Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Основные патоморфологические процессы, лежащие в основе мочекаменной болезни и экспериментального оксалатного нефролитиаза (Обзор литературы) 9
1.1 Основные теории оксалатного нефролитиаза с точки зрения патоморфологических изменений, выявляемых в почке 9
1.2 Характеристика современных моделей экспериментального нефролитиаза 15
1.3 Закономерности структурных преобразований тканей почки при экспериментальном нефролитиазе 19
1.4 Влияние свободно-радикального окисление на формирование нефролитиаза, роль антиоксидантов 23
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 29
2. Характеристика экспериментального материала 29
2.2 Методы исследования 30
ГЛАВА 3. Морфологическая характеристика структурных : преобразований почки в условиях этиленгликолевои модели оксалатного нефролитиаза 35
3.1 Общая характеристика морфологии почки интактной крысы 35
3.2 Характеристика преобразовательных процессов в тканях почки на сутки экспериментального оксалатного нефролитиаза 40
3.3 Особенности морфологии почки на 42 сутки экспериментального оксалатного нефролитиаза 51
ГЛАВА 4. Иммуноморфологическая и биохимическая характеристика процессов оксидативного повреждения в тканях почек в условиях этиленгликолевои модели оксалатного нефролитиаза 62
4.1. Морфологическая характеристика экспрессии маркеров оксидативного повреждения и антиоксидантной защиты в условиях развития этиленгликолевой модели оксалатного нефролитиаза 62
4.2 Характеристика биохимических показателей оксидативной и антиоксидантной систем почек 74
ГЛАВА 5. Особенности морфологической организации почки в условиях антиоксидантной терапии в эксперименте 78
Заключение s6
Выводы 98
Практические рекомендации 100
Список литературы
- Характеристика современных моделей экспериментального нефролитиаза
- Методы исследования
- Характеристика преобразовательных процессов в тканях почки на сутки экспериментального оксалатного нефролитиаза
- Характеристика биохимических показателей оксидативной и антиоксидантной систем почек
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время от 5 до 10% населения экономически развитых стран мира страдает мочекаменной болезнью, отмечается продолжающийся рост заболеваемости (Тиктинский О.Л., 2000; Сое F.L., 2005; Daudon М., 2005). Одна из причин этого заключается в отсутствии эффективного воздействия на этиологические и патогенетические факторы образования и роста камней. Высокая распространенность мочекаменной болезни обусловливает актуальность исследований, связанных с выявлением отдельных звеньев ее этиопатогенеза, лечения и профилактики.
Установлено, что кристаллы солей кальция являются субстанцией, способной индуцировать тканевые реакции в эпителии дистальных почечных канальцев и собирательных трубок. Воспалительные изменения, возникающие в них, являются результатом повреждающего воздействия кристаллов кальция оксалата и кальция фосфата. Морфологическая перестройка тканей почки усугубляется оксидативным повреждением, стимулятором которого могут быть кальциевые депозиты (Selvan R., 2002; Rashed Т., 2004).
Гипероксалурия является необходимым условием образования и выпадения кристаллов, которые непосредственно взаимодействуют с эпителием почечных канальцев. Данное взаимодействие индуцирует свободно-радикальное окисление и генерирует активные формы кислорода. Образующиеся свободные радикалы оказывают прямое воздействие на мембраны клеток канальцев, вызывая их повреждение и инициируя воспалительную инфильтрацию.
Так возникают условия для адгезии кристаллов солей и формирования очага кристаллизации с последующей активизацией процессов агрегации и образования депозита (Thamilselvan S. et al., 1997; Khan S.R., 2004). Продолжение роста и увеличение камня продолжается уже в просвете чашечно-лоханочной системы вплоть до клинически значимых размеров.
В то же время, остаются недостаточно изученными вопросы морфологической перестройки эпителиоцитов почечных канальцев и собирательных трубок, трансформации интерстициальных элементов почки на начальных стадиях нефролитиаза в связи с процессами оксидативного повреждения. Вопросы патоморфоло-гического доказательства эффективности антиоксидантнои терапии
также недостаточно освещены. Это обосновывает целесообразность вышеуказанных направлений в исследовании проблемы экспериментального оксалатного нефролитиаза.
Цель исследования - выявить особенности структурной перестройки почек и оценить процессы оксидативного повреждения в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза.
Задачи исследования.
-
Изучить общие и частные закономерности морфологических изменений в почках на различных сроках развития экспериментального нефролитиаза.
-
Выявить гисто-топографические особенности образования кальциевых микролитов и динамику их дальнейших превращений в тканях почки на различньпс сроках развития экспериментального нефролитиаза.
-
Определить особенности экспрессии маркеров оксидативного повреждения и антиоксидантной защиты в тканях почки и изменение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса почек в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза.
-
Изучить морфологические особенности экспериментального оксалатного нефролитиаза в условиях применения а-токоферола.
Научная новизна. Впервые на основании комплексного морфологического, иммуногистохимического и биохимического исследования установлены закономерности и особенности структурных изменений почек в условиях развития экспериментального оксалатного нефролитиаза. Выявлены особенности распределения соединений кальция на 21 и 42 сутки эксперимента в тканях почки и последующие структурные преобразования эпителия канальцев нефрона и собирательных трубок с изменением их функциональной активности.
Впервые изучены структурно-метаболические проявления оксидативного повреждения тканевых элементов почки. Доказано усиление процессов оксидативного повреждения в органе и ослабление функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты, наиболее выраженные в зонах максимальной патогистоло-гической перестройки почки, что соответствует зонам интенсивного литогенеза.
Впервые проведен анализ эффективности применения а-токоферола при экспериментальном оксалатном нефролитиазе. Показано снижение выраженности структурной перестройки почки, обра-
тимость морфологических изменений мозгового вещества почки, уменьшение размеров и числа соединений кальция, ослабление оксидативного повреждения тканей и клеток и сохранение системы ферментной антиоксидантной защиты.
Практическая значимость работы. Морфологическое и им-муногистохимическое исследования тканей почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе способствует выявлению определенных структурно-метаболических особенностей перестройки органа на начальных стадиях мочекаменной болезни. Выявление оксидативного повреждения позволит оценить его роль при начальном развитии оксалатного нефролитиаза. В связи с тем, что при оксалатном экспериментальном нефролитиазе происходит активация свободно-радикального окисления с угнетением ферментных систем антиоксидантной защиты, целесообразно использовать а-токоферол для ослабления оксидативного повреждения.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
В условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза превалируют дистрофические изменения эпителия канальцев неф-ронов и собирательных трубок по типу гиалиново-капельной и гид-ропической дистрофии, происходит расширение просвета канальцев и собирательных трубок, отмечается мононуклеарная инфильтрация интерстиция, разрастание соединительной ткани и формирование перитубулярного и периваскулярного фиброза.
-
При моделировании оксалатного нефролитиаза в зависимости от сроков эксперимента отмечаются гистотопографические особенности отложения соединений кальция, что проявляется перераспределением формирующихся кальциевых микролитов из области основания и средней трети почечного сосочка в область средней трети и вершины сосочка.
-
В условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза происходит активация свободно-радикального окисления и ослабление функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты в зонах интенсивного литогенеза.
-
В условиях применения а-токоферола наблюдается ослабление проявлений оксидативного повреждения почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе.
Апробация работы. Результаты работы доложены на Второй международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2009), на Всероссийской конференции с между-
народным участием, посвященной 100-летию Российского общества патологоанатомов (Санкт-Петербург, 2009), на XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009), на III международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург, 2009), на XI научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь - Барнаулу» (Барнаул, 2009), на VI Международной научно-практической конференции «Окружающая среда и здоровье» (Пенза, 2009), на III съезде нефрологов юга России «Актуальные проблемы региональной нефрологии» (Ростов-на-Дону, 2010), на VII съезде научного общества нефрологов России (Москва, 2010), на межлабораторной научной конференции в НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск, 2011).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 7 статей в ведущих рецензируемых журналах по списку ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций. Диссертация иллюстрирована 7 таблицами, 55 рисунками. Список используемой литературы включает в себя 177 работ, в том числе 50 источников на русском языке и 127 на иностранных.
Характеристика современных моделей экспериментального нефролитиаза
Патоморфологическая перестройка почек при экспериментальном; нефролитиазе протекает в виде стереотипных структурно-функциональных реакций: В основе лежат дистрофические изменения эпителия канальцев: нефрона и собирательных трубок, формирование воспалительных инфильтратов и развитие интерстициального фиброза; 1 Исследования S:R. Khan et al.. [104] показали, что при однократном внутрибрюшинном введения оксалата натрия во внутренней зоне мозгового вещества почек крыс развивается повреждение эпителия почечных канальцев. Изменения ограничивались канальцами, расположенными вокруг кристаллов кальция, в виде расширения просвета канальцевой системы и некроза эпителиоцитов с оголением базальных мембран. Канальцы, расположенные на некотором удалении, сохраняли нормальное строение эпителия и не имели расширения просвета. Был сделан вывод о цитотоксическом взаимодействии между кристаллическими структурами оксалата кальция и некрозом эпителиоцитов. Khan S.R. наблюдал отложение соединений кальция в просвете почечных канальцев, в интерстиции, на базальной мембране эпителия дистальных канальцев. В более поздних работах S.R. Khan [99] отмечал, что первоначально кристаллы кальция обнаруживаются в просвете канальцев нефрона, далее кальциевые депозиты откладываются в собирательных трубках почечного сосочка, в дальнейшем происходит их накопление в интерстиции и отложение на базальных мембранах канальцев. Кристаллические соединения обнаруживаются в собирательных трубках на поверхности почечного сосочка, затем изъязвляются, выходят в просвет почечной лоханки, где продолжается их рост.
Согласно исследованиям Marengo S.R. et al. [121] моделирование нефролитиаза с использованием осмотических мининасосов с оксалатом калия в течение 7 дней способно индуцировать отложение соединений кальция в почках, но не вызывает значительных структурных изменений, хотя отмечается воспалительная реакция в области отложений соединений кальция.
S.R. Khan и Р.А. Glenton в экспериментах на нокаутных мышах с использованием гидрокси-Ь-пролина выявили, что повреждение эпителия канальцев нефрона и развитие воспалительной инфильтрации более выражены в области отложений кристаллических депозитов, а также наличие тендерной зависимости в формировании экспериментального нефролитиаза [106].
Использование S.R. Khan с соавторами гидрокси-Ь-пролина при моделировании кальциевого оксалатного нефролитиаза в опытах на крысах и свиньях показало наличие отложений кристаллов кальция в корковом; мозговом- веществе почек и по всей поверхности почечного? сосочка [108]. В; зависимости; от. сроков эксперимента наблюдалось; перераспределение кристаллов; оксалата- кальция. Через четыре недели? депозиты кальция;. обнаруживались в просвете собирательных трубок, эпителиоцитах. тонкого канальца петли и, дистальных канальцах нефронов. Гипероксалурия, возникающая на фоне применения гидрокси-1,-пролина; способна , индуцировать повреждение эпителиоцитов канальцев нефрона, что сопровождалось усилением экскреции лактатдегидрогеназы. Наблюдалась морфологическая перестройка тканей почки, связанная с обтурацией просвета канальцев, их последующим расширением: и слущиванием, клеток эпителия. После 6-9 недель эксперимента небольшое количество кристаллов оксалата кальция; выявлялось в корковом веществе почек, но максимальное количество депозитов располагалось, в толще . почечных сосочков, в частности в интерстиции на вершине сосочка с последующим разрушением;; переходного эпителия и проникновением формирующегося;камня.в просвет почечной лоханки, что по морфологическим проявлениям напоминало; бляшки Рэндалла. Определялось расширение большинства почечных канальцев, содержащих кристаллические отложения, с разрушением эпителиоцитов Примечательно,, что эпителиоциты канальцев нефрона и собирательных трубок, расположенные на некотором удалении, сохраняли, нормальное строение. Камнеобразование в почках ассоциировалось с воспалительной реакцией: в интерстиции обнаруживались гигантские многоядерные клетки и макрофаги, а также отмечалось, формирование фиброза. S.R. Khan сделал вывод, что использование гидрокси--пролина провоцирует изменения, сходные с применением этиленгликоля; в качестве индуктора гипероксалурии и формирование экспериментального нефролитиаза.
Методы исследования
Оценивали характер изменений коркового и мозгового вещества почки, состояние сосудистых клубочков, капсулы почечного тельца, канальцев нефронов, собирательных трубок и элементов интерстиция органа.
Для выявления отложений соединений кальция использовали импрегнацию серебром по методу Косса, с контролем реакции 0,1%-ным раствором соляной кислоты [117, 118, 132, 147]. Метод основан на реакции замещения. Ткань обрабатывается раствором нитрата серебра; катионы серебра замещают кальций в депозитах с формированием солей серебра. Впоследствии производится восстановление серебра до металла с его визуализацией. Описанный процесс протекает в соответсвии с приведенными ниже химическими реакциями: СаСОз + AgN03 = Ag2C03 + Ca(N03)2, Ag2C03 + 2H+ = 2Ag + H20 + C02 При окраске данным методом соединения кальция окрашиваются в черный цвет, ядра клеток приобретают красную окраску, остальные тканевые структуры розовые. Оценивали характер отложения и распределения кальциевых депозитов, их средние размеры, особенности локализации в тканях почки и обратимость вызванных этиленгликолем изменений.
Для определения соединительнотканных элементов использовали окраску по Ван-Гизону (04-030802, Bio-Optica, Italy). С целью оценки степени зрелости соединительной ткани применяли окраску по MSB-методу (Marcius-Scarlett-Blue) в модификации Д.Д. Зербино [27.]. Для выявления ретикулярных элементов соединительной ткани использовали импрегнацию серебром по методу Гордона-Свита с докраской гематоксилином Гарриса.
Для выявления гликогена, глико- и мукополисахаридов, гиалуроновой кислоты ставили ШИК-реакцию (04-130802, Bio-Optica, Italy).
С целью определения биосинтетической активности и общей функциональной жизнеспособности клеток использовали полихромную методику окраски сафранином-О (Т) по Яцковскому А.Н. [50], дающую возможность судить о клетЬчной активности по степени конденсации хроматина (табл.2).
Оценку ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) проводили путем измерения соотношение площади! ядра и цитоплазмы эпителиоцитов собирательных трубок, поскольку именно здесь происходит нуклеация и агрегация соединений кальция, из-за высокой концентрации оксалат-иона [73]. Определение площади ядра и площади клетки выполняли с помощью программного пакета AxioVision 3.4 LE (Carl Zeiss, Germany). Для этого вручную курсором обводили контуры ядер и эпителиоцитов собирательных трубок при большом увеличении (х400). Площадь цитоплазмы рассчитывали как разность между площадью клетки и площадью ядра. Оценка ядерно-цитоплазматического отношения в эпителиальных клетках собирательных трубок проводилась по формуле: ЯЦО=8я/8ц, где SH - площадь ядра эпителиоцитов, Su — площадь цитоплазмы эпителиоцитов [1, 38, 42].
Для определения экспрессии митохондриальной супероксиддисмутазы (СОД-2) и малонового диальдегида (МДА) проводили непрямой двухшаговый стрептавидин-биотиновый метод с контролем специфичности реакции. После стандартной процедуры депарафинизации и регидратации выполняли блокирование эндогенной пероксидазы согласно рекомендациям производителя антител (Santa Cruz, USA).
Восстановление антигенной специфичности производилась с помощью предварительной обработки срезов, погруженных в цитратный буфер (рН-6,0) в микроволновой печи при мощности 600 Вт 3 раза по 7 минут [15].
В качестве первичных антител использовали антитела к СОД-2 (G-20: sc-18504), 1:100 и антитела к МДА (F-25: sc-130087), 1:30 фирмы Santa Cruz (USA). Продукт реакции визуализировали с помощью системы Goat ABC Staining system: sc-2023 (Santa Cruz) и диаминобензидина (ДАВ).
Свободнорадикальное окисление оценивали по изменению биохимических показателей оксидантного и антиоксидантного статуса в гомогенате коркового вещества почки. В оксидантном статусе оценивали общую прооксидантную активность, концентрацию малонового диальдегида, и других, тиобарбитурат-реактивных продуктов окисления жирных кислот. В антиоксид антной системе исследовали общую антиоксидантную активность и активность ферментов — каталазы, супероксиддисмутазы и( глутатионпероксидазы., Оценивали; общую оксидантную активность. по. интенсивности окраски флуоресцентного комплекса:, образующегося при; взаимодействии : продуктов перекисного окисления ТВИН-80 с, тиобарбитуровой кислотой;
Общую антиоксидантную активность оценивали по степени ингибирования Ре2+/аскорбат-индуцированного окисления ТВИН-80 гомогенатом ткани- (гемолизат эритроцитов). Активность каталазы определяли, по подавлению ферментом окисления молибдата натрия перекисью водорода. Активность супероксиддисмутазы оценивали по содержанию в пробе нитроформазана, окрашенного продукта восстановления нитротетразолия супероксидными радикалами. Маркером активности глутатионпероксидазы служило оперделение неокисленного глутатиона по цветной реакции с: реактивом Эллмана.
Морфометрические исследования проводили с использованием программных пакетов ImageJ 1.43 [51] и AxioVision 3.4 LE (Garl Zeiss, Germany).
Степень экспрессии малонового диальдегида и супероксиддисмутазы (в баллах- 1+, 2+, 3+) оценивали по интенсивности окрашивания ДАБ с применением программы анализа изображений ImageJ 1.43. Помимо этого, для удобства интерпретации результатов полученные данные рассчитывали по формуле: %-=100 -, где Е% - процент экспрессии; 256 256 максимум интенсивности окраски, D - интенсивность окрашивания ДАБ.
Характеристика преобразовательных процессов в тканях почки на сутки экспериментального оксалатного нефролитиаза
Таким образом, к исходу 21 суток моделирования нефролитиаза происходит структурная перестройка коркового и мозгового вещества почки. В коре почки отмечалась деформация почечных телец, расширение мочевого пространства. В эпителиоцитах извитых канальцев нефронов коры почки преобладали изменения по типу гиалиново-капельной дистрофии. В наружной зоне мозгового вещества почки наблюдались повреждение эпителиоцитов канальцев по типу гиалиново-капельной и гидропическои дистрофии, слущивание эпителия .и расширение просвета канальцевой системы. В эпителиоцитах собирательных трубок внутреней зоны мозгового вещества в области основания и средней трети почечного сосочка наблюдались признаки гидропическои и гиалиново-капельной дистрофии, уплощение эпителиоцитов, расширение просвета собирательных трубок с локализацией в нем слущенных эпителиоцитов и белковых цилиндров. В отдельных случаях в области вершины почечного сосочка просвет собирательных трубок был резко расширен (до 43,8 мкм). В переходном эпителии чашечно-лоханочной системы прослеживалось уплощение, слущивание эпителия и обнажение клеток базального слоя, субэпителиально наблюдались умеренно выраженные склеротические изменения. Определялась очаговая интерстициальная и субэпителиальная лимфогистиоцитарная инфильтрация мозгового вещества почки. В области вершины и средней трети почечного сосочка субэпителиально и в интерстиции откладывались ШИК-позитивные соединения. Отложения кристаллов оксалата кальция преимущественно локализовались в области основания и средней трети почечного сосочка. В 10% наблюдений обнаруживались крупные соединения кальция с обтурацией просвета канальцев. Наблюдалось значительное снижение функциональной активности эпителиоцитов собирательных трубок, наиболее выраженное в местах интенсивного литогенеза (основание и средняя треть почечного сосочка). Около кальциевых микролитов отмечалось разрастание соединительной ткани главным образом за счет коллагеновых элементов.
В случае продолжающегося воздействия этиленгликоля1 до 42 суток (группа 3)i выявлялась выраженная патогистологическая перестройка тканей почки с дистрофическими и некробиотическими изменениями клеток и тканевых структур.
В корковом веществе определялось выраженное полнокровие кровеносных сосудов. Почечные тельца были деформированы, просвет капсулы значительно увеличен. Капиллярный клубочек имел дольчатое строение, наблюдалось полнокровие и пролиферация мезангиальных клеток. Нарулшый листок капсулы почечного тельца был утолщен, за счет увеличения количества коллагеновых волокон и отложения ШИК-положительных соединений. Отмечалось расширение проксимальных и дистальных канальцев со скоплениями белковых цилиндров в просвете. Апикальная поверхность нефроцитов была фестончатая, выражено неровная. Наблюдалось разрушение оксифильной каемки эпителиоцитов проксимальных канальцев нефрона (рис.20). В ядрах клеток определялось набухание, в ряде случаев пикноз. В некоторых случаях в цитоплазме имела место ярко выраженная эозинофильная зернистость, с проявлениями гиалиново-капельной дистрофии, в других клетках наблюдались признаки гидропической дистрофии, в виде оптической пустоты вокруг ядра (рис.21). В элементах интерстиция наблюдалась умеренная лимфогистиоцитарная инфильтрация.
В наружной зоне мозгового, вещества почки в канальцах нефрона и собирательных трубках наблюдались выраженные признаки сочетанных дистрофических изменений по типу гиалиново-капельной и гидропической дистрофии (рис.22). Наблюдалось расширение просвета канальцев нефрона и собирательных трубок. В некоторых канальцах и собирательных трубках на достаточно большом протяжении наблюдали слущивание эпителиоцитов с оголением базальных мембран. Измененные клетки располагались в просвете канальца вместе с многочисленными белковыми цилиндрами. В межканальцевой соединительной ткани на всем протяжении почечного. сосочка определялась мононуклеарная инфильтрация и полнокровие кровеносных сосудов.
В эпителиальной выстилке собирательных трубок; прямых дистальных канальцев и тонких канальцев петли внутренней зоны мозгового вещества наблюдались признаки гидропической дистрофии. Эпителий был частично десквамирован, в ядрах клеток наблюдался пикноз и набухание. Просвет собирательных трубок мозгового вещества характеризовался неоднородностью, в среднем составляя 24,9±0,62 мкм- (табл.3). В случае наличия крупных кальциевых камней просвет отдельных собирательных трубок был резко расширен (до 66.7 мкм - рис.23).
Переходный эпителий почечного сосочка и лоханки был: уплощен, на большом протяжении слущен, с оголением клеток базального слоя.
Отложения кальция определялись в составе эпителия канальцев и собирательных трубок наружной и внутренней зоны мозгового вещества, в интерстиции, в просветах канальцев і нефрона и. собирательных трубок в составе белковых цилиндров. Они- располагались на всей площади почечного сосочка, включая верхушку и, реже, в канальцах, коркового вещества, в больших количествах; в среднем 27,4їЗ,22 (с максимальными значениями 57 В;поле зрения). Обнаруживаемые кальциевые депозиты были сравнительно крупными, в среднем, составляя 11,8±0,62 мкм (табл.4).
Характеристика биохимических показателей оксидативной и антиоксидантной систем почек
На фоне антиоксидантной терапии (ос-токоферолом) определялись умеренно выраженные патоморфологнческие изменения структур почки крысы. В корковом веществе почечные тельца имели округлую форму, в капиллярных клубочках наблюдались слабо выраженные воспалительные изменения, в некоторых случаях - имело место увеличение клеток мезангия, сохранялась дольчатость капиллярных петель. Апикальная поверхность эпителиоцитов проксимальных и дистальных канальцев была неровная, фестончатая; отмечалось сохранение щеточной каемки эпителиоцитов проксимальных канальцев (рис.47). В ядрах некоторых клеток определялись явления пикноза и набухания. В цитоплазме эпителиоцитов отмечалась эозинофильная зернистость, в целом наблюдались умеренно выраженные изменения эпителия по типу гиалиново-капельной дистрофии.
Для наружной зоны мозгового вещества были характерны сочетание явлений гиалиново-капельной и умеренно выраженной гидропической дистрофии эпителия собирательных трубок и прямых канальцев нефрона. В измененных клетках ядра подвергались пикнозу, в цитоплазме наблюдалась оптическая пустота около ядра.
Во внутренней зоне мозгового вещества просвет собирательных трубок был равномерен, несколько расширен на вершине почечного сосочка составляя в среднем 16,4±1,56 мкм (табл.3). В цитоплазме эпителиоцитов наблюдалась эозинофильная зернистость, умеренно выраженные признаки гиалиново-капельной дистрофии. В просвете некоторых собирательных трубок располагались одиночные опущенные эпителиоциты, белковые цилиндры (рис.48). Отмечалась умеренно выраженная лимфогистиоцитарная инфильтрация интерстиция почечного сосочка. Переходный эпителий чашечно-лоханочной системы был сохранен, на некоторых участках незначительно уплощен. В мозговом веществе почки определялось умеренное количество (до 17,6±2,39 в поле зрения) соединений кальция, располагавшихся относительно равномерно по всей площади почечного сосочка, преимущественно в составе эпителия собирательных трубок и в их просвете среди слущенных эпителиоцитов (рис.49). Кальциевые депозиты были мелкие, их средний размер составил 5,4±0,28 мкм (табл.4). Крупных соединений кальция, обтурировавших просвет канальцев, или инкрустации их эпителия не обнаруживалось. Отложения ШИК-позитивных соединений в интерстиции почечного сосочка, в просвете собирательных трубок или перитубулярно не наблюдалось.
Склеротических изменений не отмечалось. Межканальцевые интерстициальные соединительнные элементы имели типичное строение, с незначительным количеством аморфного и волокнистого компонента (рис.50). Под переходным эпителием чашечно-лоханочной системы избыточного количества коллагеновых волокон не определялось (рис.51).
Отмечалось относительное сохранение функциональной активности эпителия собирательных трубок: активными оставались 76,2±2,01% клеток. ЯЦО эпителиоцитов собирательных трубок у животных с моделью экспериментального оксалатного нефролитиаза на фоне употребления а-токоферола составило 0,34±0,07 (табл.3).
В группе животных, получающих антиоксидантную терапию (а-токоферол), иммуногистохимическое исследование показало умеренно выраженную экспрессию СОД-2 эпителиоцитами извитых проксимальных и дистальных канальцев нефрона коркового вещества почки. В собирательных трубках наружной и внутренней зон мозгового вещества наблюдалась выраженная экспрессия мтитохондриальной супероксиддисмутазы (рис.52, 53). Определялась умеренная экспрессия СОД-2 в переходном эпителии, выстилающем почечную лоханку. Выраженность экспрессии СОД-2 на фоне использования антиоксиданта в эпителиоцитах собирательных трубок всех отделах мозгового вещества статистически значимо (на 12,5%) превышала показатели животных с экспериментальной моделью оксалатного нефролитиаза (табл.5).
Одновременно в условиях применения антиоксиданта выявлялось снижение содержания продуктов ПОЛ. В эпителиоцитах канальцев нефрона, собирательных трубок, переходном эпителии- чашечно-лоханочной системы, в элементах интерстиция наблюдалась слабо выраженная экспрессия малонового диальдегида (рис. 54, 55, табл.6).
Таким образом, на фоне антиоксидантной терапии (ос-токоферола) отмечена умеренная выраженность структурной перестройки почек. В канальцевой системе органа отмечались умеренно выраженные признаки гиалиново-капельной дистрофии, просвет собирательных трубок в пределах почечного сосочка был несколько расширен и характеризовался относительной равномерностью. Отложения соединений кальция наблюдались на всей площади почечного сосочка в умеренных количествах, характеризовались мелкими размерами. Инкрустации эпителия и крупных соединений кальция, обтурирующих просвет почечных канальцев и собирательных трубок не обнаруживалось. Скопления ШИК-позитивных соединений в почечном интерстиции не отмечалось.
Увеличения количества соединительнотканных элементов интерстиция коркового и мозгового вещества почки не наблюдалось. Отмечалось сохранение функциональной, активности эпителиоцитов собирательных трубок. ЯЦО эпителиальной выстилки собирательных трубок соответствовало показателям интактных крыс.
При применении антиоксиданта (d-токоферола) отмечалось определенное снижение выраженности оксидативного повреждения тканей и клеток и сохранение системы ферментной антиоксидантной защиты
