Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Стресс как фактор патогенеза вирусных инфекций 23
1.1. Проблема стресса 23
1.2. Нейрогуморальная регуляция стресса 27
1.3. Стресс индуцированная иммуносупрессия и её роль в изменении течения вирусного инфекционного процесса 32
ГЛАВА 2. Цитокины и их роль при вирусных инфекциях 47
2.1. Активность цитокинов при вирусных инфекциях 47
2.2. Применение цитокинов и их индукторов при вирусных инфекциях 65
2.3. Полипренилфосфаты - индукторы цитокинов... 70
ГЛАВА 3. Иммунокоррекция и иммуномодуляторы, применяемые для коррекции иммунодефицитов 74
ГЛАВА 4. Иммунология клещевого энцефалита 80
ГЛАВА 5. Материалы и методы 92
1. Вирусы 92
2. Животные 94
3. Фоспренил 95
4. Цитокиновый профиль 95
5. Определение противовирусной активности Фоспренила в культурах клеток 96
6. Определение адъювантного действия Фоспренила с вакцинами против бешенства и клещевого энцефалита 100
7. Индукция стресса у животных . 103
7.1. Индукция физиологического стресса 103
7.2. Индукция психогенного стресса 104
7.3. Определение состояния стресса у животных 105
8. Клеточные суспензии 106
9. Фракционирование клеточных суспензий 107
10. Определение числа антителообразующих клеток 108
11. Выявление антигеннеспецифических супрессоров у животных при стрессе 109
12. Определение титров вируса Лангат в субпопуляциях спле-ноцитов стрессированных животных in vitro 111
13. Исследование влияния стресса на функцию естественных киллеров 112
14. Индукция вирус- и стрессиндуцированной иммуносупрессии у мышей и её коррекция с помощью Фоспренила 113
15. Определение протективной активности Фоспренила при экспериментальной инфекции, вызываемой вирусом клещевого энцефалита у мышей 115
16. Определение протективной активности Фоспренила при экспериментальной инфекции, вызываемой вирусом полиомиелита у мышей 116
17. Исследование влияния полипренилфосфатов на вирионы вне клетки в реакции прямой гемагглютинации 118
18. Исследование стимуляции интерферона Фоспренилом в опытах in vitro. 119
18.1. Выявление интерферона в клетках СПЭВ, заражённых вирусом клещевого энцефалита и в культуре, инфици рованной вирусом при одновременном внесении Фоспренила и патогена 119
18.2. Изучение стимуляции интерферона Фоспренилом в культуре клеток Таурус-1, инфицированных вирусом инфекционного ринотрахеита и аденовирусом 121
19. Статистическая обработка результатов 122
ГЛАВА 6. Характеристика нарушений гуморального и клеточного иммунитета при физиологическом и психогенном стрессе у лабораторных животных 124
6.1. Влияние физиологических (температуры окружающей среды, гипокинезии) и психогенных (информационный стресс) стрессоров на функции антителообразующих В-клеток 124
6.2. Стресс-индуцированная активация Т-супрессоров и их роль в патогенезе инфекции у мышей, заражённых вирусом Лангат 128
6.3. Нарушение функций естественных киллеров на фоне физиологического и психогенного стресса 133
6.3.1. Подавление цитотоксической активности естественных киллеров под действием физиологических стресс факторов и при нагрузке 133
6.3.2. Снижение естественной противоопухолевой резистентности у мышей при стрессе 135
ГЛАВА 7. Стресс-индуцированные изменения патогенеза экспериментальных флавивирусных инфекций 139
7.1. Активация бессимптомной инфекции, вызываемой вирусом Лангат у мышей на фоне стрессиндуцированной им-муносупрессии 139
7.2. Утяжеление течения клинически выраженной инфекции, вызываемой вирусом клещевого энцефалита у мышей при стрессе 143
ГЛАВА 8. Механизмы стресс-индуцированных изменений течения флавивирусных инфекций и методы их коррекции с помощью Фоспренила 147
8.1. Увеличение субпопуляции пермиссивных для вируса Лангат селезёночных макрофагов у стрессированных животных 147
5.1. Коррекция вирус- и стресс-индуцированной иммуносу-прессии у мышей с помощью Фоспренила 150
8.1. Коррекция стресс-индуцированных изменений течения вирусного инфекционного процесса с помощью Фоспренила 154
8.3.1. Предотвращение стрессовой активации бессимтомной инфекции, вызываемой вирусом Лангат у мышей с помощью Фоспренила 154
8.3.2. Влияние Фоспренила на стресс-индуцированное утяжеление течения острой клинически выраженной инфекции, вызываемой вирусом клещевого энцефалита... 158
ГЛАВА 9. Противовирусное действие Фоспренила при экспериментальных инфекциях инфекциях, вызываемых вирусами клещевого энцефалита и полиомиелита у мышей и механизм протективного эффекта препарата, связанный с иммуномодуляцией 163
9.1. Изучение защитного эффекта Фоспренила при экспериментальном клещевом энцефалите у мышей 163
9.2. Иммуномодупирующее действие Фоспренила при клещевом энцефалите - один из механизмов противовирусного действия препарата 169
9.2.1. Стимуляция Фоспренилом в организме животных, зараженных вирусом клещевого энцефалита, «ранней» опосредованной вирусом индукции цитокинов (ИЛ-б, ФНО-а,ИФН-у) 170
9.3. Противовирусное действие Фоспренила при эксперимен тальной инфекции, вызываемой вирусом полиомиелита у мышей 174
ГЛАВА 10. Особенности противовирусной активности Фоспренила на этапах взаимодействия вирус-клетка 177
10.1. Подавление размножения РНК - (вирус клещевого энцефалита, вирус диареи крупного рогатого скота) и ДНК- (вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота) содержащих вирусов в чувствительных культурах клеток в присутствии Фоспренила 177
10.2. Исследование противовирусной активности Фоспренила в отношении ДНК- (аденовирус) и РНК- (вирус полиомиелита) - содержащих вирусов, не имеющих оболочки 181
10.3. Взаимодействие Фоспренила и вирионов клещевого энцефалита вне клетки при использовании реакции ге-магглютинации 181
10.4. Изучение изменений вирулентности внутриклеточных и внеклеточных вирионов, вызываемых Фоспренилом 188
10.5. Интерфероногенная активность Фоспренила — один из механизмов противовирусного действия препарата на этапах взаимодействия вирус-клетка 191
ГЛАВА II. Перспективы использования Фоспренила в качестве адъ-юванта некоторых противовирусных вакцин 198
11.1. Фоспренил значительно повышает протективный эффект вакцины против бешенства в опытах на животных 198
11.2. Адъювантный эффект Фоспренила при вакцинации мышей против клещевого энцефалита 202
Обсуждение полученных результатов 206
Выводы 234
Список литературы 237
- Стресс индуцированная иммуносупрессия и её роль в изменении течения вирусного инфекционного процесса
- Индукция вирус- и стрессиндуцированной иммуносупрессии у мышей и её коррекция с помощью Фоспренила
- Стресс-индуцированная активация Т-супрессоров и их роль в патогенезе инфекции у мышей, заражённых вирусом Лангат
- Коррекция вирус- и стресс-индуцированной иммуносу-прессии у мышей с помощью Фоспренила
Введение к работе
В последнее время существенно возросло внимание к проблеме роли естественных иммуномодулирующих факторов в патогенезе вирусных инфекций человека и животных. Это связано с тем обстоятельством, что здоровье организма зависит от целого ряда факторов, непосредственно воздействующих на иммунную систему. Иммуномодулирующими свойствами обладают вирусы, бактерии, микоплазмы, которые с одной стороны стимулируют в инфицированном организме специфический иммунный ответ, а с другой — вызывают антигеннеспецифическую иммуномодуляцию и формирование вторичного иммунодефицита. Состояние иммунодефицита может приводить к развитию в организме целого ряда патологических процессов, в частности, к снижению иммунологического ответа на вакцинацию, проявлению и более тяжёлому течению вторичных инфекций, развитию аутоиммунных реакций.
Многие вирусы вызывают в организме вторичный иммунодефицит, формирование которого связано с тропизмом вирусов к лимфоидным клеткам. Так, размножение вирусов в клетках-мишенях приводит к разрушению Т- и В- лимфоцитов или их трансформации /85, 86/. Другим известным механизмом формирования в организме вирус-индуцированной им-муносупрессии является свойство некоторых вирусов (герпеса, Эпштейна-Барра, осповакцины, ВИЧ) нарушать продукцию клетками иммунной системы цитокинов, обеспечивающих регуляцию формирования адекватного и эффективного противовирусного иммунитета /66/.
Вместе с тем, особенности иммуномодулирущих свойств целого ряда вирусов, играющих важную роль в инфекционной патологии человека (на-
пример, вируса клещевого энцефалита), остаются малоизученными, что в свою очередь затрудняет подбор эффективных иммунокорректоров.
К числу наиболее распространённых неинфекционных факторов, непосредственно влияющих на функции иммунной системы, является стресс.
Современный человек постоянно подвергается воздействию множества стресс-факторов, которые с достаточно большой степенью условности можно подразделить на 2 большие группы:
физиологические (климатические условия, изменения экологической обстановки, например, загрязнение окружающей среды, состав пищи, наличие различных примесей в питьевой воде, заболевания инфекционной и неинфекционной этиологии и др.);
психологические или психогенные (социальная обстановка, межличностные конфликты, информационные нагрузки и др.), причём роль второй группы стрессоров постоянно возрастает и по мнению некоторых специалистов современный человек постоянно подвергается воздействию психогенных стрессоров /9,88,90,180,181/.
Стресс на уровне целого организма определяется как состояние, проявляющееся специфическими симптомами, которые включают в себя:
увеличение секреторной активности гипофиза, гиперфункцию и гипертрофию коркового слоя надпочечников с уменьшением в них липидов и холестерина /87,190/;
инволюцию лимфоидных органов, лимфатических узлов, селезёнки, тимуса, лимфопению, эозинопению /190,191/;
образование трофических язв на коже, кровоизлияния и образование язв в желудочно-кишечном тракте /190/.
В многочисленных клинических и экспериментальных исследованиях, начиная с 60-х годов XX века и кончая современными было показано, что стресс вызывает в организме человека и животных иммуносупрессию:
снижает количество циркулирующих Т- и В-лимфоцитов, антиген-презентирующих моноцитов и иммуноглобулинов /60,61,79/;
подавляет первичный и вторичный иммунный ответ к различным антигенам, значительно уменьшает абсолютное число и фагоцитирующую активность макрофагов (МФ) селезёнки /69,80,128/;
снижает цитотоксическую активность естественных киллеров (ЕК) и МФ селезёнки /60,61,69,103,121 /;
подавляет способность клеток продуцировать а —р- и у- интерферон (ИФН) и, напротив, увеличивает продукцию некоторых цитокинов (ЦТ): ИЛ-2, ФНО-а /68,69,70,117,126,128,130,166/.
Полученные данные убедительно свидетельствуют о том, что стресс является широко распространённым естественным иммуномодулирующим фактором.
На фоне стресс-индуцированной иммуносупрессии наблюдается значительное снижение чувствительности организма к инфекциям вирусной этиологии. Этот факт клинически и экспериментально подтверждён при инфекциях, вызываемых вирусами простого герпеса, Коксаки В, полиомы, полиомиелита, бешенства, гриппа/95,126,167,185,191,197,198,201/.
В последнее время всё больший интерес вызывает иммуномодуляция, вызываемая психогенными стрессорами, чрезвычайно распространёнными в жизни современного человека (информационные нагрузки, изменения рабочей обстановки, межличностные отношения) /114,119,154,181,190/. В ряде исследований доказано, что действие таких стресс-факторов отрица-
тельно влияет на функции Т- и В-лимфоцитов, МФ и ЕК, что, с одной стороны, может привести к активации латентных герпеспесвирусных инфекций, включая вирус простого герпеса (ВПГ) 1-го типа, вируса Эпштейна— Барра (ВЭБ), вируса герпеса зостер (ВГЗ), а с другой - подавляет развитие специфического иммунного ответа при вакцинации против гепатита В и гриппа /161,188,191/. Всё" это позволяет рассматривать стресс как фактор патогенеза вирусных инфекций - проблему, требующую тщательного изучения, а также разработки внедрения высокоэффективных антистрессорных препаратов.
Стресс-индуцированную иммуносупрессию связывают с цитотокси-ческим действием гормонов стресса и глюкокортикоидов на клетки—продуценты антител, а также влиянием на метаболизм иммунекомпетентных клеток гуморальных медиаторов (катехоламинов, простогландинов) и некоторых ЦТ (ИЛ—1, ИФН-а) /70,71,77,79,87/. Тем не менее, некоторые особенности механизмов стресс-индуцированной активации вирусных инфекций продолжают оставаться малоизученными, что в свою очередь затрудняет подбор препаратов, обладающих антистрессорньш и противовирусным действием.
Разработка и внедрение новых высокоэффективных противовирусных лечебно—профилактических препаратов до сегодняшнего дня остаются актуальными. Несмотря на постоянный поиск таких лекарственных средств в практике современной медицины и ветеринарии используется сравнительно небольшой набор препаратов, обладающих широким спектром антивирусного действия. Это связано с целым рядом обстоятельств, наиболее существенные из которых: недостаток сведений об особенностях иммунного ответа при многих вирусных инфекциях, сравнительно небольшое коли-
чество известных природных и синтетических соединений, обладающих прямым противовирусным действием и не обладающих при этом токсичностью, аллергенностью или другими побочными эффектами для организма животных и человека. В связи с этим наибольший интерес вызывает поиск и внедрение в практику иммуномодуляторов естественного происхождения, соответствующих требованиям, перечисленных выше /85/.
Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) является возбудителем тяжелого заболевания высоко актуального для практического здравоохранения не только России, стран СНГ, Балтии, но и ряда стран Европы. В настоящее время профилактика клещевого энцефалита (КЭ) в основном осуществляется с помощью инактивированных вакцин. Несмотря на многолетнее применение по крайней мере 4-х вариантов вакцин против КЭ заболеваемость имеет устойчивую тенденцию к увеличению, а ареал распространения КЭ -к расширению. При этом эффективных лечебных препаратов против КЭ не разработано. Использующиеся средства серопрофилактики (сыворотки и иммуноглобулины) имеют ограниченный спектр действия, а также при некоторых условиях могут способствовать персистенции ВКЭ в ЦНС и развитию в организме иммунопатологических процесссов /86/. Аналогичными свойствами обладают многие иммуномодуляторы и средства фармакологической иммунокоррекции /32/.
В связи с этим актуальным представляется разработка и внедрение новых препаратов, которые обладают прямым противовирусным эффектом при КЭ, а также повышают эффективность вакцинального процесса.
Полипренолы являются интегральныйыми компонентами всех клеток, как прокариотических, так и эукариотических. Они участсвуют в биосинтезе гликопротеинов и вызывают целый ряд биологических эффектов:
обладают гепатопротекторной, антиметастазирующей, ранозаживляющей и иммуномодулирующей активностью /37,78,142,186,187/.
Фосфаты полипренолов - иммуномодуляторы естественного происхождения - являются действующим началом препарата Фоспренил (ФП). ФП разработан и внедрён в практику в качестве противовирусного препарата широкого спектра действия при вирусных инфекциях мелких домашних и сельскохозяйственных животных /37,78/. ФП не является ксенобиотиком, нетоксичен, нетератогенен, обладает прямой противовирусной активностью против целого ряда ДНК- и РНК-содержащих вирусов /78,177,186,187/.
Показана высокая терапевтическая активность препарата, который при этом не вызывает осложнений, не способствует персистенции вирусов и развитию иммунопатологических процессов в организме животных /78,177/,
На основании вышеизложенного целью настоящего исследования было:
в результате изучения нарушений функций гуморального и клеточного иммунитета при стрессе разработать схему иммунокоррекции с помощью ФП, и на основании исследования механизмов активации флавивирус-ных инфекций на фоне стресса отработать методы использования ФП для предотвращения стресс-индуцированной активации флавивирусных инфекций;
установить возможность применения ФП в качестве лечебно-профилактического средства при целом ряде вирусных инфекций и исследовать механизмы противовирусного эффекта этого препарата.
Для выполнения заданной цели были поставлены следующие задачи:
Изучить нарушения функций гуморального и клеточного иммунитета у мышей при физиологическом и психогенном стрессе.
Исследовать стресс-индуцированные изменения патогенеза некоторых флавивирусных инфекций у лабораторных животных: активацию бессимптомной инфекции, вызываемой вирусом Лангат (ВЛ) и утяжеление течения клинически выраженной инфекции, вызываемой ВКЭ.
Изучить механизмы изменений патогенеза бессимптомной (ВЛ) и острой (ВКЭ) флавивирусной инфекций на фоне стресса.
Разраработать экспериментальный метод предотвращения стресс-ин-дуцированной активации инфекции, вызываемой В Л с помощью препарата ФП.
Изучить лечебно-профилактическое действие ФП при экспериментальных вирусных инфекциях у мышей и исследовать механизмы противовирусного эффекта этого препарата.
Исследовать возможность использовния ФП как адъюванта некоторых противовирусных вакцин.
Научная новизна
Впервые показано, что иммуносупрессия, вызываемая как физиологическими, так и психогенными стресс-факторами ассоциируется с подавлением функций антителообразующих В-клеток, ЕК и активацией антиген-неспецифических Т-супрессоров у мышей. Установлено, что психогенный стресс, вызываемый информационная нагрузкой, индуцирует в организме животных не менее выраженный иммунодефицит, чем физиологические стрессоры: температура окружающей среды, гипокинезия.
Впервые установлено, что на фоне стресс-индуцированной иммуно-супресии у мышей наблюдается активация бессимтомной инфекции, вызы-
ваемой ВЛ и осложнение течения клинически выраженной инфекции, вызываемой ВКЭ. Показано, что одним из механизмов трансформации бес-симтомной инфекции ВЛ в клинически выраженную при стрессе является значительное увеличение числа селезеночных МФ, пермиссивных для вируса. При этом соотношение Т- и В-лимфоцитов в селезенке у стрессиро-ванных животных не изменяется.
Впервые экспериментально разработан метод иммунокоррекции стресс-индуцированной иммуносупрессии с помощью препарата ФП и предотвращения активации бессмптомной инфекции, вызываемой В Л у мышей при стрессе.
Изучен противовирусный эффект ФП при экспериментальном КЭ у лабораторных животных. Впервые установлено, что ФП обладают выраженным протективным действием при острых инфекциях, вызываемых ВКЭ и вирусом полиомиелита (ВП) у мышей.
Установлено, что одним из механизмов противовирусного эффекта ФП при КЭ является ранняя опосредованная вирусом индукция препаратом некоторых ЦТ: ИЛ-6, ФНО-а, ИФН-у. ФП обладает стимулирующей активностью в отношении некоторых ЦТ: при введении препарата в организм интактных животных наблюдается повышение уровня ИФН-^у и ИЛ-6 в сыворотке крови; при одновременном введении ФП и инфицировании мышей ВКЭ регистрируется повышение уровней ФНО-а, ИФН-у и ИЛ-6. Индуцированная ФП стимуляция ЦТ у заражённых вирусом животных наблюдается в значительно более ранние сроки, чем у мышей, инфицированных ВКЭ и необработанных ФП. Уровни ЦТ, у мышей, которым одновременно вводили ФП и вирус, значительно ниже, чем у животных, которых заражали вирусом КЭ и не обрабатывали препаратом.
Изучены некоторые механизмы противовирусного действия ФП на этапах взаимодействия вирус-клетка. Исследовано протективное действие ФП при заражении чувствительных культур клеток вирусами сем. Flaviviri-dae, Herpetoviridae, Adenoviridae, Picornaviridae. Впервые показано, что ФП подавляют размножение вирусов, содержащих оболочку (ВКЭ, ВГ) в культурах клеток и, напротив, не обладают противовирусным действием in vitro в отношении безооболочечных вирусов (АВ, ВП). При этом установлено, что ФП значительно снижают вирулентность урожая внутри- и внеклеточных вир ионов ВГ. Впервые показано, одним из механизмов противовирусного действия ФП in vitro является стимуляция препаратом клеточного ИФН.
Впервые показана возможность взаимодействия ФП и вирионов ВКЭ вне клетки с помощью реакции гемагглютинации.
Впервые установлено, что препарат ФП значительно повышает проте ктивный эффект коммерческих вакцин производства ФГУП «ПИПВЭ им. М.П.Чумакова» против КЭ и бешенства в опытах на животных.
Практическая значимость
Использованный в работе метод индукции у животных информационной нагрузки является перспективным для моделирования психогенного стресса, изучения стресс—индуцированной иммуносупрессии и изменений течения вирусного инфекционного процесса.
Полученные данные о стресс-индуцированной иммуносупрессии позволяют проводить отбор антистрессорных препаратов и иммуномодулято-ров с целью адекватной иммунокоррекции и предотвращения осложнений течения вирусных инфекций при стрессе.
Разработана экспериментальная схема лечения и профилактики КЭ с помощью ФП. Показано, что ФП обладают высоким протективным действием и при этом не вызывают персистенции ВКЭ в организме животных, что обосновывает дальнейшее исследование ФП в качестве средва этио-тропной терапии КЭ.
Полученные результаты позволяют рекомендовать препарат ФП для дальнейших испытаний в качестве эффективного средства, предотвращающего стресс—индуцированные осложнения течения вирусного инфекционного процесса, а также лечебно-профилактического противовирусного препарата широкого спектра действия.
С.В.Ожерелков является одним из авторов изобретения и разработчиков Фоспренила, на который выдан 10 июня 1998 г. Российским агентством по патентам и товарным знакам патент на изобретение № 2129867 «Средство для профилактики и лечения инфекционных заболеваний и коррекции патологических состояний живого организма». Полученные в работе данные о противовирусном действии ФП при экспериментальном КЭ и полиомиелите, свидетельствуют о возможности создания лекарственной формы препарата и перспективности ее применения для профилактики и лечения вирусных инфекций, актуальных для человека. ФП прошел все стадии доклинических испытаний, и в настоящее время подготовлены документы для Минздрава России с целью получения разрешения клинических испытаний препарата в качестве средства этиотропной терапии некоторых вирусных заболеваний, в том числе КЭ. Аналогичные испытания ФП проводятся в Республике Беларусь. В настоящее время ФП рекомендован Департаментом Ветеринарии Минсельхозпрода России (№ 13—4 -/ 21102 от 03. 12. 97 г.) в качестве лечебно-профилактического противовирусного средства для до-
машних и сельскохозяйственных животных. При непосредственном участии автора получены экспериментальные и клинические данные, позволившие рекомендовать ФП для лечения и профилактики наиболее распространенных вирусных инфекций сельскохозяйственных животных (диареи и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, а также трансмиссивного гастроэнтерита молочных поросят). На основе экспериментальных данных, полученных автором, разработаны и успешно применяются схемы использования Фоспренила как антистрессорного препарата, им-мунокорректора и адъюванта для ветеринарных вакцин.
Полученные данные о механизмах противовирусного действия ФП не только значительно расширяют спектр использования ФП в ветеринарной практике, но и создают основу для создания лекарственной формы препарата для лечения и профилактики некоторых вирусных инфекций, играющих важную роль в инфекционной патологии человека.
Основные положения, выносимые на защиту.
Стресс, вызываемый физиологическими и психогенными факторами, индуцирует в организме животных нарушения функций гуморального и клеточного иммунного ответа. На фоне стресс-индуцированной иммуносу-прессии у мышей наблюдается активация преимущественно бесимптомной инфекции, вызываемой ВЛ и утяжеление течения клинически выраженной инфекции, вызываемой ВКЭ.
Препарат ФП обладает способностью предотвращать развитие стресс-индуцированной супрессии и транформацию бессимтомной инфекции, вызываемой ВЛ в клинически выраженную. ФП при определённой схеме применения эффективно защищает животных от острого КЭ.
ФП обладает по крайней мере двумя механизмами противовирусного
действия:
иммуномодулирующим - стимулирует при введении в организм вместе с вирусом продукцию некоторых ЦТ (ФНО-а, ИФН-7 и ИЛ-6), играющих важную роль в защите организма от вирусной инфекции;
противовирусным эффектом на уровне взаимодействия вирус-клетка (обладает способностью подавлять размножение обол очечных ДНК— и РНК-содержащих вирусов в чувствительных культурах клеток).
Стресс индуцированная иммуносупрессия и её роль в изменении течения вирусного инфекционного процесса
Лимфоидная ткань одной из первых реагирует на стресс. В экспериментальных исследованиях показано, что введение здоровым животным лимфоцитов от особей, находившихся в состоянии стресса, вызывает у них изменения, подобные стресс-реакции /69-71/. Наиболее выраженные и ранние реакции иммунитета на стрессорные воздействия — это клеточные сдвиги в лимфоидной ткани, возникающие вследствие угнетения пролиферации, разрушения клеток, мобилизации и перераспределения лимфоцитов. Изменяется соотношение Т- и В-лимоцитов в костном мозге, селезёнке, лимфатических узлах и периферической крови /69-71,79-84/. На стадии тревоги отмечается снижение массы тимуса и селезёнки, происходит миграция большого количества лимфоцитов в костный мозг и соединительную ткань. Эти изменения направлены на улучшение клеточного взаимодействия в процессе иммунного ответа. На стадии резистентности происходит усиление костномозгового кроветворения, существенно увеличивается количество стволовых клеток в костном мозге. Стресс-индуцированная иммуносупрессия (иммунодефицит) формируется на стадии истощения (при дистрессе). Именно на этой стадии происходит нарушения соотношений и взаимодействия иммунокопетентных клеток, угнетаются их пролиферация и функциональная активность. Происходит вторичное уменьшение численности клеток иммунных органов. Подавление гуморального звена иммунитета, выражающееся в угнетении антителообразования наблюдается, как при действии физиологических, так и психогеных стрессоров. Установлено, что нарушения в системе костномозговых лимфоцитов при стрессе обусловлено снижением содержания В-клеток в лимфоидных органах и их сниженной способностью к кооперативному взаимодействию /43-46,69-72/. Изменения со стороны гуморального звена иммунитета при стрессе проявляется в виде снижения уровня нормальных антител и сывороточных иммуноглобулинов вплоть до их полного исчесзновения из перферической крови. Стресс-индуцированный иммунодефицит характеризуется также снижением функциональной активности Т-лифоцитов (Т-ЛФ). Иммуносу-прессия охватывает все основные субпопуляции этих клеток (Т-супрессо-ры, Т-хелперы, Т-киллеры) и регистрируется, как при физиологическом, так и психоэмоциональном стрессе /8,9,41—45,69-71/.
Многочисленные клинические данные свидетельствуют о том, что 90-95% населения страдают вторичными (приобретёнными) иммунодефи-цитами. Факторы, влияющие на формирование в организме вторичных имунодефицитов достаточно разнообразны. При этом одними из самых распространённых факторов, вызывающих иммуносупрессию, являются стрессоры, например, алиментарная недостаточность, гипокинезия, психогенные стрессоры и др. /55,56/. К стресс-факторам, индуцирующим имму-носупрессию, в настоящее время относят бактериальные, вирусные и другие инфекции, многочисленные патологические процессы (опухоли, ожоги, травмы, истощения и др.) /55,69, 77,79/. Стресс, вызываемый, как физиологическими (операционные воздействия, травмы, инфекции различной этиологии, физические нагрузки и т.д.)) так и психогенными факторами (информационные нагрузки, события повседневной жизни) приводит к формированию в организме человека и животных вторичного транзиторного иммунодефицита. Стресс-индуциро-ванный иммунодефицит характеризуется следующими особенностями: снижением абсолютного и относительного числа Т-ЛФ (особенно уровня Т-хелперов и Т-супрессоров) и В-лимфоцитов, уменьшением уровней IgA, IgG, IgM, снижением уровня комплемента и фагоцитарной активности лейкоцитов крови. При постинфекционном иммунодефиците,напротив, наблюдается резкое увеличение числа Т-суперссоров, снижение отношения Т-хелперов к Т-супрессорам, угнетение ответа Т-клеток на митогены. На фоне стресса наблюдается значительное снижение активности Т-клеток по данным реакции бласттрансформации /8,69,70/. При этом экспериментальные наблюдения показывают, что у стрессированных мышей количество клеточных элементов в тимусе снижается на 30%, а в селезёнке в 2 раза по сравнению с контролем. В тимусе животных со стрессом полностью исчезают клетки с картинами митоза, а в селезёнке число таких клеток уменьшается в 3 раза. В тоже время и в тимусе, и в селезёнке стрессированных мышей резко возрастает количество деструктивно изменённых и разрушенных клеток (в том числе МФ). Лимфоидная ткань различных по расположению лимфоузлов по-разному реагирует на стресс. Например, в брыжеечных лимфоузлах стрессированных животных изменения лимфоидной ткани выражены значительно сильнее, чем в паховых лимфоузлах /8,9,79/. Стресс-индуцированные изменения в органах иммунной системы коррелируют со стадиями общего адаптационного синдрома (тревоги, резистентности, истощения), зависят от длительности стрессового воздействия, природы стрессора, индивидуальных особенностей организма и некоторых других факторов /8,21,52/. Изменения в органах иммунной системы при стрессе носят носят временный характер: при прекращении действия стрессора уже через 48 часов микроанатомическое строение тимуса и селезёнки полностью соответствуют данным контроля /24,59,60,61,77—79/.
По мнению большинства авторов, наиболее чувствительным к стрес-сорным нагрузкам является Т-клеточное звено иммунитета. Это связано с тем, что Т-ЛФ менее резистентны к глюкокортикоидным гормонам по сравнению с В-лимфоцитами /77-79/.
Наблюдаемую при стрессе лимфоцитопению обычно связывают с повышенным уровнем глюкокортикоидов, однако некоторые авторы полагают, что причиной лимфоцитопении может служить уменьшение поступления лимфоцитов из лимфоузлов в лимфу, а затем в периферическую кровь. Исследованиями многих авторов показано участие в регуляции иммунных функций эндорфиноподобных (опиоидных пептидов) /11,12/. Веществам этого класса отводится роль связующего звена между нервной и иммунной системами. Опиоидные пептиды синтезируются и хранятся в центральной нервной системе, гипофизе и надпочечниках, где они защищены от воздействия энзимов, и в определённый момент могут оказывать влияние на функциональное состояние адаптивных систем, в том числе и на иммунитет /11,12,25/. E.W.Palmblad в 1985 году показал наличие на мембранах МФ и лейкоцитов рецепторов для опиоидных пептидов /8/.
Индукция вирус- и стрессиндуцированной иммуносупрессии у мышей и её коррекция с помощью Фоспренила
Вирусный гомолог рецептора ИФН-у был обнаружен у ряда поксви-русов и у у-группы вирусов герпеса. Вирус осповакцины также содержит ген, продуктами которого являются растворимые рецепторы к ИФН- у, ИФН-о/р. Ряд поксвирусов кодируют ИЛ-1-рецептор (ген В 15R). Продукт этого гена имеет 25% гомологию с клеточным рецептором и связывает ИЛ-1р, но не ИЛ-1а /66,162/.
Многие вирусы обладают способностью нейтрализовывать активность ЦТ. Аденовирусы, например, имеют 4 гена, в которых закодирован антагонистический эффект действия ФНОа. Вирус кори специфически связывается с CD 46, клеточным комштементрегулирующим белком, найденным в моноцитах, являющихся первичной мишенью для вируса кори in vivo. При связывании вируса с этим белком происходит супрессия продукции моноцитами ИЛ-12, что в свою очередь приводит к иммуносупрессии /20,66, 162/.
Представление вирусного антигена белками ГКГС класса 1 также можетбыть нарушено вирусными гомологами. Функция белков ГКГС класса 1 заключается в связывании мелких пептидов внутри клетки и презентации их на поверхности клетки, где Т-ЛФ проверяют их по признаку «свой-чужой». Механизм этого процесса заключается в следующем: пептиды, образовавшиеся в результате деградации белков, перемещаются в эндоплазматический ретикулум, где с помощью 2-х белков ТАРІ и ТАР 2 присоединяются к ГКГС. Связываясь с р2—микроглобулином, они транспортиру-ютсяк поверхности клетки. ВПГ простого имеет белок, который интерферирует с функцией ТАР, а аденовирусы имеют белок, препятствующий связыванию микроглобулина с молекулами ГКГС класса 1 и нарушающий их перемещение к поверхности клетки /162/,
Вирус цитомегалии человека имеет ген, гомологичный ГКГС класса 1, который связывается (52-микроглобулином (субъединицей молекулы ГКГС—1, необходимой для транспорта к клеточной поверхности). Таким образом, он становится неузноваемым для ЕК, которые вызывают лизис клеток, на которых отсутствует антиген ГКГС класса 1 /66, 162/.
Многие ретровирусы активируют онкогены. Вирусы, лейкемии, например, усиливают при том экспрессию генов ЦТ, положительного контроля клеточной пролиферации. При активации онкогенов с помощью ретро-вирусных вставок, многие из поражённых генов являются генами ЦТ /66/. Однако одного усиления продукции ЦТ недостаточно для неотрансформации клеток: например, вирус гепатита является индуктором синтеза ИЛ-8, однако это не приводит к неотрасформации /66,162/.
Отличительным признаком вирусной инфекции является острая реакция инфицированной вирусом клетки. Эта реакция включает в себя продукцию специфических цитокинов. Сейчас окончательно ясно, что при первом взаимодействии вирусных белков с белками мембраны клетки инициируется первая волна продукции цитокинов. Установлено, что при первичной инфекции, вызываемой вирусами группы герпеса (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ) продуцируется целый ряд ЦТ: ИЛ-lp, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13, ФНО-а, ИФН-аДу /162/. Вирус гриппа стимулирует в организме продукцию ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-15, ИЛ-18, ФНО-а, ИФН-чх,р,у. При острой инфекции, вызываемой вирусом гепатита В, наблюдается продукция провоспалительных ЦТ (ИЛ-lp, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ФНО-а, ИФН-у), а также антивоспалительного цитокина ИЛ-10. При этом по данным одних авторов стимуляции провоспалительных ЦТ ассоциируется с клиренсом, по данным других - чрезмерная продукция ИЛ-6 может приводить к циррозу печени и развитию гепатокарциномы /162/. Некоторые рет-ровирусы, например, HTLV-1 стимулируют продукцию целого каскада ЦТ ( ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3,ИЛ-Ч ИЛ-5,ИЛ-6, ИЛ-9, ИЛ-15, ФНО-а, ФНО-р, ИФН-у) и хемокинов (ИЛ-8, RANTES). Однако чрезмерная продукция ФНО-а ассоциируется с тяжёлой нейропатологией при данной вирусной инфекции. Избыточные количества ФНО-а ассоциируются с другими воспалительными заболеваниями ЦНС, включая рассеянный склероз, энцефалопатию при ВИЧ-инфекции, бактериальный менингит и церебральную малярию /66,162,168/.
При ВИЧ-инфекции происходит нарушение нормального баланса ЦТ: на начальной стадии инфекции происходит повышение уровня одной группы ЦТ (ИФН-а, ИЛ-2, ИЛ-12), а по мере перехода инфекцию в стадию СПИДа продукция этих ЦТ снижается, а продукция другой группы (ИЛ- 4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а) - усиливается. Многие исследователи считают, что такое переключение с одной группы ЦТ на другую и обуславливает многие симптомы, ассоциированные со СПИДом : истощение, лимфоматоз, неврологические поражения, деменцию. Дисбаланс ЦТ может содействовать поражению ВИЧ СД4-клеток и лимфатических узлов, приводя к про-грессированию иммуносупрессии и к последующему развитию оппортунистических инфекций /150,157/.
Такая концепция получила название Thl/Th2 гипотезы, поскольку в начальной стадии усиливается уровень ТЫ-ЦТ, что может подавлять продукцию Th2 — ЦТ. В настоящее время принято считать, что резистентность или чувствительность к большинству инфекционных заболеваний строго зависит от балланса цитокинов Thl/Th2, индуцируемых в процессе инфекции. Некоторые исследователи считают, что в случае вирусных инфекций эта схема может применена только к цитопатогенным вирусам, когда ИФН--у обязателен для защиты организма хозяина при минимальном или полностью отсутствующем иммунном ответе по ТЫ. Исследование роли ТЫ (ИЛ-12, ИФН-у) и Th2 (ИЛ—4, ИЛ-10) в иммунном ответе мышей против вируса осповакцины (ВОВ) показало, что ИЛ-12 " мыши были более чувствительны к инфекции, вызываемой ВОВ, чем ИФН-у" " мыши /149,150/. При этом цитотоксические Т-ЛФ (ЦТЛ) к ВОВ отсутствовали у ИЛ-12 мышей, но сохранялись у интактных и у ИФН—у животных. У CD4+ и CD8+ -Т-клеток от ИЛ-12 мышей была выявлена пониженная способность продуцировать ИФН--у, a CD4+ клетки демонстрировали повышенную способность к цитокиновому ответу по типу Th2. Репликация вируса ВОВ была снижена у ИЛ-4 " мышей. А у ИЛ-10 _/_ животных оба штамма вызывали повышение уровня провоспалительных ЦТ ИЛ-1а и ИЛ— б.Таким образом, ИЛ-4, продуцируемый Th2 клетками и ИЛ-10, продуцируемый Th2 клетками и МФ препятствуют эффективной антивирусной защите хозяина.Таким образом,авторами была выявлена новая функция ИЛ-12 в антивирусной защите помимо индукции продукции ИФН-у и показано, что ИЛ-4 и ИЛ-10 изменяют протективный ответ к ОВ-инфекции /149,150/.
Стресс-индуцированная активация Т-супрессоров и их роль в патогенезе инфекции у мышей, заражённых вирусом Лангат
Полипренолы - ненасыщенные ациклические алифатические спирты, содержащие более 4-х изопреновых звеньев, соединённых по принципу «голова к хвосту». Они являются интегральными компанентами биологических мембран всех живых организмов и влияют на многие свойства мембран (текучесть, проницаемость, температуру фазового перехода, образование небислойных структур и т.д.) /142,163,182/. Установлено, что фосфори-лированные полипренолы - действующее начало препарата ФП обладают широким спектром биологической активности, в частности на функционирование иммунной системы, гемопоэтической и системы естественной резистентности /186,187/. Одним из механизмов стимуляции ФП системы естественной резистентности организма является является индукция выработки эндогенных ИФН. Например, в опытах на мышах линии СВА показано, что при внутрибрюшинном однократном введении ФП в дозах 40 и 200 мкг/мышь регитрировали индукцию общего сывороточного ИФН в сыворотке крови через 2 часа и сохраняется повышенным до 72 часов после введения препарата. Уровень сывороточного ИФН достигал 256 ЕД , в то время как у контрольных животных - 0 ЕД /186,187/. В опытах in vitro было исследовано влияние ФП на действие стандартных индукторов ИФН: ридо-стина, неовира - камедона (индукторов ИФН-сс и ИФН-р), стафиллококко-вого энтеротоксина А (СЭА) определяющего способость клеток к синтезу ИФН- у /78,182,186,187/. Эксперименты на мышах показали, что предварительное ввдение ФП в дозе 5 мкг/ мышь приводит к усилению впоследствии применяемых ридостина и неовира. В опытах на клетках мышиных фибробластов L929 было установлено, ФП, действует преимущественно на клетки костного мозга (В-клетки) и увеличивает неовир- и ридостин- индуцирующую продукцию ИФН-а/р /78/ . Кроме того, показано, что ФП модулирует активность иммукомпетентных клеток тимуса, селезёнки, стимулируя ИФН-ответ на стандартные индукторы ИФН. ФП способствуют повышению ИФН-активирующей способности сыворотки и плазмы крови.
В опытах на мышах линии С57В1/6 установлено, ФП, введённые животным однократно в дозах 1 или 4 мкг внутримышечно или перорально индуцирует продукцию ФНО до уровня 30-50 ЕД /78/. При внутримышечном введении ФП мышам линии BALB/c отмечали 3-6 кратную по сравнению с контролем стимуляцию ИЛ-1 через 24 часа. Пероральное введение препарата животным приводило к стимуляции ИЛ-1 в 1,6 раза по сравнению с контролем через 7 суток /78/,
В некоторых работах, было показано, что химически синтезированный полипренол - дегидрогептапренол (ДТП) в дозе 200 мкг, веденный ин-траназально дважды - за 3 дня и за 1 день до заражения, значительно повышает протективность мышей к инфекции,вызываемой ВС /141/. При этом у животных, обработанных ДТП и зараженных вирусом отмечали значительное повышение продукции сыворотчного ИФН и ФНО по сравнению с мышами, которым вводили только препарат или только вирус /141/.
Профилактический эффект введения полипренолов, выделенных их хвои сибирской (Abies sibirica), был показан при экспериментальном аэро генном заражении мышей вирусом гриппа /98/. Авторы не обнаружили по вышения уровня ИФН в сыворотке крови животных, обработанных поли пренольными препаратами и инфицированных вирусом гриппа /98/. При этом у таких мышей регистрировалось уменьшение массы тимуса и селе зенки и, напротив, увеличение численности лимфоцитов и МФ в бронхо— альвеолярном тракте. Кроме того, увеличивалась супероксидпродуцирующая активность альвеолярных МФ. Полученные активность альвеолярных МФ. Полученные факты свидетельствуют о том, что одним из механизмов профилактического эффекта полипренольных препаратов является стимуляция факторов естественной резистентности организма /98/. Приведённые данные свидетельствуют о том, ЦТ, являясь регуляторами иммунопоэза в норме, действуют на все звенья иммунной системы, но их действие распространяется и на другие системы организма (кроветворения, сосудистую, гипофизадреналовую, нервную и эндокринную). С помощью ЦТ осуществляются иммунные механизмы, направленные на элиминацию инфекционных агентов, в частности, вирусов. ЦТ действуют в очень низких концентрациях, как основные медиаторы инфекционных и иммуно-воспалительных реакций, развивающихся в организме в ответ на вирусные инфекции. Большинство ЦТ действуют местно, но некоторые, клинически наиболее важные ЦТ, могут действовать системно, как плейотропные гормоны, с частично перекрывающими друг друга и потенциально опасными функциями (иммуновоспалительные гормоны). Наиболее важные в том отношении ЦТ: ИЛ-1сс/р, ФНО-а, ИЛ-6. Про воспалительные ЦТ (особенно ИЛ-1 и ФНО-а) играют решающую роль в патогенезе многих инфекционных аутоиммунных заболеваний, включая вирусные, например, СПИДа. В низких концентрациях провоспалительные ЦТ - неотъемлемая часть оптимального функционирования защитных и восстановительных систем организма. Часть ЦТ, особенно в высоких концентрациях, представляет большую опасность для организма. Например, с повышением концентрации ИЛ-6 связывают раннюю смертность больных сепсисом, наличие высокой концентрации ИЛ-6 повышает заболеваемость и смертность при хроническом стрессе, старении, инфаркте миокарда 151/. Показано, что у больных с СХУ, вызванный ВЭБ, наблюдается высокий уровень ИЛ-6 /51/. В патогенезе аутоиммунных заболеваний, например, при ревматоидном артрите решающее значение имеет избыточная продукция про воспалительных ЦТ (ИЛ-1, ФНОа, ИЛ-6, ИЛ-8, ГМ-КСФ) /51/.
Коррекция вирус- и стресс-индуцированной иммуносу-прессии у мышей с помощью Фоспренила
Иммунология различных форм (острого, хронического, бессимптомного) КЭ изучена недостаточно, особенно в аспекте клеточных и молекулярных механизмов иммунного ответа. Известно, что ВКЭ репродуцируется в органах системы иммунитета на ранних стадиях инфекции и локализуется в них при персистентной инфекции /75,76,85/. Выраженный тропизм персистирующего вируса КЭ к лимфоидным органам и длительная его пер-систенция в тканях селезёнки и лимфатических узлов показана при экспериментальном хроническом и бессиптомном КЭ у обезьян и сирийских хомячков /75,76/. Согласно клиническим данным, ранним проявлением иммунного ответа являются внутрипопуляционные изменения лимфоцитов /75,76/. В острой стадии КЭ у больных развивается умеренный лейкоцитоз без изменения общего количества лимфоцитов. Однако число Т-ЛФ снижено, причём дефицит Т-клеток выявляется уже в первые дни болезни и сохраняется до 14 дня, а нормализуется только через 3 месяца. Напротив, функция В-системы при остром КЭ не нарушена. Отмечена активная пролиферация В-лимфоцитов и 2-кратное повышение их содержания в периферической крови с нормализацией к 90—му дню /75,76,85,172/. Некоторые авторы связывают избирательное поражение Т--системы иммунитета при остром КЭ с размножением возбудителя в тимусе, регулирующем процессы созревания, дифференцировки и функциональной активности Т-ЛФ /85/. Многочисленные наблюдения показали, что глубина вирусиндуцированной Т-клеточной супрессии и её продолжительность прямо коррелируеют с тяжестью клинического течения КЭ /75/. Например, у больных стёртой формой КЭ дефицит Т-ЛФ был 2-кратным и сохранялся 35 дней, а у больных с поражением ЦНС был 4-кратным длился в течение 1 года /75,76/. Сущест-венныое снижение популяции авидных Т-клеток некоторые авторы связывают с поражением рецепторных структур Т-клеток, поражённых вирусом. В тоже время не отмечено нарушений функций Т-эффекторов ГЗТ /85/.
Отражением функционирования В-клеточной системы при остром КЭ служат показатели гуморального иммунитета. Различные виды специфических антител появляются в крови больных и исчезают асинхронно. Вируснейтрализующие (ВН) антитела, антигемагглютинины - 3 4 года, комплементсвязывающие антитела (КС) - от 1 до 6 лет. На основании сравнительного изучения спектра имуноглобулинов IgA, М и G в ликворе и в сыворотке больных острым КЭ некоторые авторы допускают локальный синтез иммуноглобулинов в мозге и их последующую фильтрацию через повреждённый гематоэнцефалический барьер в остром периоде инфекции. Исследования динамики синтеза различных иммуноглобулинов при остром КЭ показали, что через 4 дня после начала заболевания выявляются IgM, а на 21 день отмечается переключение синтеза IgM на IgG, уровень которых в крови нарастает и может оставаться высоким в течение 10 лет. При этом уровень IgM может быть высоким в течение 3-х месяцев, затем снижаться, однако у лиц с поражениями ЦНС (например, с менингеальной формой КЭ) IgM могут выявляться в течение 3-х лет/75,76/.
При хроническим течении КЭ в ликворе и сывороке крови больных также выявлются значительные титры ВН- КС- и антиагглютинирующих антител. Таким образом, развитие острого и хронического КЭ обычно происходит на фоне циркулирующих в крови и ликворе специфических антител. Однако антитела при КЭ могут играть, как защитную, так и повреждающую роль /85/.
Состояние Т—клеточной системы при хроничеком КЭ у людей изучено недостаточно. Функционирование субпопуляций Т—ЛФ, МН/МФ, ЕК— клеток интенсивно изучалось на экспериментальных моделях острой формы КЭ у лабораторных животных. ЦТЛ (Т-киллеры, эффекторные лимфоциты, сенсибилизированные лимфоциты) разрушают in vitro в отсутствие противовирусных антител (ПВА) и комплемента заражённые вирусом клетки-мишени. Фундаментальное свойство ЦТЛ - двойная специфичность, распознавание адсорбированных или включённых в состав цитоплазматических мембран вирусных белков, зависящее от видовых свойств клеточной оболочки и фенотипических признаков инфицирующего вируса, показано в экспериментах на мышах, заражённых вирусом КЭ /76,85/. Наряду с этим при экспериментальном КЭ у мышей индуцируются аутореактивные Т-ЛФ, относящиеся к популяции Т-киллеров, распознающие сингенные и аллогенные вирусинфицированные клетки. Установлено, что ЦТЛ обладают защитным эффектом в начале вирусного инфекционного процесса и повреждающим в более поздние сроки. Защитным действием при КЭ обладает цитолиз, осуществляемый нормальными лимфоидными клетками - зависимая от антител цитотоксичность клеток (ЗАЦК) /85/. Однако ЗАЦК может быть пусковым показано, что адоптивный перенос иммунокомпетентных клеток и ПВА мышам, заражённым ВКЭ во второй половине инкубационного перода (6—7 сутки после заражения) может создавать условия для развития имунопатологического действия (ИПД) эффекторов иммунного ответа /76,85,136,137/. При этом функционирует ряд факторов, способствующих или ограничивающих ИПД.
Так, иммунные к вирусу КЭ ЦТ Л оказывают ИПД самостоятельно или в кооперации с эффекторами гип ер чувствительности замедленного типа (ЭГЗТ). Развитие ИПД подавляется высокими дозами ПВА (1 : 640 в РПГА) /85/. В свою очередь иммунные к вирусу ЭГЗТ сами по себе не индуцируют ИПД, однако в кооперации с МФ вызывают этот эффект. В этом случае подавление ИПД может осуществляться как при помощи ПВА, так и Т-супрессорами, угнетающими активность ЭГЗТ /85, 172,175/.
Роль МФ при КЭ изучено in vitro и in vivo. В культурах перитонеаль-ных МФ мышей, морских свинок отмечено поглощение вируса КЭ в течение 1-го часа и низкое содержание вируса в клетках, что расценивается как завершенный фагоцитоз. При развитии у мышей острой формы КЭ функциональные изменения МФ (активность и интенсивность фагоцитоза) характеризуются повышением фагоцитарной активности в отношении инфицированных клеток. Установлено также, что МФ могут способствовать формированию персистентной формы инфекции, так как вирус может активно и длительно размножаться в МФ. В этом случае возможна реактивация вируса и переход инфекции из латентной формы в клинически выраженную /75,76,85/. При экспериментальной подострой инфекции у мышей и инаппарантной инфекции КЭ у морских свинок повышение неспецифической резистентности также связывают прежде всего с активации фагоцитоза незараженных клеток. Интересен тот факт, что МФ сами по себе не оказывают иммунопатологичекого действия, однако участвуют в развитии ИПД в кооперации с ЭГЗТ или с невысокими титрами ПВА (1 : 40). Этот феномен называется — зависимое от антител повреждающее действие макрофагов (ЗАПДМ). Высокие титры антител (1 : 640) предотвращают ЗАПДМ /85/.
