Введение к работе
Актуальность гемы.Гаптоглобин (Нр) - а гликопротеид глобули-новой фракции белков сыворотки крови. Основная функция гаптоглоби-на в организме связана с его способностью образовыватьс гемоглобином, высвобождающимся при разрушении эритроцитов, прочный комп- J леке.Образующийся Нр-Hb комплекс уже не проникает через почечный фильтр,а удаляется из плазмы в органы ретикулоэндотелиальной сие-' темы,главным образом в печень,где претерпевает превращения в би-лирубиновом цикле (Nyman М.,1959; Akaiwa S.,1976,Javid J.,1978). Таким образом,образование гаптоглобин-гемоглобинового комплекса является необходимым этапом в процессе катаболизма гемоглобина,а также обеспечивает сохранение в организме железа (Успенская В.Д., : 1970;Putnam F.W.,1984). Установлено,что концентрация гаптоглобина ' в сыворотке крови зависит от физиологического состояния организма и может значительно изменяться при различных патологиях.Поэтому его определение может иметь дифференциально-диагностическое,-а также прогностическое значение.(Eaton J.W. е.а.,1982;Warkentin D.L.e.a.,1987; Antila Н.е.а.,1990; Skinner J.G..Roberts L.,1994). Значительные успехи,достигнутые в области изучения данного белка, касаются в основном,гаптоглобина сыворотки крови человека.Имеющиеся в литературе данные о гемоглобинсвязывающем белке у животных весьма ограничены. Существовании Нр в сыворотке крови птиц в течении долгого времени отрицалось,а единичные сообщения зарубежных авторов носят фрагментарный характер ( Musquera S.e.a.,1977;1979; Delers F.,е.а.,1984;1986).Информация о химическом составе белка практически полностью отсутствует.Физико-химические и биологические характеристики белка не определены.Остается совершенно неизученным вопрос о динамике содержания Нр в онтогенезе у птицы.
Разработка методов исследования и определение физиологических нормативов,а также изучение ряда физико-химических и биологических свойств гаптоглобина позволит расширить сферу применения этого биохимического показателя и открывает новые возможности для получения биологически активных препаратов и их применения в ветеринарии.
Цель и задачи исследований.Основной целью настоящей работы было углубленное исследование некоторых функциональных и биохимических особенностей гаптоглобина из сыворотки крови кур.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
2.
1)Изучить возрастную динамику содержания гаптоглобина в сыворотке крови кур;
2)Разработать способ выделения и очистки и получить препарат гаптоглобина,свободный от белковых и низкомолекулярных примесей;
3)Определить химический состав белка,а также изучить некоторые его физико-химические и биологические свойства.
Научная новигна работы.Нами была установлена возрастная зависимость содержания гаптоглобина в сыворотке крови кур.
Впервые получен гомогенный препарат гаптоглобина из сыворотки крови кур.Внесены модификации в метод выделения гаптоглобина и определения его фенотипов.
Впервые изучены физико-химические и структурные характеристики исследуемого белка.Определены молекулярная масса и субъединичный состав, изоэлектрическая точка, максимум пероксидазной активности в зависимости от pri среды и температуры, термостабильность, аминокислотный и углеводный состав белка.Показано влияние различных факторов на образование и свойства гаптоглобин-гемогло-бинового комплекса.
Теоретическое и практическое значение работы.Данные по количественному содержанию гаптоглобина в сыворотке крови кур могут быть использованы как нормативы в лабораторной практике.
На основе результатов исследования разработан модифицированный метод выделения и очистки гаптоглобина из сыворотки крови кур,который может быть использован для получения чистого препарата белка с целью изучения структуры,свойств и применения в качестве диагностического препарата в лабораторной практике.
Научные результаты внедрены на кафедре органической и биологической химии и используются при чтении лекций и проведении лабораторно- практических занятий по темам:"Структура и функция белков крови" и "Метаболизм гемоглобина".Результаты работы использованы в методических указаниях "Методы современной биохимии" - М.:Моск. вет.акад.,1987. и " Выделение и очистка гаптоглобина из сыворотки крови кур" - М. :Моск.вет.акад.,1990.
Полученные данные вносят существенный вклад в наши познания о структурных особенностях белка и расширяют наши представления о путях эволюционного преобразования молекулы гаптоглобина,а также открывают перспективу целенаправленного изучения гаптоглобинов сельскохозяйственных животных и птицы.
3.
Апробация работы.Основные положения диссертационной работы докладывались на:Научных конференциях МВА,Москва, 1987 - 1990 гг.; на заседании Московского отделения биохимютеского общества АН СССР,Москва,МВА,март,1988;на Всесоюзном симпозиуме "Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа",Киев, сентябрь 1989 г.;на кафедральном и межкафедральном совещаниях сотрудников МВА.
Структура и объём диссертации.Работа состоит из введения,обзора литературы,собственных исследований,обсуждения результатов, выводов,сведений о практическом использовании результатов исследований, рекомендаций по использованию научных выводов,списка литературы, приложения. Диссертация содержит 157 страниц машинописного текста,включая 13 таблиц,24 рисунка и 3 фотографии.Список литературы состоит из 279 работ (71 отечественных и 208 зарубежных авторов).
Публикации работы.По материалам диссертационной работы опубликовано 5 печатных работ,в которых отражены ее основные положения.
