Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ 6
ВВВДЕНИЕ 7
ГЛАВА I. ОБЗОР ЖТЕРАТУРЫ. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ТРОМБОЦИТОВ.
-
Измерение агрегации тромбоцитов Ю
-
Реакции тромбоцитов на действие агрегирующих агентов 15
-
Структурная организация мембран тромбоцитов.
-
Краткая характеристика строения биологических мембран 17
-
Организация и физико-химические свойства липидов в мембранах тромбоцитов... jg
-
Гликопротеиды и сократительные белки тромбоцитов 22
-
Микротрубочки и микрофиламенты тромбоцитов 28
-
Тромбин-индуцируемые изменения свойств тромбоцитов 30
-
Роль цАМФ, продуктов метаболизма арахидоновой кислоты и ионов Са в агрегации тромбоцитов 35
1.6. Цель и задачи исследования 39
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 43
ГЛАВА II. Объекты и методы исследования 43
-
Выделение тромбоцитов 43
-
Установка для исследования агрегации тромбоцитов 44
-
Спектрофотометрические измерения 46
-
Флуоресцентные измерения 46
-
Метод флуоресцентных зондов 47
-
Определение размеров тромбоцитов 47
-
Электронно-микроскопические измерения 48
-
Способ определения серотонина в биологических средах 48
-
Статистическая обработка результатов ...... 52
11.10. Реактивы 52
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУВДЕНИЕ 54
ГЛАВА III. Исследование тромбин-индуцированной агрегации
тромбоцитов. Влияние физических и химических факто
ров 54
-
Обоснование использования низких концентраций тромбоцитов в растворе и лазерных источников света для изучения агрегации 54
-
Кинетика тромбин-индуцированной агрегации тромбоцитов при низких концентрациях клеток
в растворе 62
-
Связь мевду структурно-морфологическими состояниями тромбоцитов и параметрами кривой агрегации 67
-
Роль мембран и цитоскелета в определении рефрактерности тромбоцитов 79
-
Дезагрегация и рефрактерность тромбоцитов 80
-
Тромбин-индуцированная агрегация рефрактерных к АДФ тромбоцитов ....82
-
Роль микротрубочек и микрофиламен-тов в агрегации тромбоцитов 85
III.4.4. Установление различий в структурном состоянии мембран интактных и рефрактерных тромбоцитов с применением
КонА 93
III.5. Роль факторов среды в процессах агрегации
тромбоцитов 96
-
Влияние рН среды на агрегацию тромбоцитов 97
-
Реакция тромбоцитов на действие
гипо- и гипертонических сред 102
111.5.3. Агрегация тромбоцитов при различ
ных температурах среды ИЗ
ГЛАВА ІУ. Структурные изменения в белок-липидных компонентах
тромбоцитов при действии факторов внешней среды ... И8
ІУ.І. Спектры поглощения и флуоресценции тромбоци
тов 118
ІУ.2. Выявление нативного актина в тромбоцитах
флуоресцентным методом 120
ІУ.З. Влияние рН среды на параметры связывания
флуоресцентного зонда АНС тромбоцитами ...... 123
ІУ.4. рН -зависимые конформационные изменения в
белках тромбоцитов 132
ІУ.5. Влияние ионов La. на структурное состоя
ние тромбоцитарных белков 139
ІУ.6. Роль белков в реакции тромбоцитов на действие
гипотонических сред 146
ІУ.7. Исследование температурных переходов в белок-
липидных системах тромбоцитов 151
ГЛАВА У. Агрегация тромбоцитов больных ишемической болезнью
сердца 161
У.I. Особенности АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов больных ишемической болезнью
сердца 162
У.2. Влияние окисленных и неокисленных жирных кислот на АДФ-индуцируемую агрегацию
тромбоцитов 166
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 172
ВЫВОДЫ 180
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 183
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Введение к работе
Роль тромбоцитов в регуляции и обеспечении первичного гемостаза определяется способностью этих клеток останавливать кровотечение в сосудах системы микроциркуляции. Гемостаз осуществляется посредством динамических превращений тромбоцитов, включающих в себя адгезию к поврежденной сосудистой стенке, агрегацию и образование пробки. Нарушение любого из звеньев механизма тромбо-образования является причиной кровоточивости. Повышение агрегационной способности тромбоцитов приводит к образованию микротромбов и нарушению микроциркуляции. Способность тромбоцитов к агрегации нарушается при некоторых патологических состояниях организма, например, атеросклерозе, ишемической болезни сердца Д8,337. Правильная оценка изменений функциональных свойств тромбоцитов имеет большое практическое значение не только в диагностике и лечении тромбозов и геморраргий различного происхождения, но и в их профилактике. В связи с этим, изучение регуляторних механизмов агрегационной способности тромбоцитов является весьма актуальным как для теории тромбообразования, так и для практической медицины.
Одно из центральных мест в этой проблеме занимает вопрос о взаимоотношениях структурных и функциональных свойств тромбоцитов. К настоящему времени установлено, что реакция тромбоцитов на действие агрегирующих агентов, приводящая к агрегации тромбоцитов, происходит с участием клеточной мембраны /ІЗ57.
Показано, что при активации тромбоцитов происходит связывание белков мембран с цитоскелетом /Ї54,158/, увеличивается микровязкость липидного бислоя /134/, наблюдаются изменения в белках мембран /131/. Имеются сведения о нарушении способности тромбо- цитов к агрегации под действием агрегирующих агентов при изменении жирнокислотного состава липидов мембран тромбоцитов и при нарушении системы микротрубочек и микрофиламентов /126/. Однако данные о структурно-функциональных корреляциях немногочисленны и роль структурного состояния мембранных компонентов и подмем-бранных систем тромбоцитов в определении их агрегатоспособности и в механизмах агрегации изучена недостаточно. Из литературных данных следует, что исследования функциональных свойств рефрактерных тромбоцитов и тромбоцитов, стимулированных варьированием факторов внешней среды, значительно опережают анализ их структурных свойств.
В связи с изложенным, целью данной работы явилось изучение структурных и функциональных свойств тромбоцитов при действии факторов внешней среды и агрегирующих агентов и выявление связи структурного состояния тромбоцитарных мембран с агрегадионной способностью тромбоцитов.
В качестве объекта исследований выбраны тромбоциты человека. В качестве агрегирующего агента использован тромбин. Исследование структурно-морфологических изменений в тромбоцитах и динамики агрегации проводили на специально разработанном агрего-метре. Для характеристики структурных состояний мембранных систем тромбоцитов применили методы светорассеяния, абсорбционного и люминесцентного анализа, а также метод флуоресцентных зондов.
В результате проведенных исследований установлены связь между структурно-морфологическим состоянием тромбоцитов и параметрами кривой агрегации, природа рефрактерного состояния тромбоцитов и изменений светопропускания суспензий тромбоцитов при действии гипотонических сред, роль варьирования факторов внешней среды в механизмах агрегации. Показано также, что изменения рЙ » ионной силы и температуры среды инициируют структурные пере- стройки в мембранах тромбоцитов. На основе полученных данных развивается положение о регуляторной роли структурного состояния компонентов мембран и цитоскелета в определении способности тромбоцитов к агрегации. Предложен возможный механизм агрегации тромбоцитов под действием тромбина. Выявлены различия между тромбоцитами здоровых людей и больных ишемической болезнью сердца.
Полученные в работе данные расширяют и углубляют представления о механизмах регуляции агрегационной способности тромбоцитов.
