Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы.
1.1. О некоторых функционально-метаболических сдвигах при поражении печени . 10-14
1.2. Краткая характеристика нарушений энергетического обмена при поражении печени. 14-19
1.2.1. Острые поражения печени. 19-21
1.2.2. Хронические поражения печени. 21-25
1.2.3. О клиническом значении определения, активности некоторых ферментов энергетического обмена . 25-33
1.3. Способы коррекции функциональных нарушений печени при хроническом гепатите. 34-39
Глава 2. Материал и методы исследования. 40-46
Глава 3. Энергетические процессы в печени детей, больных хроническим гепатитом . 47-53
Глава 4. Активность ферментов энергетического обмена при гелиотриновых поражениях печени. 54-55
4.1. Острое гелиотриновое поражение печени. 55-58
4.2. Активность митохондриальных ферментов в процессе развития хронического гелиотринового поражения печени . 59-85
Глава 5. Влияние нвкогорых гормональных препаратов на структурно-функциональное состояние печени при хроническом экспериментальном гепатита 86
Обсуждение результатов 119
Выводы 130
Практические рекомендации 132
Литература 133
- О некоторых функционально-метаболических сдвигах при поражении печени
- О клиническом значении определения, активности некоторых ферментов энергетического обмена
- Энергетические процессы в печени детей, больных хроническим гепатитом
- Активность митохондриальных ферментов в процессе развития хронического гелиотринового поражения печени
Введение к работе
Целесообразность изучения хронических гепатитов в детском возрасте диктуется значительным распространением данной патологии, неблагоприятными исходами прогрессирующих форм заболевания.
По данным А.Ф.Блюгера (1975, 1980) удельный вес хронических гепатитов, из всех морфологически подтвержденных заболеваний печени достигает 44%. Подобная тенденция обнаружена как в целом по СССР, так и по отдельным регионам (Е.М.Тареев, 1978, А.Ф.Блюгер, 1978, Ю.М.Лопухин, 1978). На рост заболеваемости гепатитами и циррозом печени указывается в материалах ВОЗ (1974, 1983). В значительной мере, это связано с увеличением заболеваемости вирусным гепатитом, широким применением фосфорнооргани-ческих и галогенсодержащих соединений в качестве ядохимикатов в сельском хозяйстве, а также с наличием сорных растений в составе злаков. К их числу относится гелиотроп опушенноплодный (ffitiiotropium lasiocarpum ) широко распространенный в республиках Средней Азии и на юге РСФСР, содержащий гепатотоксические алкалоиды пирролизидинового ряда. Основным алкалоидом является гелиотрин, вызывающий поражения печени (Н.Х.Абдуллаев, 1978, Х.Я.Каримов, 1979, А.Н.Юлдашев, 1981).
Одной из актуальных, и в то же время недостаточно изученных проблем перехода острого патологического процесса в хронический, является проблема участия митохондрий в данном процессе. Крайне чувствительными к действию повреждающих агентов являются полиферментные ансамбли, обеспечивающие освобождение и аккумуляцию энергии, поскольку они являются структурными компонентами мембран и любое воздействие, приводящее к нарушению структуры мембран, будет приводить к нарушению процессов энергообеспечения клетки ( Santiago , 1969, De Duvg , 1980). Следует подчеркнуть, что современные представления о нарушении энерге-
-є ~
тических процессов в печени при хронических гепатитах характеризуются противоречиями. До сих пор остаются спорными вопросы о степени повреждения и значении тех или иных нарушений энергетического обмена в возникновении некротических проявлений. Для выявления механизмов развития хронических процессов важно установить не только место первичного повреждения, но и этап, начиная с которого нарушение функции клетки становится необратимым. В этом плане представляет интерес изучение состояния митохондрий, особенно в связи с появлением в зарубежной и отечественной литературе сведений о том, что необратимое повреждение печеночной клетки при воздействии гепатотропных агентов наступает с момента повреждения данных органелл - клеточных систем, генерирующих АТФ (А.Ф.Блюгер, и др.І973, Е.Ф.Лушников, 1974, N. Bageo , 1966, GsLiafoli Ernesto » 1980). Следует отметить, что при хроническом гелиотриновом гепатите многие исследования проводились в сравнительно поздние этапы развития патологического процесса и не дают полного представления о его начальных стадиях, что важно для установления целостной картины патогенеза. Все это указывает на важность изучения поведения мито-хондриальных ферментов в процессе формирования хронического гепатита. Установление начальных звеньев патологического процесса на молекулярном и субклеточном уровнях важно как для понимания сути процессов, которые лежат в основе повреждающего действия некрогенных агентов, так и для разработки средств и методов надежной терапии с целью защиты печеночной клетки от их повреждающего действия.
Исследованиями последних лет доказана возможность обратного развития хронического гепатита и цирроза печени, что легло в основу разработки методов стимуляции процессов регенера-
ции печени при гепатитах (Т.Г.Саркисов, 1970, Н.Х.Абдуллаев 1980, Biasy, 1979), При разработке методов коррекции функциональных сдвигов и стимуляции процессов регенерации патологически измененной печени необходимы исследования механизмов действия препаратов, способствующих развитию регенераторных процессов* В последние годы возрос интерес к изучению влияния гормонов на тканевую энергетику. Анаболические гормональные препараты (метиландростендиол) оказывают выраженное стимулирующее действие на белоксинтезирующую функцию печени* Применение их рекомендуется при патологических состояниях, сопровождающихся нарушением белковосинтетических процессов в организме. На угнетение их при хронических гепатитах указывали многие исследователи ( Robba
Livio et al,, 1978, Cha.tamra et al., 1981, Martini, 1982).
Однако, вопрос об их влиянии на систему энергообеспечения гепа-тоцитов у больных гепатитами изучен недостаточно. Нет однородных данных, характеризующих эволюцию метаболических сдвигов под влиянием глюкокортикоидов и анаболов при лечении хронических гепатитов.
Цель и задачи исследования. Основной целью исследования явилось изучение активности спектра митохондриальных и некоторых цитоплазматических ферментов в динамике развития хронического гепатита и в процессах регенерации и восстановления функции печени под влиянием некоторых гормональных препаратов.
Конкретные задачи исследования включали:
изучение динамики изменения активности некоторых ферментов ЦТК и уровня АТФ в крови детей, больных хроническим гепатитом,
определение активности ферментов и уровня АТФ при остром и хроническом экспериментальном токсическом гепатите в динамике
его развитая,
- исследование активности митохондриальных ферментов и содержания АТФ в печени экспериментальных животных с хроническим токсическим гепатитом при введении гормональных препаратов.
Научная новизна. В работе исследована активность митохондриальных ферментов в гепатоцитах при остром и хроническом гепатите в динамике его развития. Все основные результаты получены впервые и на современном методическом уровне.
Обнаружено, что изменение активности цитохромоксидазы (ЦО), Mot - зависимой АТФазы, сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в динамике развития хронического экспериментального гепатита сопровождается увеличением активности этих ферментов в цитозольной фракции, что свидетельствует о нарушении структурной целостности митохондриальных мембран.
Выявлено, что применение преднизолона и метиландростендио-ла для лечения животных с хроническим токсическим гепатитом оказывает нормализующий эффект на активность митохондриальных ферментов и содержание АТФ. Коррелирующее действие преднизолона проявляется раньше, но метиландростендиол оказывает более стабильное влияние на ферменты энергетического обмена.
Практическая ценность. На основании проведенных исследований делается вывод о необходимости учета состояния митохондри-альной системы гепатоцитов при поражениях печени. Для определения степени поражения печеночных клеток рекомендуется проводить определение активности СДГ, НАДФ- зависимой изоцитратдегидро-геназы (НАДФ-ИДГ), содержания АТФ в крови больных хроническим гепатитом.
Преднизолон и метиландростендиол, применяемые как стимуляторы регенерационных процессов, оказывают восстанавливающее
- 9 'i-
влияние на функциональное состояние митохондриальной ферментативной системы. Длительное применение преднизолона неэффективно в лечении хронического экспериментального гепатита, вызванного гелиотрином. В этих случаях весьма перспективно применение анаболических гормональных препаратов.
О некоторых функционально-метаболических сдвигах при поражении печени
Хронические гепатиты в силу их значительной распространенности, длительности течения, неблагоприятных последствий и недостаточной эффективности лечения вызывают возрастающий интерес к изучению интимных механизмов патологических процессов на уровне клеток, органелл, мембран. Изменение метаболизма в печени может возникнуть под влиянием различных этиологических факторов - инфекционного агента, поступления в организм гепатотокоинов. В пато-морфологической картине при токсическом гепатите с асцитом у людей обращает на себя внимание тяжелое поражение паренхимы печени с явлениями некроза центральных зон печеночных долек. Аналогичные изменения обнаружены в печени экспериментальных животных при отравлении гелиотрином (М.Н.Ханин, 1970, Н.Х.Абдуллаев, 1978, и др.). Следует отметить, что подобные токсические гепатиты могут возникать в результате отравления промышленными ядами: че-тыреххлористым углеродом, акрилонитрилом (А.Й.Арчаков, 1975, В.В.Иванов и др. 1982).
Вещества, обладающие выраженным гепатотоксическим действием, разнообразны. Для решения многих вопросов, возникающих в клинике, использовались различные экспериментальные модели. Среди НИХ - Отравление ДИНИТрофвНОЛОМ ( Шшае Chr. Remmer 1965), гелиотрином (М.Н.Ханин, 1970, Н.Х.Абдуллаев, 1976, Х.Я.Каримов, 1979), аллиловым спиртом (А.Я.Майоре, М.А.Болотова и др. 1975), /- галактозамином (А.Ф.Блюгер, 1978, Funatzu, 1978) и др.
Воздействуя на живой организм различными по своей химической природе токсическими соединениями, можно вызвать однотипные по своим проявлениям процессы некроза печеночных клеток (Н.Х.Абдуллаев, 1978, Х.Я.Каримов, 1979).
Многие исследователи с различных точек зрения стремились дать теоретическое и экспериментальное объяснение механизма гибели печеночной паренхимы при воздействии гепатотокоинов, однако до настоящего времени патогенез некроза гепатоцитов остается неясным. Между тем, именно некроз лежиш в основе необратимых нарушений функций печени, печеночной недостаточности с последующим развитием цирротических изменений.
Sherlock (1982) выделяет три вида повреждения гепатоцитов: прямое, холестатическое и иммунологическое. Прямое повреждение характеризуется, в основном, изменениями митохондрий, некрозами в центральной зоне, как правило, жировой дегенерацией. Иммунологические повреждения характеризуются на уровне мембран гепатоцитов, при холестатическом повреждении наблюдаются нарушения механизма секреции желчи внутри гепатоцитов.
Имеется значительное число исследований (Н.Х.Абдуллаев и др. 1978, М.К.Иргашев, 1979), показывающих, что при действии гепатотоксических агентов на организм развивается гипоксия печеночной ткани, обусловленная как нарушением внутрипеченочной циркуляции крови, так и угнетением активности внутриклеточных ферментов, то есть гипоксия носит смешанный характер. Так, Х.Я.Каримов (1979) термоэлектрическим методом на животных установил, что при интоксикации различными гепатотоксическими агентами (четырехзюристый углерод, гелиотрин, тиоацетамид) обнаруживаются изменения объемной скорости кровотока как в печеночной артерии, так и в воротной вене; отмечается понижение артериального и повышение венозного давления. На основании вышеизложенных данных можно заключить, что при острых и хронических поражениях печени наблюдается изменение сосудистой системы и нарушение шнутрипеченочного кровообращения.
Изменение показателей углеводного обмена при токсических поражениях печени свидетельствует о раннем нарушении этого вида обмена. Абдуллаев (1972) считает, что при дистрофических изменениях печени происходит нарушение процессов синтеза и расщепления гликогена в ней. По данным ifeytbaler» Euimiein (Цит. по Абдуллаеву, 1978), для возникновения спонтанной гипогликемии необходима гибель более чем 8С$ паренхимы, при этом уровень сахара в крови может резко изменяться. По всей вероятности, в уменьшении содержания гликогена в печени большое значение имеет развивающаяся гипоксия печеночной ткани, в результате уменьшается синтез АТФ, снижается содержание НАДН и НАДФН и др. Существенное изменение наблюдается и в содержании промежуточных продуктов обмена углеводов - пировиноградной и молочной кислот в крови (Манкус, 1975).
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что токсические поражения печени сопровождаются изменением метаболизма углеводов, заключающегося в снижении содержания гликогена печени, изменением концентрации сахара и продуктов гликолиза в крови, а также изменением активности ферментов и коферментов, участвующих в углеводном обмене.
Ряд работ посвещен изучению состояния липидного обмена при гелиотропной интоксикации, что обусловлено, прежде всего, развитием жировой инфильтрации органов - одной из самых распространенных его ответных реакций на действие гепатотоксических веществ. Так, Пулатова (1972), Абдуллаев (1978) установили, что при воздействии на организм гелиотрина наблюдается накопление липидов в печени, содержание триглицеридов увеличивается в несколько раз. Накопление липидов в печени при ее жировой инфильтрации, в основном, происходит за счет фракции триглицеридов. Пулатовой (1972) отмечено, что при экспериментальных токсических поражениях печени гелиотрином, значительно снижается уровень фосфолипидов в крови. При введении данного алкалоида в печени повышается скорость окисления жирных кислот (Назырова, Баширова, 1973).
Известно, что печень играет ведущую роль в белковом обмене, осуществляя такие важные процессы, как дез - и трансамини-рование аминокислот, синтез мочевины и белков плазмы.
О клиническом значении определения, активности некоторых ферментов энергетического обмена
Ферментная дискоординация, наблюдаемая в печеночных клетках при хронических гепатитах находит отражение в изменении активности фермеНТОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ (Drozdzt 1976 , Posnanska, 1977), что приобрело большое диагностическое значение в гепатологии.
Степень изменения активности ферментов в сыворотке крови зависит ОТ внутриклеточной ИХ локализации ( Henderson А., 1980). При определении активности аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови и печени больных хроническим гепатитом было отмечено, что отношение активности ACT к активности АЛТ в сыворотке отражает соотношение этих ферментов в цитозоле клеток печени. Увеличение данного отношения происходило вследствие более значительного снижения активности АЛТ по сравнению с ACT и зависело от тяжести патологического процесса ( Ciuyaki, 1979). R. PriedeL и соавт. (1979), рассматривая механизмы выхода клеточных ферментов во внеклеточное пространство, на основании литературных данных указывают основную причину перераспределения ферментов - нарушение структурно-функциональной целостности клеточных мембран. Одним из основных энергетических механизмов клетки является ЦТК. Поэтому изучение скоростей лимитирующих реакций ЦТК, катализируемых СДГ, МДГ (НАД), МДГ (НАДФ), ИДГ (НАДФ), позволяет судить о состоянии энергетического обмена в тканях. I. Малатдегидрогеназа ( ь- малат: НАД-оксидоредуктаза IЛ.1.37) Фермент катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в щавелевоуксусную. Коферментом служит НАД. Равновесие реакции при рН 7,0 сдвинуто влево, поэтому оксалацетат служит активным акцептором электронов от НАДН и, следовательно, от других ферментов, окисляющихся при участии НАД. Кроме того, оксалоацетат является важным регулирующим зве ном в ЦТК, т.к. по типу "обратной связи" конкурентно подавляет СДГ (Ленинджер, 1966). МДГ (НАД) имеется во всех тканях. Kei brtickc соавт. (1959) доказали существование двух основных фрак ций МДГ, расположенных в различных клеточных областях: митохонд риальная (М-МДГ) и цитоплазматическая (С-МДГ). A.Lodoia и.а 1978) выявили преимущественную локализацию НАД-зав. МДГ в цитозоле. Были применены различные методы выявления гетерогенности МДГ: физико-химические, иммунологические и др. Электрофоретически, например, было выявлено от 2 (ш кегіі,Моііег,І959) до 6 фракций (КгшагуЪ, 1964, Bailey-Ietal, 1974}. О Клиническом значении определения изоферментов МДГ при патологии печени имеется немало работ (Ю.А.Юрков, 1973, Н.В.Татьянко с со-авт. 1974, К.А.Андриуца, 1976, И.И.Зубикова 1976, К.А.Эмирчанов, 1976, Graubaum С соавт. 1978, F. Sciiapira,I978, Lloatti, 1977), В настоящее время изменение общей активности МДГ в сыворотке крови довольно широко изучено в клинике при различных патологических состояниях (Ю.А.Юрков, 1973, А.М.Запруднов, 1973, А.Б.Зборовский, Мартемьянов 1974, Й.К.Мусабаев, 1974, Б.И.Мамутов, 1981). Увеличение активности МДГ отмечено при вирусном гепатите (Д.М.Брагинский и соавт., 1965, К.А.Андриуца, 1976, О.С.Махмудов, 1977, Ш.Й.Зубикова, 1976, М.С.Аркьянц,1973). Особенно высокое содержание МДГ обнаруживается при печеночной коме ( Villa,1965, Setzman, 1967). При циррозе печени МДГ не достигает столь больших величин, как при вирусном гепатите, но значительно превышает норму ( Villa, 1965). Особое внимание привлекло соотношение цитоплазматической и митохондриальной фракций при острых и хронических поражениях печени. При циррозе наблюдается увеличение митохондриальной фракции МДГ ( Reith. с соавт.1964), Schmidt с соавт. 1967). Полагают, что повышение в сыворотке крови М-МДГ представляет собой тест, характеризующий более глубокое поражение печени. Эти подтверждения данным А.М.Запруднова (1973), который нашел в сыворотке крови детей, больных хроническим гепатитом и циррозом печени увеличение катодной фракции МДГ, особенно при обострениях патологического процесса более длительное и стойкое, чем ACT. Это зависит от локализации фермента в гепатоците, от молекулярного веса (М.В. МДГ=60000, АСТ=П0000), следовательно, переход МДГ из гепатоцита в кровь возможен уже при небольших повреждениях клеточной мембраны. Активность МДГ исследовалась непосредственно в ткани печени больных вирусным гепатитом. Отмечено снижение активности фермента в разгаре вирусного гепатита (Н.И.Лучшев и др. 1977, Ю.А.Ильинский и др. 1978), что авторы объясняют увеличением проницаемости мембран. Исследуя активность МДГ(НАД) при хроническом гепатите у детей, Н.А.Васильева (1970) отметила умеренное повышение активности ее в крови, наиболее выраженное в фазе обострения. 2. Малатдегидрогеназа НАДФ-зависимая (МДГ-НАДФ, КФ I.I.I.40.) Впервые окислительное декарбоксилирование малата до пиру-вата И СОр наблюдали Mo ulder , Veruaesland , Fians (I945).Och.oa с соавт. выделили из печени голубя фермент, катализирующий реакцию: 1и.-малат + НАДФ пируват + С02+НАДФН+Н+ и назвали его малик-ферментом или НАДФ-зависимой МДГ ( L-малат-НАДФ-окси-редуктаза, декарбоксилирующая). Реакция легко обратима, однако в физиологических условиях равновесие сдвинуто в сторону образования пировиноградной кислоты ( Freakel,I972). Активность МДГ (НАДФ) ингибируется НАДФН, оксалацетатом ( Saiii,I980). Фермент бЫЛ Обнаружен В раЗЛИЧНЫХ ТКаНЯХ ЖИВОТНЫХ (D. Brdiczka et al., 1971). Считалось, что фермент находится только в цитозольной фракции тканей животных ( Panoie, 1964). Однако Sanuer с соавт. (1979) показали, что МДГ(НАДФ) присутствует и в митохондриях. Установлено, что в печени большая часть МДГ(НАДФ) сосредоточена в цитозоле ( D. BrdiczkcJ97I). Этот факт, очевидно, обусловлен тем, что НАДФ - зависимые дегидрогеназные реакции поставляют
ВОССТаНОВИТеЛЬНЫе ЭКВИВалеНТЫ ДЛЯ 6ИОСИНТЄТИЧЄСКИХ ПрОЦеССОВ, КО торые наиболее интенсивно протекают именно в цитозольной фракции (И.Д.Головацкий, 1978). Функция НАДФ-зависимой митохондриальной МДГ заключается в обеспечении водородом восстановительных биосинтезов, например биосинтез жирных кислот (Dugan с соавт.1971) связан с энергообеспечением клетки (В.П.Скулачев,1972), принимает участие в основном пути генерации энергии при окислении промежуточных продуктов ЦТК, образующихся из глутамина (sauncr, 1979). Активность МДГ(НАДФ) при различных патологических состояниях для характеристики энергетических процессов определяли А.Г.Голубев (1975), А.А.Покровский (1973). Увеличение активности МДГ(НАДФ) объясняли участием ее в шунтовой передаче восстановительных эквивалентов через митохондриальную мембрану.
Энергетические процессы в печени детей, больных хроническим гепатитом
При исследовании активности ферментов и содержания АТФ в крови больных хроническим гепатитом в персистирующей форме отмечалось умеренное повышение их активности: НАД-МДГ в 2,4 раза (45,84 4,І2ммоль/л.мин), НАДФ-МДГ - в 1,8 раза (17,67 1,47 ммоль/л.мин), НАДФ-ИДГ - в 2,3 раза (24,84, 2,32ммоль/л«м), СДГ - в 6,5 раза (4,33 0,37ммолъ/л.мин) и понижение содержания АТФ на 26,6$ (50,29 44,Юммоль/л.)
Более выраженные изменения отмечаются в группе больных ХАГ. Во всех случаях выявлена высокая степень гиперферментемии: НАД-МДГ достигает величины 63,85 5,33 ммоль/л мин, что превышает нормальное значение в 3,4 раза, НАДФ-МДГ - в 3,1 раза (30,51 2,67ммоль/л.мин), НАДФ-ИДГ - в 3,4 раза (36,67 3,45 ммоль/л.мин), СДГ - в 7,7 раза (5,17 0,44 ммоль/л.мин). Резко снижено содержание АТФ в крови с 689,50 59,10 ммоль/л до 312,64 24,45 ммоль/л, что составляет 45,3% от контрольного значения.
Сравнительная оценка, проведенная в группах больных хроническим гепатитом с активной и персистирующей формами позволила выявить зависимость степени изменения энзимологических показателей от формы заболевания. Более высокая степень гиперферментемии наблюдается при активной форме. Однако активность СДГ при обеих формах была высокой, что может быть свидетельством глубокого поражения митохондриальных структур в гепатоцитах. Дестабилизация ферментов ЦТК указывает на функциональные нарушения в клетках печени.
В группе детей, больных ХПГ получавшей симптоматическое лечение отмечается выраженная тенденция к нормализации. Активность НАД-МДГ понижается до 31,51 2,87 ммоль/л.мин (на 31,3%), НАДФ-МДГ до 12,00 0,95 ммоль/л.мин (на 32,1%), НАДФ-ИДГ - до 21,50 2,11 ммоль/л.мин (на 13,5%), СДГ - до 3,67 0,32 ммоль/л. мин (на 15,3%), концентрация АТФ повысилась до 586,07 50,50 ммоль/л., что практически находится в пределах нормы.
Все больные ХАГ по проводимому лечению были разделены на две группы: 1-ая получила симптоматическое лечение препаратами улучшающими функциональное состояние печени путем воздействия на различные стороны обмена (витаминотерапия, экстракты и гид-ролизаты печени, препараты крови - нативная плазма, альбумин), 2-ая группа (II детей) наряду с симптоматической терапией получала глюкокортикоиды (преднизолон назначался в суточной дозе 1-1,5 мг/кг массы тела). Указанную дозу дети получаж в течении недели. Общий курс лечения длился 1,5-2 месяца.
Проведенные клинико-биохимические исследования в динамике дали возможность установить, что наибольший эффект получен в группе детей, леченных преднизолоном. У детей этой группы отмечено улучшение самочуствия и аппетита раньше, чем у детей, получавших симптоматическое лечение. Энзимологические показатели также были более низкими. В первой группе активность НАД-МДГ снижалась до 4-1,01 3,96 ммоль/л.мин (на 35,8%), НАДФ-МДГ - до 15,67 1,42 ммоль/л.мин (на 48,6%), НАДФ-ИДГ - до 32,17 2,87 ммоль/л.мин (на 12,3%), СДГ на 32,2% (3,50 0,16). В группе получавшей преднизолон НАД-МДГ достигала 32,47 3,23 ммоль/л.мин, что на 26% ниже, чем в первой группе, НАДФ-МДГ - 11,67 0,98ммоль/л. мин (на 15,6% ниже), НАДФ-ИДГ - 19,34 1,45 (на 39,9%), СДГ, однако, сохраняла высокое значение (в пределах величины периода обострения, до лечения). Уровень АТФ повышался в обеих группах. В группе получавшей преднизолон он был несколько ниже, чем в первой группе.
На основании полученных результатов можно сделать вывод о выраженных отклонениях энергетического обмена при хронических поражениях печени. Нарушение окислительно-восстановительных процессов в организме больного ребенка ведет к энергетическому дефициту, а следовательно, и к нарушению глубоких метаболических процессов, для осуществления которых требуется специфическая энергия. В результате проводимого лечения наблюдается тенденция к нормализации исследуемых показателей энергетического обмена, однако полной их нормализации не происходило при всех формах хронического гепатита. Особенно высокий уровень активности наблюдается у СДГ - фермента, локализованного в митохондриях печени, что указывает на глубину и длительность поражения данных органелл в печени и необходимость проведения соответствующих реабилитационных мероприятий в процессе диспансерного наблюдения этих больных. Лечение преднизолоном, несмотря на улучшение многих клинических показателей, не устраняло нарушение функции митохондрий, так как при этом активность СДГ остается высокой, практически на уровне поступления в стационар.
Активность митохондриальных ферментов в процессе развития хронического гелиотринового поражения печени
Для каждой группы был проведен морфологический контроль, выявляющий динамику структурных нарушений печени в процессе развития токсического хронического гепатита.
У животных с одной неделей затравки балочное строение в некоторых дольках нарушено. Гепатоциты различаются по величине и форме, находятся в состоянии зернистой, либо вакуольно-гидро-пической, иногда доходящей до баллонной дистрофии. Ядра различной величины и формы, часто обладают разреженным хроматином. Во многих полях зрения обнаруживаются 1-2 некробиотически измененные клетки. Кровеносные сосуды расширены, неравномерно полнокровны. Часто встречается явление периваскулярного отека и отек соединительной ткани портальных полей. Купферовы клетки округлены, гиперхромны и выступают в просвет расширенных сину-соидов, отмечается умеренная их пролиферация.
Таким образом, после введения в течении недели (через день по ІОмг/ІООг массы животного) гелиотрина гистологическая картина слабо напоминает картину острого гепатита. При этом основными компонентами поражения печени являются изменения, затрагивающие сосуды, ретикуэндотелиальную систему и соединительную ткань портальных полей,сопровождаемые дистрофическими изменениями паренхиматозных клеток.
Через две недели затравки наблюдается усугубление патологического процесса. Балочное строение в большинстве случаев не прослеживается. Основная масса гепатоцитов несколько увеличена в размерах, имеет четкие границы, цитоплазма их в состоянии зернистой, баллонной дистрофии. Двуядерные и крупные регенерирующие клетки встречаются редко. В отдельных полях зрения наблюдаются участки некроза 2-4 клетки.
Через три недели затравки в печени экспериментальных животных отмечаются явления хронизации процесса. Дольчатое строение не нарушено, но трабекулярное расположение гепатоцитов не определяется. В центральных отделах долек иногда прослеживаются относительно нормальные гепатоциты, тогда как основная масса паренхимы представлена полиморфными гепатоцитами в состоянии зернистой и вакуольно-гидропической дистрофии с некротическими очагами в 1-5 клеток. Несколько увеличено число двуядерных гепатоцитов. Сосуды расширены, неравномерно полнокровны. Вокруг сосудов небольшие скопления лимфоидно-гистиоцитарных элементов, которые местами диффузно распределяются в паренхиме.
Через две недели после окончания затравки в печени видна явная картина хронического гепатита. Дольчатое строение местами не определяется, балки отсутствуют повсеместно. Гепатоциты, составляющие паренхиму, в основном увеличены в размерах, полиморфны, цитоплазма их в состоянии зернистой, либо вакуольно-гидропической, доходящей до баллонной дистрофии. Участки некроза в 2-4 клетки встречаются во многих полях зрения. Крупные сосуды и синусоидальные капилляры расширены, свободны от крови. Лимфоидно-гистиоцитарная инфильтрация образует умеренные скопления вокруг сосудов, диффузное ее распределение в паренхиме местами значительно и обнаруживает присутствие фибробластов. Происходит разрастание соединительной ткани.
Спустя два месяца после окончания затравки несколько снижены дистрофические изменения гепатоцитов и морфологические изменения более напоминают картину интерстициального гепатита. Архитектоника печени значительно нарушена. Паренхима печени диффузно инфильтрована лимфоидно-гистиоцитарными элементами.
Дольчатое строение сохранено в большинстве случаев, балочное же строение гепатоцитов прослеживается не везде. Гепатоциты, в основном, полигональной формы, находятся в состоянии умеренно выраженной зернистой, либо вакуольно-гидропической дистрофии. Часто встречаются поля с полной деструкцией печеночной паренхимы и с замещением ее соединительной тканью. Соединительная ткань отечна. Некроз 2-4 клетки.
Таким образом отмечено динамичное нарастание структурных нарушений в гепатоцитах, в зависимости от длительности опыта. Сформировавшийся хронический экспериментальный гепатит выявлен у животных 5-ой группы (спустя 2 недели после окончания затравки).
Ферментативное исследование крови крыс в процессе развития хронического экспериментального гепатита. Изучение активности ферментов в сыворотке крови показало, что через одну неделю воздействия на животных небольшими дозами гелиотрина (Юмг/ЮОг массы) отмечается гиперферментемия (таблица 4, рис. 1-3). Самое значительное изменение наблюдалось в активности НАДФ-ИДГ - в 3,2 раза по отношению к контролю. Активность НАД-МДГ и НАДФ-МДГ увеличена в 2,1-2,2 раза, ЦО - 2,4 раза. Активность СДГ не изменялась. Очень незначительно увеличение активности АТФазы. Изменение концентрации АТФ в крови также невелико.
На 14-ый день интоксикации в сыворотке крови степень ги-перферментемии прогрессирует. Активность НАДФ-ИДГ достигает максимального значения 72,61-5,50 ммоль/литр.мин., (рис.1), значительно увеличение активности ЦО, оно превышает контрольное значение в б раз.
