Введение к работе
Актуальность темы.
Борьба с вирусными заболеваниями активно осуществляется во всем мире, но до сих пор огромное количество людей страдают как от самих инфекций, так и от их последствий. К таким инфекциям относится и эпидемический паротит (ЭП).
Несмотря на то, что этиология данного заболевания известна с 1934 года (K.Johnson & R. Goodpasture, 1934), когда впервые был выделен возбудитель эпидемического паротита, и уже в течение более 30 лет применяются живые паротитные вакцины, болезнь остается не до конца изученной. В нашей стране активная борьба с этим инфекционным заболеванием началась с 1981 года, когда в календарь прививок была внесена прививка против эпидемического паротита (акад. А.А. Смородинцев и др., чл.-корр. В.Ф. Попов и др., акад. О.Г. Анджапаридзе и др., 1974, 1977, 1981 гг.). Однако, введение вакцинации оказалось недостаточной мерой для формирования напряженного и длительного поствакцинального иммунитета (акад. В.В. Зверев, д.б.н. Н.В. Юминова, 2004 г.). В 1998 году в календарь прививок была внесена 2-ая ревакцинирующая прививка. При анализе изменения заболеваемости за эти годы становится очевидна огромная роль вакцинопрофилактики в этом вопросе. Но, несмотря на общую картину снижения заболеваемости по России, до сих пор в регионах РФ могут возникать вспышки эпидемического паротита (вспышка в Удмуртской Республике, январь-февраль 2008 год).
До начала массовой иммунизации против эпидемического паротита все дикие штаммы вируса не были генетически гомогенны, в отличие от вируса кори (всего 1 генотип А), существовали разные генетические линии (в России свой генотип, который нигде больше в мире не встречался). Проводимая в ряде стран вакцинация ускорила процесс эволюции вируса (сейчас уже - 12 генотипов). В настоящее время различия в нуклеотидных последовательностях у разных диких вариантов вируса эпидемического паротита составляют от 6 % до 19 % (при изучении SH-гена вируса, состоящего из 318 нуклеотидов). Благодаря вмешательству массовой иммунизации, при пороге высокой привитости населения, может произойти смена генотипа дикого эндемичного штамма вируса с достоверным увеличением показателя генетической дивергенции. В этой связи абсолютно ясно, что мониторинг эффективности противопаротитных вакцин просто необходим.
В условиях вакцинопрофилактики также произошло изменение возрастной структуры заболевших: увеличился удельный вес молодёжи и взрослых до 35- 39 лет. Еще одной неблагоприятной тенденцией в изменении эпидемического процесса паротитной инфекции является заболевание детей в возрасте до одного года. Такие изменения свидетельствуют о важности мониторинга популяционного, изучения формирования поствакцинального иммунитета за счет его гуморальной и клеточной составляющих; необходимости пострегистрационного мониторинга оценки качества и эффективности применяемых на территории Российской Федерации вакцинных препаратов (особенно отечественных); анализе изменения заболеваемости ЭП во времени (по годам) и по разным возрастным когортам, а также групп риска, при помощи методов математического моделирования.
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) относит эпидемический паротит к инфекциям, которые могут быть ликвидированы с помощью активной иммунизации. В странах европейского региона, в том числе и в России, уже поставлены цели по ликвидации местных случаев эпидемического паротита.
Целью настоящей работы является оценка эффективности вакцинации и ревакцинации эпидемического паротита в ряде регионов Российской Федерации на современном этапе.
Задачи исследования:
-
Изучить иммуногенность и реактогенность отечественных моно- и комбинированных паротитных вакцин из штамма Ленинград-3, пассажная история которого насчитывает 15 пассажей на культуре клеток почек морской свинки и 7 пассажей на культуре клеток фибробластов эмбрионов японских перепелов.
-
Разработать метод исследования молекулярных механизмов внутриклеточной сигнализации моно- и паротитно-коревой вакцин на ионные каналы клеточной мембраны посредством измерения хлорной проводимости Са2+ - активируемых хлорных каналов с целью оценки их безопасности.
-
Оценить уровень популяционного иммунитета у детей, подростков, молодёжи и взрослых, вакцинируемых и ревакцинируемых живыми паротитной и паротитно-коревой вакцинами на контролируемых территориях.
-
В случае вспышечной заболеваемости провести верификацию случаев ЭП и выявить трансмиссию диких изолятов вируса.
-
Провести сравнительный анализ и оценить диагностическую значимость иммуноферментных тест-систем для диагностики эпидемического паротита, используемых на территории РФ, дать предложения по их применению.
-
Оценить возможные изменения заболеваемости эпидемическим паротитом у населения России с течением времени в рамках осуществления программы её снижения в ближайшие годы до 1,0 или менее на 100 тыс. населения (с помощью математического анализа).
Научная новизна.
Впервые в крупном очаге паротитной инфекции (на территории Удмуртской Республики) осуществлена верификация вспышки с помощью метода ПЦР в режиме реального времени и лабораторного серологического подтверждения случаев эпидемического паротита. Выделено 8 изолятов диких штаммов вируса.
С целью выявления возможных молекулярных механизмов внутриклеточной сигнализации при применении отечественных вакцинных препаратов (паротитно-коревой, паротитной вакцин) были изучены ионные токи Са 2+ – активируемых хлорных каналов, возникающие при взаимодействии вакцины с клеточной мембраной, на биологической модели – харовые водоросли. Такой подход был применен впервые и позволил оценить взаимодействие антигенных белков оболочечных вирусов (эпидемический паротит, корь) с ионными каналами клетки, подтвердив изменение её функционального состояния. Такое взаимодействие вирусных белков с ионными каналами клетки активировало электрофизиологические параметры мембран клеток и подтвердило, что отечественные вакцины против эпидемического паротита оказывают положительный эффект на физиологию клеток и играют определяющую роль в мембранном электрогенезе и внутриклеточной сигнализации.
Получены данные о диагностической значимости отечественных тест-систем Паротит Скрин, производства ЗАО «Биосервис», РФ и ВектоПаротит Ig M и Ig G, производства ЗАО «Вектор Бест» в сравнении с зарубежными немецкой и американской тест-системами, широко используемыми в европейских лабораториях сети ВОЗ для верификации эпидемического паротита в условиях спорадической заболеваемости.
Впервые был проведен математический анализ с использованием метода R/S-анализа и модифицированной модели Вольтерра-Лотки (модель «Хищник-жертва») с целью анализа и прогнозирования заболеваемости эпидемическим паротитом на территории Российской Федерации.
Практическая значимость работы.
В результате проведённых исследований показана полная иммунологическая безопасность и эффективность отечественных паротитных моно- и комбинированных (корь-паротит) вакцин из штамма Ленинград-3 (Л-3), пассажная история которого насчитывает 15 пассажей на культуре клеток почек морской свинки и 7 пассажей на культуре клеток фибробластов эмбрионов японских перепелов.
Сравнительные исследования отечественных и зарубежных тест-систем показали высокий процент совпадения результатов по тестам специфичности и чувствительности наборов реагентов Паротит Скрин и ВектоПаротит Ig M, Ig G с препаратами производства Германии «Euroimmun» и BCM Diagnostics, США, что позволяет рекомендовать российские наборы реагентов для проведения серологической работы в рамках выполнения национальной программы снижения заболеваемости эпидемического паротита до 1,0 или менее на 100 тыс. населения.
На основании использованных в данной работе методов математического анализа заболеваемости эпидемическим паротитом было осуществлено их внедрение в практику, работы управления здравоохранения администрации города Перми для обеспечения мониторинга эффективности вакцинопрофилактики и прогнозирования заболеваемости ЭП на данной территории (акт о внедрении от 14.03.2011 г.). Полученные результаты могут быть использованы медицинскими организациями, участвующими в выполнении задач по обеспечению государственных гарантий оказания населению бесплатной медицинской помощи, при организации профилактических мероприятий на территории г. Пермь.
Материалы данного исследования использованы при подготовке Национального руководства по клинической и лабораторной диагностике. Вирус эпидемического паротита (семейство Paramyxoviridae). Изд. Группа «ГЭОТАР – Медиа», М., 2012г., 2:667-669.
Апробация материалов диссертации и публикации.
Материалы диссертации доложены на 5-ой Российско-итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», (Петрозаводск, 2008), Всероссийской конференции «Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов» (Пермь, 2008), Российской научно-практической конференции «Высокотехнологические виды медицинской помощи при инфекционных болезнях детей» (Санкт-Петербург, 2009), Научно-практической конференции «Вакцинопрофилактика: проблемы и перспективы развития» (Пермь, 2010), Международной конференции «Развитие научных исследований и надзор за инфекционными заболеваниями » (Санкт-Петербург, 2010), Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2010. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 2010), Всероссийском ежегодном конгрессе «Инфекционные болезни детей: диагностика, лечение, профилактика» (Санкт-Петербург, 2010), Международном конгрессе «Вакцины 2011» (Пекин, 2011).
Апробация диссертации состоялась 26 апреля 2012 г. на научной конференции отдела вирусологии ФГБУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» Российской академии медицинских наук.
Всего опубликовано 8 работ, в том числе в 3 журналах, рекомендованных ВАК и в национальном руководстве по клинической и лабораторной диагностике, изд. Группа «ГЭОТАР-МЕДИА». М., 2012.
Структура и объем диссертации.
