Введение к работе
Актуальность темн.По современным представлениям процесе» тормоіения її возбуждения, протекавшие в коре и подкорковых центрах головного мозга, передача нервных импульсов, состояние тонуса кровеносных сосудов, рост н деление клеток, а такіе проницаемость биологических мембран-в значительной степени.обусловлены активностьв протекания окислительного дезаминирования биогенных аминов, катализируемого, аниноксидазами (АО), ныинокендазы выполняет регуляторные Функции в процессах биосинтеза аминов и их обратного превращения в резервные формы, при свободно радикальном окислении липидов. АО относится к клвчевым ферментам, нарушение функции которых ведет к растрояствц обмена веществ при патологических СОСТОЯНИЯХ.
К числу АО относятся, наряду с меыбраносвязанными флавиновыми моноаминоксидазами (МАО), растворииые медьсодврт жащие диаыиноксидазы (ДАО), а такіе аииноксидазн крови и микроорганизмов.
Внимание исследователей к этим ферментам все более возрастает, что объясняется важностью предполагаемых их Функций в организме. Изучение природы аминоксидаэ и способов активного воздействия на их функции при помочи ингибиторов особенно вахно для разработки методов лечения разнообразных заболеваний. Поиск новых высокоспецифичннх ингибиторов аыиноксидаз, обладающих высокой активностьв, но малотоксичных для организма актуален для клинической медицины. Среди таких ингибиторов, обладающих вироким спектром биологического действия и yie применяемых в ,медицине в качестве лекарственных препаратов * особое внимание исследова-
- 4 -телей привлекает изатин, являвшийся нативным ингибитором мо-ноаминоксидази.
В последнее время появилось новое направление в использовании МАО. Ноноаыиноксидазныв препараты применяют для хииического. клинического и токсикологического анализа. На основе велатнновых мембран, содервацих МАО, создан ферментный электрод.
Работа выполнялась в соответствии с 1. Общесоюзной программой "Биохимия животных и человека" - шифр 2.28.4.3 4981-1990 г.г.]; 2. Планом НИР ИЭФБ АН СССР " Исследования меди-аторных систем фармакологическими и биохимическими методами" [ номер гос. регистрации О187.О06ЇО??].
Цель я задачи исследования ..Целью настоящей диссертации является изучение свойств нового аминоксидазноґо препарата из бактерий нтамма Methanosarclna barker1 27, сравнение его свойств с наиболее полно изученной моноаминокси-сидазой - ноноаминоксидазой митохондрий печени свиньи.
В ходе дальнейшей работы через ЙО мы обозначаем фермент, выделенный из бактерий нтамма Methanosarclna barkerl 27, через МАО - фермент, выделенный из митохондрий печени свиньи.
Для реализации поставленной цели в работе реиены следующие задачи:
разработан метод выделения Фермента из бактерий втамыа Methanosarclna barkerl 27;
изучена субстратная специфичность нового аминоксидазноґо препарата и МАО различных степеней очистки;
разработан метод иммобилизации высокомолекулярной фракции МАО печени свиньи;
изучено влияние новых ингибиторов изатинового ряда на МАО и АО;
изучено действие на активность 1JA0 и АО сульфид-ионов и разработан ферментный метод определения их концентрации в физических средах.
Надчнаа новизна.Впервые выделена и изучена амин-оксидаза из бактерий итамиа Methanosarclna Ьагкегі 27, взятого из коллекции Института никробиологии им.А.Кирхенштейна
- 5 -АН Латвийской Республики.
Впервые получен иммобилизованный препарат очищенной высокомолекулярной моноаминоксидазы, изучены его кинетические характеристики с различными субстратами.
Впервые изучено влияние новых производных изатина, содержащих ацетильные и мегнльние группы у гетероциклического атома азота, ацетил- и алкилзамещеннуп оксиминогруппу во этором положении, а также соответствующих производных бензизатинов на ферментные препараты МАО и АО. Установлено, что ингибирующая активность исследованных соединений зависит от химической структуры ингибитора и от степени очистки фермента.
Практическая значимость.!.Разработан эффективный и простой способ выделения ЙО из нового источника. 2.« Получены ИАО-содержацие мембраны, пригодные для создания биологических сенсоров, в том числе и ферментных электродов. 3; Разработан метод определения концентрации сульфид-ионов в различных биологических средах.
Апробация работы.Результаты исследований были доложены на конференции " Методы получения, анализа и применения ферментов" „(Рига, 1S90); на " Второй Всесоюзной конфе-фереиции по анализу неорганических газов С Ленинград, 1990); на Международной конференции " Сенсор/ Техно-93" ( Санкт-Петербург. 1993 г.).
Структура и объем диссертации.Диссертация изложена на страницах маиинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, закличения. выводов и списка использованной литературы. Диссертация содержит Ю* страниц , 15 рисунков. 12 таблиц и библиографию из 156 работ.
