Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Аутоантитела к ДНК 10
1.1.1. Полиреактивность ААТ к ДНК 10
1.1.2. Происхождение ААТ к ДНК 12
1.1.3. Каталитическая активность ААТ к ДНК 15
1.2. Взаимосвязь вирусных инфекций и аутоиммунитета 17
1.2.1. Индукция аутоиммунных процессов при вирусных инфекциях 17
1.2.2. Аутоантитела к ДНК при вирусных инфекциях 24
1.2.3. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) (краткая характеристика) 26
1.2.4. Изменения в иммунной системе при ГЛПС 28
1.2.5. Циркулирующие иммунные комплексы при ГЛПС 29
1.3. Участие иммуноглобулинов М (IgM) в регуляции иммунного ответа 32
1.3.1. Функциональные свойства IgM 32
1.3.2. Роль IgM в регуляции иммунного ответа на вирусные Инфекции 33
1.3.3. Роль IgM в регуляции аутоиммунного процесса 35
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 38
2.1. Оборудование и реактивы 38
2.2. Объект исследования 40
2.3. Определение аутоантител к ДНК методом ИФА 40
2.3.1. Подбор оптимальной концентрации конъюгата 42
2.3.2. Статистическая обработка результатов 42
2.4. Выделение циркулирующих иммунных комплексов 44
2.5. Определение ДНК- абзимной активности в сыворотке крови 44
2.6. Выделение и очистка IgG и IgM иммуноглобулинов сыворотки крови 45
2.6.1 Осаждение иммуноглобулинов сульфатом аммония 45
9 2.6.2 .Обессоливание СА-фракции методом гель-фильтрации 46
2.6.3. Хроматография на колонке с QAE-сефадексом А-50 47
2.6.4 Аффинная хроматография ААТ к ДНК на нДНК и дДНК-целлюлозе 47
2.6.5 Выделение IgM ААТ к ДНК 48
ГЛАВА 3. Результаты экспериментов и их обсуждение 49
3.1. Содержание ААТ к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц 49
3.1.1. Содержание IgG ААТ к ДНК в сыворотке крови при ГЛПС 49
3.1.2. Содержание IgM ААТ к ДНК в сыворотке крови при ГЛПС 59
3.1.3. Зависимость содержания IgG ААТ к ДНК от уровня содержания IgM 67
3.2. Характеристика ЦИК в сыворотке крови больных и здоровых лиц 71
3.2.1. Содержание ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС 72
3.2.2. Определение ААТ к ДНК в составе ЦИК 74
3.2.3. Зависимость содержания ААТ к ДНК в ЦИК от уровня их содержания в сыворотке крови больных ГЛПС 77
3.3. ДНК-абзимная активность в сыворотке крови больных ГЛПС 79
3.3.1. Определение абзимной активности в сыворотке крови 79
3.4. Выделение и характеристика IgG ААТ к ДНК 84
3.4.1. Определение удельной активности IgG ААТ к ДНК 89
3.5. Выделение и характеристика IgM ААТ к ДНК 90
Заключение 94
Выводы 97
Литература 99
- Аутоантитела к ДНК
- Аутоантитела к ДНК при вирусных инфекциях
- Определение аутоантител к ДНК методом ИФА
- Содержание ААТ к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц
Введение к работе
По современным представлениям о природе иммунитета основным назначением иммунной системы является защита организма от внешней и внутренней биологической агрессии. Развитие защитной реакции связано со способностью иммунной системы распознавать чужеродные для данного организма макромолекулы и отличать их от собственных антигенов. С другой стороны, известно, что иммунная система в норме обладает потенциальной способностью вырабатывать антитела к большинству собственных антигенов и в сыворотке крови здоровых людей (Добродеева, Суслонова 1990, Несвижский и др., 1988, Lacroix-Desmazes et al, 1998) и интактных животных (Poverenny et al, 1966) всегда присутствует небольшой уровень аутоантител к собственным антигенам. Нарушение механизмов иммунорегуляции может привести к развитию аутоиммунных процессов в организме с повышением содержания в сыворотке крови аутоантител (ААТ) к собственным антигенам организма, что обычно сопровождается патологическими изменениями в различных органах и тканях (Spartz et al., 1997; Christen et al., 2004). Для большинства аутоиммунных заболеваний (АИЗ) характерно повышение содержания в сыворотке крови ААТ к нативной и (или) денатурированной ДНК, что рассматривается как один из диагностических признаков аутоиммунных заболеваний (Arbuckle et al, 2001; Gill et al., 2003; Sherer et al., 2004).
На различных моделях аутоиммунных патологий продемонстрирована возможность активного участия ААТ к ДНК в развитии заболевания (Сучков и др., 2001, Robin et al., 2006). Показано, что ААТ к ДНК проникают в клетки
(Koren et al., 1995; Reichlin et al., 1995), перекрестно реагируя с рецепторами клеточной мембраны, способны запускать апоптоз (Paul et al., 2002). Они обладают цитотоксической активностью (Sasaki et al, 1991, Kramers et al., 1994; Nezlin et al., 1999; Kozyr et al., 2002), которая коррелирует с их ДНК-гидролизующей активностью (Сучков и др., 2006). Имеются прямые доказательства повреждающего действия ААТ к ДНК при СКВ на ткань клубочков почек (Morioka, 1996; van Bruggen et al, 1997; Witte et al., 1998; Limaye, Mohan, 2004; Zeng et al., 2004).
В последние годы появились сведения об обнаружении признаков аутоиммунных процессов при вирусных заболеваниях, которые не относятся к АИЗ (Hansen et al., 1998). Повышение содержания в сыворотке крови ААТ к компонентам собственных клеток и тканей, в том числе к ДНК, выявлено в сыворотке крови при вирусном гепатите (Pawlotsky et al, 1994), при ВИЧ (Massabki et al., 1997; Zandman-Goddard, Shoenfeld, 2002), вирусном энцефалите (Гармашова и др., 2004), парвавирусной инфекции (Kerr et al., 1996).
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС), вызываемая РНК-содержащими хантавирусами (Raftery, 2002; Miyamoto et.al, 2003; Lednicky, 2003), является одним из опасных, характеризующихся высокой летальностью, вирусных заболеваний. Для ГЛПС характерно поражение многих органов и систем, в особенности почек, вследствие повреждения сосудов микроциркуляторного русла (Сиротин, 1994). Одним из основных факторов повреждения почек при ГЛПС являются циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), содержащие, наряду с антителами к вирусу, различные продукты гиперактивации иммунной системы, в том числе аутоантитела к собственным антигенам (Сомова-Исачкова и др., 2003).
В литературе отсутствуют сведения по характеристике спектра аутоантител при ГЛПС, и, неизвестно, присутствуют ли у больных ГЛПС в сыворотке крови и в составе ЦИК ААТ к ДНК. Принимая во внимание
» данные литературы о повышении уровня содержания ААТ к ДНК при
многих вирусных инфекциях, мы предполагаем, что при инфицировании хантавирусами в сыворотке крови больных также могут появиться ААТ к ДНК, которые способны вносить существенный вклад в развитие нефропатии как у больных СКВ (Gaynor et al., 1997, Сучков и др., 2005). Выяснение возможности участия ААТ к ДНК в развитии ГЛПС является
' одним из подходов для понимания роли ААТ к ДНК при вирусных
инфекциях и поиска новых методов лечения.
Цель исследования: выяснить возможность участия аутоантител к нативной и денатурированной ДНК в развитии геморрагической лихорадки с почечным синдромом.
Были поставлены следующие задачи:
определить уровень содержания IgG и IgM ААТ к нативной
иденатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц;
выделить из индивидуальных образцов сыворотки крови больных
ГЛПС и здоровых лиц циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и
выяснить присутствие в них ААТ к ДНК методом ИФА;
исследовать ДНК-гидролизующую активность ААТ в сыворотке крови
больных ГЛПС;
выделить из сыворотки крови очищенные фракции IgG и IgM ААТ к
ДНК методом аффинной хроматографии на ДНК-сорбентах и
определить их удельную ДНК-связывающую активность.
Научная новизна
В работе впервые исследованы ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и дана их характеристика.
Во всех исследованных образцах сыворотки крови больных ГЛПС, в
отличие от здоровых лиц, выявлена ДНК-абзимная активность, характерная
для цитотоксических ААТ к ДНК.
» Обнаружено, что уровень содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови
больных ГЛПС достоверно превышает уровень их содержания в сыворотке крови здоровых лиц.
Установлен ранее неизвестный факт присутствия ААТ к ДНК в ЦИК в сыворотке крови больных ГЛПС.
' Практическая значимость
Обнаруженное в работе достоверное повышение уровня содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС по сравнению с уровнем их содержания у здоровых лиц может иметь важное клинико-диагностическое значение.ПрисутствиеААТ к ДНК в составе ЦИК у больных ГЛПС указывает на то, что эти аутоантитела вовлечены в патогенез заболевания, что необходимо учитывать при выборе стратегии иммунокоррекции при ГЛПС.
Положения, выносимые на защиту:
1 .Установлено, что в сыворотке крови больных ГЛПС присутствуют ААТ к нативной и денатурированной ДНК
2. Выявленные существенные различия уровня содержания и свойств ААТ к ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц, свидетельствуют о потенциальной возможности участия ААТ к ДНК в развитии заболевания.
Апробация работы
Основные результаты исследований докладывались на XIII международной научной конференции «Ферменты микроорганизмов:
структура, функции, применение».- Казань, 2005; 9-ой Международной
Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI
века».- Пущино, 2005; 10-ой Международной Пущинской школе-
> конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века».- Пущино, 2006;
X всероссийском научном форуме «Дни иммунологии». - Санкт-Петербург, 2006; а также на ежегодных итоговых научных конференциях Казанского государственного университета в 2004-2005 гг.
Структура и объем диссертации
' Диссертационная работа изложена на 117 страницах и состоит из
введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения с 25 рисунками и 10 таблицами, выводов и списка цитируемой литературы с 165 наименованиями. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.
Аутоантитела к ДНК
Одним из характеристик свойств ААТ к ДНК является их полиреактивность. ААТ к ДНК способны вступать в реакции с хроматином, нуклеосомами, компонентами базальных мембран клубочков почек, ламинином, гепарансульфатом, коллагеном (Eilat and Naparstek, 1999; Smeenk, 2000). Отмечена способность ААТ к нативной ДНК перекрестно реагировать с поверхностными мембранными и рибосомальными белками (Sun et al., 1995), фосфолипидами, кардиолипином (Леках и др., 1997; Sharma et al., 2001). Кроме того, ААТ к нуклеиновым кислотам могут взаимодействовать с некоторыми экзогенными АГ, например, различными бактериальными липополисахаридами (Паутова и др. 1996).
Полиспецифичность анти-ДНК ААТ может объясняться несколькими причинами. В качестве одной из них Леках и др. (1997) предполагают наличие сходных эпитопов в молекулах АГ (например, фосфатные группы в ДНК и фосфолипидах, которые несут ярко выраженный отрицательный заряд). Gaynor и др. (1997) возможность перекрестного реагирования ААТ к ДНК с пептидами объясняют, исходя из предположения, что отрицательно заряженные остатки аспартата и глутамата являются в определенной мере аналогами фосфатных группировок, а ароматическиий остаток тирозина в пептидной молекуле аналогичны гидроксильным группам при пентозах в молекуле ДНК.
Abakushin и Poverenny (1996) выделили из препарата Ig белковую фракцию, в присутствии которой реакционная способность ААТ к ДНК существенно возрастала. По мнению авторов, в полученной ими белковой фракции содержатся вещества, участвующие в связывании ААТ к ДНК в качестве кофакторов, наличие которых в определенной степени может модулировать полиспецифичность ААТ.
Полиреактивность ААТ к ДНК выражается и в их способности к перекрестным реакциям с нативной и денатурированной ДНК (Леках и др., 1991). Связывание ААТ с ДНК зависит от множества факторов, так как взаимодействие внутри комплекса ДНК-ААТ может обеспечиваться различными механизмами: электростатическим притяжением, ван-дер-ваальсовыми и гидрофобными силами (Генералов и Новиков, 1998). Существует предположение о том, что определенный вклад в процесс связывания ААТ с ДНК вносят и полисахаридные компоненты молекулы AT (Yamada et al., 1997).
Условно ААТ сыворотки крови, по специфичности к нативной и денатурированной ДНК, можно разделить на несколько типов. К первому типу можно отнести естественные ААТ, присутствующие в сыворотке крови и здоровых людей, и больных аутоиммунными заболеваниями. Эти ААТ относятся преимущественно к классу IgM, обладают выраженной перекрестной реактивностью к различным собственным и экзогенным антигенам и являются, как правило, продуктами экспрессии эмбриональных генных сегментов, связывание которых с нуклеиновыми кислотами имеет, как правило, низкоаффинный характер. Специфичность таких ААТ в отношении нуклеиновых кислот разнообразна: они могут взаимодействовать с нативной и денатурированной ДНК (Teodorescu, 2002), различными синтетическими нуклеотидными полимерами, двуцепочечной РНК и т.д. Ко второму типу можно отнести ААТ, высоко специфичные в отношении либо к нДНК, либо к дДНК. Такая полиспецифичность ААТ к ДНК, по-видимому, связана с тем, что существуют две принципиальные возможности для связывания нуклеиновых кислот антителами. Во-первых, на антигенсвязывающем участке (Fab), где связывание характеризуется высокой специфичностью и аффинностью. Во-вторых, на участке Fc, на котором не происходит многоточечного узнавания антигена и связывание характеризуется низкой специфичностью и сродством.
В связи с тем, что ААТ в клетке могут связываться с компонентами ядра, хроматином, можно предположить, что ААТ к ДНК способны оказывать влияние на процессы транскрипции, трансляции и вносить изменения в клеточный цикл (Yanase et al., 1997). Показано, что в сыворотке крови содержится широкий спектр ААТ к компонентам трансляционного аппарата, в частности, к транспортным РНК и их комплексам с рибосомальными белками (Tsuzaka et al., 1996). Обнаружена способность ААТ к ДНК in vitro модулировать синтез РНК (Van Helden et al., 1989). Эти данные свидетельствуют в пользу возможности участия ААТ к ДНК в регуляции процессов трансляции. Существует также предположение, что расплетенное состояние ДНК в репликативном комплексе фиксируется аутоантителами к ДНК, что имеет прямое отношение к регуляции репликации ДНК и, следовательно, к регуляции синтеза белка.
Аутоантитела к ДНК при вирусных инфекциях
Часто исходной причиной сбоя иммунной системы и развития аутоиммунных процессов являются различные инфекционные агенты, которые могут выступать индукторами развития аутоиммунного состояния (АИС). Так, например, при рассеянном склерозе (РаСк) агентами, вызывающими АИС, являются вирусы кори и гепатита В (Бойко, Фаворова, 1995), герпеса, гриппа, папилломы, Эпштейна-Барра (Steinman, 2001).
Некоторые вирусные заболевания, такие как СПИД и вирусные гепатиты, не относятся к АИЗ, но при этих патологиях имеет место существенное нарушение иммунного статуса. Они сопровождаются аутоиммунными гуморальными и клеточными реакциями: в крови больных гепатитом, как и при АИЗ, обнаруживаются органонеспецифические ААГ (Nevinsky, Buneva, 2002). Кроме того, у пациентов с вирусными заболеваниями обнаруживаются повышенные титры AT против ДНК (Nevinsky, Buneva, 2002).
При клещевом энцефалите, вызываемом РНКовым вирусом, переносимом насекомыми, обнаруживаются AT не только к компонентам вируса, но и к ДНК. У больных этой вирусной инфекцией, как и при различных типичных АИЗ, наблюдался повышенный уровень содержания в сыворотке крови AT к ДНК по сравнению со здоровыми донорами. Известно, что повышенный уровень ААТ к ДНК наблюдался не у всех больных АИЗ. Гармашовой с сотрудниками (2004) показано, что процент больных с повышенным титром анти-ДНК AT среди больных клещевым энцефалитом существенно выше, чем наблюдается при многих других АИЗ (Гармашова и др., 2004).
В литературе имеются указания на то, что при СКВ и рассеянном склерозе повышенный титр AT к нативной ДНК (нДНК) наблюдается реже, чем к денатурированной ДНК (дДНК): 54 и 68% при СКВ и 18 и 53% при РаСк соответственно (Ершова и др., 2003). В отличие от рассеянного склероза и СКВ, при клещевом энцефалите уровень AT к нДНК достоверно превышал уровень анти-дДНК антитела - 40 и 32% соответственно. На начальной стадии клещевого энцефалита средняя концентрация AT против нДНК была в два раза ниже, чем на более поздней стадии. Авторы предполагают, что дальнейшее развитие заболевания может вести к усилению аутоиммунных процессов, способствующих высвобождению нДНК из клеток и выработке ауто-АТ к нДНК (Гармашова и др., 2004).
При менингиальной форме клещевого энцефалита происходит поражение тканей мозга, также как и при рассеянном склерозе. Показано, что в патогенезе РаСк ведущая роль принадлежит AT к ДНК (Williamson et al., 2001). Учитывая это, нельзя исключить, что в поражении мозга больных клещевым энцефалитом и развитии аутоиммунных реакций важную роль могут также играть ААТ к ДНК.
Сизякиной с сотрудниками (1996) был исследован уровень ААТ к ДНК при другом инфекционном заболевании - синдроме приобретенного иммунодефицита (СПИД). Ими показано, что в сыворотке крови больных ВИЧ присутствуют скрытые AT к ДНК, которые, вероятно, находятся в составе комплексов с различными компонентами сыворотки. Показано, что количество таких ААТ к ДНК увеличивается при переходе заболевания на более тяжелую стадию.
Остается неясным, способствуют ли ААТ к ДНК при этом обострению заболевания или они являются лишь следствием осложнений, обусловленных основным заболеванием.
Приведенные выше примеры о корреляции вирусных инфекций с повышенным уровнем ААТ к ДНК в сыворотке крови больных указывает на то, что вирусные инфекции часто выступают индукторами аутоиммунных состояний. Одним из основных механизмов индукции, по-видимому, является запуск аутоиммунных реакций в результате сродства эпитопов вирусного антигена с белками хозяина, то есть по механизму, известному под названием молекулярной мимикрии.
Определение аутоантител к ДНК методом ИФА
Определение уровня содержания ААТ к ДНК проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА), оптимизированным ранее в нашей лаборатории (Сатарова и др., 1994). В качестве антигена использовали ДНК эритроцитов цыплят ("Reanal", Венгрия). Для приготовления дДНК раствор нДНК выдерживали на кипящей водяной бане в течение 15 минут, после чего резко охлаждали. Концентрацию ДНК в растворе определяли, исходя из того, что 1 опт.ед. при длине волны 260 нм соответствует 40 мкг/мл.
Для выявления в лунках планшета антител, связавшихся с ДНК, І использовали конъюгированные с пероксидазой антитела против иммуноглобулинов человека (НПО "Вектор-Бест"), именуемые далее как «конъюгат». Рабочую концентрацию конъюгата определяли, исходя их данных предварительного эксперимента по выяснению оптимального разведения каждой серии конъюгата.
ИФА проводили по следующей схеме. В лунки активированных ультрафиолетовым светом планшетов (облучение в течение 2 часов на расстоянии 15 см от источника) вносили раствор ДНК (10 мкг/мл - как нДНК, так и дДНК) на 0,1 М фосфат - 0,05М цитратном буфере, рН 5,0 (ЦБ). Планшеты с сорбируемой ДНК инкубировали в течение ночи при комнатной температуре, после чего несвязавшуюся ДНК трижды отмывали фосфатно-солевым буфером с твином (ФСБТ): 0,01М фосфатный буфер, рН 7,2; ОДМ NaCl; 0,05% твин-20. Далее в подготовленные планшеты вносили образцы сыворотки крови, разведенные ФСБТ в соотношении 1:100. После чего планшеты инкубировали в течение 1,5 часов при 37С, а затем 0,5 часа при 4С. По окончании инкубации планшеты трижды промывали ФСБТ и вносили рабочий раствор конъюгата, приготовленный на ФСБТ. После внесения раствора конъюгата планшеты инкубировали и промывали, как описано выше. После указанных манипуляций планшеты несколько раз ополаскивали дистиллированной водой и вносили субстратную смесь, приготовленную на ЦБ и содержащую 0,05% Н2Ог и 0,4 мкг/мл ортофенилендиамина. Планшеты с субстратной смесью инкубировали в течение 0,5 часа в темноте при комнатной температуре, после чего измеряли уровень ответа цветной реакции ИФА на спектрофотометре "Multiscan" в единицах оптической плотности при длине волны 492 нм (ОП г) 2.3.1. Подбор оптимальной концентрации конъюгата
Одним из важных условий при определении ААТ, содержащихся в сыворотке крови людей в довольно небольших титрах, является оптимальная рабочая концентрация конъюгата. Поскольку отдельные партии конъюгата всегда варьируют по качеству, то перед использованием каждой новой серии необходимо проверять ее реакционную способность титрованием. Далее проводили реакцию ИФА по указанной в пункте 2.3 схеме. В качестве АГ использовали нДНК, в качестве источника AT - сыворотку крови больных СКВ. Оптимальную рабочую концентрацию конъюгата выбирали на линейном участке кривой титрования, где наблюдались максимальный уровень ответа реакции ИФА (ОП492 не менее 0,8-1,0) и нулевое значение неспецифического связывания конъюгата с полистиролом.
В результате экспериментальной проверки было выяснено, что оптимальная рабочая концентрация указанного конъюгата составляет 1:20000.
Статистическая обработка результатов
Поскольку метод ИФА является очень чувствительным, даже незначительные изменения условий реакции могут отражаться на её результатах. Поэтому для стандартизации результатов анализов, полученных в разное время, во всех экспериментах параллельно анализировали одну и ту же сыворотку крови с высоким содержанием ААТ к обоим типам ДНК, обозначенную как "стандарт".
Содержание ААТ к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц
Нами исследовано методом ИФА содержание ААТ классов IgG и IgM к нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови 60 больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (ГЛПС) и 25 здоровых лиц. Во всех исследованных образцах сыворотки крови выявлены IgG и IgM ААТ к нДНК и дДНК. Результаты по анализу содержания IgG ААТ к ДНК представлены на рис. 1 и 2. Индивидуальные значения уровня содержания ААТ к нДНК в сыворотке крови больных ГЛПС колеблются от 0,02 до 0,29 отн. ед., у здоровых - от 0,05 до 0,28 отн.ед. (рис.1). Содержание ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС варьирует от 0,22 до 0,81 отн.ед., у здоровых лиц- от 0,14 до 0,64 отн.ед. (рис. 2).
В таблице 1 приведено распределение частот индивидуальных уровней содержания ААТ к нативной и денатурированной ДНК у больных ГЛПС и здоровых лиц.
Как видно из таблицы 1, у 28 % больных ГЛПС и здоровых лиц уровень содержания ААТ к нДНК не превышает 0,07 отн.ед. У большинства больных ГЛПС (62%) и здоровых лиц (56%) уровень содержания ААТ к нДНК находится в пределах 0,08 - 0,19 отн.ед. Более высокий уровень содержания ААТ к нДНК (0,20-0,28 отн.ед.) наблюдается у 8 % больных ГЛПС и 16% здоровых лиц. Распределение частот индивидуальных уровней содержания ААТ к дДНК (табл.2) у больных ГЛПС и здоровых лиц существенно отличается. отн.ед.
У подавляющего большинства здоровых лиц (76%) уровень содержания ААТ к дДНК находится в пределах 0,14-0,37 отн.ед., в то время как у 72% больных ГЛПС он колеблется от 0,50 до 0,73 отн.ед.
В группе больных ГЛПС среднее значение содержания ААТ к нДНК по медиане составляет 0,10±0,07, то есть близко к норме, и 95% индивидуальных значений не превышает пороговые пределы данного показателя в норме. Совершенно иная картина выявляется при сравнении уровня содержания ААТ к дДНК в сыворотке крови больных ГЛПС и здоровых лиц. Средний уровень содержания ААТ к дДНК по медиане у больных ГЛПС составляет 0,60 ± 0,12 отн.ед., что в 2 раза превышает аналогичный показатель у здоровых лиц. У больных ГЛПС 50% индивидуальных показателей содержания ААТ к дДНК (между 25-м и 75-м перцентилями) находятся в пределах 0,52-0,69 (табл.4), что достоверно превышает пороговые значения нормы.
Приведенные данные свидетельствуют о том, что инфицирование человека хантавирусом и последующее развитие ГЛПС сопровождаются активацией аутоиммунных процессов в организме и усилением продукции ААТ к дДНК.
В литературе обсуждаются различные механизмы развития аутоиммунных процессов при вирусной инфекции. В качестве одной из причин индукции аутоиммунных реакций рассматривается возможность соматических мутаций в течение иммунного ответа, направленного против вирусных антигенов. Недавно показано, что нарушению толерантности к собственным антигенам может привести мутация в генах, кодирующих белки, ответственные за поддержание толерантности (Pawlotsky et. al., 1994). Индукция синтеза антител может быть связана также со структурным сходством детерминантов антигенов вируса с эпитопами антигенов человека и неспособностью В- и Т-клеток различать структурно сходные компоненты (Christen, Herrath, 2004).
Не исключена возможность, что продукция ААТ к ДНК может быть результатом антигенспецифичной активации и селекции В-клеток. Мы предполагаем, что в качестве специфического индуктора активации В-клеток могут выступать внеклеточные ДНК сыворотки крови, уровень содержания которых повышается при самых разных патологиях (Anker et al, 2001). В частности, нами обнаружено повышение уровня внеклеточной ДНК в сыворотке крови и при ГЛПС (данные не опубликованы).
Известно, что ведущим механизмом повреждения почек при ГЛПС является индукция воспалительных процессов иммунными комплексами (ИК), содержащими продукты активации иммунной системы в ответ на вторжение вируса. Иммунохимический состав ЦИК при ГЛПС еще недостаточно изучен и, неизвестно, входят ли ААТ к дДНК, уровень которых повышен при ГЛПС, в состав ЦИК. Наиболее полно исследовано клиническое значение ИК при системной красной волчанке (СКВ). Показано, что при СКВ ЦИК, в составе которых содержатся цитотоксические ААТ к ДНК, оседают на почечных канальцах и базальной мембране гломерул, и вызывают деструктивные процессы (Limaye, Mohan, 2004).
Вопрос о патогенетическом потенциале ААТ к дДНК при развитии ГЛПС пока остаётся открытым. Мы предполагаем, что они могут вносить существенный вклад в развитие воспалительных процессов в почках, как это показано при изучении механизмов развития СКВ. В связи с этим приобретает актуальность исследование иммунохимического состава ЦИК при ГЛПС, выяснение присутствия в их составе ААТ к ДНК что позволит судить о механизме участия ААТ к ДНК в патогенезе заболевания.
