Введение к работе
Актуальность проблемы.
Получение препаративных количеств биологически важных белков, их структурно-функциональное исследование, в том числе направленное изменение их структуры и свойств сильно облегчается,а иногда невозможно без клонирования генов, кодирующих эти белки, и получения эффективно экспрессирующих генЕО-инженерных конструкций. Среди современных методов клонирования можно выделить следующие: 1) Клонирование гена, полученного из геномного банка 2) Клонирование кДНК копии гена. 3) Химико-ферментативная сборка гена из синтетических олигодезоксирибонуклеотидов. Третий метод позволяет планировать синтетический ген, изменяя нуклеотидную последовательность с сохранением аминокислотной; при этом существенно облегчаются последующие генно-инженерные манипуляции с геном, и сконструированные гены максимально приспособлены к работе в определенном типе клетки-хозяина Благодаря развитию химических методов синтеза олигодезоксирибонуклеотидов (в дальнейшем олигонуклеотиды), он является более простым и не связан с дополнительными генно-инженерными операциями, как при работе о природными генами. Большинство синтетических генов было экспресси-ровано в ирокариотических и эукариотических системах и было показано, что биологическая активность синтетических генов не отличается от природных аналогов.
Цель работы.
Целью работы являлся химико-ферментативный синтез рекомби-нантного гена, кодирующего интерлейкин-3 человека, к его экспрессия в Е. coll.
Научная новизна и практическая ценность работы.
Настоящая работа является частью комплексных исследований по клонированию и экспрессии различных лимфокинов, проводимых в Институте биоорганической химии им. М. М. Шэмякина АН СССР совместно с ВНИИ Генетика Миныедпрома
Интерлейкин 3 ( IL-3 ) - мультиколониестимулирующий фактор, действующий на полипотентные стволовые клетки костного мозга на различных стадиях роста и дифференцировки этих клеток. Этот биорегулятор в настоящее время успешно проходит' клинические испыта-
- 4 -ния и считается перспективным при лечении летально облученных и раковых больных, а также при различных заболеваниях крови.
Получение штаыыа-продуцента IL-3 человека имеет большое значение также для изучения ыолекулярно-биологических основ его действия в гемопоззе.
Объем работы.
Диссертационная работа изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы, состоящего из 126 ссылок.