Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Аполипопротеин A-I 13
1.1.1. Общая характеристика липопротеинов 13
1.1.2. Физико-химические свойства апо A-I 15
1.1.3. Гетерогенность апоА-1 16
1.1.4. Структура аполипопротеина A-I 17
1.1.5. Структура апоА-1 в составе ЛПВП 21
1.1.6. Дифенсиновая функция аполипопротеинов 27
1.2. Вирус иммунодефицита человека 32
1.2.1. История ВИЧ-инфекции 33
1.2.2. Характеристика и строение ВИЧ 35
1.2.3. Причины эпидемии СПИДа 40
1.2.4. Геном и жизненный цикл ВИЧ 42
1.2.5. Механизм цитопатогенного действия вируса 46
1.3. Рецептор CD4 49
1.3.1 Общая характеристика СЭ4-рецептора 49
1.3.2 Структура и функция С04-рецептора 52
1.3.3 Рекомбинантный cd4 55
Глава 2. Материалы и методы исследований 60
Глава 3. Результаты собственных исследований 76
3.1. Иммунохимическое сродство оболочечных белков ВИЧ-1 и аполипопротеина А-І человека 76
3.1.1. Иммунохимическое соответствие апоА-1 и антител к ВИЧ-1
3.1.1.1. Иммуноферментный анализ гомологии апоА-1 и антител к ВИЧ-1 76
3.1.1.2. Иммунохимическое соответствие апоА-І и антител к ВИЧ-1 в дот-блоте 79
3.1.2. Иммунохимическое соответствие белков ВИЧ-1 и антител к апоА-1 80
3.1.2.1. Иммунохимическое соответствие белков ВИЧ-1 и антител к апоА-І в ИФА 81
3.1.2.2. Взаимодействие оболочечных рекомбинантных белков ВИЧ с антителами к апоА-І в иммуноблоте 84
3.2. Взаимодействие между CD4 и апоА-1 в ИФА 85
3.3. Проявления конкурентных взаимоотношений между апоА-1 и envl за рецептор CD4 в реакции in vitro 87
3.4. Поиск сайтов связывания CD4 с апоА-1 и gp 120 у компьютерным методом 90
3.5. Влияние апоА-1 и envl на синтез белка и ДНК Т-лимфоцитами 92
3.6. Влияние апоА-1 и envl на продукцию иммуноглобулинов В-лимфоцитами крови человека 95
Обсуждение 100
Выводы 108
Список литературы 109
- Дифенсиновая функция аполипопротеинов
- Иммунохимическое сродство оболочечных белков ВИЧ-1 и аполипопротеина А-І человека
- Взаимодействие оболочечных рекомбинантных белков ВИЧ с антителами к апоА-І в иммуноблоте
- Влияние апоА-1 и envl на синтез белка и ДНК Т-лимфоцитами
Введение к работе
Актуальность темы. Основная функция липопротеинов крови связана с транспортом липидов от мест их синтеза (печень, кишечник) в другие органы и ткани, где липиды используются как энергетические субстраты и как материал для синтеза биологических мембран. Однако роль белкового компонента липопротеинов различного класса более многообразна. Аполипопротены выполняют в организме важнейшую регуляторную функцию. Так, аполипопротеин А-І (апоА-I) повышает активность ЛХАТ [Sparrow I., Gotto А., 1982], аполипопротеин С-П активирует липопротеиновую липазу. [Kinnunen P. et al., 1983; Connelly P. et al., 1987]. В последние годы было показано, что апоА-I в комплексе с восстановленной формой стероидных гормонов принимает участие в регуляции экспрессии многих генов [Панин Л.Е. и др., 1995-2002]. Взаимодействие комплекса с ДНК осуществляется в области повторов типа (GCC)n [Панин Л.Е. и др. 2001, 2002]. В дальнейшем было показано, что этот комплекс играет важную роль в регуляции синтеза ДНК и белка в клетках лимфоидной ткани [Панин Л.Е., Клейменова Е.Ю., 2002]. Более того, он имеет отношение к синтезу иммуноглобулинов.
Важным шагом в развитии этих исследований было установление
высокой степени гомологии между апоА-I и поверхностными белками
ВИЧ-1 (envl) [Lukashev V.A. et al., 2000]. Благодаря исследователям из
университета шт. Алабама (г. Бирмингем) стали известны
антивирусные свойства синтетических пептидных аналогов апоА-1.
Это касается вируса Herpes и вируса иммунодефицита человека (ВИЧ)
[Srinivas R.V. et al. 1990]. В то же время Оуенс с соавторами показали,
что апоА-I и его синтетические аналоги, представляющие собой
амфипатные а-спиральные пептиды, эффективно ингибируют
репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток и препятствуют образованию
клеточного синцития [Owens B.J. et al. 1990]. Мартин с соавторами
1 CJJVW V t т. л/
обнаружили, что апоА-1 взаимодействует с трансмембранным белком ВИЧ-1 гликопротеином gp41 [Martin I. et al. 1992]. В работе американских исследователей из техасского университета сообщалось о том, что апоА-1, находясь в кровяном русле в составе ,ЛПВП, обладает широким спектром антивирусной активности [Singh LP. et al., 1999].
Все это дало основание предположить, что между апоА-1 человека и оболочечными белками ВИЧ-1/2 существует структурно-функциональное соответствие, играющее важную роль в патогенезе ВИЧ-инфекции. Исследование механизма противовирусной активности апоА-1 человека по отношению к ВИЧ может оказаться перспективным при создании вакцин и эффективных профилактических средств.
Целью работы являлось исследовать структурно-функциональную гомологию между аполипопротеином А-І человека и оболочечными белками ВИЧ-1/2 и оценить ее вклад в развитие иммунодефицита.
Задачи исследования:
-
Исследовать иммунохимическое сродство между апоА-1 человека и поверхностными белками ВИЧ-1 /2. >
-
Изучить функциональную и структурную гомологию между рецептором CD4, апоА-1 человека и поверхностными белками ВИЧ-1/2.
-
Провести сравнительный анализ взаимодействия апоА-1 и поверхностных белков ВИЧ-1 с рецептором CD4 на поверхности Т-лимфоцитов человека.
-
Исследовать влияние апоА-1 человека и поверхностных белков ВИЧ-1 на скорость биосинтеза белка и ДНК Т-лимфоцитами человека.
-
Изучить влияние апоА-1 человека и поверхностных белков ВИЧ-1 на продукцию иммуноглобулинов В-лимфоцитами человека.
Научная новизна работы. Впервые исследовано иммунохимическое сродство между апоА-I человека и поверхностными белками ВИЧ-1/2. Показано перекрестное иммунохимическое взаимодействие антител к апоА-I с оболочечными белками ВИЧ-1/2 и апоА-I с антителами к ВИЧ-1/2.
Впервые исследовано взаимодействие апоА-I человека с рецептором CD4. Показано взаимодействие апоА-I человека с рекомбинантным рецептором CD4 и с рецептором CD4 на поверхности Т-лимфоцитов человека.
Впервые исследовано влияние апоА-I человека и поверхностных белков ВИЧ-1 на биосинтез белка и ДНК Т-лимфоцитами человека. Показано их взаимное влияние на этот процесс, основанное на конкурентных взаимоотношениях между апоА-I человека и поверхностными белками ВИЧ-1.
Впервые показано влияние апоА-I человека и поверхностных
белков ВИЧ-1 на продукцию иммуноглобулинов В-лимфоцитами
человека. ''<>..
Теоретическая и практическая значимость работы. В
результате проведенных исследований был описан новый механизм снижения продукции иммуноглобулинов с последующим развитием иммунодефицита у ВИЧ-инфицированных пациентов, основанный на конкурентных взаимоотношениях между апоА-I человека и поверхностными белками ВИЧ-1. Конкурентные взаимоотношения играют также важную роль в подавлении функции апоА-I, связанной с регуляцией биосинтеза белка.
Положения, выносимые на защиту:
-
Аполипопротеин A-I человека и поверхностные белки ВИЧ-1 имеют общие антигенные детерминанты.
-
Иммунохимическое и структурное сходство между апоА-1 человека, поверхностными белками ВИЧ-1 и рецептором CD4
Т-лимфоцитов приводит к конкурентным взаимоотношениям между
апоА-I человека и поверхностными белками ВИЧ-1. , -,
-
Аполипопротеин А-1 блокирует цитопатическсіе действие поверхностных белков ВИЧ-1 на скорость биосинтеза ДНК.и белка Т-лимфоцитами. - --
-
Конкурентные взаимоотношения между апоА-I человека и оболочечными белками ВИЧ-1 способствуют снижению продукции антител В-лимфоцитами человека и развитию иммунодефицита. и
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11. печатных работ: 9 статей и 2 тезисов. Материалы диссертации доложены на объединенной научной сессии СО РАН и СО РАМН (24-25июня, Новосибирск, 2000г); на научной сессии Новосибирской государственной медицинской академии (19-20 декабря 2000г).
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 128 страницах, включая 15 рисунков и 8 таблиц. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, содержащей 35 отечественных и 87 иностранных источников.
Дифенсиновая функция аполипопротеинов
Известно, что в структуре аполипопротеинов установлены амфипатные а-спиральные участки, в которых одна сторона содержит полярные (гидрофильные) аминокислотные остатки, а другая - неполярные (гидрофобные). Спиральные структуры аполипопротеинов относительно лабильны и легко денатурируют под влиянием температуры, высокой ионной силы или органических растворителей. Эти области ответственны за связывание липидов. Доля а-спиральных участков восстанавливается после добавления к белку фосфолипидов (Zorich N.L. et al., 1987). Этому способствует взаимодействие молекулы белка с полярными "головками" фосфолипидов. При формировании а структуры происходит вытеснение молекул воды, связанной с фосфолипидами, и образуются гидрофобные области. Белок принимает ориентацию на фосфолипидном монослое таким образом, что ось а спирали становится параллельной поверхности монослоя. Белковая молекула поворачивается так, что ее гидрофильная часть контактирует с полярной областью ЛП-частицы, а гидрофобная часть погружена внутрь и экранирована от водного окружения. Неэстерифицированный холестерин в составе поверхностного монослоя облегчает такое связывание через образование "щелей", удобных для встраивания белка. Амфипатные а-спиральные участки апоА-I и anoA-IV ответственны за активацию лецитин-холестеринацилтрансферазы (Jonas А. et al., 1993.; Meng Q.H. et al., 1993), за ингибирование липопротеинлипазы под влиянием апоЕ (Rensen P., Vanberkel Т. et al., 1996), а также за способность апоЕ к связыванию .с рецепторами (Nolle R.T., Atkinson D. et al., 1992). Наличие на аполипопротеинах амфипатных областей делает их похожими на группу белков дифенсиновой системы организма. Дифенсины (от англ. defence - защита, оборона) представляют собой несколько неферментных катионных белков, содержащихся в цитоплазматических нейтрофильных гранулах и освобождающихся в ответ на различные стимулы. Эти белки легко экстрагируются кислотами, характеризуются низкой молекулярной массой (менее ЮкДа) и относительно высоким содержанием цистеина и аргинина. С помощью ЖХВД из гранулоцитов кролика выделено пять дифенсинов, а из нейтрофилов человека - три (Lichtenstein A. et al., 1986). Установлена полностью их структура и аминокислотная последовательность. Дифенсины человека по сравнению с кроличьими имеют меньшую молекулярную массу (около 3,5 кДа), являются гораздо более гидрофобными и содержат меньше остатков аргинина. Как и для большинства аполипопротеинов, в структуре катионных белков характерным признаком является чередование заряженных (катионных) и гидрофобных участков. Наличие в молекулах дифенсинов полярных и неполярных участков придает им свойства поверхностно-активных соединений. Дифенсины способны вызывать гибель различных микроорганизмов и опухолевых клеток. Они оказались эффективными против синегнойной и кишечной палочки, золотистого стафилококка, против грибковой и вирусной инфекции. Дифенсины лизировали многие опухолевые клетки мышей и человека. Лизис зависел от концентрации дифенсина в среде и не наблюдался в присутствии ингибиторов энергетического метаболизма, цитоскелетного аппарата клетки или лизосомальной функции. Данные свидетельствуют о том, что дифенсинопосредованная цитотоксичность требует связывания молекул дифенсина с клеткой-мишенью, энергозависимой интернализации и последующего взаимодействия их с лизосомами. Действие дифенсинов было очевидным уже через Зч и достигало максимума через 8-14ч. При совместном применении дифенсинов и перекиси водорода наблюдался синергический эффект (Lichtenstein A. et al., 1988). Антимикробные свойства, подобные обнаруженным у дифенсинов, найдены у ЛП-частиц, содержащих апоА-1. ЛПВП после иммуноаффинной хроматографии с анти-апоА-1 моноклональными антителами антимикробной активностью по отношению к Staphylococcus epidermidis не обладали. Электрофоретический анализ подтвердил, что антимикробная активность связана с присутствием в частицах ЛПВП апоА-1. Из работ исследователей из университета шт. Алабама (г. Бирмингем) стало известно об антивирусных свойствах апоА-1. Это касается вируса Herpes и вируса иммунодефицита человека (Owens В.J., 1990; Srinivas R.V. et al., 1990). Как и в отношении противомикробной активности, выраженными антивирусными свойствами обладали 18-членные синтетические пептиды апоА-1, содержащие амфипатные СС-спиральные участки, а также димеры этих пептидов, "сшитые" через концевые пролин или аланин. Интересно, что апоА-1 и его синтетические аналоги ингибировали проникновение вирусов в цитоплазму, совершенно не влияя на взаимодействие вирусов с наружной клеточной мембраной. зо Конкретный механизм антимикробных свойств ЛПВП, в частности апоА-I, неясен. Возможно, что эти свойства объясняются способностью частиц ЛПВП связывать и нейтрализовать бактериальные липополисахариды (LPS) и эндотоксины. Так, внутривенное введение кроликам человеческих ЛПВП вызывало супрессию продукции фактора некроза опухоли в ответ на липополисахаридную стимуляцию (Cue J.I. et al., 1994).
Иммунохимическое сродство оболочечных белков ВИЧ-1 и аполипопротеина А-І человека
Иммунохимическое сродство оболочечных белков ВИЧ-1 и аполипопротеина A-I человека. Иммунохимическое сродство между 1-ым и 2-ым белками можно показать следующим образом: провести перекрестную иммунную реакцию между 1-ым белком и антителами ко 2-ому белку и соответственно - между 2-ым белком и антителами к 1-му белку. Сначала было показано иммунохимическое соответствие апоА-1 и антител к ВИЧ-1 в ИФА и дот-блоте, затем - иммунохимическое соответствие белков ВИЧ-1 и антител к апоА-1 в ИФА и иммуноблоте.
. Иммунохимическое соответствие апоА-1 и антител к ВИЧ-1. Для того чтобы показать наличие общих антигенных детерминант между обол очечными белками ВИЧ-1 и аполипопротеином A-I человека сначала исследовали взаимодействие между апоА-1 и антителами к ВИЧ-1.
Иммуноферментный анализ гомологии апоА-1 и антител к ВИЧ-1.
В качестве положительного контроля было показано титрование апоА-1 антителами иммунизированного им кролика. На рис.8 представлена кривая титрования апоА-1 специфическими антителами к нему. Хорошо видна линейная зависимость оптической плотности при 492 нм в интервале от ОД о.е. до 1,5 о.е. при изменении количества белка в лунке от 1 нг до 100 нг. В сыворотке неиммунизйрованного кролика такой зависимости не обнаружено.
На первом этапе исследования была показана специфичность взаимодействия аполипопротеина А-І с антителами к суммарным белкам ВИЧ-1. С этой целью апоА-І (антиген) сорбировали на планшет и титровали антителами к ВИЧ-1. Для этого использовали сыворотку от ВИЧ-инфицированного пациента, имеющую полный набор антител к вирусным белкам: gp 160/120, рбб, р51/55, gp41, р40, р31, р24, р17, р13 и титр в тест-системе "Антиген" 1:6400. Сыворотку при последовательном двукратном. разведении (с шагом 2) от 1:100 до 1:6400 наносили на планшет, на поверхности которого был предварительно сорбирован апоА-1 (антиген).
Кривая титрования представлена на рис.9. При разведении сыворотки от 1:3600 до 1:200 оптическая плотность иммуноферментной реакции увеличивалась от 0,02 до 1,1 о.е. Самое высокое показание оптической плотности отмечалось при разведении ВИЧ-позитивной сыворотки 1:200. Для кривой титрования сывороткой крови здорового человека эта величина составляет не более 0,2 о.е. Поскольку разведение сыворотки 1:200 было оптимальным, провели титрование апоА-1 (антиген) сывороткой ВИЧ-инфицированного в разведении 1:200. Антиген наносили на планшет по 100 мкл с разным содержанием белка в растворе от 0,33 нг до 800 нг. На рис.10, представлены кривые титрования апоА-1 сывороткой от двух разных больных СПИДом.
В качестве контроля за неспецифической сорбцией на планшет наносили бычий сывороточный альбумин (БСА). На рис.10 видно, что обе ВИЧ-положительные сыворотки с высокой специфичностью взаимодействовали с апоА-1 (антигеном).
Подобные результаты получены при использовании пяти других сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов. Полученные данные позволяют предположить, что при высокой концентрации апоА-І в крови здоровых людей, может быть получен ложноположительный ответ на ВИЧ.
Кроме того, были проведены эксперименты по титрованию сорбированного на планшете апоА-1 отрицательными сыворотками (донорские сыворотки крови, не содержащие антител к ВИЧ). Ни одна из 20 отрицательных сывороток не дала положительного результата.
Таким образом, впервые установлено, что существует иммунохимическое сродство между апоА-1 и антителами к ВИЧ-1, присутствующими в крови ВИЧ-инфицированных.
Взаимодействие оболочечных рекомбинантных белков ВИЧ с антителами к апоА-І в иммуноблоте
. Взаимодействие оболочечных рекомбинантных белков ВИЧ с антителами к апоА-1 в иммуноблоте. Кроме твердофазного ИФА, взаимодействие оболочечных рекомбинантных белков, с антителами к апоА-1 было показано в иммуноэлектроблоттинге, представленном на рис.15.
На дорожке 1 - апоА-1 с молекулярной массой 28Ша, выявленный антителами к апо A-I (положительный контроль). На дорожке 2 -оболочечные белки ВИЧ, к которым добавляли сыворотку неиммунизированного кролика (отрицательный контроль). На дорожке 3 -рекомбинантные белки ВИЧ, выявленные антителами к апоА-1.
Белки выявлялись в виде четырех полос. На основании всех предыдущих исследований было сделано заключение: эти полосы соответствуют обол очечным белкам ВИЧ-1 (gpl20 и gp41) и ВИЧ-2 (gp 105 и gp36).
Таким образом, впервые установлено иммунохимическое соответствие между белком gp41, gpl20 и апоА-1. Показано, что существует иммунохимическое сродство между антителами к апоА-1 и обол очечными белками ВИЧ-1, а также существует иммунохимическое взаимодействие между апоА-1 и антителами к ВИЧ-1, присутствующими в крови ВИЧ-инфицированных пациентов.
Взаимодействие между CD4 и апоА-1 в ИФА. На данном этапе исследования было показано взаимодействие между рецептором CD4 и аполипопротеином А-І человека с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в модели с использованием индивидуальных и рекомбинантных белков.
Зависимость оптической плотности ферментативной реакции от концентрации envl белков и апоА-1 человека представлена на рис.16. Показано, что зависимость оптической плотности для envl выходит на плато при меньшей концентрации, чем для апоА-1 человека.
Это можно объяснить тем, что аффинитет апоА-1 к СВ4-рецептору ниже, чем у envl белков. Кроме того, для концентрации апоА-1 больше 10 мкг/мл происходит снижение оптической плотности ферментативной реакции. Это происходит от того, что при таких концентрациях апоА-1 образует димеры. При образовании димеров количество молекул, способных связываться уменьшается, что и приводит к снижению оптической плотности.
Несмотря на это, данный факт может лежать в основе конкурентных взаимоотношений между ВИЧ-1 и апоА-I человека за СБ4-рецептор. Однако не меньший интерес представляют конкурентные взаимоотношения между апоА-I и ВИЧ-1 за рецептор к апоА-I. Ранее было показано, что апоА-I в комплексе с восстановленными формами стероидных гормонов принимает участие в усилении экспрессии генов, повышая, таким образом, скорость биосинтеза белка в различных тканях (Панин Л.Е., 1992; Панин Л.Е. и соавт., 2001). Известно, что при развитии ВИЧ-инфекции больные теряют в весе. Было сделано предположение, что этот эффект связан с конкурентными взаимоотношениями между апоА-I и ВИЧ-1 за рецептор к апоА-1.
Полученные нами результаты говорят о том, что взаимодействие ВИЧ-1 с клетками (лимфоцитами и макрофагами), несомненно, осуществляется через СБ4-рецептор. В отношении ВИЧ-2 в данной работе не получено подтверждения этому факту. При титровании фиксированного на планшете СБ4-рецептора рекомбинантными поверхностными белками ВИЧ-2 был получен результат на уровне отрицательного контроля, см. рис.16.
Можно дать несколько объяснений полученным результатам. Во-первых, отсутствием указанного взаимодействия. Во-вторых, отсутствием в полипептидной цепи данных рекомбинантных белков ВИЧ-2 антигенных детерминант к СБ4-рецептору. Кроме того, как известно, вирус иммунодефицита второго типа связывается с рецептором CD4 на порядок с лишним слабее, чем вирус иммунодефицита первого типа (Moore J.P., MorikawaY., 1991). 3.3 Проявления конкурентных взаимоотношений между апоА-1 и envl за рецептор CD4 в реакции in vitro. На следующем этапе было проведено исследование конкурентного взаимодействия поверхностных белков ВИЧ-1 (gpl20, gp41) и anoA-I с С04-рецептором в условиях in vitro. Исследование проводили методом проточной цитофлуориметрии на CD4 лимфоцитах человека (МТ4-клетках). Определение СБ4-рецепторов проводили на проточном цитофлуориметре. Начальным этапом в подборе реагентов для метода проточной цитофлуориметрии было определение количества моноклональных антител к CD4, требуемое для того, чтобы пометить все клетки флуоресцентной меткой. Для этого в суспензию клеток МТ4 объемом 25 мкл вносили различное количество моноклональных антител к CD4.
Влияние апоА-1 и envl на синтез белка и ДНК Т-лимфоцитами
На основании предыдущих исследований было сделано предположение, что при определенных условиях апоА-1 может выступать в качестве блокирующего агента в процессе проникновения вируса в клетку. В равной степени можно говорить и о конкурентных взаимоотношениях между env белками ВИЧ-1 и апоА-1 в отношении рецептора аполипопротеина A-I, что может приводить к подавлению участия апоА-1 в регуляции экспрессии генов. В связи с этим была предпринята попытка показать конкурентные взаимоотношения между поверхностными белками ВИЧ-1 и аполипопротеином A-I человека связанных с биосинтезом белка и ДНК на Т-лимфоцитах.
В эксперименте на одно измерение брали по 250000 клеток. Для этого готовили суспензию клеток с концентрацией 0,5 х 106 кл/мл, из которой отбирали 500 мкл на точку. К суспензии клеток экспериментальной группы (п =5) добавляли апоА-1 или envl или одновременно оба этих агента. В контрольной группе, добавляли буфер. В качестве отрицательного контроля использовали env2. Для определения скорости синтеза ДНК в суспензию клеток вводили меченный по тритию тимидин. Для определения скорости синтеза белка в суспензию клеток вводили меченный по углероду лейцин.
Учитывая тот факт, что в зависимости от того, в какой фазе развития находится лимфоцит, деления или роста, возможен преимущественный биосинтез белка или ДНК. Поэтому исследования проводили на 2-х, 3-х и 4-х суточной культуре клеток.
Из таблицы 3 видно, что на 2-х суточной культуре клеток МТ4 хорошо проявляется ингибирующее действие envl на биосинтез ДНК (группа 3). Внесение в культуру рекомбинантного белка envl снижало скорость биосинтеза ДНК в два раза. Аполипопротеин А-1 снимал ингибирующее действие envl (группа 4), что приводило к восстановлению скорости биосинтеза ДНК до уровня контрольной группы.
В 3-х суточной культуре клеток МТ4 удалось показать стимулирующее действие апоА-1 на биосинтез ДНК, которое снималось при одновременном введении с envl.
При этом скорость биосинтеза ДНК в контроля составила 255; - при воздействии апоА-1 - 284, и при совместном воздействии апоА-1 и envl 259 имп/мин на 1000 клеток. Поверхностные белки ВИЧ-2 не оказывали никакого действия на синтез ДНК. Стимулирующий эффект апоА-1 на культуру клеток МТ4 проявлялся также в увеличении клеточности на 3-й сутки инкубации (таблица 4). При использовании 4-х суточной культуры клеток МТ4 хорошо проявлялось ингибирующее действие envl на биосинтез белка табл.5 (группа 3). Снижение скорости включения С14-лейцина наблюдалось при воздействии на Т-лимфоциты апоА-1 (группа 2) и env2. Аполипопротеин А-1 снимал действие envl (группа 4), что приводило к восстановлению скорости биосинтеза белка практически до уровня контрольной группы (группа 1). Проведение исследования конкурентных взаимоотношений между поверхностными белками ВИЧ-1 и аполипопротеином A-I на перевиваемых Т-лимфоцитах человека показали, что envl белки снижают скорость биосинтеза белка и ДНК в клетках, в то время как аполипопротеин А-1 полностью снимает цитопатическое действие envl. Кроме того, показано усиление биосинтеза ДНК аполипопротеином А-1, которое ингибируется envl белками. Эти результаты доказали еще раз наличие конкурентных взаимоотношений между поверхностными белками ВИЧ-1 и аполипопротеином А-1. 3.6. Влияние апоА-I и envl на продукцию иммуноглобулинов В-лимфоцитами крови человека.
