Введение к работе
Актуальность проблемы. Протимозин а - это низкомолекулярный, чрезвычайно кислый ядерный белок, обнаруженный в клетках млекопитающих. Он вовлечен в процессы клеточного деления и является жизненно важным белком. Однако конкретная функция протимозина а и механизм его действия неизвестны, хотя высокая консервативность и его участие в пролиферации клеток свидетельствуют о том, что протимозин а играет некую фундаментальную роль в живых клетках. Изучение свойств протимозина а в клетках млекопитающих затруднено ввиду сложности организации этих клеток. Поэтому использование простых модельных систем, таких как клетки бактерий, продуцирующих белок млекопитающих, является одним из подходов для понимания свойств белка и механизмов его функционирования.
Цель работы. Целью диссертационной работы является изучение свойств протимозина а при продукции белка в клетках E.coli - модельной системе, для которой существует большое количество хорошо разработанных молекулярно-биологичес:<их и генетических методов исследования.
Научная новизна и практическая ценность работы. В настоящей работе показано, что при экспрессии гена протимозина а млекопитающих в клетках E.coli происходит остановка деления клеток. За угнетение клеточного роста отвечает мРНК протимозина а, а точнее - ее фрагмент 230-271 и.о., а не сам белок. При исследовании образования ковалентного комплекса протимозина а крысы с тРНК показано, что при продукции протимозина а в клетках Exoli тРНК присоединяется к С-концевой области белка. Комплекс с тРНК может образовывать и С-концевой пептид протимозина а, при этом ни один из С-концевых остатков треонина не принимает участия в образовании связи с тРНК. Также было показано, что протимозин а способен
присоединять тРНК in vitro при инкубации очищенного белка и суммарной РНК E.coli. Реакция протекает наиболее эффективно в присутствии ионов цинка. Протимозин а также способен образовывать комплекс с Т7-транскриптом тРНКЛ1а человека, однако этот процесс малоэффективен. В настоящей работе обнаружено, что протимозин а является цинк-связывающим белком, и ионы цинка стимулируют взаимодействие протимозина а с белком Rev ВИЧ-1.
Публикации и апробация работы. По теме диссертации опубликовано пять печатных работ. Результаты исследований доложены на III Всероссийской планово-отчетной конференции по направлению «ГЕННАЯ И КЛЕТОЧНАЯ ИНЖЕНЕРИЯ» (Пущино, 1993), на II съезде биохимического общества РАН (Москва, 1997) и на 13-м Французско-Российском симпозиуме «Структура и регуляция эукариотических генов» (Монпелье, 1997).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из следующих частей: введение, обзор литературы, результаты и обсуждение, материалы и методы, выводы, список цитируемой литературы. Работа проиллюстрирована 48 рисунками и 28 таблицами.
