Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В связи с существованием в мире природных очагов туляремии проблема ее, специфической профилактики остается на сегодняшний день достаточно актуальной.
Основным достижением в профилактике - туляремии, несомненно, является создание живой туляремийной вакцины (ЖГВ), применение которой позволило снизить 'заболеваемость этой инфекцией до состояния спорадических їли мелкогрупповых вспышек. Вкисте с тем, как и всякая живая вакцина, КТО имеет определенные недостатки, важнейшим из которых является введение человеку чужеродной генетической информации.
Одним из наиболее перспективных направлений в области совершенствования и разработки различных способов эффективной защиты от возбудителя туляремии является создание нового поколения вакцинных препаратов на основе протективных антигенов.
Однако отсутствие исчерпывавших сведений о важнейших антигенах Franoisella tularensls является одной из основных причин, сдерживающих исследования в этом направлении. До настоящего времени остается дискуссионным вопрос о протективном компоненте микроба и природе защитного иммунитета при туляремии.
К числу наиболее изученных - антигенов внешней мембраны (ВМ) P.tularensls относятся мембранные белки, привлекавшие внимание исследователей в связи с их ведущей рольв в формировании Г-клеточного иммунитета [Sandstrom. 1987; SJosted, 1989. 1990; Suroel, 1989. 1990; TarnviJc, 1989J. При этом пока не обнаружено существенных различий в- спектре мембранных белков между аеарктическими и голарктическими штаммами, включая вакцинные и их авирулентные бескэпсульные варианты, : что затрудняет объяснение формирования иммунитета при туляремии только проявлением свойств' зелков, входящих в состав ВМ (Sandstrom.1988; Родионова,1589.1990J.
Особое значение в иммуногенезе туляремии. занимает иипополисахарид (ЛПС), очищенные препараты которого не обладают зараженными токсическими и протективными свойствами, характерными мя эндотоксинов многих грамотрицателышх бактерий. В то «е время іменно между липополисахаридами из вирулентных S- и авирулентнш 1-культур у.tularensls имеются существенные структурные отличия 'Хлебников,1990,1991]. н-ЛПС не имеет б-специфических юлисахаридных цепей и его молекулы состоят только из липида А и
коровых Сахаров.
В связи с вышеизложенным, исследования ЛПС, белков и ЛПС-белковых коиплесоз (ЛПБК) внешних мембран P.tularensis являются одним из основных подходов к пониманию природы протектквного туляремкйного антигена и механизмов формирования защитного иммунитета.
ЦЕЛЬЮ РАБОТЫ является изучение физико-химических свойств и иммунологической активности ЛПС-бедковъпс комплексов внешней мембраны возбудителя туляремии.
I.Получить препараты внешних мембран и оценить их протективную
активность.
2.Виделить ЛПС-белковые комплексы из внешних мембран и исследовать т физико-химические и протектавные свойства. .
3.Получить и охарактеризовать очищенные препараты основных белков и ЛПС из внешних мембран.
4.Сконструировать ЛПС-белковые комплексы из очищенных индивидуальных мембранных белков и лкпополисахарида.
5.Оценить протективкые свойства сконструированных ЛПС-белковых комплексов.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. . Впервые на молекулярном уровне экспериментально показано, что ведувдй протективньй антиген туляремийного микроба представляет собой липополисахаридобелковьй комплекс, белковая часть которого состоит из основных мембранных белков с молекулярной массой (м.м.) 17-19 кД. Причем для проявления защитного эффекта оптимальное соотношение ЛПС и белка в комплексе должно составлять 1:1,
Впервые выделены и изучены основные свойства природного белка 17 кД F.tularensis.
Показано, htv иммунизация очищенными препаратами ЛПС и мембранных белков (17 кЛ и 63 кД) каждым в отдельности не обеспечивает защиту мышей от гибели при , заражении вирулентным штаммом F.tularensis. Препараты ВМ. ЛПС-белковые комплексы, выделенные из внешней мембраны.или сконструированные из препаратоз ЛПС вирулентного штамма и мембранного белка 17 кД из авирулентаого R-варианта вакцинного штамма, обладают протективными свойствами при
экспериментальной туляремии.
Предлокен простой способ выделения ЛПС-белковых комплексов из внешних мембран путем их солюбилизации дезоксихолатон натрия и фракционированием нэ сефакриле S-200.
Препараты ВМ, полученные как из вирулентного, так и из вакцинного штаммов, способны защищать 60-100 морских свинок, зараженных вирулентным штаммом 503 в дозе 1000 живых микробных
КЛеТОК (Я.М.К.).
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Полученные в результате работы сведения о природе протектизного антигена являются,обоснованием возможности создания туляремийных вакцин нового поколения., В соответствии с разработанными методами полумения препаратов - ЛПС-белковых комплексов из внешних мембран подготовлена инструкция по изготовлению и контролю молекулярной туляремийной вакцины, утвержденная директором Института иммунологии "10" декабря 1990г.
АПРОЕАШЯ РАБОТЫ И.ПУБЛИКАЦИИ.Материалы диссертации доложены и обсуждены на 20-ом Европейском биохимическом сьезде (FEES), август 1990г Будапешт, Венгрия; на П-ом Европейском иммунологическом сьезде, июнь 1991 Хельсинки, Финляндия; на Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы профилактики туляремии", ноябрь 1991г Симферополь; на традиционных екегодных конференциях Института иммунологии, 1986-1Э90г; на межлабораторном Семинаре Института иммунологии, апрель. "1994г. По теме диссертации опубликовано II печатных работ.
СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, главы, отражающей результаты собственных исследований по теме, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 133 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами и 20 рісунками. Библиографический указатель содержит 215 источіііжов, в том числе ?4 отечественных и 141 иностранных авторов.
Автор выражает благодарность и искреннюю признательность за плодотворное сотрудничество и полезные обсуждения своим коллегам. Материалы соавторам (указаны поименно в диссертации в соответствии с разделами работы) принадлежат поровну.
Г.ЛипополисахаридоОелковый комплекс, белковая часть которого состоит из основных мембранных Селков с молекулярной массой 17-19 кЛ, является ведущим протектизным антигеном туляремийного микроба.
2.Данные, характеризующие биохимические и иммунохимические свойства'внешних мембран, ЛПС-Оелковых комплексов и оелка 17 кД.
3.Иммунизация препаратами внешних мембран f.tuiarensis создает у морских свинок иммунитет, обеспечивающий, эффективную зашиту животных при заражении вирулентными штаммами голарктической разновидности.
