Содержание к диссертации
Введение
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
2.1. Фолликулогенез, гормоны и регуляция астрального цикла 11
2.2. Способы индуцирования суперовуляции у коров и телок-доноров 27
2.3. Методы извлечения эмбрионов у доноров 42
2.4. Морфологическая оценка качества эмбрионов, методы их пересадки и криоконсервирования 48
2.5. Заключение 62
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 71
3.1. Материал и методы исследований 71
3.2. Вызывание суперовуляции у коров и телок-доноров , 75
3.2.1. Отбор коров и телок под доноров эмбрионов 76
3.2.2. Синхронизация охоты доноров 83
3.2.3. Влияние различных гонадотропинов и биологически активных веществ на уровень суперовуляции 89
3.2.4. Гормональный фон в крови доноров в разные периоды эстрального цикла и сезоны года 118
3.2.5. Взаимосвязь биохимических показателей крови доноров
с эмбриопродуктивностью 129
3.2.6. Многократное использование высокоценных коров в качестве доноров эмбрионов 137
3.2.7. Использование в качестве доноров эмбрионов телок случного Возраста 150
3.3. Извлечение и оценка качества эмбрионов 156
3.3.1. Технология нехирургического извлечения эмбрионов у коров
и телок-доноров 156
3.3.2. Поиск и оценка качества эмбрионов 167
3.4. Пересадка эмбрионов 180
3.4.1. Отбор и подготовка реципиентов 181
3.4.2. Гормональный и биохимический фон в крови реципиентов
перед нехирургической пересадкой эмбрионов 192
3.4.3. Результаты нехирургических пересадок эмбрионов реципиентам 201
3.5. Использование криоконсервирования эмбрионов в
трансплантации 213
3.5.1. Механизм процесса замораживания и оттаивания эмбрионов 214
3.5.2. Криопротекторы и подготовка эмбрионов к замораживанию 220
3.5.3. Криотехника и режимы замораживания и оттаивания эмбрионов 223
3.5.4. Продолжительность хранения, дальняя транспортировка и межпородная пересадка замороженных эмбрионов 232
4. ОБСУЖДЕНИЕ 235
5. ВЫВОДЫ 255
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 259
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 260
- Фолликулогенез, гормоны и регуляция астрального цикла
- Способы индуцирования суперовуляции у коров и телок-доноров
- Материал и методы исследований
Введение к работе
Производство молока, мяса и другой животноводческой продукции в соответствии научно обоснованным нормам потребления продуктов животного происхождения составляет основу продовольственной безопасности государства и социального обеспечения населения (145). Определяющее значение для реализации данного положения в организационно-хозяйственном аспекте скотоводства имеет высокоэффективный численный и породный состав структуры совокупного стада, соответствующий экономике каждого региона (137). Однако современное отечественное скотоводство характеризуют качественные структурные изменения: с начала 90-х годов происходит устойчивое сокращение поголовья крупного рогатого скота, сопровождающегося увеличением доли коров в стаде при одновременном уменьшении шлейфа. Отечественное скотоводство устойчиво приобретает экстенсивные формы ведения (66, 67, 68). В результате этого возникла ненормальная экономическая обстановка, ибо зависимость России от импорта молочных продуктов и мяса возросла до недопустимых размеров. За период 1991-1999 годов производство молока в стране сократилось на 43%, а говядины - более чем в 2 раза, что в расчете на душу населения ниже медицинских норм потребления. Рост импорта не решает проблему, а лишь создает нездоровую конкуренцию со стороны зарубежных производителей, реализующих не всегда качественный товар по демпинговым ценам (146, 137).
Эти условия аргументировали разработку институтами РАСХН программы развития животноводства России на период до 2010 года, которую в мае 2000 года одобрил Президиум Россельхозакадемии. Программа направлена на положительную коррекцию негативных тенденций в скотоводстве: производство молока планируется увеличить на 24 млн т (с 32 млн т до 56 млн т ). При стабилизации имеющегося поголовья на уровне 13 млн коров с удоем 2500 кг молока (все категории хозяйств) их продуктивность должна быть повышена до 4300 кг. В программе, наряду с принятием комплекса организационных, экономических и технологических мер планируется интенсифицировать использование генетического потенциала продуктивности пород скота, который на 35-45% в настоящее время остается невостребованным. Для повышения эффективности крупномасштабной селекции, обеспечивающий ежегодный рост удоев коров, следует увеличивать интенсивность отбора лучших быков по потомству. Параллельно планируется активизировать процесс структурных изменений породного состава, удовлетворяющих требованиям экономики каждого отдельного региона.
Принимая во внимание масштабы разработанной программы, становится очевидным, что традиционные методы воспроизводства не позволяют на должном уровне решать поставленные задачи. В этих условиях особую актуальность придают мероприятиям, направленным на улучшение организации воспроизводства на основе современных биотехнологических методов (67, 137, 160), уже в достаточной мере апробированных в скотоводстве и обладающих значением для других видов животных (121, 139). В первую очередь сюда относят биотехнический метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, в основе которого лежат принципы направленной регуляции репродуктивной функцией, впервые разработанные отечественными учеными (37, 38, 39, 81, 132).
Главной перспективой развития метода трансплантации является создание методик, обеспечивающих получение максимального числа потомков от коров с желательным генотипом за счет гормонального индуцирования множественной овуляции. Метод эмбриотрансплантации дает реальную возможность существенно интенсифицировать селекционный прогресс за счет использования генетического потенциала, представляющего собой резерв генофонда у коров, обладающих уникальными хозяйственно-полезными свойствами, что невозможно достичь, применяя традиционные методы воспроизводства (естественное и искусственное осеменение).
В селекционных программах использование метода эмбриотрансплантации нацелено на ускоренное воспроизводство по линии мать-сын, учитывая, что коровы через сыновей-производителей оказывают положительное влияние на генетический прогресс крупных популяций скота. Наибольшие успехи по созданию высокопродуктивных молочных стад достигнуты в Канаде и США, причем лидерство они удерживают именно благодаря эффективному использованию метода трансплантации эмбрионов. Достаточно сказать, что более 70% быков-производителей, занесенных в государственные книги учета, получены путем пересадки эмбрионов (333).
На современном этапе эмбриотрансплантация позволяет значительно сократить селекционный интервал: после соответствующих гормональных обработок вызывают суперовуляцию у половозрелых телок и извлекают пригодные для трансплантации реципиентам эмбрионы, получая после этого высокоценный племенной молодняк. Метод трансплантации в практике скотоводства применяют также для быстрого восстановления численности и широкого распространения редких и исчезающих пород животных, ускоренного создания выдающихся стад коров-рекордисток, как матерей будущих быков-родоначальников линий, создания банка криоконсервированных эмбрионов с последующей их пересадкой в стадах (315, 362, 178, 128). Очевидно преимущество метода при импорте и экспорте сельскохозяйственных животных (учитывая жесткие карантинные требования).
Таким образом, трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота обуславливает высокую эффективность целенаправленного использования генетического материала, что значительно повышает производительность труда в селекционной работе при выведении новых пород, линий и семейств животных.
Трансплантацию эмбрионов используют как уникальный метод исследований, касающихся фундаментальных (репродуктивная, физиология, биохимия, эндокринология, генетика) и прикладных (акушерство, гинекология) дисциплин. Активно используют технологию эмбриотрансплантации в программах исключения передачи таких заболеваний как лейкоза, бычьей диарее и др. (152, 235).
При трансплантации эмбрионов становится доступным, не требуя большого времени, выявление нежелательных рецессивных генов, что приведет к возможности их элиминации из популяций сельскохозяйственных животных. Разрабатываются методы культивирования ооцитов вне организма и их последующее оплодотворение in vitro или в яйцеводах самок того же самого или другого вида. Разделение эмбрионов с целью получения генетических копий и химер, а так же получение клонов животных методами генной инженерии и Т-ядер открывают особые возможности и перспективы. Разработаны для практического применения методики определения пола предимплантационных эмбрионов на стадии морулы путем хромосомного анализа или выявления H-Y антигена специфическими антителами (209).
На современном этапе исследования по биотехнологии воспроизводства крупного рогатого скота проводят, прежде всего, в направлении, связанном с непосредственной реализацией достигнутых результатов в сферу производства. Уровень знаний, полученный на основе достижений физиологии, эндокринологии, биохимии, фармакологии и других наук, позволяет в области биотехнологии трансплантации эмбрионов получить стельность до 70-80% от числа пересадок или до 3-4 телят-трансплантатов на одно извлечение, то есть показатели аналогичные практическим показателям, достигнутым в области технологий искусственного осеменения. Однако необходимо иметь в виду, что приводимый уровень эффективности характерен для экспериментальной работы, при условии безукоризненного соблюдения зоогигиенических норм содержания, кормления и эксплуатации животных, когда все технологические элементы выполняют высоко квалифицированные специалисты на здоровых животных, прошедших жесткий ветеринарный контроль. Реально, в производственных условиях показатели приживляемости не превышают, в лучшем случае, 50-55%. За последние 1.5-2 десятилетия накоплен огромный объем литературы, отражающий экспериментально-практическую работу в области новейших технологий воспроизводства. Тем не менее, реализация метода трансплантации, как в условиях производства, так и во многих научно- исследовательских институтах встречает затруднения. Недостаточно надежны методы индуцирования суперовуляции, высока вариабельность результатов гормональных воздействий, недостоверна предсказуемость реакции яичников на гормональные препараты. При получении приемлемого числа эмбрионов на донора имеет место высокий процент дегенерации и отсутствия оплодотворяемости, наличия персистирующих и атрезирующих фолликулов в яичниках доноров. Еще остаются недостаточно совершенной техника извлечения, оценка качества, криоконсервации и трансцервикальной пересадки эмбрионов (143, 118, 119, 122).
Однако совершенствование и практическое применение метода эмбриотрансплантации необходимо как для решения первоочередных задач по преодолению негативных тенденций в животноводстве, так и для развития других биотехнологических направлений: генная и клеточная инженерия, использующая специальные векторы для интеграции чужеродной генной конструкции в пронуклеус зиготы; исследования по получению тотипотентных эмбриональных стволовых клеток с генными конструкциями с целью создания множественных линий с генетическим разнообразием; исследования по получению трансгенных животных и клонов; исследования по элиминации нежелательных генов (158). Следует учитывать, что перечисленные направления, при условии совершенствования, в ближайшие годы должны стать важнейшими факторами повышения эффективности селекции сельскохозяйственных животных (159, 160).
В этой связи исследованиям и механизмам внедрения научных достижений в практику скотоводства необходимо придать новый импульс. Назрела острая потребность в переосмыслении старых и определении новых, оригинальных подходов к исследованиям в избранной области знаний с созданием и использованием принципиально новых методик (208). Вместе с тем без создания современной теоретической концепции, но главное без систематизации, анализа и обобщения всего накопленного за последние двадцать лет экспериментального материала и производственного опыта невозможна перспектива модернизации и практического применения биотехнологического метода трансплантации эмбрионов с целью преодоления накопившихся в молочном скотоводстве проблем и дальнейшего развития отрасли.
Цель и задачи исследований. Для решения этих вопросов нами была поставлена цель исследований - разработать и усовершенствовать технологию получения не менее 6 эмбрионов за одно извлечение на донора и достичь 50% приживляемости эмбрионов при пересадке.
Для достижения поставленной цели сочли необходимым решить следующие задачи:
1. Разработать новые методы вызывания суперовуляции у коров и телок-доноров с использованием существующих отечественных гормональных препаратов.
2. Исследовать эндокринные и биохимические аспекты для определения тестов на эмбриопродуктивность.
3. Усовершенствовать приборы для извлечения эмбрионов у коров- доноров и сконструировать приборы для извлечения эмбрионов у телок-доноров.
4. Изучить влияние биологически активных препаратов (утеротоник, ПДЭ, оксилат, миксоферон) на результаты суперовуляции и пересадки эмбрионов.
5. Разработать технологию низкотемпературного замораживания и оттаивания эмбрионов с применением криопротектора этиленгликоль.
Научная новизна. Усовершенствованы методы вызывания полиовуляции у коров и телок доноров на основе применения современных гормональных препаратов и биологически активных веществ. Усовершенствованы и сконструированы новые приборы для извлечения и пересадки эмбрионов. Изучены эндокринные и биохимические факторы, влияющие на эмбриопродуктивность доноров, возможность многократного использования под доноров коров и телок случного возраста, а также разработана технология глубокого замораживания эмбрионов с криопротектором этиленгликоль. Новизна исследований подтверждена патентом на катетер для извлечения эмбрионов у телок и пятью рационализаторскими предложениями по усовершенствованию технологии трансплантации эмбрионов.
Практическая значимость. Совершенствование методов индуцирования полиовуляции у коров и телок доноров позволяет получать стабильные результаты по выходу нормальных эмбрионов более 6 на донора. С использованием сконструированного катетера для извлечения эмбрионов у телок-доноров повысился процент извлекаемости эмбрионов более чем на 30%. Разработанные методические и технологические условия глубокого замораживания эмбрионов с криопротектором этиленгликоль снизили временные показатели подготовки эмбрионов к замораживанию и оттаиванию, а также позволили проводить пересадку эмбрионов в тех же пайэтах в условиях ферм, не снижая процента приживляемости. За разработку технологии трансплантации эмбрионов и внедрение в производство была присуждена премия Совета Министров СССР 30.11.1990г.
Реализация результатов исследований. Полученные результаты использованы в 2-х инструкциях по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота и четырех методических рекомендациях ВИЖа, результаты исследований вошли в ежегодные и пятилетние отчеты отдела трансплантации эмбрионов на Ученом Совете ВИЖа.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и одобрены на 11 международных, союзных, республиканских и зональных конференциях (Москва, Тарту, Львов, Харьков, Киров, Петербург, Боровск, Брест, Минск, 1985-2000 г.г.).
Публикации. Основные научные результаты и положения, включенные в диссертацию, отражены в 37 публикациях, в том числе 2-х инструкциях и 4-х методических рекомендациях.
Фолликулогенез, гормоны и регуляция астрального цикла
Важнейшей функцией организма самок сельскохозяйственных животных является репродуктивная функция, направленная на сохранение вида, особенностью которой для данных животных является, поли - и моноцикличность. Ритмичное проявление эстрального цикла у самок домашних животных достигших половой зрелости обусловлено и находится в непосредственной зависимости от центральной нервной системы и ее взаимоотношений с эндокринной системой (189, 50, 104, 112, 247, 101, 281, 41, 87).
В последнее десятилетие благодаря современным высокочувствительным методам определения концентрации гипофизарных и других гормонов в биологических жидкостях организма получены новые данные о значении и функциональных состояниях желез внутренней секреции, что, в частности позволило определить роль и непосредственное участие гормонов в механизме регуляции полового цикла. Митюшков М.И. и другие (89) считают, что гуморальная регуляция физиологических процессов существовала задолго до появления нервной системы. Гормональную регуляцию биологических процессов, происходящих в организме, авторы относят к высшей гуморальной регуляции.
В настоящее время накопилось много экспериментальных и клинических данных о роли коры головного мозга, гипоталамо-гипофизарного комплекса, яичников и матки в регуляции полового цикла у самок домашних животных (90, 27, 197, 247, 101, 41, 134). По мнению этих и других авторов, каждое звено проявляет свое действие с определенной периодичностью в строго определенное время в зависимости от фазы полового цикла.
Яичники у самок сельскохозяйственных животных расположены в тазовой полости. Внутренним концом с помощью собственной связки прикрепляются к матке, а наружным при помощи поддерживающей связки прикрепляются к стенке таза. Снаружи яичник покрыт поверхностным зародышевым эпителием, под которым расположена белочная оболочка, состоящая из соединительной ткани. В яичниках различают две части: центральную и наружную. Центральную часть занимает мозговой слой, в котором проходят кровеносные сосуды яичника и нервы. Мозговой слой переходит в ворота, где расположена сеть яичника. В наружной части (корковом слое) находятся гамето-гормонопродуцирующие элементы яичника, фолликулы и желтые тела. Основную массу фолликулов составляют примордиальные фолликулы, представляющие собой ооцит, окруженный одним слоем фолликулярного эпителия. Начало развития фолликула сопровождается образованием нескольких слоев фолликулярных клеток, ростом яйцеклетки и формированием вокруг нее прозрачной оболочки (зона пеллюцида). Такой фолликул приобретает овальную форму и продвигается из мозговой зоны яичника в корковую зону. Далее вокруг ооцита образуется фолликулярная полость, заполненная жидкостью. Фолликул с образовавшейся полостью называют третичным или везикулярным. Одновременно с пролиферацией гранулезного слоя образуется две соединительно-тканные оболочки внутренняя и наружная, которые наряду с гранулезным слоем участвуют в продуцировании половых гормонов (92, 1).
Развитие фолликулов до образования в них полости не контролируется гонадотропными гормонами. С момента образования полости фолликул становится восприимчивым к гонадотропным гормонам и способным к продукции половых гормонов (111, 101). Эти данные подтверждаются исследованиями по выявлению рецепторов к ФСГ в клетках гранулезы, а к ЛГ - в клетках тека-интерна и наружном слое клеток гранулеза. Вначале развития фолликулов рецепторы гранулезы более чувствительны к ФСГ, чем к ЛГ. ФСГ в синергизме с эстрогенами повышают чувствительность фолликулярных клеток к ЛГ (270, 36).
Продуцируемые клеточными элементами фолликула стероиды выделяются во внеклеточное пространство, в том числе и в фолликулярную полость. В фолликулярной жидкости установлено наличие всех стероидов - простагенного, андрогенного и эстрогенного рядов (163).
Концентрация половых стероидов в фолликулярной жидкости различна на разных этапах роста и развития фолликула. Наибольшие различия в зависимости от стадии развития фолликула обнаружены в уровнях эстрогенов и андрогенов. Соотношение между этими гормонами обратное, в фолликулярной жидкости мелких и больших фолликулов. Сходную динамику отмечают и Lindner L.O. е.а (270). Такая закономерность в динамике стероидных гормонов в зависимости от стадии развития фолликулов отражает стадийность в функциональном состоянии стероидпродуцирующих систем, характеризуя физиологическое значение гормонов в механизмах овуляторного процесса. Согласно результатам исследований данных авторов, в фолликулярной жидкости небольших фолликулов количество андрогенов преобладает над эстрогенами. По мере созревания фолликулов происходит увеличение концентрации эстрогенов и снижение уровня андрогенов.
Способы индуцирования суперовуляции у коров и телок-доноров
Трансплантация эмбрионов как биотехнологический метод включает следующие технологические элементы: подбор, синхронизация, индуцирование суперовуляции, искусственное или естественное осеменение донора, хирургическое или нехирургическое извлечение и морфологическая оценка эмбрионов, кратковременное или длительное их хранение, отбор и подготовка реципиентов и пересадка эмбрионов.
Индуцирование суперовуляции (множественной овуляции), бесспорно, является одним из самых сложных и определяющих этапов в технологии трансплантации эмбрионов у животных, так как на этом этапе решается проблема потенциального выхода эмбрионов от высокопродуктивных животных (101). После того как было установлено, что экзогенное введение гонадотропных гормонов, содержащих в своем составе ФСГ-активность, стимулирует рост и развитие примордиальных фолликулов в яичниках самок, их начали использовать для индуцирования множественной овуляции у домашних животных.
Метод суперовуляции был разработан и освоен в нашей стране выдающимся эмбриологом Завадовским М.М. и его сотрудниками (40). Еще в 20-30-е годы под руководством Завадовского М.М. были проведены экспериментальные работы, в которых было показано, что если ввести в кровь самки гонадотропные гормоны, то это приводит к стимулированию роста, развитию и созреванию дополнительного количества фолликулов. В качестве гонадотропного гормона использовалась сыворотка жеребых кобыл - СЖК. Количество созревших фолликулов зависело от дозы инъецированной СЖК (44, 76). Авторы также отмечают, что наиболее важным звеном в современной биотехнологии трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных является гормональное индуцирование суперовуляции у них. В группу доноров переводятся только те животные, которые положительно реагируют на инъекцию гонадотропных гормонов (107).
Но имеется еще целый ряд проблем, связанных с суперовуляцией такие, как установление оптимальной дозы гонадотропина, используемой с сочетании с лютеолитическими препаратами. Почти ничего неизвестно о факторах, влияющих на скорость восстановления яичников у животных с множественной овуляцией, и в особенности, о возможных отрицательных влияниях избыточного количества яичниковых гормонов на воспроизводительную функцию, продвижение яйцеклеток и их жизнеспособность. Не изучен до конца механизм биологического действия ГСЖК при вызывании суперовуляции, не разработаны точные критерии оценки качества овуляции и др.
Стимулирование фолликулярного роста и овуляции у доноров с использованием ГСЖК вызывает эндокринные изменения у большинства обработанных животных. После инъекции гонадотропина яичники увеличиваются в массе и объеме с последующим образованием разного количества и величины желтых тел. Антагонизм, в связи с реакцией яичников, эстрогенов и прогестерона приводит к накоплению такого количества гормонов в крови животных, уровень которых резко отличается от нормы.
Такой эндокринологический статус оказывает влияние на морфологическое и физиологическое состояние шейки и рогов матки, яйцеводов и может неблагоприятно влиять на продвижение гамет, нормальное развитие зародышей, что способствует снижению оплодотворяемости и дегенеративным изменениям зародышей в течение и после суперовуляции.
Для увеличения масштаба практического применения метода трансплантации зародышей, необходимы стандартные условия вызывания множественной овуляции. Используемые методы в настоящее время нуждаются в усовершенствовании до такого уровня, чтобы они стали надежными, дешевыми и при исполнении были несложными.
Первые сообщения о вызывании множественной овуляции у коров- доноров были сделаны L.E. Casida и др. (180). После этого проведены многочисленные исследования в этом направлении с использованием гонадотропинов, гипофизарных и плацентарных гормонов. При этом основной целью исследований было изучение действия различных гормонов, и их сочетаний, установление оптимальных доз, то есть выявление таких доз гормональных препаратов, которые за несколько дней до предполагаемой охоты вызывали бы стимуляцию роста и созревания 10-20-ти и более фолликулов.
К сожалению, лишь некоторые авторы приводят показатели соотношения числа оплодотворенных яйцеклеток на донора, что является главным в оценке эффективности метода гормональной обработки.
Анализ данных литературы показал, что в среднем на одного донора получено не более 4-х оплодотворенных зародыша с учетом потерь при неудачном осеменении и извлечении зародышей, а также минимальной овуляции.
По данным E.F.Graham (212) в Северной Америке по группе центров по трансплантации в среднем на одного донора получено по 3.9 зародышей. Было показано, что сроки применения фолликулостимулирующих гормонов имеют очень важное значение и связаны со стадией эстрального цикла. Попытки применения ГСЖК в лютеиновой фазе оказались неэффективными. Для достижения удовлетворительной множественной овуляции у коров и телок доноров и оплодотворяемости яйцеклеток гонадотропин использовали в фолликулярной фазе полового цикла (с 16-го дня). Эстральный цикл коровы- донора можно контролировать предварительной энуклеацией желтого тела.
Однако, эта процедура не безопасна из-за появления спаек в яичнике, а иногда и гибели животных вследствие возможного кровотечения.
D.F.Dowling (196), а затем T.L.Avery и др. (162), E.S.E. Hafez и др. (221) комбинировали инъекции ГСЖК с энуклеацией желтого тела ректально и установили, что индекс суперовуляции и оплодотворяемость яйцеклеток зависят от чистоты проведения энуклеации.
Материал и методы исследований
Отбор коров-доноров - это целенаправленный выбор племенных животных, хорошо реагирующих на гормональную обработку дающих биологически полноценные эмбрионы. Основным критерием пригодности коров в качестве доноров - это ее генетическая ценность и способность передавать высокие продуктивные признаки (73).
Коров, для использования в качестве доноров, мы отбирали по следующим критериям: генетический потенциал, воспроизводительный статус, молочная продуктивность, возраст, состояние здоровья.
Эффективно влиять на генетический прогресс в стаде при трансплантации можно лишь в том случае, если продуктивность донора превышает средний надой по стаду 3 тыс. кг молока за лактацию и более. При отборе коров-доноров руководствовались комплексом селекционных признаков: породность, экстерьер, конституция, морфофункциональные свойства вымени, легкость отелов, жизнеспособность приплода. Отдавали предпочтение животным с длительным сроком использования, а среди них - коровам, имеющих высокопродуктивных дочерей и положительно оцененных по качеству потомства сыновей.
Основное условие, определяющее гормональные физиологические функции и получение полноценного приплода, - это полноценное сбалансированное кормление с учетом физиологического состояния и продуктивность животных. Особенно важно обеспечить кормление коров- доноров в периоды запуска и после отела первые 3-4 месяца, поскольку эти периоды совпадают с максимальным увеличением массы плода и наивысшей молочной продуктивностью, на что расходуется большое количество питательных веществ. Низкий уровень кормления, несбалансированность рационов по общей питательности к жизненно важным элементам ведут к нарушению обмена веществ, воспроизводительной функции и снижению качества эмбрионов.
Важнейшим критерием отбора коров под доноров является воспроизводительный статус.
После отела воспроизводительная система коров подвергается 4 стадиям изменений (81, 25).
1. Лизис желтого тела и развитие в яичнике новых фолликулов регулируется нейрогуморальными связями.
2. Изменение размеров матки до небеременного состояния сопровождается частичным разрушением мышечных, сосудистых, соединительных и других тканей матки, очень сильно разросшихся во время беременности.
3. Разрушение и последующее новообразование покровного эпителия слизистой оболочки матки и маточных трубчатых желез, что обуславливает их секреторную функцию.
4. Полное удаление из матки клеточного детрита, накопившегося в результате разрушительных процессов и, главное, исчезновение из матки микроорганизмов (оздоровление матки).
Продолжительность этих стадий варьирует от 30 до 90 дней в зависимости от благополучия отела, продуктивности, возраста.
Уменьшение размеров матки до небеременного состояния, определяемого ректальной пальпацией, не может служить гарантией к готовности получения нормальных эмбрионов. У многих коров первая овуляция происходит через 25- 35 дней после отела при еще увеличенной матке и незавершенной перестройке эндометрия. Следовательно, наступление первой охоты после отела не может служить критерием готовности матки к осеменению.
