Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ. ГРИПП И ДРУГИЕ ОСТРЫЕ РЕСПИРАТОРНЫЕ ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ (ОРВИ) С ПОСТОЯНСТВОМ ЗАНИМАЮТ ВЕДУЩЕЕ МЕСТО В ИНФЕКЦИОГШОЙ ПАТОЛОГИИ. За ПОСЛЕДНИЕ ГОДЫ НА
грипп и другие орви приходится 75% всех случаев инфекционных заболеваний. ежегодно, по статистическим данным, гриппом и орви переболевают более 70 млн. человек, хотя истинное число их значительно выше. на долю гриппа и орви приходится около 40% дней временной ^трудоспособности.
вакцшюпрофилактика в силу ряда причин, таких, как многообразие этиологических факторов, смена антигенных характеристик возбудителей, особенности индивидуального и коллективного иммунитета, не в состоянии обеспечить полную защиту населения от гриппа Поэтому поиск новых антивирусных и иммуномодулирующих препаратов остается одной из актуальных задач в системе борьбы со столь распространенной инфекционной патологией.
Широко проводимый в эксперименте скрининг соединений на предмет выявления антивирусной активности обнаружил целый ряд препаратов, обладающих вирусингибирующими потенциями: производные адамантанового ряда (Индулен М.К. и др., 1990; Киселев О.И. и ДР.,1997; СГОТСКАЯ Л.Л. и ДР.,1996; ПЛАТОНОВ ВТ. И ДР.,1989;1997; KOLOCOURIS N. ЕТ AL.,1996; SERKHWIEVA J. ЕТ AL.,1993 И ДР.), АНОМАЛЬНЫЕ НУКЛЕОЗИДЫ ( Галегов Г. и др.,1994; Самойлович Е.О. идр., 1989;"Валтрекс", 1998;), препараты с антиоксидантной активностью (Долг анова и др., 1991; Исаков В.А. и др.,1993;1996 ), ингибиторы нейраминидазы вируса гриппа ( Hayden F. ет ai.,1999 ), индукторы интерферона ( Ершов Ф.И., Чижов Н.П. и др.,1993; Ершов Ф.И. и др.,1997; Протасова С.Ф. и др., 1989; 1995; 1996; Чекановская Л.А., 1997 и др.), ингибиторы протеолиза ( Аникин В.Б. и др., 1993; Голкшщоидр., 1994; КОЛОМИЕЦА.Г. ИДР.. 1997;CONDRAJ.H.ET AL., 1995; HOSAXAM ЕТ AL., 1995; И ДР.) И ДРУГИЕ ВЕЩЕСТВА ОДНАКО, ДАЛЬНЕЙШИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЗВОЛИЛИ ПОКА СИНТЕЗИРОВАТЬ И ДОВЕСТИ ДО КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ ТОЛЬКО НЕСКОЛЬКО ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВОГРИППОЗНОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ, ТАКИХ КАК РЕМАНТАДИН, ДЕЙТИФОРИН, АДАПОМИН И АРЕИДОЛ (ИНДУЛЕН М.К И ДР.,
1972; 1979; ИльенкоВ.И. идр., 1977;1979; КиселеваИ.В. ,1982; Злыдников ДМ, 1983; 1987; Кубарь О.И. ИДР., 1988; КИСЕЛЕВ О.И. идр., 1990; ВОТЯКОВ В.И. ИДР., 1977; 1981; Лобанова Е.А.,1989; 1990; Платонов ВТ. и др., 1986; Гагаринова В.М и др.,1989; Слепушкин А.Н. и др., 1997). Каждый из них, наряду С ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ КЛИНИЧЕСКИМ эффектом обладает и некоторыми отрицательными характеристиками: формирование в процессе их применения резистентных штаммов вируса, способность кумулиговаться в организме, ограниченные возможности действия некоторых препаратов в отношении вируса гриппа типа В и ремантадинустойчивых штаммов (Козелецкая К.Н.,2000), а также ограничения к применению при наличии некоторых соматических заболеваний. К тому же дейтифорин производится за пределами Российской Федерации, а широкий выпуск адапромин а и арбидол а в России пока не обеспечен.
Вследствии того, что попытки исследователей синтезировать химические соединения,
ПРЕРЫВАЮЩИЕ ТЕ ИЛИ ИНЫЕ ЭТАПЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ВИРУСА С КЛЕТКОЙ, ОКАЗЫВАЛИСЬ НЕ ВСЕГДА УДАЧНЫ, В ПОСЛЕДНИЕ ГОДЫ ВОЗРОС ИНТЕРЕС К ПРИРОДНЫМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМ ВЕЩЕСТВАМ, СПОСОБНЫМ ЗАДЕЙСТВОВАТЬ В ОРГАНИЗМЕ МНОГИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ (БЕСЕДНОВА Н.Н. И ДР.,1996;
Протасова С.Ф. и др., 1989; 1995; 1996; Цыьтльский А.В. и др., 1989; 1992; Щегловитовл О.Н. и др.,1987; Serkee«ieva J. ет al.,1993; 1995). Такие вещества, выделенные из природного сырья растительного или морского происхождения, ЯВЛЯЮТСЯ ОПТИМАЛЬНЫМ ВАРИАНТОМ антивирусного
ПРЕПАРАТА В СИЛУ ЕСТЕСТВЕННОСТИ ДЛЯ ОРГАНИЗМА, СУММАРНССТИ ПО ЭФФЕКТИВНОСТИ И ШИРОКОГО ДИАПАЗОНА ДЕЙСТВИЯ. НАШЕ ВНИМАНИЕ ПРИВЛЕК ПРЕПАРАТ, ПОЛУЧЕННЫЙ МЕТОДОМ ГИДРОЛИЗА МЯГКИХ ТКАНЕЙ МИДИЙ И РЕКОМЕНДУЕМЫЙ АВТОРАМИ ( БЕСЕДИНА Т.В., БОЙКОВ Ю.А., РЕХИНА НЛ И ДР., 1993, 1994 ), КАК ПИЩЕВАЯ ДОБАВКА ДЛЯ ЛИЦ ОСЛАБЛЕННЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ. РАНЕЕ В НИИ МЕДИЦИНСКОЙ РАДИОЛОГИИ И НИИ ОНКОЛОГИИ ( Г.МОСКВА ) БЫЛО ОБНАРУЖЕНО, ЧТО МИДИЙНЫЙ ГИДРОЛИЗАТ СПОСОБСТВУЕТ УСКОРЕНИЮ ВЫВОДА РАДИОНУКЛЕОТИДОВ ИЗ ОРГАНИЗМА, ПОВЫШАЕТ УСТОЙЧИВОСТЬ ОРГАНИЗМА К ДЕЙСТВИЮ ТОКСИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ, УВЕЛИЧИВАЕТ СКОРОСТЬ РЕГЕНЕРАЦИИ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ КОСТНОГО МОЗГА, УКРЕПЛЯЕТ СТЕНКИ КАПИЛЛЯРОВ, ПОВЫШАЕТ УРОВЕНЬ ГЕМОГЛОБИНА И СОДЕРЖАНИЕ ЭНДОГЕННЫХ ПРОТЕКТОРОВ В РЯДЕ ТКАНЕЙ (КУДРЯШОВ Ю.Б. И ДР.,1989;
ЛевшггонЖЗ. идр.,1992)
Целью данного исследования явилось изучение в эксперименте вирусингибирующей активности МИДИЙНОГО ГИДРОЛИЗАТА, полученного методами кислотного и ферментативно -кислотного гидролиза из мягких тканей мидий Mytojs EDULIS GAUjOPROVINALEIAIJS, на МОДЕЛИ вируса гриппа и других РНК- и ДНКчхщержащих вирусов. Задачи настоящего исследования:
Изучение вирусингибирующих потенций мидийного гидролизата (МИГИ) в опытах ин витро на модели вируса гриппа.
Определение зависимости противогриппозной активности МИГИ от исходного сырья, технологических схем производства.
Изучение защитного действия мидийного гидролизата при экспериментальном гриппе животных.
Изучение влияния мидийного гидролизата на иммуногенез при экспериментальной гриппозной инфекции, вакцинальном процессе и определение его интерфероногенного действия.
Изучение вирусингибирующих потенций мидийного гидролизата в опытах ин витро в ОТНОШЕНИИ РЯДА других вирусов, в частности вирусов простого герпеса I и П типов и вируса иммунодефицита человека ( ВИЧ - 1 ).
Научная новизна
В результате исследований получено экспериментальное обоснование ДЛЯ РАЗРАБОТКИ нового противовирусного препарата широкого спектра действия, полученного из естественного сырья морского происхождения.
Впервые в опытах in vitro обнаружена вирусингиеирующая активность в отношении вирусов гриппа у мидийного гидролизата - субстрата, полученного из мягких тканей мидий -моллюсков мташ eduus galloprovbcaleialis методами кислотного или ферментативно-КИСЛОТНОГО гидролиза. Доказана возможность ингибиции с помощью мидийного гидролизата репродукциии вирусов гриппа типов А и В.
Впервые в опытах ин виво выявлено защитное действие мидийного гидролизата при токсическом экспериментальном гриппе животных. При разных способах АППЛИКАЦИИ МИДИЙНЫЙ гидролизат защищал от 53,0% до 84,0% экспериментальных животных, зараженных токсигенным штаммом вируса гриппа а/виктория/35/72 ( h3n2 ).
Обнаружено иммуномодулирующее и интерфероногенное действие мидийного гидролизата в эксперименте. мидийный гидролизат, введенный животным по профилактической
или лечебной схемам, способен увеличивать уровень антигемагтлютинирующих антител в 2,0-3,0 раза в сыворотках крови животных. в культуре клеток лейкоцитов периферической крови человека мидийный гидролиз at индуцировал синтез гамма-интерферона
Впервые в опытах in vitro выявлена вирусингибирующая активность мидийного гидролизата в отношении вирусов простого герпеса i и ii типов и вируса иммунодефицита человека i типа. Практическая значимость и внедрение результатов работы.
Результаты экспериментального изучения в опытах т vitro и ш vivo антивирусной активности МИДИЙНОГО ГИДРОЛИЗАТА в отношении вируса гриппа явились обоснованием специфической активности нового антивирусного препарата ВИР АМИД, основой которого является МИДИЙНЫЙ гидролизат. На указанный препарат составлен и направлен в ФПС МЗ РФ проект Временной Фармакопейной Статьи (ВФС) (вхФПС МЗ РФ №100 от 24.01.94).
Полученные экспериментальные данные и разработанная научно-техническая документация позволили получить разрешение на проведение клинических испытаний Вир амида на здоровых добровольцах (1-ая фаза ) и у больных гриппом и ОРВИ ( П-ая фаза ). Проверка безвредности мидийного ГИДРОЛИЗАТА на 20 здоровых добровольцах показала отсутствие каких-либо побочных явлений при разных способах применения препарата (отчет НИИЭМ им. Пастера от 1.01.93 по договору №04-93).
Клинические испытания Вирамида у больных гриппом и ОРВИ, проведенные в 3-х клиниках: диспансерно-поликлиішческом отделение НИИЭМ им. Пастера МЗ РФ, Военно-медицинской академии (г.С.-Петербург) и ВНИИ гриппа РАМН, завершены и отправлен отчет в ФПС МЗ РФ «О КЛИНИЧЕСКОМ исследовании препарата ВИР АМИД (МИГИ-К, МИГИ-ФК) в качестве противовирусного средства у взрослых при гриппе и ОРВИ» ( исх. НИИЭМ им.Пастера №522 от 31.10.95).
Получено заключение Государственного института доклинической и клшшческой экспертизы лекарств МЗ РФ о том, что клинические исследования подтверждают эффективность препарата при лечении больных гриппом и ОРВИ и о передаче материалов для рассмотрения в ФПС РФ с целью разрешения медицинского применения Вирамида в комплексной терапии больных ГРИППОМ И ОРВИ ( ИСХ ГИДКЭЛ МЗ РФ №211-5930/2-7J7 ОТ 20.04.96).
На основании данных экспериментального изучения МИШ в отношении вирусов простого герпеса і и П типов в Фармакологический Государственный Комитет МЗ РФ направлено обоснование для расширения показаний к применешло Вирамида и программа изучения терапевтической эффективности Вирамида у больных герпетической инфекцией при местном его применении ( исх нииэм им.пастера №599 от 22.12.95).
Новая Фармакопейная статья предприятия на препарат Вирамид утверждена на Президиуме Фармакопейного ГосударственнгоКомитетаМЗ РФ от 16.06.00.
Материалы работы использованы при составлении практических рекомендаций для врачей «Неспецифическая профилактика гриппа и ОРЗ среди рабочих промышленных предприятий» (Санкт-Петербург, 1996г.). Основные положения, выносимые на зашиту
1. МИДИЙНЫЙ гидролизат - ПРОДУКТ, полученный из мышечной ткани моллюсков Мупш
EDUIiS OALLOPROVWALEIAUS, ОБЛАДАЕТ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ АНТИВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ
ВИРУСОВ ГРИППА, ИНГИБИРУЯ РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСОВ ГРИППА ТИПОВ А И В Ш VITRO И ЗАЩИЩАЯ ОТ ГИБЕЛИ МЫШЕЙ ПРИ ЗАРАЖЕНИИ ПОСЛЕДНИХ ТОКСИГЕННЫМ ШТАММОМ ВИРУСА ГРИППА А.
Положительные результаты получены при разных способах аппликации МИГИ по лечебной и
2. МИДИЙНЫЙ ГИДРОЛИЗАТ, введенный животным перорально, интрапазально или
ПАРЕНТЕРАЛЬНО ПО ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ ИЛИ ЛЕЧЕБНОЙ СХЕМАМ ПОВЫШАЕТ УРОВЕНЬ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ПРОТИВОГРИППОЗНЫХ А1ГГИГЕМАГТЛЮТИНИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ ПРИ ЗАРАЖЕНИИ ЖИВОТНЫХ ВИРУСОМ ГРИППА. ПРИ ЭТОМ ИССЛЕДУЕМЫЙ ПРЕПАРАТ ОБЛАДАЕТ ИНТЕРФЕРОНОГИШЫМ ДЕЙСТВИЕМ, ИНДУЦИРУЯ СШГГЕЗ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК.
3. МИДИЙНЫЙ ГИДРОЛИЗАТ ОБЛАДАЕТ В ОПЫТАХ IN VTTRO ВЫРАЖЕННОЙ ВИРУСИНГИБИРУЮЩЕЙ
АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСОВ ПРОСТОГО ГЕРПЕСА 1 И 2 ТИПОВ И ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА
ЧЕЛОВЕКА 1 ТИПА (ВИЧ-1).
Апробация результатов исследования
Результаты работы были представлены на национальных и международных конгрессах, конференциях и симпозиумах: Юбилейной международной конференции "Актуальные проблемы инфекционной патологии" (СПб., 1993), Ком Международном конгрессе по вирусологии (Глазго,1993), V-ой Международной конференции по химиотерапии инфекционных и онкозаболеваний (Австрия, 1994), конференции во ВНИИ гриппа РАМН "Новые подходы к целенаправленному конструированию противовирусных препаратов" (СПб.,1994), VII-ой Международной конференции по сравнительной и прикладной вирусологии (Монреаль, Канада, 1994), П-ом Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва.1995), Международном симпозиуме "Прогресс в клинической вирусологии" (Прага,Чехословакия,1995), Х-ом Международном конгрессе по вирусологии (Иерусалим, Израиль,1996), на Международной конференции "Антиинфекционные препараты и химиотерапия" (Лейпциг, Германия , 1996), на Международной конференции «Региональные проблемы профилактической медицины» (Великий Новгород, 1999) Публикации По теме диссертации опубликовано 11 работ.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа содержит 7 рисунков и 38 таблиц. Список цитируемой литературы включает *лх отечественных и Ц? иностранных источников.
