Введение к работе
Актуальность работы определяется рядом фактов, которые позволяют сформулировать некоторые положения: 1. Ведущая причина смертности в мире, в том числе и в России - заболевания сердечно-сосудистой системы [Е.И.Чазов, 2008; G.Y.Lip, C.Weber, 2011], при которых непосредственной причиной смерти нередко являются тромбозы, обусловленные атеросклеротическими изменениями сосудистой стенки, при этом активируются тромбоциты, запуская каскад биохимических реакций, ведущих к образованию тромбоцитарной пробки и к формированию фибриновой сети [Д.М.Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2008; Б.И.Кузник, 2010; K.Tanaka е.а., 2008]. Столь же опасны и кровотечения, которые сопровождают не только травмы и хирургические вмешательства, но нередко и роды [А.Д.Макацария и др., 2011]. При этом часто (70-80%) кровоточивость обусловливается недостаточностью тромбоцитарного звена системы гемостаза [А.С.Шити-кова, 2008]. 2. Не всегда оценку гемокоагуляции сопровождает адекватный контроль тромбоцитарного звена [И.Е.Попова, 1999; W.J.Chen, S.L.Yeh; 2003], хотя через тромбоциты в значительной мере реализуется влияние ЛПО на гемостаз [А.Ш.Бышевский и др., 1994, 2006; 2009, 2010, 2011; В.В.Юдин, 2002; С.Л.Галян и др., 2003, 2010; Р.Г.Алборов, 2006]. 3. Наклонность к гипер- или к гипокоагуляции во многом определяется изменением интенсивности взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) [З.С.Баркаган, 1998; И.Н.Бокарев, 2002; M.Levi, 2004; H.M.Spronk, 2003], так как его скорость, а, следовательно, и скорость непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) может рассматриваться как мера напряжения в системе гемостаза [А.П.Момот, 1990; З.С.Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000; В.Ф.Киричук и др., 2002; H.M.Spronk, 2003]. 4. Интерес к оценке НВСК, протекающего в условиях физиологической нормы с малой интенсивностью [Д.М.Зубаиров, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2003, 2006], тем и обусловлен, что при экстремальных воздействиях сдвиги уровня маркеров НВСК отражают наклонность к гипер- или гипокоагуляции [И.Н.Бокарев, 2002; М.К.Умут-баева, 2005; А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др., 2008; O.Segers е.а., 2010]. 5. Единичными работами показано, что сдвиги НВСК, обусловливаемые экзогенной ги-пертромбинемлей, сопряжены с толерантностью к тромбину (ТкТР) [И.Н.Бокарев, 2002; В.П.Балуда, 1995; Р.Г.Алборов, 2006; А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др., 2008; А.Ш.Бышевский, И.А.Карпова и др., 2011], однако неизвестно, как соотносятся уровень маркеров ВТФ и ТкТР с коагуляционной активностью тромбоцитов. Кроме того, важно установить, является ли связь гипертромбинемии с ТкТР закономерной, независящей от причины, вызывающей рост уровня тромбина в кровотоке. 6. Определение уровня маркеров НВСК в плазме и коагулоактивности тромбоцитов у больного вполне доступно, тогда как определение ТкТР возможно лишь в экспериментах на животных, которые основаны на оценке частоты выживания после внутривенного введения тромбина или на оценке степени сдвигов активности прокоагулянтов или уровня фибриногена. Разумеется, эти способы неприем-
лемы для клиники, так как введение даже следовых количеств тромбина в кровоток недопустимо в связи с его способностью аутокаталитически ускорять тромби-нообразование [Д.М.Зубаиров, 1978, 2000; А.Ш.Бышевский и др. 1986, 1993; А.С.Шитикова, 2000: Л.П.Папаян, 2003]. Вместе с тем, ТкТР - один из важнейших интегральных показателей, характеризующих систему гемостаза.
Всё это и определило необходимость установить возможность оценки ТкТР не-инвазнвным, косвенным и доступным использованию в клинике приемом.
Цель исследования. Охарактеризовать при разнообразных воздействиях, изменяющих тромбинообразование, зависимость между коагулоактивностью тромбоцитов, плазменным уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и способностью организма противостоять гипертромбинемии с тем, чтобы оценить возможность контроля в клинике толерантности к тромбину по уровню в плазме крови продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген, т.е. маркеров НВСК.
Задач» исследования. 1. Изучить сдвиги коагулоактивности тромбоцитов и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови при воздействиях, уменьшающих эти величины. 2. Изучить те же сдвиги при воздействиях, повышающих коагулоактивность тромбоцитов и уровень маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови. 3. Использовать при выполнении задач, сформулированных в пп. 1 и 2, воздействия, отличающиеся по механизму, длительности и интенсивности, следовательно, и по характеру влияния на организм (в частности, на гемостаз) - это позволит выявить, насколько закономерны соотношения между коагулоактивностью тромбоцитов, плазменным уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и сдвигами толерантности к тромбину. 4. Подвергнуть анализу взаимосвязи всех полученных переменных, оценить ранговую корреляцию их сочетаний по два, определяя величины, характеризующие наличие и тесноту ассоциативных связей (г5), оценить связи переменных, устанавливая корректность усреднения по величине коэффициентов аппроксимации. 5. Повторить эксперимент по изучению гемокоагуляции в условиях гипер- и гипокоагулемии с тем, чтобы сопоставить сдвиги толерантности к тромбину, оцениваемой использованным нами методом, и методом, основанным на определении частоты выживания животных после внутривенного введения тромбина в DL5»'..
Научная новизна.
Впервые выявлено существование тесной положительной и близкой к линейной ассоциативной связи между показателями НВСК и показателями коагулоактивности тромбоцитов.
Впервые экспериментально выявлено наличие отрицательной ассоциации между коагулоактивностью тромбоцитов и интенсивностью НВСК с одной стороны, и толерантностью к тромбину - с другой.
Экспериментально показано, что результаты определения ТкТР инвазнвным методом (по частоте выживания или гибели животных после внутривенного введения
DLsor. тромбина) близки к данным, полученным при оценке ТкТР неинвазивным методом (по степени сдвигов коагулоактивности тромбоцитов или маркеров НВСК).
Впервые выдвинуто экспериментально обоснованное предположение, согласно которому судить о толерантности пациента к тромбину можно по уровню в кровотоке продуктов ВТФ (т.е. маркеров НВСК), или по активности тромбоцитов.
Теоретическая и практическая значимость
Опытным путем показано, что оценивать толерантность организма к тромбину можно по уровню маркеров НВСК или по коагулоактивности тромбоцитов, что позволяет судить о ТкТР неинвазивным приемом. Ранее с этой целью определяли частоту выживания животных после введения токсической дозы тромбина или оценивали у них степень сдвигов активности некоторых прокоагулянтов. Такие приемы не могут использоваться в клинической практике, т.к. введение даже следовых количеств тромбина в кровоток исключается, в связи с его способностью аутокаталитически ускорять тромбинообразование [А.Ш.Бышевский, 1984, А.Ш.Бышевский и др. 1986; А.Ш.Бышевский, Д.М.Зубаиров и др., 1993; Д.М.Зубаиров, 1989, 2000; А.С.Шитикова, 2000; Л.П.Папаян, 2003].
Апробация и публикация. Основные положения диссертации доложены на 42-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2008); на Ш научной международной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2008); на Российской конференции, посвященной 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009); на 43-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2009); на III Международной научно-практической конференции «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2010); на конгрессе «Человек и лекарство. Урал-2010» (Тюмень, 2010); на 44-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2010) на 5-й Всероссийской конференции «Клиническая гемостазиоло-гия и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, НЦССХ им. А.Н.Бакулева, Научное общество «Клиническая гемостазиология», 2011); на 45-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2011); заседании Тюменского регионального отделения РАЕ (2010, 2011), на совместном заседании кафедр биохимии, физиологии и общей гигиены с курсом экологии ТюмГМА (2011).
По материалам диссертации имеется 18 публикаций: 4 из них - в журналах, рекомендованных ВАК для публикаций диссертационных материалов, 3 - в материалах Российских конференций с международным участием и 2 главы в монографии.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, включает «Введение», «Обзор литературы», разделы «Материалы и методы исследований», «Обсуждение полученных данных», «Выводы», «Практические рекомендации» и «Литература» (436 источников, из них 206 зарубежных).
Положения, выносимые на зашиту
-
Разнообразные по природе и механизму воздействия (введение 2-кратного избытка витаминов А, Е, В5 и В12, введение тироксина, мерказолила, адреналина, тромбопластина, гепарина, смена сезонов) сопровождаются изменением интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови.
-
Сдвигам интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, вызываемым этими воздействиями, неизменно сопутствуют сдвиги показателей коагулоактивности тромбоцитов, характеризующие их способность к реакции высвобождения, к спонтанной и АДФ-индуцируемой агрегации и общую коагулоактивность.
-
Воздействие факторов, приводящих к ускорению внутрисосудистого свертывания крови, сопровождается увеличением коагулоактивности тромбоцитов, а воздействие факторов, замедляющих внутрисосудистое свертывание крови, протекает со снижением коагулоактивности тромбоцитов.
-
Независимо от вида воздействия (из числа перечисленных в п. 1), его интенсивности и продолжительности постоянно выявляется тесная положительная линейная ассоциация между показателями интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и показателями коагулоактивности тромбоцитов.
-
Независимо от вида воздействия, его интенсивности и продолжительности связь между показателями коагулоактивности тромбоцитов, а также уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантностью к тромбину оказывается тесной отрицательной.
-
Результаты определения у животных толерантности к тромбину инвазивным методом (по частоте выживания животных после внутривенного введения тромбина в DL5o%) близки к данным, полученным при оценке толерантности к тромбину методом, основанным на оценке степени сдвигов коагулоактивности тромбоцитов или маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови.
-
Судить о толерантности к тромбину можно по уровню в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген, т.е. маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, или по коагулоактивности тромбоцитов.
