интерлей-кина-1бета (IL-lp), интерлейкина-8 (IL-8), интерлейкина-10 (IL-10) мононуклеарами периферической крови, и определить уровень БОФ (С-реактивного белка (СРБ), лактоферрина (ЛФ), фибриногена (ФГ), альфа-2-макроглобулина (МГ)) в сыворотке крови женщин, страдающих хроническим трихомониазом.
-
Оценить влияние маркеров воспаления на функциональную активность ингибина-А.
-
Разработать прогностические критерии развития бесплодия у женщин, перенесших трихомониаз, на основании исследования молекулярных маркеров, для улучшения диагностики и тактики лечения.
Научная новизна
1. Впервые по результатам комплексного исследования ин-терлейкинов и БОФ показано, что только уровни СРБ и ЛФ достоверно различаются в группах женщин с развившимся бесплодием и неосложнеиного бесплодием трихомониаза.
-
Показано значение уровней СРБ и ЛФ для прогноза развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, пере несших трихомониаз.
-
Впервые дана характеристика способности молекулы ЛФ образовывать межмолекулярные комплексы с ингибином-А и снижать функциональную активность ингибина-А в биологических тестах.
4.'Впервые разработан способ выделения и очистки ингибина-А, основанный на бутанольной экстракции, преципитации сульфатом аммония и аффинной хроматографии на иммобилизованном лектине клещевины
Научно-практическая значимость работы
Разработана система комплексной лабораторной оценки овариального резерва, основанная на определении уровней ингибина-А и биохимических факторов воспаления (СРБ и ЛФ) у женщин, страдающих хроническим; трихомониаз ом, показана прогностическая роль этих факторов в развитии бесплодия.
Разработан способ выделения и очистки ингибина-А.
Разработаны прогностические критерии развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, перенесших трихомониаз, и выведено уравнение прогностической вероятности развития бесплодия.
Основные положения, выносимые на защиту
-
У женщин, страдающих хроническим трихом ониазом, отмечена высокая вариабельность уровня ингибина-А в сыворотке крови: от 4,3 нг/л до 29,4 нг/л. Вторичное бесплодие развилось на фоне пониженного уровня ингибина-А в 63,2% случаев, а на фоне нормального уровня ингибина-А у 12,9% пациенток.
-
Исследование продукции IFNy, IL-ip, IL-8, IL-10 мононук-леарами периферической крови у женщин, больных трихомо-
ниазом, показало преимущественное формирование иммунного ответа по типу Th-2.
-
Показано, что только уровни С-реактивного белка (СРБ) и лактоферрина (ЛФ) достоверно отличаются в группах женщин с развившимся впоследствии бесплодием и неосложнен-ного бесплодием трихомониаза.
-
Дана характеристика способности молекулы ЛФ образовывать межмолекулярные комплексы с ингибином-А и снижать функциональную активность ингибина-А в биологических тестах.
-
Показано значение уровней ЛФ и СРБ для прогноза развития бесплодия при нормальном уровне ингибина-А у женщин, перенесших трихомониаз.
-
Разработан способ выделения и очистки ингибина-А, основанный на бутанольной экстракции, преципитации сульфатом аммония и аффинной хроматографии на иммобилизованном лектине клещевины.
Апробация работы и публикации
Материалы, вошедшие в диссертационную работу, ее основные положения были представлены и обсуждены на: Международном Междисциплинарном научно-практическом Семинаре и Научном Дискуссионном Клубе «IW+SDC07» «Новые Технологии в Интегративной Медицине и Биологии» (2007г., Паттайя - Бангкок, Таиланд); II съезде физиологов СНГ (2008г., г. Кишинэу, Молдова); Объединенном иммунологическом форуме (2008г., г. Санкт-Петербург); Международной конференции «Физиология и патология иммунной системы» (2008г., г. Москва); VIII Межрегиональной научно-практической конференции «Лекарство и здоровье человека» (2009г., г. Астрахань).
В соавторстве с д.м.н., профессором А.А. Николаевым, д.м.н. О.В. Бойко, д.м.н. Д.Л. Луцким, д.м.н. А.В. Бойко и к.б.н. М.В. Плосконос получен Патент на изобретение «Пита-
тельная двухфазная среда для выделения трихомонад» (Патент № 2272834 от 27 марта 2006г.).
В соавторстве с д.м.а, профессором А.А. Николаевым, подана заявка на изобретение «Способ получения и очистки ин-гибина-А человека», о чем получено положительное решение о выдаче патента от 17.06.2011г. (заявка №2009149599 (073251) от 30.12.2009г.).
Работа прошла апробацию на межкафедральной конференции с участием кафедр общей и биоорганической химии, фармацевтической химии, биохимии, нормальной физиологии, патологической физиологии, микробиологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России; кафедры молекулярной биологии, генетики и биохимии ГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет».
По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 статьи в центральной медицинской печати, рекомендованной Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации.
Объем и структура диссертации
