Введение к работе
'.
Акту.альность_темы^
Выяснение . механизмов регуляции функций клетки стероидными гормонами является актуальной проблемой современной биологвд. Согласно существупцим представлениям, после проникновения в клетку стероидные гормоны взаимодействуют с цитоплазматиче скими' белковыми факторами - рецепторами гормонов. Образовавшийся гормон - рецепторний комплекс'(ГРК). проникает из цитоплазмы в клеточное ядро, где взаимодействует с акцепторными сайтами хромосомной ДНК: В ре-їультате изменяется скорость синтеза специфических молекул матричной РНК и вслед за.этим-синтез белков. .Особенности регуляции стероидами различных генов определяются, по - видимому, именно строением и расположением акцепторных сайтов. Поэтому для детального изучения механизмов гормональной регуляции экспрессии генов прежде всего необходим анализ структуры* генов. Причем особенно важно определение полной структуры генов, включая не только районы экзо-нов, но,и прилежащих к гену регуляторних районов, а"также нитронов; Цель нас,тоящеЙ_рабдты.
Известно, что синтез тирозинаминотрансферазы в клетках печени млекопитапцих имеет тканеспецифичный стероидрегулируемый характер (Raiha, Schwartz. 197Э). Данная работа посвящена структурно -функциональному изучению гена тирозинаминотрансферазы (ТАТ) человека. Для. проведения такого рода экспериментов первоначально необходимо приготовить препараты ДНК гена ТАТ человека. -, В связи с этим на начальном этапе работы необходимо было отработать методы клонирования на примере гена тирозинаминотрансферазы-крысы и провести-клонирование гена тирозинаминотрансферазы человека. Для детального анализа структурной организации генов необходимо знание их нуклео-тидной последовательности. Определение полной нуклеотидной последовательности гена ТАТ человека явилось'следующим этапом работы. Расположение регуляторних элементов в гене ТАТ человека, 'ответственных за регуляцию экспрессии гена глюкокортикоидами, неизвестно (Rettermieier, 1990). В связи с'этим, помимо изучения структурных особенностей организации гена ТАТ человека, на следующем этапе работы необходимо было провести анлиз полной нуклеотидной последовательности этого гена с целью выявить наиболее вероятные участки
связывания глшокортикоид - рецепторного комплекса. На^чная_новизна_и_п2актическая_ценность_работы.
При клонировании гена тирозинаминотрансферазы крысы была разработана орипшальная схема отбора клонов из геног.ных библис г і,-к с использованием зондов на основе одноцепочечной форг.а бактериофага МІЗ. Успешно выполнен отбор гена тирэзинаминотранеЬ-:;,азы крысы ;і проведен первичный анализ отобранных клонов.
В процессе работы сконструирован набор молекулярных зон;\оь для генов тирозинаминотрансферазы, проопиомелглоко; тина и пролак-тина, позволивший проводить научно-исследовательски;- рай /ш, но священные изучению механизмов регуляции этих генэв.
По разработанной схеме отбора клонов из геноми-fl -'тслілтєки человека был выделен ген тирозинаминотрансферазы человека. Создан набор рекомбинантных ДНК со вставками, полностью переіг.лі'-іішій ген ТАТ человека. Впервые определена полная куклоотнднчя й -следова-тельность гена ТАТ человека.
При анализе нуклеотидной последовательности гі;і:а гнроьипаш-нотрансферасы человека обнаружены вероятные учасікп ачязыганил гормон - рецепторного комплекса. Дополнительно к рьіі-v ^.нарунен-ным (Eettenmeier, 1990), найдены еще три Aiu - поьтоса, ли плі: иной степени совладашие с консенсусом для Aiu - повторов. Кроме того, в пнтроне № 6 гена ТАТ человека обнаружен дп%:ер длиной Ы. нуклеотидных остатка. Установлено, что в каждом па мономеров этого димера на 3' - конце находится прямой ІЄ - членный повтор. 0У5лукщии_и_апрооаа;_1я_работы.
Результаты исследований были доложены >ra v съезде Всесоюзного общества генетиков и селекщюнеров им. Вави^^ва іМосква, 1987); на III Всесоюзном съезде эндокринологов (Таїі.секг, 1989); на конферен ции "Геном человека - 90" ;Переславль - оалосский, I990J, на конференции "Геном человека --Э1" (Переславль - Залесскпй, 1991), на конференции "Геном человека - 93" (Черноголовка, 1993); на 7 Международном конгрессе по изоферментам (Новосибирск, 1992); на втором рабочем совещании "Регуляция экспрессии генов млекопитающих" (Новосибирск, 1991). По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.
Стру_ктура_и_объем_работы. Диссертация изложена на 192 страницах, она включает 27 рисунков, список цитированной литературы содержит
150 наименований. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и обсуждений, выводов.
