Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Специфические токсиканты метилфосфоновая кислота и моноэтаноламин. активность ферментов в оценке функционального состояния печени (обзор литературы) 12
1.1. Взаимодействие токсиканта с организмом 12
1.2. Токсиканты метилфосфоновая кислота и моноэтаноламин 13
1.3. Особенности воздействия биологически активных веществ в низких дозах на живые организмы 22
1.4. АСТ, АЛТ и ХЭ как ферменты, отражающие функциональное состояние печени . 26
Глава 2. Материалы и методы исследования 34
2.1. Материалы и структура исследования 34
2.2. Методы исследования 40
2.2.1. Экспериментальные методы исследования 40
2.2.2. Биохимические методы исследования 41
2.2.2. Статистическая обработка измерений . 43
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 44
3.1. Изучение влияния моноэтаноламина на активность некоторых ферментов, характеризующих функциональное состояние печени, после введения лабораторным мышам 44
3.1.1. Определение времени максимального изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в плазме крови лабораторных мышей после внутримышечного введения МЭА в дозе 1 мг/кг массы тела 44
3.1.2. Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в зависимости от внутримышечного введения различных доз МЭА и определение доз, оказывающих наибольшее влияние (дозозависимый эффект) 48
3.1.3. Определение срока восстановления активности ферментов в плазме крови лабораторных мышей после однократного введения моноэтаноламина в дозах 1 и 10-12 мг/кг веса 53
3.1.4. Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в плазме крови лабораторных мышей в хроническом 3-х месячном эксперименте при еженедельном введении МЭА 55
3.2. Изучение влияния метилфосфоновой кислоты на активность некоторых ферментов, характеризующих функциональное состояние печени, после введения лабораторным мышам 57
3.2.1. Определение времени максимального изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в плазме крови лабораторных мышей после внутримышечного введения МФК в дозе 5 мг/кг массы тела 57
3.2.2. Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в зависимости от внутримышечного введения различных доз МФК и определение доз, оказывающих наибольшее влияние (дозозависимый эффект) 61
3.2.3. Определение срока восстановления активности ферментов в плазме крови лабораторных мышей после однократного введения метилфосфоната в дозах 5 и 10-15 мг/кг веса 66
3.2.4. Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в плазме крови лабораторных мышей в хроническом 3-х месячном эксперименте при еженедельном введении МФК 69
Заключение 72 Выводы 81
Список используемой литературы 83
- Особенности воздействия биологически активных веществ в низких дозах на живые организмы
- Биохимические методы исследования
- Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в зависимости от внутримышечного введения различных доз МЭА и определение доз, оказывающих наибольшее влияние (дозозависимый эффект)
- Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в зависимости от внутримышечного введения различных доз МФК и определение доз, оказывающих наибольшее влияние (дозозависимый эффект)
Особенности воздействия биологически активных веществ в низких дозах на живые организмы
Как было написано выше, МЭА, ввиду широкого применения в промышленности и быту, может появляться в природной среде в различных количествах, в основном это будут малые и сверхмалые концентрации. МФК может попадать в природную среду, благодаря широкому использованию фосфонатов в сельском хозяйстве, быту, в составе отходов при уничтожении фосфорорганических отравляющих веществ; и также как МЭА, количества этого ксенобиотика в компонентах природной среды будут варьироваться, от низких до сверхмалых доз (СМД). Есть данные о содержании микроколичеств ФОС в домашней пыли [176].
Оценке воздействия сверхмалых доз на различные биологические системы животных и растений в настоящее время уделяется много внимания.
Отношение ученых всего мира к этой области исследований, поделило их на два лагеря. Первые, исключают научность и достоверность полученных данных по воздействию СМД, основываясь, чаще всего, на недостаточной компетентности исследователей; ошибках в постановке ими эксперимента, а также последующей неправильной статистической обработкой полученных данных. Вторые, убеждены в обратном, что не однократно пытаются доказать научному сообществу. Примером использования сверхмалых доз является такое медицинское направление как гомеопатия, известная и используемая еще издревле.
Одними из самых первых ученых, использующих в своих исследованиях СМД, были независимые исследователи Грейфсвальдского университета в Германии Р. Арндт и Х. Шульц, изучавшие в конце XIX века метаболизм дрожжей. Они пришли к выводу, что яды в сверхмалых дозах производят стимулирующий эффект, а в больших – ингибируют или полностью парализуют деятельность клетки [142, 178].
Одним из первых отечественных ученых, изучающих действие СМД, был Г.Н Шангин-Березовский, опубликовавший работу по токсичному действию некоторых мутагенов в ультрамалых дозах [133; 134]. В конце ХХ века при изучении влияния антиоксидантов на электрическую активность нейрона максимальный эффект был зарегистрирован при концентрации вещества 10-15 моль/л, это было подтверждено с помощью эксперимента на животных [16, 20]. В то же время французским иммунологом Жаком Бенвенистом была опубликована, «взорвавшая научную диаспору» работа, по эффекту «памяти воды» и «передачи биоинформации» [144]. За эти исследования ученый был удостоен антинобелевской премии, что ярко характеризует негативное отношение консервативных ученых к вопросу о воздействии СМД.
На основе этих исследований работы по изучению СМД не были закончены; наоборот, это послужило толчком к активному изучению данного вопроса. [6; 18; 19, 22, 33, 38, 39, 53, 58, 65; 69; 71, 76, 138, 143, 182].
Cверхмалыми концентрациям (дозам) на данный момент считаются концентрации 10-12 моль/л и ниже, количество молекул при этом в клетке находится на уровне от 1 до 10 [21].
В начале XXI века для многих лекарственных веществ, а также различных пестицидов, регуляторов роста и других биологически активных веществ была определена их эффективность в сверхмалых дозах. Отечественными учеными были проведены исследования биологических эффектов СМД естественных регуляторов, в первую очередь гормонов, разных биохимических процессов. Одним из выводов по результатам работы стало обнаружение ингибирования синтеза дезоксирибонуклеиновой кислоты в клетках переживающих культур опухолей человека под влиянием гормона эпифиза - мелатонина, причем такой результат наблюдался при концентрации как 510-5, так и 5(10-12–10-13) моль/л [128]. В дозозависимых экспериментах, с применением сверхмалых доз, была выявлена интересная закономерность: двум концентрациям действующего вещества одной из которых являлась высокая либо низкая доза, другой – сверхмалая, соответствовали пики активности, разделенные на графике так называемой «мертвой зоной»; в этой зоне вещество либо не проявляло никакой активности, либо изменяло ее на противоположную [16, 86, 122, 147, 148]. Другой выявленной особенностью действия СМД является эффект «расслоения» свойств. При уменьшении концентрации вещества сохраняется активность, но исчезают побочные эффекты. Примером в данном случае может являться феназепам, который в терапевтической дозе действует как успокаивающее и снотворное средство, а в СМД (10-9-10-15 моль/кг) исключительно как успокаивающее [85]. Множество работ посвящено изучению возможных механизмов действия веществ различной химической природы в СМД на живые системы организма [12; 48; 96]. Говоря о механизме действия сверхмалых доз биологически активных веществ, следует в первую очередь объяснить саму возможность реакции столь малого количества молекул со своими рецепторами, ведь при концентрации 10-15 моль/л и ниже в определенной степени теряется смысл понятия «концентрация». Одной из идей о возможном механизме действия сверхмалых доз биологически активных веществ на клеточном и субклеточном уровнях, как параметрическом резонансе, была предложена Л. А. Блюменфельдом. Он считал, что параметрический резонанс возникает при условии, в котором временные параметры, запускаемые биологически активными веществами внутриклеточных процессов, совпадают с временем подхода вещества к рецептору. В результате связывания активного вещества с его рецептором (ферментом) последний переходит в конформационно-неравновесное состояние, обеспечивающее на определенной стадии релаксации его максимальную активность [12, 102].
Другая идея принадлежит Бурлаковой Е. Б. За основу механизма действия веществ в сверхмалых дозах, ею было предложено использование аллостерического взаимодействия в молекуле фермента двух каталитических центров с различным сродством к активному веществу [17, 21].
Активно ведется изучение действия сверхмалых доз активных веществ на биологические мембраны [18, 21, 68; 69, 72].
Многие ученые, в основном теоретики, объясняли эффект СМД, прибегая к структуре воды, в частности к ее структурным образованиям – кластерам. Одна часть исследователей считают, что долгоживущие кластеры имеются в самой воде; мнение других сходится на том, что водные кластеры индуцируются вводимыми биологически активными веществами [21, 35; 49, 50].
Для выяснения эффекта СМД проводятся экспериментальные исследования физико-химических свойств и структур разбавленных водных растворов биологически активных веществ [74; 75, 109; 121; 141].
Биохимические методы исследования
В ходе эксперимента опытным лабораторным мышам одноразовым инсулиновым шприцем вводились внутримышечно в область бедра растворы МФК и МЭА объемом 0,1 мл, нейтрализованные (доведенные до рН=7,0) водными растворами NaOH или HCl. Контрольным группам мышей внутримышечно вводился физиологический раствор в объеме эквивалентном объему раствора МЭА и МФК вводимому лабораторным мышам опытных групп. Введение осуществлялось в первой половине дня. В работе использовались химические вещества – МФК фирмы «Sigma-Aldrich Fluka» (Германия) и МЭА фирмы «НеваРеактив» (Россия).
Для осуществления взятия крови натощак вечером предшествующего дня из клеток с мышами изымалось питание. Забор крови проводили методом декапитации с помощью металлических ножниц исключительно в первой половине дня. Кровь сливали по стеклянной воронке, промытой физиологическим раствором и гепарином в пластиковые пробирки Эппендорфа с двумя каплями гепарина 5000 Ед/мл фирмы «Синтез» (Россия). Пробирки закрывали и несколько раз переворачивали для перемешивания раствора гепарина с кровью. Для отделения плазмы полученную цельную кровь центрифугировали 12 минут при 3000 об/мин на центрифуге SiGMA 1-15P (Германия), после чего плазму отбирали автоматическим дозатором фирмы «Biohit» (Финляндия).
В плазме крови определяли ферментативную активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и холинэстеразы. Активность АСТ и АЛТ в плазме крови определяли по аттестованной в лаборатории экотоксикологии РЦ СГЭКиМ «Методике измерений активности ферментов в плазме (сыворотке) крови мелких теплокровных животных фотометрическим методом», свидетельство об аттестации ФГУП «УНИИМ» № 224.0474/01.00258/2011 от 29.11.2011 г. Активность холинэстеразы в плазме крови определяли по аттестованной в лаборатории экотоксикологии РЦ СГЭКиМ «Методике выполнения измерений биохимических показателей в плазме (сыворотке) крови мелких теплокровных животных фотометрическим методом», свидетельство об аттестации ФГУП «УНИИМ» № 224.11.03.052/2009 от 17.06.2009 г. Определение активности АСТ основано на измерении в УФ - спектре изменения оптической плотности. L-аспартат при взаимодействии с -кетоглутаратом в присутствии АСТ образуют L-глутамат и оксалоацетат, последний, в свою очередь, в реакции с НАДН в присутствии малатдегидрогеназы восстанавливается до яблочной кислоты и НАД+. Скорость окисления НАДН прямопропорциональна изменению оптической плотности определенной при длине волны 320 нм и соответственно активности АСТ в пробе [140]. К 1 мл прогретого до 37С реагента, содержащего L-аспартат, -кетоглутарат, НАДН и малатдегидрогеназу приливали 100 мкл плазмы крови, перемешивали и через одну минуту начинали фотометрировать опытные пробы с интервалом в одну минуту при длине волны 320 нм против холостой пробы, содержащей дистиллированную воду. Количество считываний было равно трем.
Определение активности АЛТ основано на измерении в УФ-спектре изменения оптической плотности. L-аланин при взаимодействии с -кетоглутаратом в присутствии АЛТ образует L-глутамат и ПВК, которая в реакции с НАДН в присутствии лактатдегидрогеназы восстанавливается до молочной кислоты и НАД+. Скорость окисления НАДН прямопропорциональна изменению оптической плотности, определенной при длине волны 320 нм и соответственно активности АЛТ в пробе [140]. К 1 мл прогретого до 37С реагента, содержащего L-аланин, -кетоглутарат, НАДН и лактатдегидрогеназу приливали 100 мкл плазмы крови, перемешивали и через одну минуту начинали фотометрировать опытные пробы с интервалом в одну минуту при длине волны 320 нм против холостой пробы, содержащей дистиллированную воду. Количество считываний было равно трем. Определение активности ХЭ основано на измерении при 405 нм изменения оптической плотности. Холинэстераза гидролизует бутирилтиохолин с образованием масляной кислоты и тиохолина. Тиохолин восстанавливает окрашенный гексацианоферрат (III) до бесцветного гексацианоферрата (II). Скорость снижения оптической плотности раствора при длине волны 405 нм пропорциональна активности холинэстеразы в пробе. К 1 мл прогретого до 37С реагента, содержащего гексацианоферрат (III) в пирофосфатном буфере приливали 20 мкл плазмы крови и инкубировали при 37С в течение 5 минут, затем добавляли 250 мкл реагента, содержащего бутирилтиохолин йодид, перемешивали и через две минуты начинали фотометрировать опытные пробы с интервалом в одну минуту при длине волны 405 нм против холостой пробы, содержащей дистиллированную воду. Количество считываний было равно трем. Все биохимические исследования проводимые методами спектрофотометрии производились на полуавтоматическом биохимическом анализаторе Stat Fax 3300 «Awareness Technology» (США).
Статистическую обработку данных проводили с использованием критериев непараметрической статистики. При исключении выбросов использовали метод Титьена-Мура, проверяя минимум и максимум значений выборки. Достоверность различий между двумя выборками определяли по W-критерию Вилкоксона-Манна-Уитни для независимых выборок [36, 43]. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимали равным менее 0,05. Результаты анализов усредняли с помощью расчета медианы, на основании которой считали различия в процентах между опытными и контрольными группами. Для цифрового отображения разброса данных использовали 25-ый и 75-ый процентиле. При статистической обработке результатов исследования был использован интегратор модульной программы AtteStat 1.0 для программы Microsoft Exel, разработанный И.П. Гайдышевым в лаборатории информационно-вычислительного центра ФГУН «РНЦ «ВТО» им. академика Г.А. Илизарова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации.
Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в зависимости от внутримышечного введения различных доз МЭА и определение доз, оказывающих наибольшее влияние (дозозависимый эффект)
Было выяснено, что МЭА оказывает достоверное влияние на активность изучаемых ферментов белых лабораторных мышей, причем наибольшее отклонение большинства показателей относительно контрольных групп наблюдалось через 4 суток после введения МЭА в дозе 1 мг/кг веса [95]. Исходя из этого, мы пришли к выводу о необходимости изучения «дозозависимого эффекта» МЭА через 4 суток после введения токсиканта. В ходе обработки полученных экспериментальных данных были выявлены достоверные изменения в активности исследуемых ферментов в зависимости от вводимых доз МЭА в диапазоне высоких от 100 до 1 мг/кг с интервалом в один порядок; средних от 10-3 до 10-9 мг/ кг и малых от 10-12 до 10-18 мг/кг веса тела животного с интервалом в 3 три порядка.
Самой высокой дозой МЭА в этом эксперименте была взята 0,1 часть среднего по данным [34; 57] уровня ЛД50.
Данные изменения активностей ферментов печени – АЛТ, АСТ, ХЭ в зависимости от вводимых доз МЭА представлены в таблице 3.1.2.1. и также отображены на рисунках 3.1.2.1., 3.1.2.2., 3.1.2.3., 3.1.2.4.
Примечание. О - опытная группа (по 20 животных), К - контрольная группа (по 20 животных). Верхний индекс – статистический уровень значимости различий (р) по сравнению с контрольными группами при р 0,05.
Активность АЛТ при введении моноэтаноламина в высоких дозах от 100 до 1 мг/кг достоверно снижалась в 1,45 раза (100 мг/кг) и 1,54 раза (10 и 1 мг/кг). Также значительное снижение от 23 до 30% было отмечено после введения токсиканта в средней (10-9) и малых (10-12-10-18) мг/кг дозах. При введении средних доз МЭА (10-3-10-6) мг/кг достоверного изменения активности АЛТ не было отмечено. В целом, можно отметить тенденцию, характеризующуюся снижением активности АЛТ после введения высоких и малых доз МЭА.
С лабораторно-диагностической точки зрения, снижение активности АЛТ не указывает на серьезные нарушения в работе печени, сопровождающиеся цитолизом клеток печени, об этом бы свидетельствовало резкое увеличение активности данного фермента. Изменение активности АЛТ (в % относительно контрольных групп) в плазме крови через 4 суток после введения различных доз МЭА. Примечание. По оси абсцисс - значения концентраций МЭА в мг/кг массы тела. Значения отличий (в % ) указаны в случае достоверных различий при р 0,05.
В случае снижения активности АЛТ можно предположить, что существует дефицит ее кофермента - пиридоксальфосфата [91]. Также снижение активности АЛТ может быть обусловлено нарушением функции почек [24].
Активность АСТ, также как и активность АЛТ имела тенденцию к снижению (см. рис. 3.1.2.2.). Об этом свидетельствует снижение активности фермента после введения высоких доз (100-1), средней (10-9) и малых (10-12-10-18) мг/кг. Воздействие же средних доз (10-3-10-6) мг/кг на активность АСТ имело иной характер: если введение токсиканта в дозе 10-3 мг/кг, как и в случае с АЛТ не оказало достоверного влияния, то после введения 10-6 мг/кг отмечается увеличение активности на 22%. Также можно отметить схожую тенденцию к снижению активности между АЛТ и АСТ, при переходе от высоких доз к малым, что объясняется возможным дефицитом витамина B6.
. Изменение активности АСТ (в % относительно контрольных групп) в плазме крови через 4 суток после введения различных доз МЭА. Примечание. По оси абсцисс - значения концентраций МЭА в мг/кг массы тела. Значения отличий (в % ) указаны в случае достоверных различий при р 0,05.
Иная по направленности тенденция, наблюдалась при введении средних доз МЭА 10-3 и 10-6 мг/кг: увеличение активности АСТ в данном случае, может быть обусловлено незначительными разрушениями содержимого гепатоцитов. Изменение активности ХЭ (в % относительно контрольных групп) в плазме крови через 4 суток после введения различных доз МЭА. Примечание. По оси абсцисс - значения концентраций МЭА в мг/кг массы тела. Значения отличий (в % ) указаны в случае достоверных различий при р 0,05. Активность холинэстеразы достоверно снижалась во всем диапазоне вводимых доз МЭА. Максимальное снижение было зафиксировано после введения доз 1 и 10-9 мг/кг и составляло 1,72 и 1,89 раза соответственно.
Рисунок 3.1.2.4. Суммарная картина изменения активности АСТ, АЛТ, ХЭ (в % относительно контрольной группы) в плазме крови через 4 суток после введения различных доз МЭА. Примечание. По оси абсцисс – значения концентраций МЭА в мг/кг массы тела животного. Значения отличий (в %) указаны в случае достоверных различий при p 0,05.
Сравнительный анализ результатов исследования дозозависимого эффекта различных доз МЭА, на активность ферментов печени через 4 суток после введения токсиканта показал, что основным эффектом воздействия являлось снижение активности АСТ, АЛТ и ХЭ в 1,2-1,9 раза (см. рис. 3.1.2.4.).
При введении высоких (100-1) и малых (10-12-10-18) мг/кг доз МЭА наблюдалась гипоферментемия. Причинами ее, вероятно, стало нарушение обмена липидов, в частности фосфолипидов биологических мембран [154], и как следствие блокировка каналов выхода ферментов в межклеточное пространство. Не исключается вероятность снижения белок-образующей функции на фоне гипоальбуминемии [47].
Эффект введения средних доз МЭА (10-3-10-6 мг/кг) характеризовался снижением активности ХЭ в 1,3 раза, а также увеличением активности АСТ в 1,2 раза (для дозы 10-6 мг/кг). Такой эффект проявился, предположительно, по причине незначительного разрушения содержимого гепатоцитов, и как следствие снижения активности ХЭ и увеличения активности АСТ, за счет высвобождения митохондриальной формы трансаминазы. Также подобный характер воздействия МЭА в средних дозах, может быть обусловлен образованием, так называемой «мертвой зоны», характерной для некоторых биологически активных веществ [16, 86, 122, 147, 148].
Изучение особенностей изменения активности АСТ, АЛТ и ХЭ в зависимости от внутримышечного введения различных доз МФК и определение доз, оказывающих наибольшее влияние (дозозависимый эффект)
Известно, что МФК оказывает достоверное влияние на изучаемые биохимические показатели, причем наибольшее отклонение большинства показателей относительно контрольных групп наблюдалось через 3 суток после введения МФК в дозе 5 мг/кг веса животного. Исходя из этого, мы пришли к выводу о необходимости изучения «дозозависимого эффекта» через 3 суток после введения растворов МФК.
В ходе обработки полученных экспериментальных данных были выявлены достоверные изменения в активности исследуемых ферментов в зависимости от вводимых доз МФК в диапазоне высоких от 50 до 2 мг/кг с интервалом в один порядок; средних от 10-3 до 10-9 мг/кг и малых от 10-12 до 10-21 мг/кг массы тела животного с интервалом в три порядка.
Самой высокой дозой МФК на этом этапе исследования была взята 0,01 часть уровня ЛД50 [175].
В таблице 3.2.2.1., а также на рисунках 3.2.2.1, 3.2.2.2, 3.2.2.3., 3.2.2.4. представлены данные изменения активностей печеночных ферментов – АЛТ, АСТ, ХЭ в зависимости от вводимых доз МФК.
Активность АЛТ после введения МФК в высоких дозах от 50 до 2 мг/кг достоверно снижалась в 1,82 раза (50 мг/кг), в 1,45 и 1,63 раза (5 и 2 мг/кг) см. рисунок 3.2.2.1. Введение малых доз (10-12-10-21 мг/кг) снижало активность АЛТ в 1,25- 1,72 раза.
Тенденция к снижению активности трансаминазы наблюдалась после введения средних доз МФК, при этом достоверное снижение активности проявилось только после введения дозы 10-3 мг/кг массы тела.
Также как и в случае введения высоких и малых доз МЭА, снижение активности АЛТ после введения МФК не является причиной серьезных патологических процессов в печени и объясняется, вероятно, дефицитом витамина В6 и нарушением функционирования почек [24, 91].
Из рисунка 3.2.2.2. видно, что изменение активности АСТ после введения различных доз МФК имеет различную направленность. После введения высоких доз токсиканта 50 и 5 мг/кг активность фермента была снижена соответственно в 1,54 и 1,49 раза. Введение МФК в высокой дозе 2 мг/кг и средних дозах (10-3-10-6) мг/кг незначительно повышало активность АСТ на 9, 18 и 11%. Дозы токсиканта 10-9 и 10-21 мг/кг не вызвали достоверных изменений активности фермента. Введение малых доз МФК (10-12-10-18) мг/кг сопровождалось незначительным снижением активности АСТ в среднем на 8-15 %.
Активность ХЭ после введения различных доз МФК изменялась волнообразно. Введение высоких и малых доз приводит к снижению активности фермента, тогда как введение средних доз увеличивает активность или не вызывает достоверных отличий от контрольной группы. Так активность ХЭ после введения МФК в интервале доз 50–2 мг/кг была снижена соответственно на 19, 33 и 18 %; в интервале доз 10-12-10-18 мг/кг на 19, 42 и 27%. Максимальные изменения (снижение) активности ХЭ приходятся на дозы 5 и 10-15 мг/кг массы тела. Увеличение активности фермента на 14% проявилось после введения средней дозы МФК – 10-3 мг/кг. После введения доз токсиканта 10-6-10-9 и 10-21 мг/кг достоверных изменений активности ХЭ обнаружено не было.
Анализ суммарной картины изменения активности изучаемых ферментов, представленной на рис. 3.2.2.4., показал разнонаправленность влияния высоких, средних и малых доз МФК. Введение токсиканта в высоких (50-5 мг/кг) и малых (10-12-10-21 мг/кг) дозах приводило в целом к гипоферментемии и, как следствие, достоверному снижению активности в 1,2-1,8 раза. Наблюдаемая гипоферментемия, в данном случае, возможно, обусловлена недостатком пиридоксальфосфата [24, 100], преобладанием в клетке каталитических процессов и снижением скорости синтеза белка [130]. Причиной этим изменениям могло стать нарушение проницаемости мембран гепатоцитов из-за воздействия бифильных молекул МФК на липидный бислой мембран клеток печени [64]. Не исключается также, что снижение активности ХЭ может быть связано с обратимым ингибированием (взаимодействие молекулы МФК с ОН- группой серина активного центра фермента) [98].
Повышение активности АСТ, при снижении активности АЛТ и ХЭ, после введения МФК в дозе 2 мг/кг, скорее всего, обусловлено активацией синтеза белков и повышением энергетической нагрузки на митохондрии гепатоцитов, что могло привести к частичным разрушениям их мембран и проникновению митохондриальной АСТ из матрикса в цитоплазму клеток.
Эффект введения средних доз токсиканта (10-3-10-9 мг/кг), характеризовался гиперферментемией АСТ и ХЭ, и смещением значений активности АЛТ в область значений контрольной группы. Эти изменения могут быть следствием активной митохондриальной деятельности в клетке и преобладанием анаболических процессов над каталитическими. Такой характер воздействия МФК, как и МЭА, в средних дозах на активность ферментов может быть обусловлен существованием, так называемой «мертвой зоны», характерной для некоторых биологически активных веществ [16, 86, 122, 147, 148].
